目的:探索补肾中药淫羊藿有效成分淫羊藿苷对间充质干细胞株C3H10T1/2的促成骨分化作用,及该作用与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的相关性。方法:体外培养间充质干细胞株C3H10T1/2,给予淫羊藿苷(0...目的:探索补肾中药淫羊藿有效成分淫羊藿苷对间充质干细胞株C3H10T1/2的促成骨分化作用,及该作用与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的相关性。方法:体外培养间充质干细胞株C3H10T1/2,给予淫羊藿苷(0、10-7、10-6、10-5和10-4mol/L)联合成骨诱导液干预26d后,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色观察成骨分化情况。10-5mol/L淫羊藿苷干预C3H10T1/2细胞2、8、24与48h后,实时荧光定量聚合酶链式反应法(polymerase chain reaction,PCR)检测p38、细胞外调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated protein kinase,p42/44)mRNA的表达。10-5mol/L淫羊藿苷干预C3H10T1/2细胞10、30、60和120min后,蛋白质印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38)、p42和p44,以及翼式转录因子氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)及其磷酸化产物的蛋白表达情况。结果:10-5mol/L淫羊藿苷联合成骨诱导液的促进C3H10T1/2细胞成骨分化能力最强。PCR结果显示,淫羊藿苷作用2h后p38基因表达显著下调(P<0.01);p42和p44mRNA水平在淫羊藿苷干预2h后均显著下调(P<0.01),而在淫羊藿苷干预48h后表达均上调(P<0.05,P<0.01);其他时间点各通路基因表达情况均无显著变化(P>0.05)。10-5mol/L淫羊藿苷作用10min后,磷酸化p42/44蛋白表达减弱,磷酸化p38蛋白表达增强,并持续到30min,但对JNK蛋白的表达无明显影响。结论:淫羊藿苷促进间充质干细胞株C3H10T1/2向成骨细胞分化,其作用可能与激活p38和抑制ERK蛋白的表达有关。展开更多
文摘目的:探索补肾中药淫羊藿有效成分淫羊藿苷对间充质干细胞株C3H10T1/2的促成骨分化作用,及该作用与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的相关性。方法:体外培养间充质干细胞株C3H10T1/2,给予淫羊藿苷(0、10-7、10-6、10-5和10-4mol/L)联合成骨诱导液干预26d后,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色观察成骨分化情况。10-5mol/L淫羊藿苷干预C3H10T1/2细胞2、8、24与48h后,实时荧光定量聚合酶链式反应法(polymerase chain reaction,PCR)检测p38、细胞外调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated protein kinase,p42/44)mRNA的表达。10-5mol/L淫羊藿苷干预C3H10T1/2细胞10、30、60和120min后,蛋白质印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38)、p42和p44,以及翼式转录因子氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)及其磷酸化产物的蛋白表达情况。结果:10-5mol/L淫羊藿苷联合成骨诱导液的促进C3H10T1/2细胞成骨分化能力最强。PCR结果显示,淫羊藿苷作用2h后p38基因表达显著下调(P<0.01);p42和p44mRNA水平在淫羊藿苷干预2h后均显著下调(P<0.01),而在淫羊藿苷干预48h后表达均上调(P<0.05,P<0.01);其他时间点各通路基因表达情况均无显著变化(P>0.05)。10-5mol/L淫羊藿苷作用10min后,磷酸化p42/44蛋白表达减弱,磷酸化p38蛋白表达增强,并持续到30min,但对JNK蛋白的表达无明显影响。结论:淫羊藿苷促进间充质干细胞株C3H10T1/2向成骨细胞分化,其作用可能与激活p38和抑制ERK蛋白的表达有关。
