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金柑花蕾酵母双杂交cDNA文库构建及评价 被引量:15
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作者 苏玲 李彬 +3 位作者 王青 胡颖 罗聪 何新华 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期3169-3173,共5页
为了探索金柑花发育的分子机制并研究与金柑花发育相关重要基因编码的蛋白质之间的相互作用,本研究以融安金柑不同生长时期的花蕾为材料,采用SMART技术构建了cDNA文库,对该文库进行了鉴定评价。经检测,所构建的cDNA文库滴度为2.83×... 为了探索金柑花发育的分子机制并研究与金柑花发育相关重要基因编码的蛋白质之间的相互作用,本研究以融安金柑不同生长时期的花蕾为材料,采用SMART技术构建了cDNA文库,对该文库进行了鉴定评价。经检测,所构建的cDNA文库滴度为2.83×10^8cfu/mL,文库库容为1.42×10^10cfu,重组率为97.91%,插入的双链cDNA片段长度主要分布在250~2 000 bp之间。结果表明,该文库达到了建库标准,理论上涵盖了全部与融安金柑花蕾发育相关的基因,为后续利用酵母双杂交技术筛选互作蛋白提供了物质基础。 展开更多
关键词 金柑 CDNA文库 SMART技术 酵母双杂交技术
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月季酵母双杂交cDNA文库的构建及RhRD22互作蛋白的筛选 被引量:6
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作者 张竹君 任文娟 +4 位作者 耿子雯 付鲁峰 李伟 姜新强 刘庆华 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2021年第7期2243-2255,共13页
月季(Rosa hybrida)是全球重要的观赏植物,其生长发育和生产质量严重受到干旱胁迫的制约。在已有月季转录组数据的基础上,干旱胁迫可以诱导干旱响应基因RD22(dehydration-responsive gene RD22)的表达。为了进一步探究RhRD22参与干旱胁... 月季(Rosa hybrida)是全球重要的观赏植物,其生长发育和生产质量严重受到干旱胁迫的制约。在已有月季转录组数据的基础上,干旱胁迫可以诱导干旱响应基因RD22(dehydration-responsive gene RD22)的表达。为了进一步探究RhRD22参与干旱胁迫的分子机制,本研究利用改良的SMART(Switching Mechanism At 5’end of RNA Transcript)技术构建月季干旱胁迫酵母双杂交cDNA文库,并利用酵母双杂交技术筛选与RhRD22相互作用的未知潜在蛋白。结果表明:成功构建了高质量月季酵母双杂交cDNA文库,该文库库容为3×106cfu;插入cDNA片段的长度分布在400~2000 bp,平均长度大于1000 bp;重组率约为100%。此外,利用重组诱饵蛋白p GBKT7-RhRD22在该文库中筛选了7个与RhRD22相互作用的蛋白,包括RhEF-Ts、RhDRT100、RhGAPN、RhLDH、RhACLA-3、RhCALS3、RhEOL1。互作蛋白的GO注释分析表明,RhRD22可能参与蛋白质多肽链的翻译和延伸、DNA修复、代谢反应、乙烯生物合成、蛋白质泛素化、植物防御、应激反应等生物学过程。上述结果为进一步解析RhRD22参与干旱胁迫的分子机制提供了理论参考。 展开更多
关键词 月季(Rosa hybrida) RhRD22 c DNA文库 酵母双杂交技术 互作蛋白
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Tec激酶区作用蛋白RAI16的筛选和结构功能分析 被引量:3
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作者 邓婧 王阁 +5 位作者 杨进 郑继军 王红中 胡庆 王东 李增鹏 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期133-135,共3页
