长期体外培养对人脐血间充质干细胞成骨分化潜能的影响 被引量：6

1

作者 刘广鹏 张文杰 +3 位作者 李宇琳 孙剑 周恒 崔磊 《组织工程与重建外科杂志》 2009年第1期4-6,48,共4页

目的观察体外长期培养对人脐血间充质干细胞(Human umbilical cord blood derived mesenchymal stem cells,UCB-MSCs)成骨分化潜能的影响,探讨其作为组织工程骨种子细胞的可行性。方法流式细胞技术观察长期体外培养的UCB-MSCs细胞表面... 目的观察体外长期培养对人脐血间充质干细胞(Human umbilical cord blood derived mesenchymal stem cells,UCB-MSCs)成骨分化潜能的影响,探讨其作为组织工程骨种子细胞的可行性。方法流式细胞技术观察长期体外培养的UCB-MSCs细胞表面抗原表达的变化规律,并通过Alizarin Red染色及碱性磷酸酶活性、骨钙蛋白含量和钙离子含量的检测观察长期体外培养对UCB-MSCs成骨特性的影响。结果第10代之前的UCB-MSCs能够高表达间充质干细胞表面标志物,7代之前的细胞体外增殖能力不随传代次数而发生明显变化。Alizarin Red染色及碱性磷酸酶活性、骨钙蛋白含量和钙离子含量的检测显示8代之前的UCB-MSCs仍能保持较强的成骨分化能力。结论7代之前的UCB-MSCs能保持稳定的体外成骨分化特性,有望成为较理想的组织工程骨种子细胞。 展开更多

关键词 人脐血间充质干细胞 组织工程 成骨分化 体外培养

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量子点标记共培养睾丸体细胞体外培养观察 被引量：1

2

作者 李鸣 王晓云 +3 位作者 皮庆猛 周广东 戴海英 邢新 《中国美容整形外科杂志》 CAS 2011年第3期164-167,共4页

目的 初步验证量子点能否对共培养睾丸体细胞进行标记,为睾丸体细胞的体内外研究提供一种细胞损伤小,且简便、有效的标记手段.方法 取雄性Wistar大鼠的睾丸组织小块,胶原酶消化,差速贴壁法收集睾丸体细胞,取第一代睾丸体细胞以0.25%胰... 目的 初步验证量子点能否对共培养睾丸体细胞进行标记,为睾丸体细胞的体内外研究提供一种细胞损伤小,且简便、有效的标记手段.方法 取雄性Wistar大鼠的睾丸组织小块,胶原酶消化,差速贴壁法收集睾丸体细胞,取第一代睾丸体细胞以0.25%胰酶蛋白酶-0.02%EDTA消化,制备单细胞悬液,与量子点共同孵育2h后贴壁及传代培养,共聚焦荧光显微镜动态观察细胞生长、增殖情况.结果 相差显微镜下观察,标记细胞形态无明显改变,荧光显微镜下可见摄取量子散在分布于细胞内,主要集中于细胞核周围,分裂细胞及增殖活跃细胞摄取量明显高于老化细胞.传代后仍可见细胞内的量子点分布,荧光强度未见明显衰减.结论 量子点能够被共培养睾丸体细胞摄取,且摄取速度快,荧光显微镜下易于观察.量子点标记法对共培养细胞损伤小,操作简便易行,是共培养睾丸体细胞标记的理想选择之一. 展开更多

关键词 量子点 共培养 睾丸体细胞 细胞标记

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显微CT在口腔医学研究中的应用 被引量：10

3

作者 刘广鹏 曹谊林 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2007年第3期333-336,共4页

显微CT(micro-computed tomography,MicroCT)技术是一种新型的采用X线成像原理进行超高分辨率三维成像的设备,可以在不破坏样品的情况下,对骨骼、牙和各种生物材料进行超高分辨率X线成像,获得高精度三维图像,并进行结构、密度和力学的... 显微CT(micro-computed tomography,MicroCT)技术是一种新型的采用X线成像原理进行超高分辨率三维成像的设备,可以在不破坏样品的情况下,对骨骼、牙和各种生物材料进行超高分辨率X线成像,获得高精度三维图像,并进行结构、密度和力学的定量分析,是研究硬组织材料的强大工具。作者根据实际操作经验,结合文献资料,探讨该技术在口腔医学研究中的应用。 展开更多

