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草鱼出血病病毒的生长特性及高滴价培养 被引量:31
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作者 方勤 柯丽华 蔡宜权 《病毒学杂志》 CSCD 1989年第3期315-319,共5页
草鱼出血病病毒感染鱼肾(Clk)单层细胞后,产生明显的细胞病变,其繁殖周期为2—3天。病毒增殖的上升期在感染后的12—48小时。28℃下,当感染复数(Multiplicityof Infection简称MOI)为0.05PFU/cell时,病毒滴价可达1.78×10^(11)PFU/ml... 草鱼出血病病毒感染鱼肾(Clk)单层细胞后,产生明显的细胞病变,其繁殖周期为2—3天。病毒增殖的上升期在感染后的12—48小时。28℃下,当感染复数(Multiplicityof Infection简称MOI)为0.05PFU/cell时,病毒滴价可达1.78×10^(11)PFU/ml,不同温度(25℃、28℃、30℃)下通气培养,测定病毒滴价略有差异。感染病毒的细胞培养液经ELISA检测和电子显微镜观察均为阳性结果,并且能感染健康草鱼。 展开更多
关键词 草鱼 出血病病毒 生长特性
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猪伪狂犬病病毒在不同细胞中增殖的研究 被引量:15
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作者 彭丽英 倪建平 +2 位作者 张婉华 何锡忠 徐伟林 《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第4期67-69,共3页
研究了猪伪狂犬病病毒(PRV)在ST、PK-15、CEF、BHK-21细胞系上的增殖情况。结果表明:4种细胞对PRV均敏感,PRV在4种细胞上增殖产生的病毒毒价分别为10^(-8.87±0.04)TCID_(50)/mL、10^(-8.50±0.03)TCID_(50)/mL、10^(-7.68±... 研究了猪伪狂犬病病毒(PRV)在ST、PK-15、CEF、BHK-21细胞系上的增殖情况。结果表明:4种细胞对PRV均敏感,PRV在4种细胞上增殖产生的病毒毒价分别为10^(-8.87±0.04)TCID_(50)/mL、10^(-8.50±0.03)TCID_(50)/mL、10^(-7.68±0.06)TCID_(50)/mL和10^(-7.87±0.05)TCID_(50)/mL。4种细胞都能产生明显的病变,但不同的细胞上出现病变不同,PK-15细胞(20±2)h出现细胞病变且病变为葡萄串状的细胞;ST细胞(22±2)h出现细胞病变且病变为细胞圆缩后成合胞体病灶;BHK-21细胞(25±1)h出现细胞病变且病变为细胞圆缩后成合胞体病灶,有拉网现象;CEF细胞(24±2)h出现细胞病变为葡萄串状的细胞。以上结果说明,ST细胞也适合用于PRV的增殖培养。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 细胞病变 病毒效价 ST细胞系
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呼吸道合胞病毒空斑检测方法的建立及应用 被引量:12
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作者 臧娜 王莉佳 +3 位作者 陈伟超 谢晓虹 邓昱 刘恩梅 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第2期192-195,共4页
目的建立呼吸道合胞病毒(RSV)空斑检测方法,并用于病毒滴度的定量。方法将不同稀释度的RSVA2株病毒液分别接种于Hep-2细胞单层,加0.6%营养琼脂糖覆盖,培养6d后用10%甲醛固定。去除覆盖层,0.05%中性红染色,按文献报道的方法进行空斑计数... 目的建立呼吸道合胞病毒(RSV)空斑检测方法,并用于病毒滴度的定量。方法将不同稀释度的RSVA2株病毒液分别接种于Hep-2细胞单层,加0.6%营养琼脂糖覆盖,培养6d后用10%甲醛固定。去除覆盖层,0.05%中性红染色,按文献报道的方法进行空斑计数。建立空斑法测定RSV滴度的标准曲线,并验证空斑法的准确性及精密性,应用建立的空斑法检测RSV感染BALB/c小鼠肺组织中的RSV滴度。结果RSVA2株感染的Hep-2细胞出现典型的空斑,直径约1~3mm,形态呈圆形或类圆形。空斑法的最低检测限为3.4×101PFU/ml,线性关系良好,相关系数r=0.999996,准确性及精密性均良好。RSV感染的BALB/c小鼠肺组织标本均出现数量不等的空斑。结论所建立的RSV空斑测定方法敏感、准确,能稳定地对病毒滴度进行定量测定,为进一步研究RSV的感染性和免疫原性奠定了基础。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 空斑试验 病毒滴度
