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胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA表达载体的构建及其对胃癌细胞的影响 被引量：3
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作者 高利利 吴本俨 +4 位作者 王孟薇 战大伟 张林 尤纬缔 王卫华 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期84-88,共5页
目的探讨胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA（siRNA）转染对胃癌细胞MKN45的影响。方法设计两对针对GCRG213可转录为siRNA的DNA片段，退火后插入siRNA表达载体IMG-800。测序正确的重组子IMG-800-1（含干扰片段1）、IMG-800-2（含干扰片段2... 目的探讨胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA（siRNA）转染对胃癌细胞MKN45的影响。方法设计两对针对GCRG213可转录为siRNA的DNA片段，退火后插入siRNA表达载体IMG-800。测序正确的重组子IMG-800-1（含干扰片段1）、IMG-800-2（含干扰片段2）和空载体经脂质体转染人胃癌细胞系MKN45细胞，G418筛选获得稳定转染的细胞株。采用半定量RT-PCR及Western免疫印迹法，比较转染不同质粒的MKN45细胞中GCRG213在mRNA和蛋白质水平上的表达差异。选取稳定转染不同质粒的MKN45细胞，采用细胞计数法绘制细胞生长曲线，流式细胞仪分析细胞的增殖状态，AnnexinV FTTC／PI双标记法检测凋亡细胞，平板克隆形成实验、裸鼠移植瘤实验分析转染细胞成瘤性。结果经测序证实，干扰片段退火后正确插入小干扰RNA表达载体IMG-800，组成重组子IMG-800-1和IMG-800-2。重组子IMG-800-1、IMG-800-2和空载体经脂质体转染人胃癌细胞系MKN45细胞，G418筛选获得稳定转染的细胞株。与对应的空载体比较，RT-PCR结果显示，转染siRNA的MKN45细胞中，mRNA的表达分别下调44．9％和49．5％；Western印迹法结果显示，转染siRNA的MKN45细胞中，蛋白的表达分别下调55．3％和64．2％。与转染空载体的细胞相比，转染siRNA的MKN45细胞生长增殖速度明显减慢，细胞周期表现为处于G0—G1期的细胞有所增加，G2／M期和（或）S期的细胞比例减少，细胞凋亡率增加，细胞克隆形成数量减少，裸鼠体内成瘤性降低。结论胃癌相关基因GCRG213 siRNA转染，可抑制肿瘤细胞的生长和增殖，促进肿瘤细胞的凋亡，抑制肿瘤细胞的成瘤性。 展开更多
关键词 胃肿瘤 GCRG213 SIRNA转染 MKN45
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