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优化构建UreB/HpaA双价幽门螺杆菌减毒活菌疫苗的免疫保护作用 被引量:13
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作者 朱森林 陈旻湖 +5 位作者 陈洁 焦志勇 李国庆 陈为 彭晓忠 胡品津 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期583-586,共4页
目的 以减毒鼠伤寒沙门菌为载体 ,通过在UreB和HpaA间引入由 3个甘氨酸残基组成的三肽柔韧接头 ,构建成UreB/HpaA双价抗幽门螺杆菌 (Hp)活疫苗 ,并对照相应单价疫苗和空白载体研究其对C5 7BL/6小鼠的免疫保护效果。方法 用序列重叠延... 目的 以减毒鼠伤寒沙门菌为载体 ,通过在UreB和HpaA间引入由 3个甘氨酸残基组成的三肽柔韧接头 ,构建成UreB/HpaA双价抗幽门螺杆菌 (Hp)活疫苗 ,并对照相应单价疫苗和空白载体研究其对C5 7BL/6小鼠的免疫保护效果。方法 用序列重叠延伸聚合酶链反应扩增带 3个甘氨酸残基柔韧接头的融合基因ureB/hpaA ,进一步以减毒鼠伤寒沙门菌SL32 6 1为载体构建UreB/HpaA双价活疫苗 ,观察其在小鼠体内的稳定性。用双价活疫苗株免疫Ⅱ级C5 7BL/6小鼠 1次 ,对照单价活疫苗和空白载体观察其在体内诱导的特异抗体反应和对小鼠的免疫保护作用。结果 测序结果显示 ,3个甘氨酸残基的编码序列GGTGGAGGC已成功地插入UreB/HpaA融合基因中。双价疫苗灌喂小鼠后 ,至少能在脾脏和回肠末段存留 10d。双价疫苗在小鼠体内诱导血清特异性IgG1和IgG2a水平明显升高。UreB/HpaA双价疫苗的免疫保护率为77.3% (17/2 2 ) ,而UreB疫苗和HpaA疫苗的免疫保护率分别为5 0 .0 % (12 /2 4 )和 4 3.5 % (10 /2 3)。结论 引入柔韧接头 ,优化构建表达UreB和HpaA的双价抗Hp活疫苗。UreB/HpaA双价活疫苗对Ⅱ级C5 7BL/6小鼠有更好的免疫保护作用。 展开更多
关键词 ureb HPAA 双价幽门螺杆菌 减毒活菌疫苗 免疫保护作用
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Construction of recombinant attenuated Salmonella typhimurium DNA vaccine expressing H pylori ureB and IL-2 被引量:10
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作者 Can Xu Zhao-Shen Li Yi-Qi Du Yan-Fang Gong Hua Yang Bo Sun Jing Jin 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2007年第6期939-944,共6页
AIM: To construct a recombinant live attenuated Salmonella typhimurium DNA vaccine encoding H pylori ureB gene and mouse IL-2 gene and to detect its immunogenicity in vitro and in vivo. METHODS: Hpylori ureB and mou... AIM: To construct a recombinant live attenuated Salmonella typhimurium DNA vaccine encoding H pylori ureB gene and mouse IL-2 gene and to detect its immunogenicity in vitro and in vivo. METHODS: Hpylori ureB and mouse IL-2 gene fragments were amplified by polymerase chain reaction (PCR) and cloned into pUCmT vector. DNA sequence of the amplified ureB and IL-2 genes was assayed, then cloned into the eukaryotic expression vector pIRES through enzyme digestion and ligation reactions resulting in pIRES-ureB and pIRES-ureB-IL-2. The recombinant plasmids were used to transform competent E. co/i DH5α, and the positive clones were screened