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Menin调控小鼠胚胎早期发育相关基因的研究 被引量：2
1
作者 张翠平 朱雅欣 +4 位作者 张宏利 李文毅 吴铃 龙红梅 李果 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期660-664,673,共6页
目的研究1型多发性内分泌肿瘤综合征相关基因(Men1)编码的蛋白(menin)对小鼠胚胎早期发育相关基因的调控,并探讨其可能的作用机制。方法以经丝裂霉素C处理的小鼠胚胎成纤维细胞作为滋养层细胞培养未分化的小鼠胚胎干细胞,使其体外分化... 目的研究1型多发性内分泌肿瘤综合征相关基因(Men1)编码的蛋白(menin)对小鼠胚胎早期发育相关基因的调控,并探讨其可能的作用机制。方法以经丝裂霉素C处理的小鼠胚胎成纤维细胞作为滋养层细胞培养未分化的小鼠胚胎干细胞,使其体外分化形成胚胎体。RT-PCR鉴定胚胎体胚胎发育期标志基因表达;染色体免疫共沉淀结合启动子基因芯片技术检测成熟胚胎体中menin调控的下游基因,Real-Time PCR鉴定结果。结果 RT-PCR结果表明胚胎体相当于小鼠胚胎发育的早期器官形成期。基因芯片检测显示,menin能调控8 640个备选基因中的784个;基因分析显示,menin能通过多个信号通路调控下游基因,包括Wnt信号通路的1500003O03Rik、Prkca、Fosl1、Nfatc3、Dvl1;TGF-β信号转导途径的Thbs1、Tgfb3、Bmp4、Smurf2;凋亡信号通路的Casp6、1500003O03Rik、Prkar1a、Ripk1、Traf2、Capn5、Endog、Myd88;MAPK信号通路的Casp6、Arrb2、Fgf15、1500003O03Rik、Map3k4、Map2k1ip1、Tgfb3、Prkca、Traf2、Dusp7、Atf2等。结论 Menin可能通过Wnt、MAPK、TGF-β、凋亡等多种信号通路对小鼠胚胎早期发育相关基因进行调控。 展开更多
关键词 MENIN 胚胎体 染色体免疫共沉淀 启动子基因芯片 信号通路
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甲状腺功能减退对发育期鼠脑氧化应激状态的影响 被引量：2
2
作者 张洪梅 苏青 罗敏 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期286-288,共3页
目的研究甲状腺功能减退(甲减)对发育期大鼠脑组织氧化应激状态的影响,进一步探讨甲减鼠脑发育异常的机制。方法以丙基硫氧嘧啶溶液灌胃,制成大鼠围生期甲减模型,收集出生后21 d的正常(对照组)及甲减幼鼠(甲减组)脑组织,测定脑组织匀浆... 目的研究甲状腺功能减退(甲减)对发育期大鼠脑组织氧化应激状态的影响,进一步探讨甲减鼠脑发育异常的机制。方法以丙基硫氧嘧啶溶液灌胃,制成大鼠围生期甲减模型,收集出生后21 d的正常(对照组)及甲减幼鼠(甲减组)脑组织,测定脑组织匀浆液各项氧化应激指标的水平。结果甲减组幼鼠脑组织蛋白羰基及硫代巴比妥酸反应产物水平、总抗氧化力、还原型谷胱甘肽水平、超氧化物歧化酶及谷胱甘肽过氧化物酶的活性较对照组升高(P<0.05);过氧化氢酶活性两组间无统计学差异(P>0.05)。结论大鼠脑发育期甲减可引起脑组织氧化应激状态的改变,这可能参与了甲减性脑损伤的发生。 展开更多
关键词 甲状腺功能减退 甲状腺激素 氧化应激 脑发育 脑损伤 大鼠
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ATP结合盒转运体A1基因多态性与2型糖尿病及肥胖的相关性
3
作者 张霞 任颖 +3 位作者 刘伟 郑升 骆天红 罗敏 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期961-964,共4页