关键词 显微CT 口腔医学 应用

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比较不同处理方法对脱细胞真皮渗透性的影响 被引量：5

4

作者 陈灿 王志军 +3 位作者 刘伟 王斌 杨柠泽 张晨 《中国美容整形外科杂志》 CAS 2008年第4期303-306,共4页

目的比较不同处理方法对猪脱细胞真皮渗透性的影响。方法对猪脱细胞真皮分别进行冷冻干燥、机械打孔、戊二醛交联三种处理,比较处理前后孔隙率的变化,并将100μl浓度为1×106/ml的成纤维细胞悬液分别接种于无处理脱细胞真皮基质(ADM... 目的比较不同处理方法对猪脱细胞真皮渗透性的影响。方法对猪脱细胞真皮分别进行冷冻干燥、机械打孔、戊二醛交联三种处理,比较处理前后孔隙率的变化,并将100μl浓度为1×106/ml的成纤维细胞悬液分别接种于无处理脱细胞真皮基质(ADM)及经3种处理后ADM上,于1、3、5、7d用MTT法测定其OD值,每组各取接种1周后的复合皮行HE染色观察。结果猪脱细胞真皮的平均孔隙率为65.61%,冷冻干燥后为67.85%,机械打孔后为71.37%,经戊二醛交联后为66.11%。MTT试验的生长曲线图显示,成纤维细胞在打孔后ADM上黏附增殖优于其他组。切片HE染色显示,经打孔处理后,细胞可部分渗透至ADM内,其他组细胞仅在其表面爬行且膜片不完整。结论机械打孔法能提高猪脱细胞真皮的渗透性,可用于组织工程皮肤的构建。 展开更多

关键词 脱细胞真皮基质 渗透性 机械打孔

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ADMA—DDAH路径在尿酸引起血管内皮损伤中的作用 被引量：6

5

作者 张威 袁伟杰 +5 位作者 陈博 李晓宇 彭燕 郝静 谷立杰 戴艳 《中华肾脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期17-22,共6页

目的 观察可溶性尿酸（UA）直接作用于血管内皮细胞后,对不对称二甲基精氨酸（ADMA）生成和二甲基精氨酸二甲胺水解酶2（DDAH-2）表达的影响,探讨ADMA-DDAH路径在尿酸引起的血管内皮损伤中的作用.方法 人脐静脉内皮细胞（HUVEC）在含不... 目的 观察可溶性尿酸（UA）直接作用于血管内皮细胞后,对不对称二甲基精氨酸（ADMA）生成和二甲基精氨酸二甲胺水解酶2（DDAH-2）表达的影响,探讨ADMA-DDAH路径在尿酸引起的血管内皮损伤中的作用.方法 人脐静脉内皮细胞（HUVEC）在含不同浓度UA（0、60、120 mg/L）的培养液孵育下,选取6 h和24 h为研究时间点,应用ELISA法和高压液相质谱分析（HPLC）技术检测细胞上清液中ADMA的浓度;应用RT-PCR、免疫荧光（IF）和蛋白印迹法（WB）检测内皮细胞DDAH-2的表达;应用流式细胞技术检测细胞内2＇,7＇-二氯荧光素（DCF）的荧光强度,用以评估内皮细胞活性氧簇（ROS）的生成.分别收集并检测经UA（0、60、120 mg/L）单独刺激和与干预剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）（UA 120 mg/L＋NAC 10 mmol/L）共孵育24 h后各组细胞内的DDAH-2蛋白水平,并将其与ADMA标准品在37℃共孵育2 h,根据ADMA的降解量,间接评估不同浓度尿酸作用对内皮细胞DDAH-2蛋白活性的影响.结果 UA以浓度依赖的方式上调ADMA的表达,并且在相同浓度下,刺激24 h比6 h更显著地上调ADMA的表达（均P＜0.05）.UA浓度、作用时间的改变对细胞内DDAH-2表达的影响无明显差异（均P＞0.05）.高UA组作用24 h后细胞内ROS生成比低UA组增多（P＜0.05）,DDAH-2活性降低（P＜0.05）,此效应可被NAC的干预所阻断.结论 高浓度UA可促进内皮细胞ROS生成,从而导致DDAH-2活性的降低和ADMA降解的减少,而干预内皮细胞NO的合成.据此推论,高尿酸损伤内皮细胞可能有DDAH-ADMA轴的参与. 展开更多

