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西瓜花叶病毒中国分离株全基因组核苷酸序列测定 被引量:15
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作者 张建新 吴云锋 +1 位作者 王睿 罗朝鹏 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期153-156,共4页
Watermelon and melon mosaic disease is the important disease in agricultural production,mostly caused by watermelon mosaic virus.In this paper,the complete nucleotide sequence of watermelon mosaic virus Chinese isolat... Watermelon and melon mosaic disease is the important disease in agricultural production,mostly caused by watermelon mosaic virus.In this paper,the complete nucleotide sequence of watermelon mosaic virus Chinese isolate(WMV-Ch)was firstly determined.Excluding the 3’-terminal poly(A)tail,the genome was 10037 nt long,containing 5’-and 3’-terminal untranslated regions and a large open reading frame.The genome encoded a polyprotein of 3217 amino acids with a predicted Mr of 365.8 kD.Based on comparison with the proposed location of cleavage sites of other potyvirus polyproteins,10 mature proteins were predicted.There were 92.5% nucleotide and 96.4% amino acid identities over entire genome between WMV-Ch and France isolate(WMV-Fr),respectively.The nucleotide identity of the coat protein genes among WMV-Ch and WMV from different countries was all less than 95%,and phylogenetic tree revealed that WMV-Ch was most close to Japanese isolate. 展开更多
关键词 西瓜花叶病毒 全基因组 序列测定 结构分析
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江苏省葫芦科作物西瓜花叶病毒的分子鉴定和序列分析 被引量:12
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作者 任春梅 程兆榜 +3 位作者 缪倩 魏利辉 周益军 范永坚 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1464-1470,共7页
[目的]对江苏各地具典型褪绿花叶症状的多种葫芦科作物是否为西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)侵染进行分子鉴定,明确该病毒在江苏的遗传分化.[方法]提取样品总RNA,利用西瓜花叶病毒的cp基因特异性引物进行RT-PCR扩增,克隆... [目的]对江苏各地具典型褪绿花叶症状的多种葫芦科作物是否为西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)侵染进行分子鉴定,明确该病毒在江苏的遗传分化.[方法]提取样品总RNA,利用西瓜花叶病毒的cp基因特异性引物进行RT-PCR扩增,克隆测序,应用DNASTAR和Clustal X软件进行序列分析.[结果]来自南瓜、瓠瓜、西瓜和西葫芦的11个分离物的RNA模板中均检测到1200 bp左右的片段;序列测定表明该片段含1154个核苷酸,包含完整的编码281个氨基酸的WMV-cp基因.序列比对结果表明,11个分离物和来自不同地区的17个分离物WMV-cp基因核苷酸和推导的编码CP蛋白氨基酸序列同源性分别为90.5%~100.0%和92.9%~100.0%.[结论]WMV的遗传变异与地缘相关性较强而与寄主相关性较弱.江苏分离物WMV-CP氨基酸均具有蚜传株系的特征结构域DAG,暗示其田间流行与蚜虫有关. 展开更多
关键词 西瓜花叶病毒 葫芦科作物 CP基因 序列分析 江苏
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基于外壳蛋白基因序列对3种葫芦科作物病毒的分子分析 被引量:10