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鸡传染性法氏囊病毒在DF-1细胞系上繁殖特性研究 被引量:12
4
作者 王永生 周欣 +3 位作者 杨霞 陈陆 王川庆 王泽霖 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期662-667,共6页
对鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)HQ株在DF-1细胞上的适应及增殖条件进行了研究,结果表明,HQ株不适应在Vero细胞上生长,而在DF-1细胞上能够很好的适应.经培养条件优化,最终选用pH值为7.0,血清含量体积分数为2%的DMEM/F12培养基做维持液,在细... 对鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)HQ株在DF-1细胞上的适应及增殖条件进行了研究,结果表明,HQ株不适应在Vero细胞上生长,而在DF-1细胞上能够很好的适应.经培养条件优化,最终选用pH值为7.0,血清含量体积分数为2%的DMEM/F12培养基做维持液,在细胞传代后第2天接种IBDV HQ株,接毒量为1%(约0.7MOI)后36 h收毒,毒价可达8.5 mL-1以上,是在CEF细胞上培养时毒价的10倍.HQ株在DF-1细胞上培养24~36 h上清液与全悬液毒价基本相同,维持在同一高峰.糖耗的高峰要先于病毒毒价高峰的出现,糖耗在高峰之后快速下降,当降低到接近0时病毒的毒价最高. 展开更多
关键词 传染性法氏囊病毒 DF-1细胞 病毒感染复数 糖耗 毒价
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直接免疫荧光法检测狂犬病毒滴度的可行性研究 被引量:12
5
作者 谈小荣 褚晓明 张建斌 《微生物学免疫学进展》 2011年第2期22-24,共3页
实验研究中建立用于定量检测狂犬病毒滴度的直接免疫荧光法,并将检测结果与传统小鼠脑内滴定法进行了比较,对照两种试验方法的灵敏度、特异性和重复性。结果显示,两种检测方法特异性基本一致;相同样品经多次检测的病毒滴度相近,重复性... 实验研究中建立用于定量检测狂犬病毒滴度的直接免疫荧光法,并将检测结果与传统小鼠脑内滴定法进行了比较,对照两种试验方法的灵敏度、特异性和重复性。结果显示,两种检测方法特异性基本一致;相同样品经多次检测的病毒滴度相近,重复性好、灵敏度高。直接免疫荧光法具有特异、灵敏、快速、操作简单、无需使用动物等优点,可应用于狂犬病毒滴度的定量检测。 展开更多
关键词 狂犬病疫苗 直接免疫荧光法 小鼠脑内滴定法 病毒滴度
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口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)的稳定性研究 被引量:11
6
作者 张晋 王红燕 +4 位作者 张亮 梁晶 徐冉 金歌 柯伟华 《微生物学免疫学进展》 2014年第4期50-56,共7页
目的评价细胞工厂工艺连续生产的口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)的稳定性。方法疫苗在-20℃放置24个月,检测病毒滴度、外观、抗生素残留量、无菌性,及对病毒血清型进行鉴别;2~8℃放置12个月检测疫苗稳定性;室温放置7周、37... 目的评价细胞工厂工艺连续生产的口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)的稳定性。方法疫苗在-20℃放置24个月,检测病毒滴度、外观、抗生素残留量、无菌性,及对病毒血清型进行鉴别;2~8℃放置12个月检测疫苗稳定性;室温放置7周、37℃放置7 d检测加速热稳定性并冻融的稳定性。结果该疫苗-20℃可贮存24个月以上,2~8℃有效期可延长至12个月,且冻融不会影响疫苗的稳定性。结论疫苗质量稳定,各项检测结果均符合《中华人民共和国药典》三部(2010版)及企业《口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)注册标准》。 展开更多