目的筛选与Tec激酶结构域相互作用的蛋白分子,并获得其蛋白质结构及功能信息。方法通过酵母双杂交技术筛选作用蛋白,利用相应的计算机软件及数据库,对筛库所得蛋白进行生物信息学分析。结果筛选得到1种Tec激酶区作用蛋白RAI16,其cDNA序... 目的筛选与Tec激酶结构域相互作用的蛋白分子,并获得其蛋白质结构及功能信息。方法通过酵母双杂交技术筛选作用蛋白,利用相应的计算机软件及数据库,对筛库所得蛋白进行生物信息学分析。结果筛选得到1种Tec激酶区作用蛋白RAI16,其cDNA序列由2863个核苷酸组成,编码759aa蛋白质,具有多个功能基序,其中包括3个酪氨酸磷酸化位点。结论推测RAI16蛋白与细胞分化有关,很可能在肝癌细胞的诱导分化信号转导转录中与Tec协同发挥重要作用。 展开更多
关键词 Tec蛋白 酵母双杂交 视黄酸诱导蛋白16 功能基序 酪氨酸磷酸化位点
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水稻抽穗期基因酵母双杂交cDNA文库的构建及分析 被引量:3
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作者 彭强 吴昌银 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期404-409,共6页
为研究水稻开花调控的分子网络,构建了水稻品种中花11幼穗分化前倒二叶叶片的酵母双杂交cDNA文库。制备了高质量的总RNA,用Oligo(dT)引物反转录合成cDNA第一链和Long Distance PCR合成双链cD-NA,通过SMART同源重组交换技术在酵母菌株AH... 为研究水稻开花调控的分子网络,构建了水稻品种中花11幼穗分化前倒二叶叶片的酵母双杂交cDNA文库。制备了高质量的总RNA,用Oligo(dT)引物反转录合成cDNA第一链和Long Distance PCR合成双链cD-NA,通过SMART同源重组交换技术在酵母菌株AH109中建立酵母双杂交所需的水稻倒二叶叶片cDNA文库。文库质量检测结果表明:cDNA文库的转化率为1.178×106/3μg pGADT7-Rec,文库滴度为2.65×108 cfu/mL,重组率为94.7%,插入片段长度为350~2 000bp。该文库可用来筛选水稻抽穗期基因的互作蛋白。 展开更多
关键词 水稻抽穗期基因 酵母双杂交 SMART技术 CDNA文库 水稻倒二叶
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中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母双杂交文库的构建 被引量:2
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作者 孙莉 岳金金 +3 位作者 费东亮 李明 马鸣潇 宋铭忻 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期572-577,共6页
【目的】本研究旨在利用位点特异性重组技术(FullCoV)将中华蜜蜂 Apis cerana cerana 幼虫膜蛋白cDNA连接到pPR3-N载体上,构建中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母双杂交cDNA文库。【方法】提取2-3日龄中华蜜蜂工蜂幼虫总RNA;分离mRNA后,在反转录酶... 【目的】本研究旨在利用位点特异性重组技术(FullCoV)将中华蜜蜂 Apis cerana cerana 幼虫膜蛋白cDNA连接到pPR3-N载体上,构建中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母双杂交cDNA文库。【方法】提取2-3日龄中华蜜蜂工蜂幼虫总RNA;分离mRNA后,在反转录酶的作用下合成幼虫膜蛋白cDNA第1链,并合成双链cDNA。在双链cDNA的5′端加上带有重组序列的接头后,通过FullCoV技术与载体pPR3-N进行连接,然后将连接产物电转化到DH10B感受态细胞,构建中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母双杂交cDNA文库,并对该文库插入片段大小和文库滴度进行检测。【结果】通过FullCoV技术成功构建了中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母双杂交cDNA文库,经检测,中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母cDNA文库的总库容量为1.5×10^7 cfu,文库滴度为3×10^6 cfu/mL,重组率达到100%。【结论】本研究利用FullCoV技术成功构建了中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母cDNA文库,为进一步探究感染中华蜜蜂的病原微生物与宿主蛋白互作研究奠定了基础。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 cDNA 文库 滴度 酵母双杂交 FullCoV技术 蛋白质相互作用