by PCR and restriction enzyme digestion. Then, the recombinant pIRES-ureB and pIRES-ureB-IL-2 were used to transform LB5000 and the recombinant plasmids extracted from LB5000 were finally introduced into the final host SL7207. After that, recombinant strains were grown in vitro repeatedly. In order to detect the immunogenicib/of the vaccine in vitro, pIRES-ureB and pIRES-ureB-IL-2 were transfected to COS-7 cells using LipofectamineTM2000, the immunogenicity of expressed UreB and IL-2 proteins was assayed with SDS-PAGE and Western blot. C57BL/6 mice were orally immunized with 1 × 10^8 recombinant attenuated Salmonella typhimurium DNA vaccine. Four weeks after vaccination, mice were challenged with 1 × 10^7 CFU of live Hpylori SS1. Mice were sacrificed and the stomach was isolated for examination of H pylon 4 wk post-challenge. RESULTS: The 1700 base pair ureB gene fragment amplified from the genomic DNA was consistent with the sequence of H pylori ureB by sequence analysis. The amplified 510 base pair fragment was consistent with the sequence of mouse IL-2 in gene bank. It was confirmed by PCR and restriction enzyme digestion that H pylori ureB and mouse IL-2 genes were inserted into the eukaryotic expression vector pIRES. The experiments in vitro showed that stable recombinant live attenuated Salmonella typhimurium DNA vaccine carrying ureB and IL-2 genes was successfully 展开更多
关键词 HPYLORI DNA vaccine ureb gene Salmonella typhimurium
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靶向幽门螺杆菌UreB鲨鱼纳米抗体的筛选与鉴定
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作者 高艳春 王艳归 +3 位作者 张玉秀 冯世涛 席晓志 顾玉超 《中国海洋药物》 CAS CSCD 2024年第4期35-41,共7页
目的 开发靶向幽门螺杆菌(H. pylori)尿素酶B亚基(UreB)的鲨鱼纳米抗体。方法 利用大肠杆菌表达系统对UreB进行重组表达,纯化后对条纹斑竹鲨进行免疫,通过间接ELISA检测免疫后鲨鱼血浆的抗体效价。提取鲨鱼外周血淋巴细胞及脾脏组织的总... 目的 开发靶向幽门螺杆菌(H. pylori)尿素酶B亚基(UreB)的鲨鱼纳米抗体。方法 利用大肠杆菌表达系统对UreB进行重组表达,纯化后对条纹斑竹鲨进行免疫,通过间接ELISA检测免疫后鲨鱼血浆的抗体效价。提取鲨鱼外周血淋巴细胞及脾脏组织的总RNA,即鲨源新抗原受体可变区(variable domain of immunoglobulin new antigen receptor,VNAR)构建鲨鱼纳米抗体噬菌体展示文库。扩增噬菌体文库,采用固相淘选,通过噬菌体多克隆ELISA检测特异性噬菌体的富集程度。通过单克隆ELISA鉴定阳性噬菌体,并通过序列比对,确定靶向UreB的鲨鱼纳米抗体序列。构建鲨鱼纳米抗体重组表达质粒,利用大肠杆菌表达系统制备重组鲨鱼纳米抗体。通过ELISA检测鲨鱼纳米抗体对重组UreB和H. pylori菌株的结合能力。结果 成功制备了重组UreB蛋白,用于免疫鲨鱼,经6次免疫后构建了库容量为1.28×10^(8) CFU的鲨鱼纳米抗体噬菌体展示文库。淘选到的2株靶向UreB的鲨鱼纳米抗体,具有较高的亲和力,其中1E3可特异性结合H. pylori。结论 成功筛选到靶向UreB鲨鱼纳米抗体,为H. pylori感染的诊断和治疗药物的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 ureb 鲨鱼纳米抗体 噬菌体展示