3
作者 古勤生 田延平 +4 位作者 彭斌 刘丽锋 邓丛良 粱新苗 孟娟 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期357-363,共7页
从山西运城的南瓜(Cucurbita moschata)、河南开封和孟津的西葫芦(Cucurbita pepo)上通过ELISA分别检测到南瓜花叶病毒(Squash mosaic virus,SqMV)、西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)和番木瓜环斑病毒西瓜株系(Papa-ya ringsp... 从山西运城的南瓜(Cucurbita moschata)、河南开封和孟津的西葫芦(Cucurbita pepo)上通过ELISA分别检测到南瓜花叶病毒(Squash mosaic virus,SqMV)、西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)和番木瓜环斑病毒西瓜株系(Papa-ya ringspot virus-Watermelon type,PRSV-W),通过接种分离纯化获得其病毒毒原(CH99/211,CH99/113,CH99/69)。本研究克隆了这3个分离物的外壳蛋白基因,应用DNAStar、Clustal X、Phylip等分析软件将这些序列同已报道的相应序列进行分析并构建系统树。结果发现SqMV可以分为两个组,CH99/211分离物与美国的Arizona分离物接近,应属于Z组;WMV分为两个组,CH99/69同国内黑龙江分离物(WMV-HLJ)和云南分离物(WMV-CHN)最接近,成一小簇;PRSV分成两个组,CH99/113属于Ⅱ组,与国内SP、MZ和BN分离物接近。序列分析表明PRSV和WMV在进化上具有地理相关性。SqMV和PRSV-W外壳蛋白基因序列分析属国内首次报道。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 西瓜花叶病毒 南瓜花叶病毒 外壳蛋白基因 分子分析
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瓜蚜在西葫芦植株上传播获取西瓜花叶病毒的效率及西瓜花叶病毒病的发生规律 被引量:8
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作者 毛晓红 刘国霞 +2 位作者 张秀霞 李娇娇 张安盛 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1274-1280,共7页
为明确瓜蚜Aphis gossypii Glover成蚜对西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)的传毒特征,应用RT-PCR技术检测了瓜蚜传播获取WMV的效率及其在成蚜体内的存留时间;同时调查了2015年山东省日光温室西葫芦瓜蚜种群动态与西瓜花叶病... 为明确瓜蚜Aphis gossypii Glover成蚜对西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)的传毒特征,应用RT-PCR技术检测了瓜蚜传播获取WMV的效率及其在成蚜体内的存留时间;同时调查了2015年山东省日光温室西葫芦瓜蚜种群动态与西瓜花叶病毒病的发生规律。结果表明,瓜蚜成蚜离开带毒西葫芦植株0 h后,带毒率为35.00%,3 h后成蚜带毒率随时间的延长开始呈下降趋势,24 h后仅为5.40%。26℃条件下,健康瓜蚜取食带毒植株5 min后即可获毒,0.5 h后获毒率达到62.50%;带毒瓜蚜取食健康植株0.5 h后植株即可带毒,24 h后植株带毒率达到94.44%。温度对瓜蚜成蚜的传毒率有一定影响,在21、26、31℃条件下,瓜蚜成蚜24 h传毒率分别为61.11%、94.44%和88.89%。调查发现,温室西瓜花叶病毒病的发生率与瓜蚜种群数量呈正相关,当温室瓜蚜成蚜种群数量为1.06~1.73头/叶时,西葫芦开始发病,当成蚜数量增至18.22头/叶时,全田发病率可达83.33%。表明瓜蚜成蚜具有较强的传播WMV的能力,有效控制瓜蚜发生对减少WMV的扩散具有重要意义。 展开更多
关键词 西瓜花叶病毒 瓜蚜成蚜 获毒 传毒 带毒持效期
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侵染南瓜的西瓜花叶病毒和黄瓜花叶病毒CP基因的克隆和序列分析 被引量:8
5
作者 刘金亮 王凤婷 +2 位作者 魏毅 张世宏 潘洪玉 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第16期262-266,共5页