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“Bolgogragsky”番茄cDNA文库的构建及质量评价 被引量:1
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作者 张佳蕊 郝娟 张喜春 《安徽农业科学》 CAS 2022年第3期92-94,101,共4页
MYB102转录因子在番茄响应低温胁迫中起着重要作用,为了进一步探究番茄转录因子MYB102的分子作用机理,筛选其蛋白,以“Bolgogragsky”为材料,从番茄的根、茎、叶、花、果以及萼片组织中提取总RNA,以其为模板合成双链cDNA,纯化后与载体pG... MYB102转录因子在番茄响应低温胁迫中起着重要作用,为了进一步探究番茄转录因子MYB102的分子作用机理,筛选其蛋白,以“Bolgogragsky”为材料,从番茄的根、茎、叶、花、果以及萼片组织中提取总RNA,以其为模板合成双链cDNA,纯化后与载体pGADT7-Rec共转化入酵母Y187感受态细胞中构建酵母双杂交cDNA文库。经测定,文库容量为2.31×10^(7) CFU,cDNA文库的转化效率为7.02×10^(6) CFU/μg,文库滴度为2.5×10^(8) CFU/mL,重组率为97%,插入的cDNA片段长度主要分布在250~2000 bp。结果表明,构建的番茄cDNA文库符合酵母双杂交文库要求,可用于筛选MYB102的互作蛋白。 展开更多
关键词 番茄 酵母双杂交 CDNA文库 SMART技术
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利用酵母双杂交技术筛选人PROKR2蛋白C端相互作用蛋白 被引量:1
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作者 周晓涛 周文涛 +5 位作者 夏开德 刘化蝶 彭震 赵云娟 迪丽娜尔.波拉提 李家大 《生物技术通讯》 CAS 2018年第1期38-43,共6页
目的:利用酵母双杂交技术从人c DNA文库中筛选人前动力蛋白受体2(hPROKR2)C端相互作用蛋白。方法:复苏酵母菌Y2HGold-hPROKR2-C,与人c DNA文库杂交,计算杂交效率;筛选相互作用克隆并测序,寻找hPROKR2蛋白C端相互作用蛋白;通过在DDO/X、Q... 目的:利用酵母双杂交技术从人c DNA文库中筛选人前动力蛋白受体2(hPROKR2)C端相互作用蛋白。方法:复苏酵母菌Y2HGold-hPROKR2-C,与人c DNA文库杂交,计算杂交效率;筛选相互作用克隆并测序,寻找hPROKR2蛋白C端相互作用蛋白;通过在DDO/X、QDO/A/X平皿上划线,对筛选到的人c DNA文库质粒的自活性进行验证;采用GST pull down进一步验证两者之间的相互作用。结果:酵母双杂交实验的杂交融合效率为1.375×10~8;在人cDNA文库中筛选出hPROKR2蛋白C端相互作用蛋白SNAPIN,GST pull down实验证实两者之间存在相互作用。结论:SNAPIN可与hPROKR2蛋白C端结合。 展开更多
关键词 人前动力蛋白受体2(hPROKR2) SNAPIN 相互作用蛋白 酵母双杂交
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香水柠檬RHF2A的克隆与互作蛋白的筛选 被引量:1
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作者 李雨泽 朱嘉伟 +6 位作者 林蔚 蓝茉莹 夏黎明 张艺粒 罗聪 黄桂香 何新华 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第24期4912-4926,共15页