关键词 尿酸 内皮损伤 不对称二甲基精氨酸 二甲基精氨酸二甲胺水解酶 活性氧簇

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组织工程化膀胱平滑肌结构的体外构建 被引量：3

6

作者 卢慕峻 王忠 +2 位作者 傅强 刘伟 曹谊林 《组织工程与重建外科杂志》 2006年第2期76-78,共3页

目的利用组织工程方法在体外初步构建膀胱平滑肌结构。方法置备膀胱脱细胞基质移植物(BAMG)并以HE和Masson染色进行支架材料评价。酶消化法获得膀胱平滑肌原代细胞,分别以免疫荧光和RT-PCR进行细胞鉴定。经过体外培养和扩增后,将P3代膀... 目的利用组织工程方法在体外初步构建膀胱平滑肌结构。方法置备膀胱脱细胞基质移植物(BAMG)并以HE和Masson染色进行支架材料评价。酶消化法获得膀胱平滑肌原代细胞,分别以免疫荧光和RT-PCR进行细胞鉴定。经过体外培养和扩增后,将P3代膀胱平滑肌细胞接种在BAMG上。结果支架上的膀胱平滑肌细胞经过体外培养4周后形成多层结构,同时免疫组化检测α-SmoothMuscleActin表达阳性。结论运用组织工程方法能够在体外进行膀胱平滑肌结构的初步构建,为进一步膀胱组织工程修复奠定技术基础。 展开更多

关键词 组织工程化 膀胱平滑肌细胞 多层结构 体外构建 In Vitro Bladder Smooth Muscle 体外培养 工程方法 初步构建 免疫组化检测 脱细胞基质 支架上 原代细胞 细胞接种 细胞鉴定 免疫荧光 酶消化法 技术基础 工程修复 材料评价

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SD大鼠人造牙槽突骨缺损自愈率的显微CT评价 被引量：2

7

作者 许悦 陈振琦 +2 位作者 吴军 李壬媚 刘广鹏 《中国口腔颌面外科杂志》 CAS 2011年第2期126-129,共4页

目的:采用显微CT评价SD大鼠牙槽突不同大小骨缺损的自愈情况,为建立大鼠牙槽突裂标准缺损模型提供实验依据。方法:7周龄SD大鼠18只,随机分为A、B2组,采用手术方法在大鼠右上颌建立3mm×3mm×2mm(A组)和4mm×4 mm×3mm(B... 目的:采用显微CT评价SD大鼠牙槽突不同大小骨缺损的自愈情况,为建立大鼠牙槽突裂标准缺损模型提供实验依据。方法:7周龄SD大鼠18只,随机分为A、B2组,采用手术方法在大鼠右上颌建立3mm×3mm×2mm(A组)和4mm×4 mm×3mm(B组)的单侧牙槽突骨缺损。分别在手术后即刻、4周和8周处死取材。通过显微CT三维重建检测,定量分析骨缺损区的愈合情况。结果:4周时,A组的新骨形成量为80.42%,B组为54.35%;8周时,A组的新骨形成量为97.5%,B组为93.12%。2组标本的骨缺损在8周时均基本自愈。结论:显微CT可用于大鼠离体骨标本的骨量计算,2种不同大小的牙槽突骨缺损自愈率无明显差别。 展开更多

关键词 大鼠 牙槽突 标准缺损 显微CT

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混合接种法构建组织工程皮肤 被引量：2

8

作者 陈灿 李高峰 +4 位作者 刘伟 杨柠泽 王斌 张晨 王志军 《中华整形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期365-368,共4页

