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题名桃果实PpARF1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
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作者
管丹
史梦雅
胡晓
关伟
刘悦萍
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机构
北京农学院植物科学技术学院
北京市平谷区人民政府果品办公室
北京农学院生物科学与工程学院/农业部华北都市农业重点实验室
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出处
《北京农学院学报》
2018年第1期1-5,共5页
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基金
2015年度新型生产经营主体科技能力提升工程项目(20150203-01)
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文摘
【目的】为了探讨转录因子ARF1(Auxin Response Factor)对桃果实发育调控的机制。【方法】以‘24号’桃果实为试验材料,构建桃ARF1基因的原核表达载体pET32a-PpARF1,转化到BL21(DE3)中诱导表达菌体蛋白,筛选出重组蛋白的最适表达条件,按照最适条件大量摇菌诱导表达蛋白,并进行重组蛋白的纯化,最后用纯化诱导后的重组蛋白制备多克隆抗体及WB检测。【结果】SDS-PAGE电泳检测得到pET32a-PpARF1重组蛋白的位置大约在95.0kD,在37℃,转速250r/min,IPTG 0.10mmol/L,诱导4h,诱导出的蛋白表达量最大。免疫印迹试验显示所得抗血清能很好检测到目的蛋白。【结论】ARF转录因子参与生长素调控桃果实发育成熟的过程。
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关键词
桃果实
ARF
原核表达
目的蛋白
westernblot(wb)检测
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Keywords
Peach fruit
ARF
Prokaryotic expression
Objective protein
Western Blot
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分类号
S662.1
[农业科学—果树学]
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