【目的】以香水柠檬(Citrus limon (L.) Burm. F.)为研究对象,分析两个RHF2A的时空表达规律,利用酵母双杂交技术和双分子荧光互补试验(BiFC)筛选、验证其互作蛋白,为深入研究RHF2A在香水柠檬自交不亲和过程中的分子作用机制奠定基础。... 【目的】以香水柠檬(Citrus limon (L.) Burm. F.)为研究对象,分析两个RHF2A的时空表达规律,利用酵母双杂交技术和双分子荧光互补试验(BiFC)筛选、验证其互作蛋白,为深入研究RHF2A在香水柠檬自交不亲和过程中的分子作用机制奠定基础。【方法】从前期转录组和泛素修饰组(未公开)筛选获得2个E3泛素连接酶RHF2A(RING-H2 Zinc Finger2A)基因RHF2A-1、RHF2A-2,并克隆其全长序列,通过生物信息学分析2个RHF2A的序列和蛋白质结构,预测其启动子顺式作用元件,构建35S-RHF2A-GFP融合蛋白表达载体用于亚细胞定位分析,采用实时荧光定量PCR分析两个RHF2A的时空表达模式,构建酵母双杂诱饵载体从香水柠檬酵母文库筛选互作蛋白。构建BiFC载体,在洋葱活体细胞内对目标蛋白进行互作验证。【结果】从香水柠檬克隆获得RHF2A-1、RHF2A-2,ORF全长分别为1 161和1 134 bp;NCBI结构域预测发现其具有Ring/U-box结构域。启动子分析发现其具有花粉特异性表达相关元件POLLEN1LELAT52、GTGANTG10。组织表达分析发现RHF2A-1在花粉特异性表达,RHF2A-2在叶中特异性表达;时空表达分析结果显示,RHF2A-1在自交柱头表达量从第1天开始升高,第3天达到峰值,是杂交柱头表达量的5倍以上。亚细胞定位显示RHF2A-1和RHF2A-2定位在细胞核。经过Uniprot网站预测其互作蛋白显示RHF2A能与KRP6、AT3G57370、UBA1、FBL17、SK11蛋白相互作用,推测其参与自交不亲和泛素化反应途径、配子体发育调控、花粉的生长发育等生物学过程。通过酵母双杂交技术筛选出72个克隆,对其测序并进行Blast比对后排除重复克隆,最终得到ABCF3等20个候选互作蛋白。经过一对一互作验证、双分子荧光互补实验确定RHF2A-1与ABCF3-2存在互作关系。【结论】RHF2A-1的时空表达规律与自交不亲和过程中花粉在雌蕊上的萌发规律相吻合;筛选得到柠檬授粉过程中直接影响花粉生长发� 展开更多
关键词 香水柠檬 RHF2A 基因克隆 时空表达 酵母双杂交技术
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葡萄VvGCN5基因的鉴定及互作蛋白筛选
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作者 陈雪琴 庞倩倩 +2 位作者 裴丹 任艳华 房经贵 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期852-861,共10页
[目的]本文旨在揭示组蛋白乙酰转移酶GCN5(general control non-repressible 5)在葡萄生长发育过程中的调控机制,并筛选出与VvGCN5互作的蛋白,以期为进一步构建VvGCN5在葡萄生长发育中的调控网络提供理论基础。[方法]利用生物信息学技术... [目的]本文旨在揭示组蛋白乙酰转移酶GCN5(general control non-repressible 5)在葡萄生长发育过程中的调控机制,并筛选出与VvGCN5互作的蛋白,以期为进一步构建VvGCN5在葡萄生长发育中的调控网络提供理论基础。[方法]利用生物信息学技术对VvGCN5的蛋白二级结构、基因结构、功能域、启动子的顺式作用元件以及抗逆的表达量和时空表达进行分析,并在烟草中进行亚细胞定位,研究VvGCN5表达位置。通过酵母双杂交技术筛选与VvGCN5互作的蛋白,并通过双分子荧光互补(BIFC)技术进行验证。[结果]VvGCN5的二级结构由α-螺旋、延伸链、β-折叠以及无规则卷曲构成,含有10段内含子序列和11段CDS序列,具有Acetyltransf_1和Bromodomain结构域,以及ARE、GT1-motif、TGACG-motif、CAT-box、CGTCA-motif等顺式作用元件。通过查询GEO数据库发现VvGCN5可能受到光照和灰霉病的影响。VvGCN5主要表达于葡萄的成熟茎、萌芽初期、心皮、种子中。亚细胞定位发现VvGCN5位于细胞核和细胞膜上。此外,以pGBKT7-VvGCN5作为诱饵蛋白,通过酵母双杂交技术和双分子荧光互补技术发现8个阳性蛋白与VvGCN5互作。[结论]本研究鉴定并分析了VvGCN5的基本信息,并得到了8个与VvGCN5互作的蛋白。 展开更多
关键词 葡萄 VvGCN5 酵母双杂交技术 双分子荧光互补 生物信息学分析