为从分子水平鉴定山东聊城的一表现明显花叶、黄化、蕨叶及果实畸形的南瓜病毒病的病原,采用RT-PCR的方法,用马铃薯Y病毒属病毒3′-末端序列的简并引物和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)外壳蛋白(CP)基因的特异引物,对该样品... 为从分子水平鉴定山东聊城的一表现明显花叶、黄化、蕨叶及果实畸形的南瓜病毒病的病原,采用RT-PCR的方法,用马铃薯Y病毒属病毒3′-末端序列的简并引物和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)外壳蛋白(CP)基因的特异引物,对该样品进行了检测,并对克隆到的基因序列进行分析。结果表明,该样品受西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)和CMV2种病毒的复合侵染,分别命名为WMV-liaocheng和CMV-liaocheng,与其他相应病毒分离物CP基因核苷酸序列的同源性分别为91.2%~98.0%和77.0%~97.9%,推导的氨基酸序列同源性分别为96.4%~98.5%和81.2%~99.1%。根据完整CP基因核苷酸序列构建的系统进化树显示:18个WMV分离物可分为3组,其中WMV-liaocheng与HLJ、CHN及Habenaria等分离物表现出较近的亲缘关系,形成Ⅲ组;30个CMV分为2个亚组,其中CMV-liaocheng属于亚组I,CMV-liaocheng可能发生过重组。 展开更多
关键词 南瓜 西瓜花叶病毒 黄瓜花叶病毒 复合侵染 CP基因
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侵染西瓜的烟草花叶病毒的鉴定 被引量:7
6
作者 李向东 朱汉城 +1 位作者 刘焕庭 郭兴启 《山东农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 1996年第2期181-184,共4页
从莘县一株表现蕨叶、花叶的西瓜上得到了分离物W-SX。W-SX经人工接种可侵染茄科、葫芦科、苋科、藜科的17种(或品种)植物。钝化温度为92℃,稀释限点10-7~10-8。病毒汁液在室温下保存50d仍有侵染活性。W-... 从莘县一株表现蕨叶、花叶的西瓜上得到了分离物W-SX。W-SX经人工接种可侵染茄科、葫芦科、苋科、藜科的17种(或品种)植物。钝化温度为92℃,稀释限点10-7~10-8。病毒汁液在室温下保存50d仍有侵染活性。W-SX不能由蚜虫传播。病毒粒子杆状,长300um。提纯病毒的最大吸收在260um,最小吸收在246um。A260/A280=1.299。在琼脂中与烟草花叶病毒(TMV)的抗血清产生明显的沉淀线。这些结果表明W-SX应为TMV的一个分离物。TMV在所有西瓜病样分离物中占8.65%。这是TMV侵染西瓜的首次报道,其对西瓜的为害性有待于进一步研究。 展开更多
关键词 西瓜 烟草花叶病毒 病毒 鉴定
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西瓜花叶病毒外壳蛋白基因的克隆与原核表达 被引量:8
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作者 张建新 刘起丽 吴云锋 《河南师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期117-119,123,共4页
利用RT—PCR方法获得了西瓜花叶病毒(WMV)陕西分离物外壳蛋白(CP)基因,大小为843bp.将CP基因克隆到pMD18-T Simple Vector,测序分析发现与各个国家CP核苷酸和氨基酸同源性分别为93.0%~95.0%和96.5%~98.6%.将CP基因定... 利用RT—PCR方法获得了西瓜花叶病毒(WMV)陕西分离物外壳蛋白(CP)基因,大小为843bp.将CP基因克隆到pMD18-T Simple Vector,测序分析发现与各个国家CP核苷酸和氨基酸同源性分别为93.0%~95.0%和96.5%~98.6%.将CP基因定向插入EcoR Ⅰ/Sal Ⅰ切开的pET30a中,构建了原核表达载体pET30-WCP,转化大肠杆菌BL21.经IPTG诱导2~8h后,成功表达了分子量约为37kD的CP蛋白.通过不同时间诱导发现,加入IPTG4h后蛋白开始表达,8h后表达量比较大.以诱导的蛋白为抗原免疫家兔,制备了WMV CP抗血清,ELISA法测其效价为1/6400,Western blot分析能与CP发生血清学反应. 展开更多
关键词 西瓜花叶病毒 外壳蛋白 原核表达 抗血清
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河南省济源市西瓜病毒检测及和西瓜花叶病毒基因组分析
8
作者 贾宝华 李秀启 +4 位作者 刘莉铭 康保珊 古勤生 吴会杰 彭斌 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期493-503,共11页
本研究调查了2022年济源市3块西瓜种植地块西瓜病毒病害平均发病率约为97%,并收集20份疑似病毒病样品,包括西瓜14份、甜瓜4份、南瓜1份和杂草反枝苋(Amaranthaceae retroflexus L.)1份。选取3份西瓜和1份杂草反枝苋病样分别进行小RNA测... 本研究调查了2022年济源市3块西瓜种植地块西瓜病毒病害平均发病率约为97%,并收集20份疑似病毒病样品,包括西瓜14份、甜瓜4份、南瓜1份和杂草反枝苋(Amaranthaceae retroflexus L.)1份。选取3份西瓜和1份杂草反枝苋病样分别进行小RNA测序共检测出7种病毒。同时采用16种侵染西瓜的病毒特异性引物对所有的20份病样进行RT-PCR检测,与小RNA测序检测结果一致。西瓜花叶病毒(watermelon mosaic virus,WMV)和小西葫芦黄花叶病毒(zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)是济源病毒病样中发生率前二的病毒,检出率分别是100%和85%。在一份反枝苋杂草样本中检测出WMV,表明反枝苋可能是WMV的中间寄主。从小RNA测序数据,获得了来自济源的4个WMV分离物的全长基因组。对WMV的全长基因组核苷酸序列进行一致性比较和系统进化分析,发现来自济源的WMV分离物具有较高的遗传多样性,表明该病毒在济源地区可能存在多个初始侵染源。本研究明确了济源地区西瓜病毒病种类,为该地区西瓜病毒病的防控策略制定及进一步的流行学研究奠定了理论基础。 展开更多