关键词 口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(人二倍体细胞) 稳定性 病毒滴度
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细胞工厂在麻腮风系列疫苗生产中的应用 被引量:9
7
作者 付永其 宋艳梅 +6 位作者 高静 张颖欣 刘辉 孙雅 申亚楠 律苗 杨云凯 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第10期1049-1054,共6页
目的利用细胞工厂培养麻疹、腮腺炎和风疹病毒,并制备麻腮风各单价及联合疫苗。方法应用40层细胞工厂培养原代鸡胚细胞和2BS细胞,制备麻疹、腮腺炎和风疹病毒原液(同时以15 L转瓶培养工艺作为对照),并制备麻腮风各单价及联合疫苗,按照... 目的利用细胞工厂培养麻疹、腮腺炎和风疹病毒,并制备麻腮风各单价及联合疫苗。方法应用40层细胞工厂培养原代鸡胚细胞和2BS细胞,制备麻疹、腮腺炎和风疹病毒原液(同时以15 L转瓶培养工艺作为对照),并制备麻腮风各单价及联合疫苗,按照《中国药典》三部(2015版)方法进行病毒滴度检测。结果细胞工厂制备的麻疹、腮腺炎和风疹病毒原液滴度分别为大于5.2、6.1和5.7 lgCCID_(50)/mL,高于转瓶工艺,且符合《中国药典》三部(2015版)相关规定;1个40层细胞工厂制备的病毒原液量相当于1个转瓶的4至8倍,产量较高。细胞工厂制备的多批次麻腮风各单价及联合疫苗的病毒滴度均符合《中国药典》三部(2015版)相关标准,且病毒滴度热稳定性下降均不超过1个lg。结论利用细胞工厂制备麻腮风各单价及联合疫苗的工艺稳定,重复性好,质量可控,可用于规模化生产。 展开更多
关键词 细胞工厂 麻腮风系列疫苗 2BS细胞 鸡胚细胞 病毒滴度
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反复冻融次数和不同保存温度对病毒滴度的影响 被引量:8
8
作者 陈柯君 李佳 +7 位作者 邓乐君 陈灶妹 赵月 江丽 张俊辉 李伟达 李茹冰 李健 《动物医学进展》 北大核心 2018年第2期61-65,共5页
为探讨在有宿主细胞的情况下,反复冻融和不同保存温度对病毒滴度的影响,将收集的含ST细胞培养的猪细小病毒和含Vero细胞培养的伪狂犬病病毒经过不同次数的反复冻融,测定其病毒滴度。将收集的猪细小病毒液和伪狂犬病病毒液分别在4、22、... 为探讨在有宿主细胞的情况下,反复冻融和不同保存温度对病毒滴度的影响,将收集的含ST细胞培养的猪细小病毒和含Vero细胞培养的伪狂犬病病毒经过不同次数的反复冻融,测定其病毒滴度。将收集的猪细小病毒液和伪狂犬病病毒液分别在4、22、-20、-80℃保存,间隔一段时间后测定半数组织细胞感染剂量(TCID_(50)),以了解病毒滴度。结果显示,含ST细胞的猪细小病毒和含Vero细胞的伪狂犬病病毒经过反复冻融3次之后,病毒滴度比未经冻融的病毒滴度分别提高了1.81lg和1.86lg。同一温度下,随着放置时间的增加,病毒滴度均呈下降的趋势。在一定时间内,不同保存温度下病毒滴度有明显区别,但在-20℃和-80℃条件下保存的病毒滴度下降比4℃和22℃条件下保存的慢。因此,在培养病毒的时候可以用反复冻融3次的方法来提高病毒的滴度。4℃和22℃只能作为病毒的短期储存温度,-20℃和-80℃对于病毒来说是合适的保存温度。 展开更多
关键词 病毒 病毒滴度 反复冻融 保存温度
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甲醛灭活工艺对By型流感病毒的灭活效果及其抗原稳定性的影响
9
作者 郭习勤 魏蕾 +3 位作者 张伟 安文珏 潘若文 崔艳霞 《中国病毒病杂志》 CAS 2024年第1期66-70,共5页
目的评价终浓度为100μg/ml甲醛、2~8℃、10 d灭活工艺对2022年四价流感病毒裂解疫苗生产用By(B/Phuket/3073/2013/BVR-1B)病毒毒株灭活的适用性。方法病毒收获液(鸡胚病毒培养产物)经过澄清过滤,控制蛋白浓度<800μg/ml,温度2~8℃,... 目的评价终浓度为100μg/ml甲醛、2~8℃、10 d灭活工艺对2022年四价流感病毒裂解疫苗生产用By(B/Phuket/3073/2013/BVR-1B)病毒毒株灭活的适用性。方法病毒收获液(鸡胚病毒培养产物)经过澄清过滤,控制蛋白浓度<800μg/ml,温度2~8℃,添加甲醛溶液至终浓度100μg/ml,对病毒收获液进行灭活。在灭活第0、1、2、3、4、5、10天取样,采用鸡胚半数感染剂量(median infective dose,EID50)法检测病毒滴度,采用Reed-Muench法计算lgEID50/ml;采用直接血凝法检测流感病毒血凝滴度;对灭活10 d的样品进行病毒灭活验证试验;灭活10 d后的病毒液经超滤、离心、层析等工艺提纯,取样进行透射电镜观察病毒颗粒完整性。