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链霉菌Streptomyces olivaceoviridis A1木聚糖酶基因xynA在大肠杆菌及毕赤酵母中的高效表达 被引量：24
1
作者 张红莲 姚斌 +4 位作者 王亚茹 袁铁峥 张王照 伍宁丰 范云六 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期41-45,共5页
从橄榄绿链霉菌StreptomycesolivaceoviridisA1中克隆出木聚糖酶基因xynA ,将带与不带原基因信号肽编码序列的xynA分别以正确的阅读框架克隆到大肠杆菌表达载体pET 2 2b(+)上的pellB信号肽编码序列之后 ,得到 2种构建的重组载体 ,在重... 从橄榄绿链霉菌StreptomycesolivaceoviridisA1中克隆出木聚糖酶基因xynA ,将带与不带原基因信号肽编码序列的xynA分别以正确的阅读框架克隆到大肠杆菌表达载体pET 2 2b(+)上的pellB信号肽编码序列之后 ,得到 2种构建的重组载体 ,在重组大肠杆菌中木聚糖酶得到了表达 ,表达产物具有生物活性。进一步将不带原基因信号肽编码序列的xynA插入到毕赤酵母转移载体pPIC9中 ,转化毕赤酵母得到重组子 ,在重组子中木聚糖酶基因得到了高效分泌表达 ,在摇床培养水平上的表达量达到 2 0 0mg L ,且表达产物具有生物学活性。 展开更多
关键词 链霉素 木聚糖酶基因 xyna 大肠杆菌 毕赤酵母 高效表达
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嗜热脂肪芽孢杆菌木聚糖酶A的H297F定点突变、表达及酶学性质变化 被引量：3
2
作者 李婵娟 石慧 +1 位作者 王曼玥 王婧 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期41-46,共6页
利用重叠延伸PCR技术对嗜热脂肪芽孢杆菌木聚糖酶XynA活性中心附近的H297位点突变为F。将XynA及XynA_(H297)F在大肠杆菌BL21(DE3)中实施了表达、纯化以及酶学性质研究。比较研究野生型木聚糖酶XynA和突变体XynA_(H297)P的酶学性质发现,... 利用重叠延伸PCR技术对嗜热脂肪芽孢杆菌木聚糖酶XynA活性中心附近的H297位点突变为F。将XynA及XynA_(H297)F在大肠杆菌BL21(DE3)中实施了表达、纯化以及酶学性质研究。比较研究野生型木聚糖酶XynA和突变体XynA_(H297)P的酶学性质发现,突变前后木聚糖酶的最适反应pH值均为5.5,在pH 4~10的缓冲液中处理20 h后残余酶活均在90%以上,均具有较好的pH稳定性。XynA最适反应温度为70℃,80℃处理20min后只有10%的残余酶活;XynA_(H297)最适反应温度为75℃,且相同处理条件下XynA_(H297)仍具有30%左右的残余活性,说明突变体的热稳定性有一定程度提高。与XynA相比,XynA_(H297)F的动力学参数Km、Vmax和Kcat均增大,说明突变后酶对底物的亲和力降低,但催化速率有所提高。 展开更多
关键词 木聚糖酶 xyna H297F 定点突变 酶学性质
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黑曲霉木聚糖酶基因(xynA)在大肠杆菌中的表达及酶学分析 被引量：4
3
作者 崔罗生 祝茂生 +3 位作者 徐顺清 朱辉 梁运祥 张忠明 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期48-53,共6页
从黑曲霉(Aspergillus niger)F19中克隆得到木聚糖酶基因xynA。将不带原基因信号肽编码序列的xynA基因片段以正确的阅读框架克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET-28a(+)上,并转化E.co-liBL21,获得重组工程菌BLX1。经过IPTG诱导... 从黑曲霉(Aspergillus niger)F19中克隆得到木聚糖酶基因xynA。将不带原基因信号肽编码序列的xynA基因片段以正确的阅读框架克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET-28a(+)上,并转化E.co-liBL21,获得重组工程菌BLX1。经过IPTG诱导,xynA获得特异性表达,其表达产物以包涵体和胞内可溶性蛋白2种形式存在。经过SDS-PAGE分析,重组蛋白分子质量约为24 ku。酶学分析表明,最适反应温度为50℃,最适反应pH为5.0,在酸性条件下具有较好的稳定性。 展开更多