关键词 西瓜 病毒病 小RNA测序 西瓜花叶病毒 系统进化
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西瓜花叶病毒新疆鄯善分离物的纯化及不同甜瓜品种的抗病性鉴定 被引量:5
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作者 王东 杜姗姗 李冠 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期991-997,共7页
从新疆哈密瓜(Cucumis melo L.)主产区之一的鄯善县采集表现病毒病症状的哈密瓜嫩叶,经昆诺藜连续3次单斑分离纯化后,采用RT-PCR扩增、克隆和测序分析,将该分离物鉴定为西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)。利用该分离物,采用... 从新疆哈密瓜(Cucumis melo L.)主产区之一的鄯善县采集表现病毒病症状的哈密瓜嫩叶,经昆诺藜连续3次单斑分离纯化后,采用RT-PCR扩增、克隆和测序分析,将该分离物鉴定为西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)。利用该分离物,采用汁液摩擦接种法对12个常见的甜瓜商业品种和13个国际通用的甜瓜白粉病生理小种鉴别寄主进行室内抗病性鉴定,结果表明,所有供试品种中没有免疫和高抗品种,表现抗病、中抗、感病和高感的品种分别有1、11、10和3个,其中表现抗病的为Iran H。 展开更多
关键词 甜瓜 西瓜花叶病毒 抗性评价 分离物
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新疆伽师县甜瓜病毒病种类鉴定
10
作者 王东 麦麦提艾则孜·穆合塔尔 +1 位作者 刘艳全 迪力达尔克孜·吾拉木 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1793-1802,共10页
于2019和2021年对新疆伽师县12个乡镇进行厚皮甜瓜(通常称伽师瓜)病毒病进行调研采样,采用两步法RT-PCR鉴定西瓜花叶病毒(watermelon mosaic virus,WMV)、黄瓜花叶病毒(cucumber mosaicvirus,CMV)、小西葫芦黄化花叶病毒(zucchiniyellow... 于2019和2021年对新疆伽师县12个乡镇进行厚皮甜瓜(通常称伽师瓜)病毒病进行调研采样,采用两步法RT-PCR鉴定西瓜花叶病毒(watermelon mosaic virus,WMV)、黄瓜花叶病毒(cucumber mosaicvirus,CMV)、小西葫芦黄化花叶病毒(zucchiniyellowmosaicvirus,ZYMV)、黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)、南瓜蚜传黄化病毒(cucurbit aphid-borne yellows virus,CABYV)和甜瓜蚜传黄化病毒(melon aphid-borne yellows virus,MABYV),并对WMV基因组进行分析。结果表明,伽师瓜病毒病发生较普遍,症状包括花叶、畸形、坏死和褪绿黄化等。采集的37份样品中,病毒的检出率为21.6%(8/37),其中WMV的检出率最高,为18.9%(7/37),CMV和ZYMV次之,没有鉴定到CGMMV、CABYV和MABYV,复合侵染更普遍。不同WMV分离物的F2/R2(P1+HC-Pro)、F4/R4(P3+6K1+CI)、F5/R5(CI+6K2+NIa-VPg)、F6/R6(6K2+NIa-VPg+NIa-Pro+NIb)和F8/R8(CP+3′-UTR)等基因组片段在进化树上的分支具有一定的差异,表明WMV基因组可能存在重组现象。 展开更多
关键词 甜瓜 病毒鉴定 基因组分析 西瓜花叶病毒
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西瓜花叶病毒单克隆抗体及TAS-ELISA试剂盒的研制 被引量:4
11
作者 梁新苗 李桂芬 +6 位作者 马洁 邓丛良 边勇 张永江 李建光 骆卫峰 周琦 《植物检疫》 北大核心 2013年第2期53-56,共4页