结果病毒收获液灭活第0、1、2、3、4、5、10天的病毒滴度分别为(8.5±0.4)、(4.2±0.5)、(1.3±0.4)、0、0、0、0 lgEID_(50)/ml,血凝滴度结果均在1∶256~1∶512;病毒灭活验证试验显示,经过10 d的灭活,病毒均已全部灭活;透射电镜观察显示,所得的病毒均为完整病毒颗粒。结论终浓度100μg/ml甲醛、2~8℃灭活10 d的灭活工艺可用于By(B/Phuket/3073/2013/BVR-1B)流感病毒的灭活处理。 展开更多
关键词 流感病毒 病毒滴度 灭活 血凝滴度 病毒灭活验证
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荧光定量PCR检测猪圆环病毒2型方法的研究与应用 被引量:8
10
作者 李志娟 王永生 +3 位作者 陈陆 杨霞 赵军 王川庆 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期49-54,共6页
利用常规PCR扩增出猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2保守区域276 bp片段,将其克隆到pMD-18载体,以pMD-18T-276质粒DNA作为标准质粒模板优化反应条件,建立定量检测PCV2的荧光定量PCR方法。结果表明:Ct值与标准品模板在5.60×101~2.74×... 利用常规PCR扩增出猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2保守区域276 bp片段,将其克隆到pMD-18载体,以pMD-18T-276质粒DNA作为标准质粒模板优化反应条件,建立定量检测PCV2的荧光定量PCR方法。结果表明:Ct值与标准品模板在5.60×101~2.74×109拷贝.μL-1范围内呈良好的线性关系,相关系数为-1.00,斜率为-3.345。所建立的方法与猪1型圆环病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖障碍与呼吸系统综合征病毒、猪细小病毒、猪瘟病毒均无交叉反应。应用该方法对PCV2感染细胞后的复制情况进行了研究,结果显示在感染细胞96 h时,PCV2复制达到最高点。此外,利用建立的方法对保存的11个分离株在PK15细胞上繁殖特性进行了研究,筛选到4株高滴度毒株,丰富了圆环病毒疫苗株的研究资源。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 荧光定量PCR 复制 病毒滴度
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细胞工厂培养轮状病毒基因重配株Ls(G3型)条件的优化研究 被引量:8
11
作者 安红 张海红 +3 位作者 王名强 韩平 余黎 周旭 《微生物学免疫学进展》 2014年第1期25-30,共6页
目的:以细胞工厂代替转瓶培养轮状病毒基因重配株Ls的可行性研究。方法采用细胞工厂与相应的转瓶培养工艺作对比,比较两种容器内细胞生长状态与病毒收获液滴度,并对细胞工厂培养条件进行了优化。结果以相同浓度接种细胞时,细胞工厂... 目的:以细胞工厂代替转瓶培养轮状病毒基因重配株Ls的可行性研究。方法采用细胞工厂与相应的转瓶培养工艺作对比,比较两种容器内细胞生长状态与病毒收获液滴度,并对细胞工厂培养条件进行了优化。结果以相同浓度接种细胞时,细胞工厂4 d长成单层,转瓶却需要7 d,经细胞仪计数后单位面积内细胞密度相当;以相同MOI接种病毒后,转瓶内的病毒于第7天病毒滴度达到峰值,细胞已完全脱落;细胞工厂于第3天病毒滴度达到峰值,并实现了3次收获。细胞工厂每次收获的病毒液滴度都稳定在一定范围,与转瓶相当。另外,细胞工厂培养条件优化结果表明,Vero细胞最佳接种浓度为3.0×104细胞/cm2,接种病毒的最适MOI为0.02~0.04。结论使用细胞工厂培养Ls株病毒不仅提高了效率,而且减少了培养空间,可替代转瓶规模化生产轮状病毒疫苗。 展开更多
关键词 轮状病毒 VERO细胞 细胞工厂 病毒滴度
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扶正除疫颗粒抗甲型H1N1流感病毒感染作用评价 被引量:7
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作者 岳冬辉 高玉伟 +11 位作者 宫晓燕 王化磊 于志君 毕岩 王承宇 岳秀芳 王珊 李霞 冯昊 金宏丽 齐瑛琳 梁萌 《中医杂志》 CSCD 北大核心 2014年第23期2029-2033,共5页