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幽门螺杆菌尿素酶B亚单位核酸疫苗的构建及鉴定 被引量:5
4
作者 曾韦锟 邹全明 井申荣 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期665-667,共3页
目的:克隆幽门螺杆菌HpureB基因,并构建其核酸疫苗。方法:以HpNCTC11637株基因组DNA为模板,用PCR扩增ureB基因,并亚克隆至pMD18-T载体中。将目的基因经SalI、BglⅡ酶切纯化后插入pTCAE中,转化E.coliDH5α。经SalI、XhoI酶切并测序鉴定... 目的:克隆幽门螺杆菌HpureB基因,并构建其核酸疫苗。方法:以HpNCTC11637株基因组DNA为模板,用PCR扩增ureB基因,并亚克隆至pMD18-T载体中。将目的基因经SalI、BglⅡ酶切纯化后插入pTCAE中,转化E.coliDH5α。经SalI、XhoI酶切并测序鉴定的阳性重组质粒命名为pT-ureB。以电穿孔法将pT-ureB转染CHO细胞,用Wes-tern blot检测UreB蛋白的表达。结果:克隆重组后得到pT-ureB。将pT-ureB以电穿孔法转染CHO细胞后,取其培养上清进行Western blot检测,在UreB的相对分子质量(Mr)为62000处出现特异性条带。结论:成功地构建了HpureB核酸疫苗。体外转染CHO细胞后,经Western blot检测证实有UreB蛋白的表达,为进一步的相关研究奠定了基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 ureb DNA疫苗
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幽门螺杆菌UreB和HspA DNA疫苗的构建及免疫评价 被引量:3
5
作者 刘秀丽 李淑琴 +3 位作者 刘纯杰 陶好霞 李勣 张兆山 《生物技术通讯》 CAS 2002年第3期161-163,共3页
本研究选择幽门螺杆菌尿素酶B和热休克蛋白A为候选抗原,通过PCR扩增基因,克隆至真核表达质粒pCD-NA3.1(-)His-Myc上,构建成DNA疫苗。通过小鼠免疫效果的评价,获得两株具有免疫源性DNA疫苗。
关键词 幽门螺杆菌 ureb HSPA DNA疫苗 构建 免疫评价 尿素酶B 热休克蛋白A 候选抗原
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幽门螺杆菌UreB单克隆抗体的制备及尿素酶活性抑制能力的研究 被引量:6
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作者 吴亚男 邹全明 +2 位作者 罗萍 郭刚 王晓勤 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期393-396,共4页
目的制备抗幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(UreB)单克隆抗体,并检测其对尿素酶活性的抑制能力。方法以重组UreB蛋白为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗UreB单克隆抗体,用ELISA检测mAb的效价、亲和常数;用Westernblot检测mAb的特异性。将尿素酶与... 目的制备抗幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(UreB)单克隆抗体,并检测其对尿素酶活性的抑制能力。方法以重组UreB蛋白为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗UreB单克隆抗体,用ELISA检测mAb的效价、亲和常数;用Westernblot检测mAb的特异性。将尿素酶与单克隆抗体预孵育后加入含有尿素和酚红的缓冲液,于550nm测定单克隆抗体对尿素酶活性的抑制能力。结果得到5株稳定分泌抗UreB的单克隆抗体的杂交瘤细胞1D5、9E1、3A2、1D6、6E6。测定抗体亚型1D5,9E1,3A2为IgG1,1D6、6E6为IgG2a,亲和常数分别为4×108、4.6×108、2.8×108、2×109、3×109L/mol。Westernblot鉴定5种单克隆抗体均能和重组UreB及全菌蛋白中的UreB抗原发生特异性结合,且均不与肠道常见菌发生交叉反应。5株单克隆抗体中只有6E6具有对尿素酶活性的抑制作用,且抑制率与单克隆抗体剂量相关。结论制备了5株稳定分泌抗UreB抗体的杂交瘤细胞株,产生的单克隆抗体效价高且特异性好,其中6E6能抑制尿素酶活性。本研究为探讨尿素酶的作用机制、UreB的纯化及Hp的临床诊断和治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 尿素酶B亚单位 单克隆抗体 尿素酶活性