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苹果转录因子MdHB1自激活作用及其互作蛋白分析 被引量:1
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作者 刘艳利 姜永华 +3 位作者 王豪杰 戚英伟 刘翠华 任小林 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1895-1900,共6页
筛选苹果转录因子MdHB1的互作蛋白,可以为研究苹果生长发育过程中各种信号分子网络提供线索和依据。本文以苹果品种‘皇家嘎啦’为试材,应用SMART技术构建酵母双杂交cDNA文库。分析MdHB1的转录活性区域并验证其对Y2HGold的细胞毒性作用... 筛选苹果转录因子MdHB1的互作蛋白,可以为研究苹果生长发育过程中各种信号分子网络提供线索和依据。本文以苹果品种‘皇家嘎啦’为试材,应用SMART技术构建酵母双杂交cDNA文库。分析MdHB1的转录活性区域并验证其对Y2HGold的细胞毒性作用,利用诱饵载体pGBKT7-MdHB1-N进行文库筛选,获得了24个阳性克隆,测序分析后得到9个无重复的MdHB1互作蛋白,其涉及光合作用、病虫害防御、逆境胁迫等过程。 展开更多
关键词 互作蛋白 酵母双杂交文库 SMART技术 MdHB1
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一组端粒相关蛋白分子的克隆 被引量:1
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作者 周平 房殿春 +5 位作者 陈兵 毛高平 刘为纹 曹传平 步晓华 张启杰 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第14期1507-1512,共6页
目的:进一步了解端粒酶的生物学功能及其在永生化或肿瘤细胞中作用的分子机制,筛选新的端粒相关蛋白分子.方法:基于酵母双杂交技术原理,采用DNA重组技术构建诱饵融合蛋白表达载体,筛选cDNA文库,β-半乳糖苷酶滤膜影印分析确证阳性克隆,... 目的:进一步了解端粒酶的生物学功能及其在永生化或肿瘤细胞中作用的分子机制,筛选新的端粒相关蛋白分子.方法:基于酵母双杂交技术原理,采用DNA重组技术构建诱饵融合蛋白表达载体,筛选cDNA文库,β-半乳糖苷酶滤膜影印分析确证阳性克隆,对阳性克隆质粒测序并在GenBank进行cDNA序列同源性比较.结果:AH109、Y187酵母菌基因表型稳定,无His渗漏表达.成功构建端粒酶催化亚单位诱饵融合蛋白表达载体pGBKT7-hTERT,其表达的融合蛋白对AH109酵母细胞生长无毒性且不具有激活自身报告基因(LacZ)的作用.从cDNA文库中筛选到Ade+、Leu+、Trp+和His+阳性克隆28个,β-半乳糖苷酶菌落影印滤膜分析筛选到Ade+、His+和LacZ+阳性克隆12个,其中有5个文库质粒具有自身激活报告基因的作用,予以弃除.7个阳性克隆质粒测序发现有2个为重复序列,cDNA序列同源性比较最终获得6个已收录人cDNA序列,他们分别为T-STAR、PAWR、I-1、SMARCB1、LOXL3和HKR3.结论:获取新的端粒相关蛋白可了解端粒酶全酶的结构及其在肿瘤、细胞永生化的生物学功能及分子机制,为肿瘤、衰老的发生及防治奠定重要的理论基础. 展开更多
关键词 端粒 端粒酶 端粒相关蛋白 酵母双杂交技术 肿瘤
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SPF鸡肝脏细胞cDNA文库的构建及鉴定
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作者 卢恒 谢芝勋 +5 位作者 谢丽基 黄莉 黄娇玲 王盛 张艳芳 曾婷婷 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期2498-2502,共5页