目的评价扶正除疫颗粒抗甲型H1N1流感病毒感染的效果。方法将112只小鼠随机分为正常对照组、病毒模型组、达菲对照组、扶正除疫组,每组28只。正常对照组和病毒模型组以生理盐水灌胃,每次0.4 ml/只;达菲对照组以达菲水溶液0.025 g/(kg... 目的评价扶正除疫颗粒抗甲型H1N1流感病毒感染的效果。方法将112只小鼠随机分为正常对照组、病毒模型组、达菲对照组、扶正除疫组,每组28只。正常对照组和病毒模型组以生理盐水灌胃,每次0.4 ml/只;达菲对照组以达菲水溶液0.025 g/(kg·d)灌胃,扶正除疫组以扶正除疫颗粒水溶液12 g/(kg·d)灌胃,均每日1次,共连续灌胃7天。给药第3天,除正常对照组外其余3组以H1N1亚型季节性流感病毒鼠肺适应株FM1-6-E2滴鼻造模,攻毒剂量为5LD50,50μl/只,造模后1h各组继续给药。从攻毒后感染之日起,每组取10只,连续观察14天,观察小鼠死亡情况;各组余18只于攻毒后3天、6天、9天计算肺指数,检测病毒滴度,观察肺组织病理变化。结果病毒模型组10只小鼠全部死亡;达菲对照组和扶正除疫组死亡率均为0。攻毒后第9天,达菲对照组、扶正除疫组与病毒模型组比较,肺指数明显降低(P<0.05或P<0.01);攻毒后第3天、6天,达菲对照组、扶正除疫组与病毒模型组比较,肺组织病毒滴定度明显降低(P<0.05或P<0.01)。达菲对照组与扶正除疫组小鼠肺脏病理变化较为轻微,炎症反应程度明显弱于病毒模型组。结论扶正除疫颗粒对小鼠感染甲型H1N1流感病毒后具有死亡保护作用,对流感病毒在宿主体内复制有抑制作用。 展开更多
关键词 扶正除疫颗粒 甲型H1N1流感病毒 死亡率 肺指数 病毒滴度
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狂犬CTN-1V株在人二倍体细胞Walvax-2株上的病毒收获液制备工艺研究 被引量:5
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作者 徐道俊 段清堂 +5 位作者 鲁卫东 杨燕羽 马波 李子财 李宛馀 刘馨 《药物生物技术》 CAS 2017年第5期381-385,共5页
采用狂犬病病毒株CTN-1V株接毒于人二倍体细胞Walvax-2株进行病毒收获液制备工艺研究。接毒时,采用不同的人二倍体细胞量、不同的接毒方式及不同的moi进行比较;接毒后,待带毒细胞长至致密单层即95%以上,采用直接换病毒维持液和带毒传一... 采用狂犬病病毒株CTN-1V株接毒于人二倍体细胞Walvax-2株进行病毒收获液制备工艺研究。接毒时,采用不同的人二倍体细胞量、不同的接毒方式及不同的moi进行比较;接毒后,待带毒细胞长至致密单层即95%以上,采用直接换病毒维持液和带毒传一代后再换维持液的方式进行比较;同时采用不同培养基维持液、不同pH值的维持液及对不同的病毒收获时间进行比较;通过测定病毒收获液的滴度来确定狂犬病病毒株CTN-1V株接毒于人二倍体细胞Walvax-2株上的病毒收获液最适制备工艺条件。接毒时,采用人二倍体细胞量≥2亿,37℃悬浮混合吸附30 min的方式及0.05 moi;接毒后采用美迪DMEM+0.3%人血白蛋白作为病毒维持液、pH为7.8~8.0的维持液及从换维持液d 3开始收获病毒液,并换上新的维持液,之后再进行5 d及7 d病毒液的收获,通过动物法和细胞法测定收获液的病毒滴度,3次收获液的病毒滴度均大于7.0 lg LD50/m L。建立起了稳定的狂犬病病毒株CTN-1V株在人二倍体细胞Walvax-2株上的病毒收获液制备工艺。 展开更多
关键词 人二倍体细胞Walvax-2株 狂犬病病毒株CTN-1V株 病毒维持液 病毒收获液 病毒滴度 moi
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自噬抑制剂3-MA抑制EV71病毒颗粒的产生与释放 被引量:7
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作者 张晓延 郗雪艳 赵振东 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期176-178,共3页