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兰州地区人群血清幽门螺杆菌致病因子抗体与上消化道疾病的关系 被引量:4
7
作者 王竞秋 尹少甫 +3 位作者 强尧生 景涛 陈根 韩俭 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2010年第11期815-817,共3页
目的研究兰州地区患者中幽门螺杆菌(Hp)致病因子VacA、CagA、UreA和UreB与上消化道疾病的关系。方法病理学HE染色诊断患者,免疫印迹技术检测80例慢性萎缩性胃炎(16例)、消化性溃疡(24例)及胃癌患者(40例)血清中VacA、CagA、UreA和UreB抗... 目的研究兰州地区患者中幽门螺杆菌(Hp)致病因子VacA、CagA、UreA和UreB与上消化道疾病的关系。方法病理学HE染色诊断患者,免疫印迹技术检测80例慢性萎缩性胃炎(16例)、消化性溃疡(24例)及胃癌患者(40例)血清中VacA、CagA、UreA和UreB抗体,分析与疾病的相关性。结果兰州地区人群上消化道疾病患者中HpCagA、VacA、UreA和UreB抗体阳性率依次为87.50%、95.00%、82.50%和80.00%;消化性溃疡组UreB抗体阳性率显著低于胃癌组(P<0.05);在消化性溃疡、胃癌组中CagA抗体阳性率显著高于萎缩性胃炎组(P<0.05)。结论兰州地区上消化道疾病患者中Hp感染率高,以Ⅰ型菌株为主;UreB与胃癌的发病关系密切;CagA在消化性溃疡和胃癌发生中的作用更为明显。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 兰州 VACA CAGA UreA ureb
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人幽门螺杆菌UreB与Omp11双价疫苗载体的构建与鉴定 被引量:3
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作者 赵玉霞 章涵 +1 位作者 段广才 郗园林 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2007年第1期103-106,共4页
目的:构建含人幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)郑州分离株MELHP27ureB-omp11融合基因的重组表达载体。方法:利用分子克隆技术,扩增HpUreB、Omp11编码基因及融合基因ureB-omp11,将融合基因ureB-omp11与载体pET30a(+)进行酶切、连接,然后转化并... 目的:构建含人幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)郑州分离株MELHP27ureB-omp11融合基因的重组表达载体。方法:利用分子克隆技术,扩增HpUreB、Omp11编码基因及融合基因ureB-omp11,将融合基因ureB-omp11与载体pET30a(+)进行酶切、连接,然后转化并筛选含有目的基因的重组载体。结果:酶切、测序分析表明,插入的基因片段为HpureB-omp11融合基因,由2280bp组成。与GenBank报道的相比,核苷酸序列同源性为99.39%,氨基酸序列同源性为99.47%。结论:成功构建了MELHp27融合蛋白UreB-Omp11的双价疫苗重组载体,为Hp蛋白质疫苗和核酸疫苗的研制奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 ureb ompll 融合蛋白
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幽门螺杆菌抗原基因ureB在乳酸菌中的克隆表达与免疫反应性研究 被引量:3
9
作者 张小娟 张荣光 +1 位作者 段广才 范青堂 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期925-928,932,共5页
