目的探讨全反式维甲酸(ATRA)调控Kruppel因子5(Klf5)在预防移植静脉术后狭窄的作用及机制。方法建立新西兰大白兔(海军军医大学动物实验中心提供)静脉动脉化动物模型,按完全随机分为造模组(A、B、C组分别为饲养2、4、8周)和ATRA组(D、E...目的探讨全反式维甲酸(ATRA)调控Kruppel因子5(Klf5)在预防移植静脉术后狭窄的作用及机制。方法建立新西兰大白兔(海军军医大学动物实验中心提供)静脉动脉化动物模型,按完全随机分为造模组(A、B、C组分别为饲养2、4、8周)和ATRA组(D、E、F组分别为饲养2、4、8周,鼻饲ATRA10 mg/d)、空白对照组(G组),各6只。分别获取移植静脉标本,行苏木精-伊红染色及免疫组化检验。建立人脐静脉平滑肌细胞(SMC)KLF5过表达细胞模型,以ATRA干预,划痕实验、细胞增殖实验(CCK-8)明确SMC增殖及迁移情况;免疫共沉淀明确ATRA对Klf5-RARa结合的阻断作用。两组间计量资料采用两独立样本t检验,多组间计量资料采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验方法。结果各组管径:A组(107.58±18.11)μm,B组(144.65±26.10)μm,C组(160.28±28.06)μm,D组(78.42±9.00)μm,E组(102.75±16.47)μm,F组(117.47±38.06)μm,G组(35.73±6.04)μm。组间比较,建模组各组(A、B、C各组)明显高于空白对照组(G组)(t=5.81、8.81、10.08,P<0.01),同期建模组各组明显高于ATRA组(t=2.06、2.96、3.03,P<0.05)。以染色指数法计算免疫组化结果,建模各组细胞核增殖抗原(Ki-67,2周3.07±0.64,4周3.67±0.81,8周1.93±0.41)表达明显高于对照组(t=6.93、9.37、4.16,P<0.01),也高于同期ATRA组(2周2.87±0.52,4周3.60±1.21,8周2.10±0.24,t=4.91、6.66、2.14,P<0.05)。实验组Klf5表达(2周4.43±0.70,4周5.67±1.18,8周3.03±0.98)明显高于对照组(t=7.27、9.09、3.83,P<0.01),建模组与ATRA组间KLF5(2周4.43±0.70,4周5.67±1.18,8周3.03±0.98)表达差异无统计学意义(t=0.49、0.17、0.42,P>0.05)。CCK-8实验:72 h Klf5组吸光度(A)值(1.54±0.20)高于其余3组(t=5.62、5.84、8.31,P<0.01),Klf5+ATRA组(1.02±0.14)高于ARTA组(0.80±0.07,t=2.47,P<0.05),对照组(1.04±0.13)高于ATRA组(t=2.70,P<0.05)。划痕实验:以迁移前后划痕距离的比值,klf5组0.098±0.006,对照组0.404±0.009,ATRA组0.597±0.014,Klf5展开更多
文摘目的探讨全反式维甲酸(ATRA)调控Kruppel因子5(Klf5)在预防移植静脉术后狭窄的作用及机制。方法建立新西兰大白兔(海军军医大学动物实验中心提供)静脉动脉化动物模型,按完全随机分为造模组(A、B、C组分别为饲养2、4、8周)和ATRA组(D、E、F组分别为饲养2、4、8周,鼻饲ATRA10 mg/d)、空白对照组(G组),各6只。分别获取移植静脉标本,行苏木精-伊红染色及免疫组化检验。建立人脐静脉平滑肌细胞(SMC)KLF5过表达细胞模型,以ATRA干预,划痕实验、细胞增殖实验(CCK-8)明确SMC增殖及迁移情况;免疫共沉淀明确ATRA对Klf5-RARa结合的阻断作用。两组间计量资料采用两独立样本t检验,多组间计量资料采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验方法。结果各组管径:A组(107.58±18.11)μm,B组(144.65±26.10)μm,C组(160.28±28.06)μm,D组(78.42±9.00)μm,E组(102.75±16.47)μm,F组(117.47±38.06)μm,G组(35.73±6.04)μm。组间比较,建模组各组(A、B、C各组)明显高于空白对照组(G组)(t=5.81、8.81、10.08,P<0.01),同期建模组各组明显高于ATRA组(t=2.06、2.96、3.03,P<0.05)。以染色指数法计算免疫组化结果,建模各组细胞核增殖抗原(Ki-67,2周3.07±0.64,4周3.67±0.81,8周1.93±0.41)表达明显高于对照组(t=6.93、9.37、4.16,P<0.01),也高于同期ATRA组(2周2.87±0.52,4周3.60±1.21,8周2.10±0.24,t=4.91、6.66、2.14,P<0.05)。实验组Klf5表达(2周4.43±0.70,4周5.67±1.18,8周3.03±0.98)明显高于对照组(t=7.27、9.09、3.83,P<0.01),建模组与ATRA组间KLF5(2周4.43±0.70,4周5.67±1.18,8周3.03±0.98)表达差异无统计学意义(t=0.49、0.17、0.42,P>0.05)。CCK-8实验:72 h Klf5组吸光度(A)值(1.54±0.20)高于其余3组(t=5.62、5.84、8.31,P<0.01),Klf5+ATRA组(1.02±0.14)高于ARTA组(0.80±0.07,t=2.47,P<0.05),对照组(1.04±0.13)高于ATRA组(t=2.70,P<0.05)。划痕实验:以迁移前后划痕距离的比值,klf5组0.098±0.006,对照组0.404±0.009,ATRA组0.597±0.014,Klf5