目的研究上海地区汉族人群中,ATP结合盒转运体A1(ABCA1)基因位点rs2020927的单核苷酸多态性与2型糖尿病(T2DM)及肥胖发病的相关性。方法选取上海地区无亲缘关系的T2DM患者440例,根据体质量指数(BM I)分为肥胖组(n=252,BM I>25 kg/m2... 目的研究上海地区汉族人群中,ATP结合盒转运体A1(ABCA1)基因位点rs2020927的单核苷酸多态性与2型糖尿病(T2DM)及肥胖发病的相关性。方法选取上海地区无亲缘关系的T2DM患者440例,根据体质量指数(BM I)分为肥胖组(n=252,BM I>25 kg/m2)和正常体质量组(n=188,BM I<25 kg/m2);另选取正常对照者315例。采用等位基因特异的实时PCR,对ABCA1基因位点rs2020927进行基因分型,并通过相关和Logistic回归分析,研究该位点与T2DM及肥胖的相关性。结果ABCA1基因rs2020927位点基因型频率在不同组间有显著性差异(P=0.001),其中AA、AG、GG基因型频率在对照组人群中分别为43.8%、35.9%和20.3%;在正常体质量的T2DM组中分别为33%、53.2%和13.8%;在肥胖的T2DM组中分别为40.9%、47.2%和11.9%。基因型GG在T2DM肥胖组和对照组中有显著性差异(P=0.009),而T2DM正常体质量组和对照组之间无显著性差异(P>0.05)。结论中国上海汉族人群中,ABCA1基因多态性位点rs2020927可能与T2DM及肥胖的发病相关。 展开更多
关键词 ATP结合盒转运体Al基因 2型糖尿病 肥胖 单核苷酸多态性 胰岛素抵抗
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蛋白激酶C抑制剂对发育期甲状腺功能减退大鼠智力的改善作用
4
作者 张洪梅 苏青 +2 位作者 董艳 李晓永 罗敏 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1231-1233,共3页
目的研究发育期甲状腺功能减退(甲减)的大鼠经蛋白激酶C(PKC)抑制剂bisindolylmaleimideⅪ处理后智力的变化,从信号转导途径进一步探讨甲减时鼠脑发育异常的机制。方法2只SD孕鼠自孕第15天起以丙基硫氧嘧啶溶液灌胃,出生的仔鼠即为甲减... 目的研究发育期甲状腺功能减退(甲减)的大鼠经蛋白激酶C(PKC)抑制剂bisindolylmaleimideⅪ处理后智力的变化,从信号转导途径进一步探讨甲减时鼠脑发育异常的机制。方法2只SD孕鼠自孕第15天起以丙基硫氧嘧啶溶液灌胃,出生的仔鼠即为甲减仔鼠。部分甲减仔鼠于出生当日起腹腔注射PKC抑制剂bisindolylmaleimideⅪ0.6μg.g-1.d-1。另外1只未灌注丙基硫氧嘧啶溶液的雌鼠所产仔鼠作为正常对照组。仔鼠龄达1个月时,对正常对照组(n=8)、甲减组(n=8)、PKC抑制剂处理组(n=8)仔鼠行水迷宫实验测试其智力水平。结果三组仔鼠学习记忆过程存在明显差异。PKC抑制剂组及甲减组皆较正常对照组逃避潜伏期长,找到终点的比率低,游速较正常对照组明显降低;且甲减组比PKC抑制剂组的逃避潜伏期更长,找到终点的比率更低,游速更慢,总体变化有显著性差异(P<0.01)。结论蛋白激酶C抑制剂bisindolylmaleimideⅪ对发育期甲状腺功能减退大鼠的智力有改善作用,PKC信号转导系统可能参与了甲减性脑发育障碍的发生。 展开更多
关键词 蛋白激酶C bisindolylmaleimideⅪ 甲状腺功能减退 学习记忆
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Cathepsin K在脂肪细胞分化中的表达及作用 被引量：1
5
作者 韩峻峰 尹晓 +3 位作者 李晓华 简蔚霞 骆天红 罗敏 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期59-62,共4页
目的 观察cathepsinK在脂肪细胞分化中的表达趋势，初步探讨其在脂肪细胞分化中的作用。方法 4～6周SD大鼠，酶消化法获得前脂肪细胞，黄嘌呤、胰岛素、地塞米松方案进行诱导，RT-PCR和Western blot方法检测cathepsinK在脂肪细胞分化过... 目的 观察cathepsinK在脂肪细胞分化中的表达趋势，初步探讨其在脂肪细胞分化中的作用。方法 4～6周SD大鼠，酶消化法获得前脂肪细胞，黄嘌呤、胰岛素、地塞米松方案进行诱导，RT-PCR和Western blot方法检测cathepsinK在脂肪细胞分化过程中的表达。用不同浓度的cathepsinK抑制剂E-64进行干预，油红染色评估效果。结果 前脂肪细胞汇合后经异丁基-甲基-黄嘌呤、地塞米松、胰岛素诱导，60％～70％的细胞分化为成熟的脂肪细胞表型，且与脂肪细胞分化紧密相关的转录因子——过氧化物增生激活物受体（PPAR-1）持续表达，可用于实验研究。在脂肪细胞分化的过程中cathepsin K mRNA和蛋白表达上升（P〈0．05）。加入不同浓度的E-64后，脂肪细胞分化进程受到抑制，且呈剂量依赖关系。结论 脂肪细胞分化前后cathepsin K的表达存在差异，其抑制剂可以阻止脂肪细胞分化。提示cathepsin K在脂肪细胞分化过程中发挥作用。 展开更多