目的探讨混合接种法体外构建复合皮的可行性。方法在异种猪脱细胞真皮的真皮面接种人成纤维细胞7d后，将其分两组进行实验。实验组：将表皮细胞按5×10^5／cm^2与成纤维细胞0．2×10^5／cm^2混合后接种于表皮面，培养液用K—SF... 目的探讨混合接种法体外构建复合皮的可行性。方法在异种猪脱细胞真皮的真皮面接种人成纤维细胞7d后，将其分两组进行实验。实验组：将表皮细胞按5×10^5／cm^2与成纤维细胞0．2×10^5／cm^2混合后接种于表皮面，培养液用K—SFM与成纤维细胞上清的1：1混合液。对照组：仅接种表皮细胞5×10^5／cm^2，培养液用K-SFM。培养1、3周后取材观察其形态变化，并行免疫组化鉴定。结果培养3周后，实验组可见表皮层连续，细胞层数3～4层，与真皮连接紧密，有表皮突形成；对照组表皮细胞层仅1～2层，且与真皮分离。实验组Laminin强阳性提示基底膜形成充分，并经透射电镜也可观察到完整的基底膜。结论将表皮细胞与少量成纤维细胞混合接种，可促进表皮细胞在脱细胞真皮上黏附增殖，并有助于基底膜充分形成。 展开更多

关键词 脱细胞真皮 组织工程 皮肤 基底膜

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睾丸支持细胞的基本生物学特性 被引量：1

9

作者 韩妲丽 王晓云 +3 位作者 邢新 周广东 刘伟 曹谊林 《生殖医学杂志》 CAS 2008年第5期361-365,共5页

目的通过了解睾丸支持细胞(Sertoli cells,SC)的基本生物学特性,探讨SC鉴定的良好方法。方法联合应用复合胶原酶及差速贴壁法从睾丸组织中分离、培养SC,光镜和电镜下观察细胞的形态、MTT法测定细胞的生长曲线,观察其在体外培养条件下的... 目的通过了解睾丸支持细胞(Sertoli cells,SC)的基本生物学特性,探讨SC鉴定的良好方法。方法联合应用复合胶原酶及差速贴壁法从睾丸组织中分离、培养SC,光镜和电镜下观察细胞的形态、MTT法测定细胞的生长曲线,观察其在体外培养条件下的增殖特性;利用免疫细胞染色及免疫荧光染色的方法,检测Fas配体(FasL)的表达,观察其免疫功能;应用吖啶橙荧光染色进行细胞鉴定。结果联合应用复合胶原酶及差速贴壁法分离、培养的细胞在光镜下呈长柱状及三角形,增殖能力强,电镜下胞核中可见特异性卫星小体,胞质中细胞器丰富,免疫细胞染色及免疫荧光染色证实其高表达FasL,吖啶橙荧光染色可见胞核中含有大量异染色质,核仁明显,证实其为SC。结论复合胶原酶及差速贴壁法分离的SC具有良好的增殖能力及免疫功能,电镜、吖啶橙荧光染色是鉴定SC方便、有效的方法。 展开更多

关键词 支持细胞 FAS配体 吖啶橙

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间充质干细胞源性外泌体microRNA在心脏缺血性损伤修复中的研究进展 被引量：1

10

作者 曹润峰 葛俊文 +1 位作者 方霞 沈立 《中华细胞与干细胞杂志（电子版）》 2021年第1期40-47,共8页

心脏缺血性损伤是危害人类健康的重要原因,过去的干细胞疗法具有重要的功能缺陷,如免疫排斥、致瘤性和输注毒性等问题。大量研究表明,间充质干细胞的主要治疗作用是由旁分泌因子所介导。最新研究发现,间充质干细胞来源的外泌体microRNA... 心脏缺血性损伤是危害人类健康的重要原因,过去的干细胞疗法具有重要的功能缺陷,如免疫排斥、致瘤性和输注毒性等问题。大量研究表明,间充质干细胞的主要治疗作用是由旁分泌因子所介导。最新研究发现,间充质干细胞来源的外泌体microRNA从移植的干细胞转移至缺血损伤的心脏细胞,调节细胞的增殖、凋亡、炎症和血管生成。本文对来源于间充质干细胞的外泌体及其内部microRNA在心脏缺血性损伤修复中的分子机制进行综述。 展开更多