目的 通过研究肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染引起细胞的自噬及抑制自噬对病毒滴度的影响,为进一步明确EV71的致病机制提供基础.方法 利用Western Blot检测EV71感染后RD-A细胞内源性LC3的型别转换和P62的降解来指示细胞发生... 目的 通过研究肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染引起细胞的自噬及抑制自噬对病毒滴度的影响,为进一步明确EV71的致病机制提供基础.方法 利用Western Blot检测EV71感染后RD-A细胞内源性LC3的型别转换和P62的降解来指示细胞发生自噬的水平,通过测定染毒细胞培养上清中EV71病毒CCID50来观察抑制自噬后细胞释放EV71感染性病毒颗粒的变化.结果 EV71的感染促进了细胞LC3的型别转换和F62的降解,诱导了细胞发生自噬;3-MA抑制细胞自噬后,EV71染毒细胞产生的感染性EV71病毒颗粒数量减少.结论 EV71可以诱导细胞发生自噬,细胞自噬可能促进EV71感染性病毒颗粒的产生和释放. 展开更多
关键词 肠道病毒属 自噬 3-甲基腺嘌呤 病毒滴度
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重组麻疹病毒载体SARS-CoV-2疫苗病毒滴度荧光定量PCR检测方法的建立、验证及应用
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作者 杜天飞 容新宗 +5 位作者 杨盛理 张勇侠 高雅丽 武志强 李春阳 刘兰军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第6期745-750,共6页
目的建立检测重组麻疹病毒载体严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)疫苗病毒滴度的荧光定量PCR(qPCR)法,并进行验证及初步应用。方法以重组质粒pUC57-S351为模板,扩增SARS-CoV-2 ... 目的建立检测重组麻疹病毒载体严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)疫苗病毒滴度的荧光定量PCR(qPCR)法,并进行验证及初步应用。方法以重组质粒pUC57-S351为模板,扩增SARS-CoV-2 S基因,优化引物浓度,建立qPCR检测方法。对该方法的专属性、重复性进行验证,确定线性范围及检测限。应用建立的qPCR法对生物反应器连续培养感染后1~12 d的重组病毒S基因拷贝数进行检测。结果选择引物浓度为0.20μmol/L建立qPCR方法。该方法能特异性检测SARS-CoV-2 S基因拷贝数;模板浓度在2×10^(2)~2×10^(8)copies/μL之间,线性关系良好(R^(2)=0.995),检测下限为2×10^(2)copies/μL;6次重复检测重组病毒S基因拷贝数的变异系数(coefficient of variation,CV)为2.64%。应用建立的qPCR法检测生物反应器连续培养感染后1~12 d的重组病毒S基因拷贝数的结果与细胞病变法检测结果基本一致。结论建立的qPCR法专属性和重复性良好,可用于重组麻疹病毒载体SARS-CoV-2疫苗病毒滴度检测。 展开更多
关键词 荧光定量PCR 重组麻疹病毒载体SARS-CoV-2疫苗 S基因 病毒滴度
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病毒感染复数对狂犬病毒PM株增殖的影响 被引量:6
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作者 陈智 孙艳 +4 位作者 牟建超 刘莉娜 刘宇 刘辉 刘杰 《微生物学免疫学进展》 2016年第5期30-33,共4页
目的:探讨不同感染复数(Multiplicity of infection,MOI)的狂犬病毒PM株在人二倍体细胞(2BS株)中增殖的影响,确定感染复数。方法将狂犬病毒PM株按照MOI 0.01、0.02、0.05、0.10、0.15、0.20接种至2BS细胞中,用显微镜观察接种病毒... 目的:探讨不同感染复数(Multiplicity of infection,MOI)的狂犬病毒PM株在人二倍体细胞(2BS株)中增殖的影响,确定感染复数。方法将狂犬病毒PM株按照MOI 0.01、0.02、0.05、0.10、0.15、0.20接种至2BS细胞中,用显微镜观察接种病毒后细胞的形态变化;培养3-5d后,第一次收获病毒液;更换培养液继续培养3-4d后,进行第二次收获。采用小鼠脑内滴定法测定狂犬病毒滴度,通过NIH法测定灭活病毒液的效价。结果当MOI为0.05-0.10时,细胞圆缩30%-40%,细胞能维持较好的生长形态,可收获病毒,病毒收获液的滴度较高(〉5.0 lgLD50/mL),且灭活后病毒液的效价较高(〉4.0IU/mL)。结论确定狂犬病毒PM株在人二倍体2BS细胞增殖的适宜MOI,为人用狂犬病疫苗生产工艺的优化提供了依据。 展开更多