关键词 CATHEPSIN K 脂肪细胞 分化 E-64
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人胰岛淀粉样多肽沉淀细胞模型的体外构建
6
作者 徐佳 张宏利 +2 位作者 骆天红 田景琰 李果 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期271-274,共4页
目的构建人胰岛淀粉样多肽(hIAPP)基因真核表达载体,并在无内源性IAPP表达的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞株上进行体外表达实验,建立可产生hIAPP沉淀的细胞模型。方法应用RT-PCR技术扩增得到hIAPP cDNA,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,... 目的构建人胰岛淀粉样多肽(hIAPP)基因真核表达载体,并在无内源性IAPP表达的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞株上进行体外表达实验,建立可产生hIAPP沉淀的细胞模型。方法应用RT-PCR技术扩增得到hIAPP cDNA,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-IAPP;随后用lipofectamine 2000介导转染CHO细胞,以RT-PCR法检测重组质粒在mRNA水平的表达,以Thiaflavin S染色的方法检测重组质粒在蛋白水平的表达。结果构建的pcDNA 3.1-hIAPP真核表达体系成功转染体外培养的CHO细胞,目的基因在mRNA水平和蛋白水平均有表达,转染后培养48 h内的CHO细胞用Thioflavin S染色,与阴性对照相比较,证实有hIAPP的表达而导致细胞内淀粉样沉积发生。结论构建了hIAPP真核表达质粒,并成功在体外表达,从而建立了可产生IAPP淀粉样沉淀的体外哺乳动物细胞模型,为进一步研究胰岛淀粉样沉积的发病机制提供了良好的平台。 展开更多
关键词 胰岛淀粉样多肽 基因克隆 真核表达载体
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多种生长因子诱导小鼠胚胎干细胞分化为胰岛素生成细胞团
7
作者 冯龄 张宏利 +5 位作者 李文毅 张芹 许丽红 赵萸 骆天红 李果 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期275-279,共5页
目的探讨体外联合应用激活素A、全反式维甲酸(ATRA)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和烟酰胺4种生长因子能否将小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导分化为胰岛素生成细胞团。方法先后以激活素A、ATRA、bFGF和烟酰胺4种生长因子诱导小鼠ESC 14 d后,... 目的探讨体外联合应用激活素A、全反式维甲酸(ATRA)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和烟酰胺4种生长因子能否将小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导分化为胰岛素生成细胞团。方法先后以激活素A、ATRA、bFGF和烟酰胺4种生长因子诱导小鼠ESC 14 d后,应用RT-PCR、DTZ染色和免疫荧光检测分化细胞胰岛素表达。结果分化细胞可检测到胰岛素mRNA表达,DTZ染色和免疫荧光染色阳性。结论体外联合应用激活素A、ATRA、bFGF和烟酰胺4种生长因子能够将小鼠ESC诱导分化为胰岛素生成细胞团。 展开更多
关键词 干细胞 胚胎 生长因子 胰岛素生成细胞团 小鼠
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人血清IA-2抗体检测方法的建立及应用
8
作者 贾秀娟 谢晓雁 +4 位作者 李果 谢超 张迪 周文中 罗敏 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期552-553,共2页