关键词 外泌体 MICRORNA 心脏缺血性损伤 分子机制

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腺病毒-BMP7载体的包装与纯化

11

作者 刘德莉 《组织工程与重建外科杂志》 2007年第4期226-227,共2页

腺病毒（Adeno）基因组为线状双链DNA，长度大约36kb．适合于容纳较大片段外源基因。与逆转录病毒载体相比，腺病毒载体能有效地将外源基因转染到各种靶细胞中。其宿主范围广，感染性强，尤其能感染分化后的非分裂期细胞。在Adeno生活... 腺病毒（Adeno）基因组为线状双链DNA，长度大约36kb．适合于容纳较大片段外源基因。与逆转录病毒载体相比，腺病毒载体能有效地将外源基因转染到各种靶细胞中。其宿主范围广，感染性强，尤其能感染分化后的非分裂期细胞。在Adeno生活周期中，其基因不整合到宿主细胞DNA中，故无插入突变激活癌基因的危险，外源基因能游离地表达。商品化的腺病毒载体一般剔除了其基因组的E1区，经体外重组后，产生可复制缺陷型腺病毒。 展开更多

关键词 逆转录病毒载体 腺病毒载体 外源基因转染 复制缺陷型腺病毒 双链DNA 纯化 包装 宿主细胞

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免疫酶细胞化学技术

12

作者 殷德民 《组织工程与重建外科杂志》 2006年第6期341-343,349,共3页

关键词 免疫酶细胞 酶细胞化学 辣根过氧化物酶 免疫细胞化学 组织工程化 抗体特异性 酶标抗体 抗体分子 化学技术 反应结合 新技术 细胞内 抗原 检测 构建 方法 标记

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上颌窦提升同期种植的研究现状 被引量：17

13

作者 邹德荣 蒋欣泉 张志愿 《口腔颌面外科杂志》 CAS 2010年第1期49-53,共5页

上颌后牙区骨量不足限制了种植修复的应用，主要与牙缺失后牙槽骨吸收和萎缩、上颌窦进一步气化使窦底位置过低等有关。种植体难以取得初期稳定性，植入时极易穿破上颌窦黏膜进入窦腔，引起感染，导致种植失败。Tatumt21在20世纪80年代... 上颌后牙区骨量不足限制了种植修复的应用，主要与牙缺失后牙槽骨吸收和萎缩、上颌窦进一步气化使窦底位置过低等有关。种植体难以取得初期稳定性，植入时极易穿破上颌窦黏膜进入窦腔，引起感染，导致种植失败。Tatumt21在20世纪80年代中期就提出了用上颌窦提升术来解决上颌后牙区行牙种植时骨量不足的问题。上颌窦提升时常在提升的上颌窦底和窦黏膜之间的空间植入骨移植材料，使得上颌窦底至牙槽嵴顶的垂直骨量增加。 展开更多

关键词 上颌窦提升 种植 同期

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同种异体组织工程化软骨局部免疫豁免诱导的实验(英文) 被引量：6

14

作者 胡洪亮 曹谊林 +2 位作者 陈婷婷 樊绮诗 胡翊群 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第14期2757-2760,共4页

背景:同种异体软骨移植存在局部免疫排斥反应,有必要进一步减少其排斥反应,以促进软骨修复的临床应用,为此进行一系列局部免疫豁免诱导的实验很有意义。目的:观察FasL基因重组逆转录病毒载体转染软骨细胞形成同种异体组织工程化软骨在... 背景:同种异体软骨移植存在局部免疫排斥反应,有必要进一步减少其排斥反应,以促进软骨修复的临床应用,为此进行一系列局部免疫豁免诱导的实验很有意义。目的:观察FasL基因重组逆转录病毒载体转染软骨细胞形成同种异体组织工程化软骨在体内生长情况。设计:随机对照观察。单位:上海交通大学。材料:选用36只同种异体新西兰兔为受者,45只新生1周龄青紫蓝兔为供者,雌雄均不限。购自中国科学院实验动物研究中心。双嗜性逆转录病毒包装细胞系PT67购自Clontech公司;细胞培养基DMEM、胎牛血清、G418、Polybrene购自GIBCO BRL。方法:实验于2000-01/2005-07在原上海第二医科大学完成。摸球法随机将新西兰兔分为3组:同种异体软骨细胞-FasL组、同种异体软骨细胞组及空白组。每组各12只。利用重组逆转录病毒载体转染的青紫蓝兔软骨细胞和组织工程材料pluronic F-127复合物构建兔同种异体组织工程软骨。①移植物观察其大体观察与质量变化:各组均将相应材料注入新西兰白兔的皮下,移植接种后1,2,3个月取出移植物观察其大体观察与质量变化。②染色观察:移植接种后1,2,3月取出移植物,切片,行苏木精-伊红、Safranin’O、Masson’s trichrome染色观察。③抗体检测:移植接种后1,2月抽血1mL,将青紫蓝兔的软骨细胞用裂解液冻融裂解作为混合抗原,于琼脂糖介质中电泳分离,与受者新西兰兔血清作用,观察有无相应抗体产生。④补体依赖细胞毒实验:将青紫蓝兔的软骨细胞制备成2×109L-1的细胞悬液,接种于96孔板上,贴壁生长24h,加受者新西兰兔血清进行细胞毒试验,在显微镜下计数凋亡细胞的百分率。主要观察指标:①两组移植物的大体观察与质量变化。②组织学变化。③抗体检测结果。④凋亡细胞的百分率。结果:纳入实验兔81只均进入结果分析。①移植物的大体观察与质量变 展开更多