旨在构建SPF鸡肝脏组织细胞的cDNA文库并且对文库质量进行鉴定。用TRIzol方法从SPF鸡肝脏组织细胞中提取总RNA,用紫外分光光度仪测定其含量后,应用SMART技术经过LD-PCR合成双链cDNA。利用CHROMA SPIN-400纯化柱纯化得到双链cDNA,并与线... 旨在构建SPF鸡肝脏组织细胞的cDNA文库并且对文库质量进行鉴定。用TRIzol方法从SPF鸡肝脏组织细胞中提取总RNA,用紫外分光光度仪测定其含量后,应用SMART技术经过LD-PCR合成双链cDNA。利用CHROMA SPIN-400纯化柱纯化得到双链cDNA,并与线性pGADT7-Rec共转化进酵母Y187感受态,以同源重组的方式在酵母细胞内构建鸡肝脏酵母双杂交cDNA表达文库。结果显示,成功构建含有1.70×10~7个重组子的SPF鸡肝脏细胞cDNA文库,插入片段多数在0.4~2.0 kb之间,重组率达100%,重组子中平均插入的片段长度为1.0 kb,文库滴度为1.30×10~7 cfu/mL。结果表明,该文库达到了高质量文库所应具备的条件,为进一步筛选此文库与ARV相互作用的宿主蛋白以及研究其功能提供了数据依据。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒 SPF鸡肝 cDNA文库 酵母双杂交 SMART技术
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利用SMART技术构建鸡肺酵母双杂交cDNA文库
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作者 赵素君 王红宁 +2 位作者 杨鑫 张安云 周英顺 《四川动物》 CSCD 北大核心 2012年第6期880-883,886,共5页
以1月龄SPF鸡肺为材料,用Trizol方法提取总RNA,并用mRNA纯化试剂盒纯化PolyA+mRNA,利用SMART技术合成双链cDNA(ds cDNA)。合成的ds cDNA通过CHROMA SPINTM TE-400 Column进行纯化,纯化后的ds cDNA与线性pGADT7-Rec共转化酵母感受态细胞A... 以1月龄SPF鸡肺为材料,用Trizol方法提取总RNA,并用mRNA纯化试剂盒纯化PolyA+mRNA,利用SMART技术合成双链cDNA(ds cDNA)。合成的ds cDNA通过CHROMA SPINTM TE-400 Column进行纯化,纯化后的ds cDNA与线性pGADT7-Rec共转化酵母感受态细胞AH109中,以同源重组的方式,在酵母细胞内构建成鸡肺的cDNA文库。获得的文库容量为3.9×106cfu,随机选取20个克隆进行PCR检测,插入片段大小集中在0.3~3.0kb之间,平均插入片段约为1.4kb左右,文库重组率为100%。结果表明该文库达到了高质量文库所应具备的条件,为酵母双杂交技术筛选与IBV-N相互作用的宿主细胞蛋白奠定基础。 展开更多
关键词 禽传染性支气管炎病毒 鸡肺 酵母双杂交 CDNA文库 SMART技术
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酵母表达质粒pGBKT7-hPROKR2-Ct的构建及hPROKR2C端蛋白的自激活鉴定
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作者 周晓涛 夏开德 +4 位作者 周文涛 刘化蝶 彭震 汤勇 李家大 《生物技术通讯》 CAS 2016年第4期479-482,共4页
目的:检测Y2HGold酵母株中表达的h PROKR2 C端蛋白是否有毒性及自激活,为后期利用酵母双杂交技术研究h PROKR2 C端相互作用蛋白奠定基础。方法:构建酵母双杂交载体p GBKT7-h PROKR2-Ct质粒,将其转入酵母感受态中验证其是否表达并计算转... 目的:检测Y2HGold酵母株中表达的h PROKR2 C端蛋白是否有毒性及自激活,为后期利用酵母双杂交技术研究h PROKR2 C端相互作用蛋白奠定基础。方法:构建酵母双杂交载体p GBKT7-h PROKR2-Ct质粒,将其转入酵母感受态中验证其是否表达并计算转化率;通过观察SD/-Trp平板上酵母菌落生长状态进行h PROKR2 C端蛋白的毒性检测;通过观察SD/-Trp、SDO/-Trp/X、SDO/-Trp/X/Aba平板上酵母菌落生长状态进行h PROKR2 C端蛋白自活性检测。结果:构建了酵母双杂交载体p GBKT7-h PROKR2-Ct,将其转入酵母感受态中,转化率为8.5×104cfu/μg;毒性及自活性检测均显示h PROKR2 C端蛋白对酵母菌株无毒性、不具有自活性。结论:可以利用酵母双杂交系统研究hPROKR2 C端相互作用蛋白。 展开更多
关键词 酵母双杂交 PROKR2 自激活实验
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蛋白质组学及其在植物研究中的应用 被引量:13
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作者 乌云塔娜 张党权 谭晓风 《中南林学院学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期115-119,共5页