将纯化的西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)制剂免疫BALB/c小鼠,用SP2/0骨髓瘤细胞与经西瓜花叶病毒免疫的BALB/c小鼠的脾细胞融合,有限稀释法克隆和间接ELISA法筛选出1株稳定分泌西瓜花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株6C6。... 将纯化的西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)制剂免疫BALB/c小鼠,用SP2/0骨髓瘤细胞与经西瓜花叶病毒免疫的BALB/c小鼠的脾细胞融合,有限稀释法克隆和间接ELISA法筛选出1株稳定分泌西瓜花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株6C6。用间接ELISA方法对所获得的杂交瘤细胞株进行亚型鉴定为IgG1。间接ELISA方法测定腹水效价为1∶105。以单克隆抗体为包被抗体、多克隆抗体为检测抗体的TAS-ELISA试剂盒与引自ATCC的西瓜花叶病毒毒源PV-27、PV-379、PV-394、PV-511分离物均有反应,与同属的马铃薯A病毒(Potato virus A)、莴苣花叶病毒(Lettuce mosaicvirus virus)、李痘病毒(Plum pox virus)不发生交叉反应,与同属的番木瓜环斑病毒呈弱阳性反应。。 展开更多
关键词 西瓜花叶病毒 单克隆抗体 TAS-ELISA试剂盒
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西瓜花叶病毒西葫芦分离物的基因组及其侵染性克隆
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作者 刘莉铭 彭斌 +3 位作者 康保珊 吴会杰 刘茜 古勤生 《中国瓜菜》 CAS 北大核心 2023年第10期16-22,共7页
西瓜花叶病毒(watermelon mosaic virus,WMV)是危害瓜类作物的一种主要病毒,笔者分析了西葫芦分离物CH99/69的基因组序列和分子变异,构建了具有侵染性的全长cDNA克隆。结果显示,CH99/69分离物基因组全长为10047 nt,与其他分离物的全基... 西瓜花叶病毒(watermelon mosaic virus,WMV)是危害瓜类作物的一种主要病毒,笔者分析了西葫芦分离物CH99/69的基因组序列和分子变异,构建了具有侵染性的全长cDNA克隆。结果显示,CH99/69分离物基因组全长为10047 nt,与其他分离物的全基因组核苷酸、多聚蛋白核苷酸和多聚蛋白氨基酸的序列一致性分别为81.40%~94.80%、81.40%~94.70%、88.40%~97.20%。基于全基因组序列的系统进化分析显示,CH99/69与中国的Urumqi火参果分离物、WMV-WS西葫芦分离物和法国的WMV-Fr西葫芦分离物亲缘关系较近,它们均聚于Ⅰ组中,而与中国的WMV-Pg人参分离物、WMV-GZca臭椿分离物、hollyhock蜀葵分离物亲缘关系最远。接种试验显示,CH99/69分离物的克隆具有侵染性,能系统侵染甜瓜、西瓜、西葫芦和瓠瓜,经接种产生的病毒后代能够通过摩擦接种进行侵染。 展开更多
关键词 西瓜花叶病毒 西葫芦分离物 基因组 侵染性克隆
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Host Reaction of Watermelon mosaic virus Isolates Infecting Melon from Different Geographical Origins in Xinjiang of China 被引量:2
13
作者 WANG Dong LI Guan 《Horticultural Plant Journal》 SCIE 2017年第1期23-28,共6页
Watermelon mosaic virus(WMV) is one of the major viruses infecting cucurbit crops worldwide. Although WMV is very common worldwide,little is known about the biological traits of WMV isolates from China. Hence, this st... Watermelon mosaic virus(WMV) is one of the major viruses infecting cucurbit crops worldwide. Although WMV is very common worldwide,little is known about the biological traits of WMV isolates from China. Hence, this study aimed to characterize 11 WMV isolates infecting melon from different geographical origins in Xinjiang based on experimental hosts. Sap inoculation of the 11 WMV isolates onto a range of 13 plant species revealed some differences compared to the WMV isolates collected from other countries. Our results showed