目的为了开发幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)口服疫苗,将Hp尿素酶B(UreB)在食品级乳酸乳球菌NZ3900菌株中进行表达,并研究其免疫反应性。方法 PCR扩增Hp MEL-HP27菌株ureB基因(基因号:FJ436980),将其克隆入大肠杆菌-乳酸乳球菌穿... 目的为了开发幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)口服疫苗,将Hp尿素酶B(UreB)在食品级乳酸乳球菌NZ3900菌株中进行表达,并研究其免疫反应性。方法 PCR扩增Hp MEL-HP27菌株ureB基因(基因号:FJ436980),将其克隆入大肠杆菌-乳酸乳球菌穿梭质粒pNZ8110中并转化乳酸乳球菌NZ3900;采用正交试验确定目的蛋白表达的适宜条件;应用western-blot鉴定其免疫反应性。结果成功扩增了Hp MEL-HP27菌株ureB基因,构建了ureB基因的乳酸菌NICE(Nisin-controlled expression)原核表达系统;UreB蛋白适宜的表达条件为:在ureB重组菌生长至对数生长前期(OD600≈0.3~0.4)加入终浓度为40ng/mL的nisin,诱导表达5h,可溶性UreB蛋白表达量最高,可达27.26μg/mL培养基。可溶性UreB蛋白的表达占上清蛋白的比例最高可达20.19%;Western-blot结果显示乳酸乳球菌表达的UreB抗原蛋白具有良好的免疫反应性。结论结果提示应用乳酸乳球菌构建幽门螺杆菌食品级疫苗可能具有较好前景。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 乳酸乳球菌 NICE ureb
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幽门螺杆菌尿素酶B亚单位功能片段的纯化及活性研究 被引量:5
10
作者 袁小澎 邹全明 +4 位作者 柏杨 杨珺 郭鹰 张卫军 刘正祥 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期959-962,共4页
目的建立一种有效的尿素酶功能片段的纯化方法。方法应用已构建的尿素酶B功能片段表达载体,IPTG诱导表达,包涵体鉴定试验判断目的蛋白表达形式,AKTA100上分别采用亲和层析和离子层析等多级纯化方式优化纯化条件,HPLC检测纯化蛋白纯度,... 目的建立一种有效的尿素酶功能片段的纯化方法。方法应用已构建的尿素酶B功能片段表达载体,IPTG诱导表达,包涵体鉴定试验判断目的蛋白表达形式,AKTA100上分别采用亲和层析和离子层析等多级纯化方式优化纯化条件,HPLC检测纯化蛋白纯度,尿素酶活性阻断试验对纯化后功能片段进行活性鉴定。结果IPTG诱导后目的蛋白高表达,包涵体鉴定试验证实目的蛋白以可溶形式存在宿主细胞中,优化后方案得到目的蛋白纯度>90%且能被尿素酶B免疫的兔血清识别,纯化后蛋白免疫家兔后产生兔抗血清能够特异性中和Hp尿素酶活性。结论成功建立了尿素酶功能片段的纯化方法。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 蛋白纯化 尿素酶B
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幽门螺杆菌双亚单位表位融合蛋白的构建、表达及鉴定 被引量:4
11
作者 周维英 吴超 +2 位作者 石云 张卫军 邹全明 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期121-125,130,共6页
目的构建和表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)黏附素(HpaA)和尿素酶B亚单位(UreB)表位串联体(HUepi)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)融合蛋白(HUepi-LTB),并对其进行纯化和鉴定。方法采用PCR技术分别扩增HpaA-UreB表位多肽编... 目的构建和表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)黏附素(HpaA)和尿素酶B亚单位(UreB)表位串联体(HUepi)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)融合蛋白(HUepi-LTB),并对其进行纯化和鉴定。方法采用PCR技术分别扩增HpaA-UreB表位多肽编码基因HUepi和LTB的编码基因LtB,重叠延伸PCR将2段基因拼接起来,T-A克隆后构建融合基因表达质粒pET-22b(+)-HUepi-LtB,经酶切鉴定后转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,采用阳离子和阴离子交换层析进行纯化,PAGE检测、N端测序和westernblotting、ELISA检测、GM1活性检测。结果成功构建表位串联体(HUepi)与LTB融合蛋白的高效表达质粒pET-22b(+)-HUepi-LtB,重组工程菌pET-22b(+)-HUepi-LtB/BL21经IPTG诱导目的蛋白表达率约28%,PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约20.7×103,破菌后电泳证实目的蛋白以包涵体形式表达,纯化后蛋白纯度达97%,免疫学鉴定该融合蛋白与兔抗LTB抗血清可以发生特异性的结合。结论HpHpaA-UreB表位串联体(HUepi)与LTB融合蛋白(HUepi-LTB)经基因克隆获得了较高的表达量,并初步显示了较好的免疫活性。为新一代Hp疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 黏附素 尿素酶B亚单位 大肠杆菌不耐热毒素B亚单位