蛋白质组研究将生命活动直接化和具体化,将基因功能整体化、动态化、定量化,是后基因组计划的一个重要组成部分.为全面准确了解和揭示植物生命活动规律,对其在分子水平上的研究工作应将基因组研究和蛋白质组研究并列开展,为植物各领域... 蛋白质组研究将生命活动直接化和具体化,将基因功能整体化、动态化、定量化,是后基因组计划的一个重要组成部分.为全面准确了解和揭示植物生命活动规律,对其在分子水平上的研究工作应将基因组研究和蛋白质组研究并列开展,为植物各领域的研究提供更可靠的理论依据.综述了蛋白质组学的研究意义、重要研究体系及在植物研究中的应用,同时展望了未来的蛋白质组学. 展开更多
关键词 蛋白质组 双向凝胶电泳 蛋白质芯片 酵母双杂交系统 噬菌体展示技术
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番茄分裂泛素酵母双杂膜系统cDNA文库及SlToc159诱饵载体的构建 被引量:2
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作者 王琪 闫见敏 +2 位作者 岳江 李云洲 须文 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期825-834,共10页
叶绿体是植物进行光合作用、脂质代谢以及氨基酸合成的重要场所。叶绿体自身基因组编码的蛋白质仅有100个左右,其余95%(约3000多个)的叶绿体蛋白质即前体蛋白是由细胞核基因组编码的,在细胞质中翻译后通过TOC-TIC转运蛋白复合体导入叶... 叶绿体是植物进行光合作用、脂质代谢以及氨基酸合成的重要场所。叶绿体自身基因组编码的蛋白质仅有100个左右,其余95%(约3000多个)的叶绿体蛋白质即前体蛋白是由细胞核基因组编码的,在细胞质中翻译后通过TOC-TIC转运蛋白复合体导入叶绿体的特定位置而发挥生物学功能。Toc159是叶绿体外膜转运蛋白,主要负责转运初始阶段前体蛋白的特异性识别。为研究番茄SlToc159与前体蛋白的互作机制,本试验以‘Alisa Craig’番茄为材料,提取番茄幼苗叶片总RNA,采用Gateway技术构建分裂泛素化膜系统cDNA文库,同时构建诱饵载体pBT3-N-Toc159AGM和pBT3-N-Toc159GM,并用营养缺陷法检测其自激活活性。文库质量检测结果显示,文库总容量为1.6×10^(7)CFU,文库滴度为4.0×10^(6)CFU·mL^(-1),外源基因插入片段为750~2000 bp,重组率为100%,符合后续筛选互作蛋白的cDNA文库要求。酶切及测序结果表明,诱饵载体pBT3-N-Toc159AGM和短截A区的pBT3-N-Toc159GM构建成功,能够在分裂泛素化系统中正确表达且无自激活活性。本研究结果为番茄膜蛋白利用酵母双杂交筛选互作蛋白提供参考与理论基础。 展开更多
关键词 番茄 分裂泛素酵母双杂交系统 CDNA文库 GATEWAY技术 叶绿体外膜转运蛋白 SlToc159 诱饵载体
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大豆花叶病毒诱导的应用于膜蛋白酵母双杂交的大豆cDNA文库构建 被引量:2
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作者 崔晓艳 陈新 +1 位作者 栾鹤翔 智海剑 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期556-560,共5页
前言大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)是大豆上最普遍的病害之一,严重影响大豆的产量和品质,通过筛选与病毒互作的寄主蛋白,根据互作蛋白的功能和两者的作用机制可揭示病毒侵染的分子机制。对于病毒编码的膜蛋白或者膜相... 前言大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)是大豆上最普遍的病害之一,严重影响大豆的产量和品质,通过筛选与病毒互作的寄主蛋白,根据互作蛋白的功能和两者的作用机制可揭示病毒侵染的分子机制。对于病毒编码的膜蛋白或者膜相关特性的蛋白,由于具有膜结合特性,在生物体内的互作多发生在膜上。 展开更多
关键词 豆类作物 大豆花叶病毒诱导 膜蛋白酵母双杂交 大豆cDNA文库
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