关键词 黑曲霉 木聚糖酶 xyna基因 酶学性质
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教酒链霉菌L1105木聚糖酶基因xynA原核表达及诱导产酶优化 被引量：2
4
作者 熊科 崔晓亭 +1 位作者 高乐 李秀婷 《中国调味品》 CAS 北大核心 2016年第9期1-4,23,共5页
教酒链霉菌(Streptomyces chartreusis)L1105产木聚糖酶性质优良,具有良好的应用价值。目前,尚未见其酶基因克隆表达的报道。研究将教酒链霉菌L1105木聚糖酶基因xynA克隆、连接、转导至原核表达系统中并研究表达系统在不同的时间、温度... 教酒链霉菌(Streptomyces chartreusis)L1105产木聚糖酶性质优良,具有良好的应用价值。目前,尚未见其酶基因克隆表达的报道。研究将教酒链霉菌L1105木聚糖酶基因xynA克隆、连接、转导至原核表达系统中并研究表达系统在不同的时间、温度及IPTG浓度下诱导表达的产酶活力水平。结果表明:教酒链霉菌L1105木聚糖酶基因原核表达载体成功构建,优化诱导表达的最终条件为诱导25h,诱导温度23℃,加入IPTG浓度为0.7mmol/L,在此条件下,获得最大的酶活力45.07U/mL,较初始酶活值3.94U/mL提高了11.43倍。研究为教酒链霉菌L1105产优良木聚糖酶的工业化应用提供了理论依据。 展开更多
关键词 教酒链霉菌L1105 木聚糖酶 基因xyna 原核表达 产酶优化
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黑曲霉木聚糖酶基因xynA的克隆及真核表达载体的构建 被引量：2
5
作者 张茂 刘德武 +5 位作者 林纯 贺晓燕 孟繁明 周庆丰 杜云平 吴珍芳 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期588-592,共5页
从黑曲霉(Aspergillus niger)GI M3.452中克隆得到木聚糖酶基因xynA的成熟肽编码序列。通过重叠延伸PCR将不带原基因信号肽编码序列的xynA基因片段和猪腮腺分泌蛋白(parotid secretory protein,PSP)基因的信号肽进行拼接得到融合片段SPA... 从黑曲霉(Aspergillus niger)GI M3.452中克隆得到木聚糖酶基因xynA的成熟肽编码序列。通过重叠延伸PCR将不带原基因信号肽编码序列的xynA基因片段和猪腮腺分泌蛋白(parotid secretory protein,PSP)基因的信号肽进行拼接得到融合片段SPA,并将其克隆到真核表达载体pcDNA6/HisTMA中,得到重组质粒pcDNA-SPA,重组质粒经过酶切、测序鉴定其读码框的正确性,在脂质体介导下将重组质粒pcDNA-SPA转染猪肾细胞(PK15),通过RT-PCR证实其在PK15细胞中表达,并在细胞培养液中检测到木聚糖酶活性为7.6I U/mL。 展开更多
关键词 黑曲霉 木聚糖酶 xyna基因 真核表达
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木聚糖酶基因xynA在大肠杆菌中的高效表达 被引量：4
6
作者 殷尔康 《现代农业科技》 2011年第12期326-327,共2页
参照Genebank中疏棉状嗜热丝孢菌木聚糖酶A基因序列,以引物拼接方式,人工合成采用大肠杆菌优势密码子的基因xynA,插入pET-20b载体,获得重组表达载体pET-20b-xynA。重组菌在16℃下诱导效果最好,10 h酶活达到42.05 U/mL,重组酶占全细胞蛋... 参照Genebank中疏棉状嗜热丝孢菌木聚糖酶A基因序列,以引物拼接方式,人工合成采用大肠杆菌优势密码子的基因xynA,插入pET-20b载体,获得重组表达载体pET-20b-xynA。重组菌在16℃下诱导效果最好,10 h酶活达到42.05 U/mL,重组酶占全细胞蛋白的47%,粗酶在65℃和pH 5～8条件下很稳定。 展开更多
关键词 木聚糖酶A基因 优势密码子 高效表达
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环介导恒温扩增法快速检测短小芽孢杆菌 被引量：1