关键词 狂犬病毒(PM株) 2BS细胞 感染复数 病毒滴度 效价
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不同工艺制备CTN-1V株狂犬病病毒MOI的摸索及其在生物反应器规模化培养中的应用
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作者 王月莉 曹烨 +9 位作者 王玲 王玥 徐晓 胡文龙 陈杰杉 宋远涛 文聪 杨敏 陶涛 梁婧 《国际生物制品学杂志》 CAS 2024年第3期133-138,共6页
目的通过比较转瓶和反应器工艺制备的CTN-1V株狂犬病病毒在Vero细胞上适应性传代的最佳感染复数(multiplicity of infection, MOI), 评价应用反应器工艺规模化制备狂犬病病毒工作种子批的可行性。方法复苏Vero细胞后按照1∶4比例传代至... 目的通过比较转瓶和反应器工艺制备的CTN-1V株狂犬病病毒在Vero细胞上适应性传代的最佳感染复数(multiplicity of infection, MOI), 评价应用反应器工艺规模化制备狂犬病病毒工作种子批的可行性。方法复苏Vero细胞后按照1∶4比例传代至生产代次, 接种不同MOI的CTN-1V株狂犬病病毒并培养。转瓶工艺毒种MOI为0.005、0.010、0.050、0.100、0.500;反应器工艺毒种MOI为0.010、0.030、0.050、0.080、0.100。在培养过程中分别采用ELISA和小鼠脑内滴定法进行狂犬病病毒G蛋白抗原含量和狂犬病病毒滴度检测, 确定最佳MOI, 并将最佳MOI分别应用于300 L反应器规模化病毒培养工艺。单次病毒收获液取样进行病毒G蛋白抗原含量和病毒滴度的检测, 并进行连续3批次确认试验。结果转瓶工艺毒种工作种子批(批号20181201)与反应器工艺毒种工作种子批(批号20201001), 在T225瓶中的最佳MOI均为0.050。将2批毒种分别用于300 L反应器灌流培养48 h后, 每批病毒收获液的G蛋白抗原含量连续9 d均达到1.0国际单位/ml以上, 病毒滴度均达到6.0 lg半数致死剂量/ml以上, 符合工艺标准。结论根据MOI比较结果, 反应器工艺可以替代原有的转瓶工艺制备狂犬病病毒工作种子批, 并应用到规模化生产中。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 VERO细胞 感染复数 G蛋白抗原含量 病毒滴度
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呼吸道合胞病毒滴度双抗体夹心ELISA检测方法的建立
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作者 王婉 唐悦 +4 位作者 赵忆宁 陈玥如 傅生芳 程亚慧 李雄雄 《国际免疫学杂志》 CAS 2024年第1期33-38,共6页
目的建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验(double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)检测呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)滴度。方法以RSV融合前F蛋白的两种抗体AM14与D25作为捕获抗体和检... 目的建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验(double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)检测呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)滴度。方法以RSV融合前F蛋白的两种抗体AM14与D25作为捕获抗体和检测抗体,通过对其抗体浓度的优化来确定DAS-ELISA较适反应条件,并对该方法的特异性、重复性、灵敏度及适用性进行验证。结果选择用AM14抗体作为捕获抗体,D25作为检测抗体。捕获抗体AM14较适工作浓度为20μg/mL,检测抗体D25的稀释比例为1∶3000。建立的DAS-ELISA与轮状病毒(rotavirus,RV)和人3型副流感病毒(human parainfluenza virus type 3,HPIV-3)无交叉反应,且不同稀释倍数的RSV病毒进行批内与批间重复试验的变异系数(coefficient of variation,CV)均<10%;不同亚型的RSV及蛋白进行试验,均能检测到病毒滴度;检测结果与CCID50比较,可检测的稀释倍数略高。结论建立了检测RSV滴度的DAS-ELISA,该方法可为实验室RSV病毒滴度检测提供依据。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 融合前F蛋白 双抗体夹心ELISA 病毒滴度