关键词 组织工程 同种异体软骨 逆转录病毒载体 FASL

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唇腭裂合并的单侧牙槽突裂大鼠模型的建立和稳定性研究 被引量：7

15

作者 许悦 陈振琦 +2 位作者 吴军 李壬媚 刘广鹏 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1111-1114,1142,共5页

目的建立唇腭裂合并的上颌骨缺损(牙槽突裂)大鼠模型,并研究其稳定性。方法以7周龄SD大鼠作为实验对象,于右侧上颌制备4mm×4mm×3mm的牙槽突裂,模拟建立唇腭裂合并的上颌骨缺损大鼠模型。根据术后骨缺损区的处理方式将模型大... 目的建立唇腭裂合并的上颌骨缺损(牙槽突裂)大鼠模型,并研究其稳定性。方法以7周龄SD大鼠作为实验对象,于右侧上颌制备4mm×4mm×3mm的牙槽突裂,模拟建立唇腭裂合并的上颌骨缺损大鼠模型。根据术后骨缺损区的处理方式将模型大鼠分为对照组(骨缺损区不予特殊处理)和实验组(骨缺损区予以骨蜡填塞),每组10只。两组大鼠分别于术毕即刻和术后4、8周时点分批处死后制备模型标本;利用显微CT(MicroCT)进行三维重建,观察和定量检测骨缺损区新骨形成情况,分析和比较两组模型的稳定性。结果 MicroCT三维图像重建显示,在术后8周时点,对照组有大量新骨充填于缺损区,缺损区明显缩小;而实验组仅断端边缘有少量新骨形成,缺损区无明显缩小。定量分析显示,对照组和实验组术后4周时点的新骨形成百分比分别为54.35%和16.53%,术后8周时点的新骨形成百分比分别为93.12%和29.30%,两组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论成功建立模拟唇腭裂合并的上颌骨缺损(牙槽突裂)大鼠模型,利用骨蜡填塞骨缺损区能显著提高模型的稳定性。 展开更多

关键词 牙槽突裂 植骨 显微CT

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人脐血间充质干细胞修复颅骨缺损的实验研究 被引量：7

16

作者 刘广鹏 李宇琳 +3 位作者 孙剑 崔磊 张文杰 曹谊林 《中华整形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期34-38,共5页

目的应用人脐血间充质干细胞（umbilical cord blood derived mesenchymal stem cells，UCB—MSCs）复合脱钙骨材料构建组织工程化骨，修复裸大鼠颅骨标准缺损。方法体外扩增培养、成骨诱导人UCB—MSCs，采用AlizarinRed染色和钙离子半... 目的应用人脐血间充质干细胞（umbilical cord blood derived mesenchymal stem cells，UCB—MSCs）复合脱钙骨材料构建组织工程化骨，修复裸大鼠颅骨标准缺损。方法体外扩增培养、成骨诱导人UCB—MSCs，采用AlizarinRed染色和钙离子半定量的方法测定细胞成骨分化能力。将第2代细胞接种在脱钙骨支架材料上继续诱导培养，扫描电镜检测细胞在材料上的生长状况。制备裸大鼠双侧颅骨全层标准缺损（直径5mm），一侧以细胞材料复合物修复作为实验侧（n=8）；另一侧以单纯脱钙骨材料修复作为对照侧（n=8）。术后6、12周取材，分别通过大体形态观察、显微CT（Micro—CT）、组织学方法检测颅骨缺损的修复效果。结果UCB—MSCs体外能够诱导分化为成骨细胞，且在脱钙骨支架材料上生长良好。Micro—CT检测显示术后6周实验侧有部分新生骨组织形成，12周时骨缺损修复率达（78．19±6．45）％，脱钙骨材料降解完全；对照侧6周时无明显新骨生成，12周时材料完全降解，骨缺损未修复。组织学检测显示12周时实验侧有较多成熟骨生成，为骨性愈合；对照侧骨缺损为纤维愈合。结论成骨诱导的人UCB—MSCs复合脱钙骨材料构建的组织工程化骨可修复裸大鼠颅骨全层标准缺损，有望成为新的组织工程骨种子细胞来源。 展开更多