目的建立糖尿病患者血清中IA-2自身抗体的检测方法。方法以原核表达的人IA-2融合蛋白作为抗原建立人血清IA-2抗体的固相酶联免疫吸附检测方法（ELISA），该方法经优化后用于糖尿病患者血清中IA-2抗体的检测。结果该文所建立方法的平均... 目的建立糖尿病患者血清中IA-2自身抗体的检测方法。方法以原核表达的人IA-2融合蛋白作为抗原建立人血清IA-2抗体的固相酶联免疫吸附检测方法（ELISA），该方法经优化后用于糖尿病患者血清中IA-2抗体的检测。结果该文所建立方法的平均批内和批间变异系数分别为6．8％和7．7％；回收率为99．2％～105％。所测定的1型和2型糖尿病患者血清中IA-2抗体的阳性率分别为49％和3．6％。结论应用原核表达的人IA-2蛋白为抗原所建立的ELISA方法简单且可靠，为糖尿病患者血清中IA-2抗体的检测提供了条件。 展开更多
关键词 糖尿病 固相酶联免疫吸附检测方法 自身抗体 IA-2
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大鼠BTCe蛋白原核表达及功能鉴定
9
作者 李鸿 周伟斌 +5 位作者 顾燕云 周文中 张迪 骆天红 李果 罗敏 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期51-53,共3页
目的原核表达获得大量具有生物活性的大鼠BTCe蛋白。方法RT-PCR法从大鼠肾脏中扩增出150bp BTCe片段,插入原核表达载体pGEX-4T-2,构建质粒pGEX-BTCe。转化BL-21菌,IPTG低温诱导表达融合蛋白,亲和层析法纯化获得融合蛋白,凝血酶酶切后获... 目的原核表达获得大量具有生物活性的大鼠BTCe蛋白。方法RT-PCR法从大鼠肾脏中扩增出150bp BTCe片段,插入原核表达载体pGEX-4T-2,构建质粒pGEX-BTCe。转化BL-21菌,IPTG低温诱导表达融合蛋白,亲和层析法纯化获得融合蛋白,凝血酶酶切后获得目的蛋白,经SDS-PAGE、Western blot及质谱鉴定。以0.5nmol/L BTCe作用于3T3-L1细胞连续培养4d,MTT法检测其促增殖能力。结果融合蛋白以水溶性形式分泌于大肠杆菌BL-21胞浆中。酶切后的目的蛋白经质谱证实其与BTCe蛋白氨基酸序列相符;作用于3T3-L1细胞可明显促进其增殖。结论大鼠BTCe蛋白在pGEX-4T-2原核表达载体可获得高效表达,所纯化蛋白具有促进3T3-L1细胞体外增殖的作用。 展开更多
关键词 BTCe蛋白 克隆 融合蛋白
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正常及饥饿大鼠胃壁组织基因表达谱的研究
10
作者 邵莉 王晓 +3 位作者 李荣英 朱鋐达 宋怀东 陈名道 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期363-366,共4页
目的通过荧光芯片技术从整体水平研究正常及饥饿大鼠胃壁组织基因表达谱,探讨饥饿大鼠胃壁组织基因表达的变化。方法用SD大鼠建立正常和饥饿两种模型,动物断头取胃壁组织抽提RNA,荧光芯片杂交,并对实验结果采用real-timePCR、Northern b... 目的通过荧光芯片技术从整体水平研究正常及饥饿大鼠胃壁组织基因表达谱,探讨饥饿大鼠胃壁组织基因表达的变化。方法用SD大鼠建立正常和饥饿两种模型,动物断头取胃壁组织抽提RNA,荧光芯片杂交,并对实验结果采用real-timePCR、Northern blot和Western blotting方法验证。结果在由基因或表达序列标签(ESTs)组成的9233个杂交点的大鼠基因芯片上,共有504个在饥饿大鼠胃壁组织呈差异表达。其中263个为已知基因,87个为已知的ESTs。在差异表达的基因或ESTs中,上调262个,下调242个,这其中包括与细胞信号转导、细胞结构运动等相关的基因或ESTs。经初步验证,芯片数据的可靠性达80%。结论利用荧光芯片技术研究正常及饥饿大鼠胃壁组织的基因表达谱,可以大规模、高通量发现胃在饥饿状态发生改变的基因,为进一步阐明饥饿胃肠生理、寻找新的与能量代谢及食欲调节相关的基因以及发现基因的新功能奠定基础。 展开更多
关键词 基因芯片 胃壁组织 饥饿 肌动蛋白 大鼠
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