that, overall, there were no obvious correlations of host responses to inoculation with WMV isolates from different geographical origins. However, isolate JS-1 caused mild mosaic on Cucurbita moschata, whereas the remaining 10 isolates were asymptomatic on this plant species. Moreover, in Datura stramonium, isolate TYG-1 induced mosaic, whereas the remaining 10 isolates did not infect this species. All isolates infected systemically Cucurbita pepo and Cucumis melo plants, causing severe symptoms. All isolates did not induce any symptoms on Cucumis sativus, but the virus could be detected using RT-PCR. Additionally, all isolates infected systemically Nicotiana tabacum plants, causing mild mosaics. Chenopodium amaranticolor and Chenopodium quinoa reacted to all isolates by chlorotic local lesions in the inoculated leaves, and the virus was detected in the inoculated leaves using RT-PCR. In addition, the attempts to transmit the isolates to Luffa cylindrica, Vicia faba, Phaseolus vulgaris, Vigna unguiculata or Pisum sativum failed as confirmed by negative RT-PCR. Our results would be useful for understanding the biological variability of WMV. 展开更多
关键词 MELON watermelon mosaic virus host range biological traits mechanical inoculation
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美洲南瓜(Cucurbit pepo)WMV-2抗性遗传及分子标记研究 被引量:3
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作者 王冬杰 葛宇 +4 位作者 刘超 李雪 徐文龙 崔崇士 屈淑平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2014年第1期79-83,共5页
以美洲南瓜(Cucurbita pepo)抗病自交系‘0504’和感病自交系‘0223’为亲本杂交获得的157个F2单株为材料,研究南瓜对西瓜花叶病毒2号(WMV-2)抗性的遗传规律和分子标记。对亲本、F1及F2苗期接种WMV-2进行抗病性鉴定,结果表明,美洲南瓜对... 以美洲南瓜(Cucurbita pepo)抗病自交系‘0504’和感病自交系‘0223’为亲本杂交获得的157个F2单株为材料,研究南瓜对西瓜花叶病毒2号(WMV-2)抗性的遗传规律和分子标记。对亲本、F1及F2苗期接种WMV-2进行抗病性鉴定,结果表明,美洲南瓜对WMV-2的抗性由单隐性基因控制。采用集团分离分析法(BSA)和SSR技术,筛选出与WMV-2抗性基因连锁的标记CMTm157和CMTm158,遗传距离分别为10.9cM和6.2cM,其可以作为南瓜抗WMV-2育种的辅助选择分子标记。 展开更多
关键词 美洲南瓜 西瓜花叶病毒 抗性遗传规律 SSR标记
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西葫芦环斑病病原鉴定及葫芦科作物对西瓜花叶病毒抗性筛选 被引量:3
15
作者 冀树娴 吴雨洪 +3 位作者 郗征 王美加 李向东 田延平 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期442-449,共8页