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汉坦病毒Vero细胞适应株的筛选及鉴定
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作者 管亚博 邢坤鹏 +6 位作者 刘晨阳 王颖 杜翔宇 陈娜娜 张朔 孙宏亮 李景良 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第7期779-787,共9页
目的 探讨汉坦病毒(Hantataan virus,HTNV)PS-6株经乳鼠鼠脑传代后在Vero细胞上的适应性,并筛选出适应Vero细胞的高滴度HTNV。方法 将HTNV PS-6株在乳鼠鼠脑内连续传代培养后,Vero细胞上连续传10代,观察细胞病变效应(cytopathic effect,... 目的 探讨汉坦病毒(Hantataan virus,HTNV)PS-6株经乳鼠鼠脑传代后在Vero细胞上的适应性,并筛选出适应Vero细胞的高滴度HTNV。方法 将HTNV PS-6株在乳鼠鼠脑内连续传代培养后,Vero细胞上连续传10代,观察细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),并采用蚀斑法检测病毒感染性滴度,滴度升高后,采用蚀斑克隆纯化筛选单克隆病毒并检测病毒滴度;分别以0.01、0.05、0.1 MOI感染Vero细胞后绘制病毒生长曲线;Reed-Muench法计算病毒LD50;Western blot法鉴定病毒特异性;透射电镜观察病毒大小及结构;与HTNV PS-6株全基因组核苷酸序列及氨基酸序列进行比较分析。将筛选出的Vero细胞适应株V-PS-6经腹腔注射10只BALB/c雌性小鼠,濒死时解剖,取心、肝、脾、肾、脑、肺、小肠、肌肉等组织进行免疫组化分析。结果 鼠脑传代毒株对Vero细胞具有较好适应性,初始病毒滴度为1.3 lgPFU/mL,随着传代次数增加,病毒滴度逐渐升高,稳定在7.5~7.9 lgPFU/mL;筛选出的适应株V-PS-6蚀斑边界清晰、圆润、肉眼可见,大小如针尖,LD_(50)为10-^(7.8),在相对分子质量约50 000处可见特异性蛋白条带,大小与适应前HTNV PS-6株相符;V-PS-6病毒直径为80~210 nm,与HTNV PS-6电镜结构未见明显差异,核苷酸序列同源性为99.39%,氨基酸序列同源性为98.85%;V-PS-6病毒明显分布在小鼠肾脏、肝脏、小肠、后腿肌肉及心脏中。结论 成功筛选出1株可较好适应Vero细胞的高滴度HTNV株,且具有良好的遗传稳定性,为后续HTNV Vero细胞疫苗的研发及相关机制的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 汉坦病毒 VERO细胞 适应性传代 蚀斑法 病毒滴度
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水痘减毒活疫苗冻干工艺的优化
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作者 顾开龙 赵莹 +3 位作者 李欣格 邹德志 王学敏 张明亮 《生物化工》 CAS 2024年第3期68-71,共4页
目的:对冻干水痘减毒活疫苗的冻干工艺参数进行筛选和优化。方法:通过设计单因素试验和正交试验对水痘减毒活疫苗的关键冻干工艺参数进行优化,采用优化后的冻干曲线制备冻干水痘减毒活疫苗,并测定制品水分含量、外观、病毒滴度等指标。... 目的:对冻干水痘减毒活疫苗的冻干工艺参数进行筛选和优化。方法:通过设计单因素试验和正交试验对水痘减毒活疫苗的关键冻干工艺参数进行优化,采用优化后的冻干曲线制备冻干水痘减毒活疫苗,并测定制品水分含量、外观、病毒滴度等指标。结果:最佳工艺参数为升华干燥温度-20℃,升华干燥真空度10 Pa,解析干燥温度30℃,解析干燥时间8 h;采用优化后冻干曲线制备的疫苗外观为乳白色或白色疏松体,复溶后为澄明液体,可微带乳光,无异物;各种理化性质及水分含量均符合规定,且制品病毒滴度符合标准。结论:优化后的冻干曲线适用于冻干水痘减毒活疫苗的制备。 展开更多
关键词 水痘减毒活疫苗 冻干工艺 正交试验 病毒滴度
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