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题名大肠杆菌Zn2+敏感突变株构建及其功能验证
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作者
王玉婷
徐桐
华贝杰
姜巨全
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机构
东北农业大学生命科学学院
中国科学院微生物研究所
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出处
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第7期2538-2549,共12页
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基金
国家自然科学基金(32070031,31770051)。
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文摘
【背景】Zn^(2+)在细胞解毒及许多生理过程中发挥着关键作用,Zn^(2+)转运蛋白已逐渐引起人们的重视。在大肠杆菌中,zntA和zitB是2个外排Zn^(2+)的关键基因。【目的】构建大肠杆菌Zn^(2+)敏感突变株,并对其功能进行验证。【方法】以Escherichia coli DH5α为出发菌株,利用λRed重组系统,通过携带卡那霉素抗性基因的同源重组片段敲除zntA基因。在单基因敲除菌株基础上,利用携带庆大霉素抗性基因的同源重组片段敲除zitB基因,获得一株敲除了zntA和zitB的双基因敲除菌株KZAB04。通过功能互补实验检测基因敲除菌株及对照菌株对不同浓度Zn^(2+)的敏感程度。【结果】基因敲除菌株KZAB04比出发菌株E.coli DH5α具有更高的Zn^(2+)敏感性。【结论】大肠杆菌Zn^(2+)敏感突变株构建成功。该菌株的构建为zntA和zitB基因功能的研究提供了必要条件,同时也为其他Zn^(2+)转运蛋白基因的功能鉴定与分析奠定了基础。
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关键词
基因敲除
λRed重组
Zn2+转运蛋白
zntA
zitb
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Keywords
gene knockout
λRed recombination
Zn2+transporter
zntA
zitb
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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