西瓜花叶病毒(watermelon mosaic virus,WMV)是危害我国葫芦科作物生产的重要病原。培育和种植抗病品种是防治病毒病最经济有效的措施。本研究利用RT-PCR和血清学方法在表现环斑症状的西葫芦果实上检测到WMV,未检测到番木瓜环斑病毒(pap... 西瓜花叶病毒(watermelon mosaic virus,WMV)是危害我国葫芦科作物生产的重要病原。培育和种植抗病品种是防治病毒病最经济有效的措施。本研究利用RT-PCR和血清学方法在表现环斑症状的西葫芦果实上检测到WMV,未检测到番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)。接种WMV侵染性克隆到西葫芦品种绿源冬宝,果实表面产生环斑症状,表明WMV是引起西葫芦果实表面环斑症状的重要病原。利用间接ELISA方法对山东泰安的西瓜、黄瓜、甜瓜、西葫芦和南瓜等46个样品检测发现33个样品表现WMV血清学阳性(检出率71.74%),薛庄采集的带有环斑症状的西葫芦均检测到WMV。对山东省81份葫芦科作物种质资源抗WMV鉴定发现西葫芦品种万盛丰宝、盛丰金珠表现中抗(MR);西瓜品种绿宝新秀和浪潮一号表现中抗(MR);甜瓜品种黄皮面瓜表现抗病(R);黄瓜品种星君贝贝表现中抗(MR);南瓜品种爱维80南瓜表现高抗(HR),蜜本南瓜、传统蜜本南瓜、七叶早南瓜、玲珑二号和绿贝贝迷你南瓜等5个品种表现抗病(R);瓠瓜品种均表现为感病(S)。研究结果对合理布局葫芦科作物品种防控WMV具有重要意义。 展开更多
关键词 葫芦科作物 西瓜花叶病毒 环斑症状 抗性评价
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西瓜花叶病毒抗血清制备及其应用 被引量:3
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作者 冀树娴 王姝雯 +3 位作者 王健 李向东 朱天生 田延平 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期833-837,共5页
西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)是危害葫芦科作物的重要病毒。制备特异性强、效价高的抗血清对快速准确检测和鉴定WMV具有重要意义。本研究将WMV外壳蛋白(Coat protein,CP)基因克隆到原核表达载体pEHISTEV获得pEHISTEV-WMV... 西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)是危害葫芦科作物的重要病毒。制备特异性强、效价高的抗血清对快速准确检测和鉴定WMV具有重要意义。本研究将WMV外壳蛋白(Coat protein,CP)基因克隆到原核表达载体pEHISTEV获得pEHISTEV-WMV-CP。将pEHISTEV-WMV-CP转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导,成功表达出分子量约为36 kDa的蛋白,与预期WMV CP大小一致。切胶回收WMV CP,与等体积弗氏不完全佐剂充分乳化后免疫健康新西兰大白兔。Western blotting结果表明,制备的抗血清与WMV CP有反应,与同属的番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)、小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)和烟草花叶病毒属的黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)均无反应。酶联免疫吸附测定(PTA-ELISA)结果表明,本研究制备的WMV抗血清效价为1∶8192,并且能够检测稀释512倍的病毒汁液。利用该抗血清对田间采集的10个RT-PCR检测为阳性的样品进行检测,全部呈现阳性。本研究利用大肠杆菌表达的CP制备的WMV抗血清具有较高的特异性和灵敏度。研究结果为WMV的快速检测和鉴定奠定了基础。 展开更多
关键词 抗血清 外壳蛋白 原核表达 西瓜花叶病毒
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西瓜花叶病毒辽宁臭椿分离物的鉴定与全序列分析 被引量:2
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作者 付晶晶 杨彩霞 +5 位作者 韩彤 廖一鸣 王昕 付春亭 冯雨 武井昕 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期96-102,共7页
2015年10月,在辽宁省盖州市采集到表现花叶的臭椿样品。应用电子显微镜负染色技术检测到线状病毒粒子(800 nm×18 nm)。利用Potyvirus通用引物PVY-Legpoty-F/PVY-Legpoty-R对三株代表样品进行RTPCR扩增,得到750 bp阳性片段。经Blas... 2015年10月,在辽宁省盖州市采集到表现花叶的臭椿样品。应用电子显微镜负染色技术检测到线状病毒粒子(800 nm×18 nm)。利用Potyvirus通用引物PVY-Legpoty-F/PVY-Legpoty-R对三株代表样品进行RTPCR扩增,得到750 bp阳性片段。经Blast搜索,与西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)高度同源。利用WMV-5NF/WMV-5NR、WMV-MNF/WMV-MNR和WMV-3NF/WMV-3NR三对引物扩增WMV全基因组,确定为10070核苷酸(MF418043)。基于cp基因进行同源性分析和系统进化关系分析,发现盖州臭椿分离物与北京臭椿分离物的关系最近。这是辽宁臭椿上WMV分子特征的首次报道。 展开更多
