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题名甲壳素亲和层析在人g2型溶菌酶制备中的应用
被引量：6
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作者
黄鹏
李文姝
谢君
鲍建瑛
曹晓娥
徐一新
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机构
上海健康职业技术学院医学基础部
上海纽约大学文理学部
复旦大学遗传工程国家重点实验室
上海健康职业技术学院生物医药系
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出处
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第5期430-434,共5页
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基金
上海市高校青年教师资助培养计划(PF-JZ-QT02022016)
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文摘
目的制备甲壳素亲和纯化介质,设计有效的纯化技术路线,对毕赤酵母表达的人g2型溶菌酶(human goose-type lysozyme 2,HLys G2)重组蛋白进行纯化。方法研究碱化、稀酸处理、碱化时间、碱浓度等各种因素对甲壳素介质性能的影响;对重组毕赤酵母进行甲醇诱导表达,依次采用亲和层析、阴离子交换层析、透析等方法从发酵液上清中纯化HLys G2,对最终纯化产物的纯度使用HPLC进行测定,杀菌活性使用双层琼脂平板扩散法进行测定。结果经处理后,在常压下甲壳素亲和介质洗脱速度可达4.5 ml/(min·cm2),对HLys G2吸附容量为1.8 mg/ml,总活性的收率为76.5%,得到的HLys G2纯度>99.0%,对溶壁微球菌具有杀灭活性。结论制备的甲壳素亲和介质具有良好性能,以甲壳素亲和层析为中心的纯化方法可有效纯化HLys G2,为规模化制备HLys G2奠定了基础。
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关键词
人g2型溶菌酶
甲壳素
毕赤酵母
纯化
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Keywords
Human goose-type lysozyme 2
Chitin
P. pastoris
Purification
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分类号
Q55
[生物学—生物化学]
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