关键词 组织工程 间充质干细胞 颅骨 脱钙骨

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壳聚糖复合纳米凝胶的聚合诱导自组装制备及生物应用 被引量：6

17

作者 袁晓菁 王灏 +2 位作者 戴婷婷 李圣利 窦红静 《功能高分子学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期340-349,共10页

以生物大分子壳聚糖为主要组成基元,在壳聚糖的羟基碳上引发单体自由基共聚合。在聚合过程中疏水的合成高分子接枝链与亲水的壳聚糖分子自组装诱导形成纳米尺度的聚集体,通过引入具有肿瘤还原环境响应性的交联剂,得到了肿瘤环境响应的... 以生物大分子壳聚糖为主要组成基元,在壳聚糖的羟基碳上引发单体自由基共聚合。在聚合过程中疏水的合成高分子接枝链与亲水的壳聚糖分子自组装诱导形成纳米尺度的聚集体,通过引入具有肿瘤还原环境响应性的交联剂,得到了肿瘤环境响应的壳聚糖-合成高分子共聚物纳米凝胶。采用透射电镜、红外光谱等手段对纳米凝胶的粒径、结构、形貌和性能进行表征,探讨了聚合诱导自组装高效制备壳聚糖纳米凝胶的机理,证实了所得纳米凝胶粒径的可控性。进一步采用近红外荧光分子和磁共振显影(MRI)分子标记的方法制备了荧光/MRI多功能复合纳米凝胶,对凝胶显影性能进行了探讨,证实了其优异的细胞标记能力和良好的生物相容性。 展开更多

关键词 壳聚糖 纳米凝胶 聚合诱导自组装 荧光显影 磁共振显影

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9例应用组织工程骨修复颅骨缺损患者的护理 被引量：3

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作者 唐军 刘广鹏 李新庆 《中华护理杂志》 CSCD 北大核心 2010年第7期660-661,共2页

总结了9例自体骨髓基质干细胞组织工程骨修复颅骨缺损的护理经验。术前做好心理护理,术中护理配合恰当,术后重点观察切口渗血、渗液情况,保持引流管通畅,预防各种并发症的发生。6例获得颅骨缺损的良好修复,2例发生不同程度的组织工程骨... 总结了9例自体骨髓基质干细胞组织工程骨修复颅骨缺损的护理经验。术前做好心理护理,术中护理配合恰当,术后重点观察切口渗血、渗液情况,保持引流管通畅,预防各种并发症的发生。6例获得颅骨缺损的良好修复,2例发生不同程度的组织工程骨吸收现象,1例术后3个月失去随访。 展开更多

关键词 颅脑损伤 骨髓基质干细胞 组织工程 干细胞移植 护理

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利用增强型绿色荧光蛋白体外表达探讨逆转录病毒转染软骨细胞的最佳条件(英文)

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作者 胡洪亮 陈婷婷 +2 位作者 曹德君 樊绮诗 胡翊群 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第19期3850-3853,共4页