关键词 POTYvirus 西瓜花叶病毒 臭椿
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西瓜花叶病毒HC-Pro基因的克隆与原核表达 被引量:2
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作者 张建新 刘起丽 吴云锋 《河南师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期101-104,共4页
利用RT-PCR方法获得了西瓜花叶病毒(WMV)陕西分离物HC-Pro基因,大小为1371bp.将HC—Pro基因克隆到pMD18-T SimpleVector,测序分析发现与其它国家HC—Pro核苷酸同源性为90.7%~94.8%.将HC—Pro基因定向插入EcoRⅠ/SalⅠ切开的... 利用RT-PCR方法获得了西瓜花叶病毒(WMV)陕西分离物HC-Pro基因,大小为1371bp.将HC—Pro基因克隆到pMD18-T SimpleVector,测序分析发现与其它国家HC—Pro核苷酸同源性为90.7%~94.8%.将HC—Pro基因定向插入EcoRⅠ/SalⅠ切开的pET30a中,构建了原核表达载体pET30-WHC,转化大肠杆菌BL21.经IPTG诱导2~8h后,成功表达了分子量约为57kD的HC-Pro蛋白.通过不同时间诱导发现,加入IPTG2h后蛋白开始表达,继续诱导到8h后表达量变化不大.以诱导的蛋白为抗原免疫家兔,制备了HC-Pro蛋白的抗血清,ELISA法测其效价为1/6400,Westernblot分析能与HC-Pro发生血清学反应. 展开更多
关键词 西瓜花叶病毒 HC-PRO 原核表达 抗血清
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西瓜花叶病毒HC-Pro基因在毕赤酵母中的分泌表达与功能研究 被引量:1
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作者 张建新 吴云锋 王秀敏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1102-1106,共5页
利用RT-PCR方法扩增出西瓜花叶病毒HC-Pro的基因,长度为1371bp,并构建了真核表达质粒pPIC9K-WHC。将重组质粒经SalⅠ单酶切后电转化Pichia pastoris GS115菌株,经PCR鉴定与G418、MD和MM培养基筛选,获得Mut+/His+表型高拷贝转化子。经1%... 利用RT-PCR方法扩增出西瓜花叶病毒HC-Pro的基因,长度为1371bp,并构建了真核表达质粒pPIC9K-WHC。将重组质粒经SalⅠ单酶切后电转化Pichia pastoris GS115菌株,经PCR鉴定与G418、MD和MM培养基筛选,获得Mut+/His+表型高拷贝转化子。经1%甲醇诱导5d后,SDS-PAGE检测发酵液上清,在66kD处有一特异蛋白条带表达。Western blot鉴定表明,表达蛋白可以和HC-Pro蛋白抗血清发生结合反应。Far-Western blot证明该蛋白能与西瓜花叶病毒CP蛋白结合,支持了HC-Pro蛋白协助传毒的"桥梁"学说。 展开更多
关键词 西瓜花叶病毒 HC—Pro 毕赤酵母 真核表达
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西瓜花叶病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量:1
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作者 公政 王莹 《贵州农业科学》 CAS 2016年第12期63-67,共5页
为寻求西瓜花叶病毒的快速诊断途径,针对西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)衣壳蛋白序列设计4套特异性引物,建立该病毒的环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)快速检测... 为寻求西瓜花叶病毒的快速诊断途径,针对西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)衣壳蛋白序列设计4套特异性引物,建立该病毒的环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)快速检测方法。结果表明:4套引物中引物组3的效果最好,最佳内外引物浓度比为8∶1。利用该引物组在65℃保温45min,通过凝胶电泳即可完成检测。此方法能够特异性地检测WMV,而对马铃薯Y病毒N株系(Potato virus Y N stain,PVY-N)、黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)、烟草脉带花叶病毒(Tobacco banding mosaic virus,TVBMV)无交叉反应。该检测体系的检测限比RT-PCR低10-100倍。 展开更多
关键词 西瓜花叶病毒 反转录环介导等温扩增(RT-LAMP) 病毒检测
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