7
作者 应琪 李太武 +5 位作者 苏秀榕 李晔 周君 崔静 王中华 李松伟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期179-183,共5页
短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)是一种能引起食源性疾病的腐败菌,对其进行快速检测具有重要意义。针对短小芽孢杆菌木聚糖(xynA)基因,设计了4条特异性引物(两条内引物和两条外引物),通过条件优化,首次将一种新颖的核酸扩增技术——环... 短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)是一种能引起食源性疾病的腐败菌,对其进行快速检测具有重要意义。针对短小芽孢杆菌木聚糖(xynA)基因,设计了4条特异性引物(两条内引物和两条外引物),通过条件优化,首次将一种新颖的核酸扩增技术——环介导恒温扩增技术应用于短小芽孢杆菌的快速检测。采用该技术,63℃温育1h的条件下扩增短小芽孢杆菌DNA,琼脂糖凝胶电泳得到特异性梯度条带。PCR和LAMP的检测灵敏度分别约为162和16.2拷贝每反应。结果表明,该方法检测短小芽孢杆菌特异性强、灵敏度高、操作简便、检测成本低,1h即可完成,有望发展成为快速检测短小芽孢杆菌的有效手段。 展开更多
关键词 短小芽孢杆菌 环介导恒温扩增技术(LAMP) 木聚糖(xyna)基因 快速检测
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木聚糖酶基因xynA在大肠杆菌中的表达研究
8
作者 殷尔康 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第32期19689-19691,共3页
通过引物拼接的方式合成采用大肠杆菌优势密码子的疏棉状嗜热丝孢菌木聚糖酶基因xynA,插入到热激质粒pHsh和质粒pET-20b中构建重组质粒pHsh-xynA和pET-20b-xynA,再转入大肠杆菌JM109表达。经热激和IPTG诱导后,木聚糖酶在重组菌中获得特... 通过引物拼接的方式合成采用大肠杆菌优势密码子的疏棉状嗜热丝孢菌木聚糖酶基因xynA,插入到热激质粒pHsh和质粒pET-20b中构建重组质粒pHsh-xynA和pET-20b-xynA,再转入大肠杆菌JM109表达。经热激和IPTG诱导后,木聚糖酶在重组菌中获得特异性表达,产物以胞内可溶性蛋白和包涵体形式存在。重组菌pET-20b-xynA在16℃下表达量最大,胞内酶活达42.13 U/ml,重组菌pHsh-xynA在42℃下胞内酶活最大,为35.06 U/ml。与质粒pHsh相比,pET-20b质粒更有利于重组木聚糖酶的表达。 展开更多
关键词 木聚糖酶 xyna基因 大肠杆菌 重组表达
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利用pET-20b克隆与表达多功能半纤维素酶
9
作者 彭静静 《湖北农业科学》 北大核心 2014年第17期4205-4207,共3页
将来源于嗜热厌氧乙醇菌(Thermoanaerobacter ethanolicus,JW200)的双活性阿拉伯/木糖苷酶(XarB)构建到pET-20b(+)上,得到质粒pET-20b-xarB。将来源于疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus DSM 5826)木聚糖酶A(XynA)构建到pET-20b-... 将来源于嗜热厌氧乙醇菌(Thermoanaerobacter ethanolicus,JW200)的双活性阿拉伯/木糖苷酶(XarB)构建到pET-20b(+)上,得到质粒pET-20b-xarB。将来源于疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus DSM 5826)木聚糖酶A(XynA)构建到pET-20b-xarB上,得到表达质粒pET-20b-xarB-xynA。将重组质粒pET-20b-xarB-xynA转入大肠杆菌Escherichia coli JM109(DE3)进行表达。SDS-PAGE结果显示,该重组酶的分子量为108 kDa,与理论值相符。 展开更多
关键词 阿拉伯/木糖苷酶 木聚糖酶 pET-20b(+) 多功能半纤维素酶 克隆 表达
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