背景:增强型绿色荧光蛋白是目前最佳标记分子,具有荧光特异性高、易于检测等独特的优势,利用基因工程技术构建能稳定表达增强型绿色荧光蛋白的重组逆转录病毒载体EGFP-pLNCX2,转染同种异体软骨细胞值得研究。目的:构建能稳定表达增强型... 背景:增强型绿色荧光蛋白是目前最佳标记分子,具有荧光特异性高、易于检测等独特的优势,利用基因工程技术构建能稳定表达增强型绿色荧光蛋白的重组逆转录病毒载体EGFP-pLNCX2,转染同种异体软骨细胞值得研究。目的:构建能稳定表达增强型绿色荧光蛋白的重组逆转录病毒载体EGFP-pLNCX2,探讨转染同种异体软骨细胞的最佳条件。设计:随机对照观察。单位:上海交通大学。材料:选用30只出生1周的新西兰白兔,雌雄不限,均购自中国科学院实验动物研究中心。双嗜性逆转录病毒包装细胞系PT67购自Clontech公司;小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞购自ATCC公司;DH5a大肠杆菌由本实验室保存;逆转录病毒载体pLNCX2购自Clontech公司;带有增强型绿色荧光蛋白的pEGFP-C1质粒由中科院细胞所丛笑倩教授惠赠。方法:实验于2005-08在上海交通大学完成。分离提取并培养新西兰白兔软骨细胞,利用基因工程技术构建能稳定表达增强型绿色荧光蛋白的重组逆转录病毒载体EGFP-pLNCX2,转染培养后的新西兰白兔软骨细胞,荧光显微镜观察转染的效果。于直径10cm的平皿接种6×105个软骨细胞,分别立即转染及接种12,24,48h后转染逆转录病毒-EGFP,1周后作流式细胞仪测定EGFP表达效率,观察逆转录病毒转染原代软骨细胞最佳时机。软骨酶消化后的软骨细胞接种24h后转染逆转录病毒,分别于第2,3,4,5,6天加250mg/LG418进行筛选。PBS洗涤后作流式细胞仪检测其效率,观察G418筛选的最佳时机。主要观察指标:①EGFP-pLNCX2转染效果。②逆转录病毒转染原代软骨细胞及G418筛选最佳时机。结果:①重组逆转录病毒载体EGFP-pLNCX2转染原代兔软骨细胞,经G418初步筛选而获得的高表达格局,可见软骨细胞经过筛选和表达绿色荧光蛋白后,保持正常的形态学,细胞伸出伪足贴壁,基质分泌旺盛。②逆转录病毒转染原代软骨细胞的最佳时机� 展开更多

关键词 增强型绿色荧光蛋白 逆转录病毒载体 转染 软骨细胞

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骨髓脂肪细胞多向分化潜能的初步探讨

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作者 陈凡凡 张文杰 +2 位作者 崔磊 刘伟 曹谊林 《组织工程与重建外科杂志》 2006年第1期8-11,共3页

目的从人骨髓脂肪层中分离培养骨髓脂肪细胞,探讨其多向分化潜能。方法体外贴壁培养和扩增人骨髓脂肪细胞,采用流式细胞仪检测骨髓脂肪细胞表面抗原CD105、CD166、CD49d等的表达情况。通过RT-PCR检测转录因子过氧化物酶增殖激活受体-γ2... 目的从人骨髓脂肪层中分离培养骨髓脂肪细胞,探讨其多向分化潜能。方法体外贴壁培养和扩增人骨髓脂肪细胞,采用流式细胞仪检测骨髓脂肪细胞表面抗原CD105、CD166、CD49d等的表达情况。通过RT-PCR检测转录因子过氧化物酶增殖激活受体-γ2(PPAR-γ2)、CCAATT增强结合蛋白(C/EBPs)和瘦素(leptin)的表达。经体外诱导分化检测骨髓脂肪细胞的体外成脂和成骨能力。结果流式细胞仪检测结果显示骨髓脂肪细胞与骨髓基质细胞具有相似的表面标志,但骨髓脂肪细胞特征性表达CD49d、C/EBPs以及leptin。体外诱导分化实验显示骨髓脂肪细胞具有成骨和成脂的能力。结论骨髓脂肪细胞具有脂肪前体细胞的特性,但同时它具有同骨髓基质细胞相似的表面标志和多向分化潜能,提示可以作为一种新的组织工程种子细胞来源。 展开更多

关键词 骨髓脂肪细胞 多向分化潜能 流式细胞仪检测 体外诱导分化 骨髓基质细胞 表面标志 脂肪前体细胞 细胞表面抗原 人骨髓 细胞特征性 过氧化物酶 组织工程 转录因子 显示 细胞来源 贴壁培养 成骨能力 结合蛋白 激活受体 分离培养

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