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幽门螺杆菌临床分离株尿素酶基因B的原核表达、纯化及免疫活性 被引量:5
12
作者 周珍文 关锐梨 +5 位作者 夏慧敏 邓秋连 谢永强 黄勇 廖灿 龚四堂 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第20期3673-3675,共3页
目的:在大肠杆菌中表达幽门螺杆菌临床分离株尿素酶B(UreB),纯化重组蛋白并分析其免疫活性。方法:将pGEX-4T-1-UreB重组菌BL21复舒,挑单菌落接种于含氨苄的LB培养基中,0.5mmoL异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组融合蛋白的表达,使用纯化... 目的:在大肠杆菌中表达幽门螺杆菌临床分离株尿素酶B(UreB),纯化重组蛋白并分析其免疫活性。方法:将pGEX-4T-1-UreB重组菌BL21复舒,挑单菌落接种于含氨苄的LB培养基中,0.5mmoL异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组融合蛋白的表达,使用纯化的重组蛋白免疫小鼠,ELISA检测血清抗体效价,并使用感染患者血清进行Western-blotting鉴定重组蛋白反应原性。结果:SDS-PAGE示在约87kD相应分子量可见融合蛋白表达,产物主要在表达上清以可溶形式存在,纯化蛋白免疫小鼠能诱导产生特异性体液免疫应答,ELISA检测特异性IgG效价为1:51200,Westernblotting示重组蛋白能被幽门螺杆菌感染患者血清识别。结论:UreB在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物具有较好的免疫原性及反应原性。 展开更多
关键词 螺杆菌 幽门 尿素酶B 免疫活性
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幽门螺杆菌儿童分离株尿素酶基因B的克隆及序列分析 被引量:4
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作者 周珍文 邓秋连 +5 位作者 夏慧敏 耿岚岚 梁伟河 谢永强 黄勇 龚四堂 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期877-880,共4页
目的克隆幽门螺杆菌(Hp)临床儿童分离株尿素酶B(UreB)基因入pGEX-4T-1表达载体,并进行测序及基因比对分析,为以UreB作为Hp疫苗分子的口服疫苗研制奠定基础。方法根据GenBank中HpUreB序列,设计一对特异性引物PCR扩增Hp临床儿童分离株Ure... 目的克隆幽门螺杆菌(Hp)临床儿童分离株尿素酶B(UreB)基因入pGEX-4T-1表达载体,并进行测序及基因比对分析,为以UreB作为Hp疫苗分子的口服疫苗研制奠定基础。方法根据GenBank中HpUreB序列,设计一对特异性引物PCR扩增Hp临床儿童分离株UreB全长基因,EcoRI及NotI酶切后与做相应酶切的pGEX-4T-1连接,转化大肠杆菌BL21,提取质粒进行双酶切鉴定及基因测序,并对测序结果进行比对分析。结果以Hp儿童分离株GZCH1为模板,成功扩增了UreB基因,基因大小为1710bp,重组pGEX-4T-1-Ure双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示UreB在正确阅读框中,序列比对分析显示其与相关报道序列核苷酸和氨基酸一致性达98%。Hp儿童分离株GZCH1UreB序列已登录GenBank(登录号:FJ455126)。结论从Hp儿童分离株GZCH1中成功克隆了UreB基因,为UreBHp口服疫苗研制奠定了基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 尿素酶B基因 克隆 儿童
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过氧化氢酶和尿素酶B亚单位二价疫苗预防小鼠幽门螺杆菌感染 被引量:4
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作者 林焕建 杨勤 +2 位作者 李菁 刘颖 王启仪 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期436-437,443,共3页
目的利用人类幽门螺杆菌(H.pylori)感染的小鼠模型研究过氧化氢酶和尿素酶B亚单位二价疫苗预防H.pylori感染的作用。方法把实验动物无特定致病菌C57BL/6小鼠分成7组,分别通过灌胃方法给予过氧化氢酶和尿素酶B亚单位(各100μg)加霍乱毒素... 目的利用人类幽门螺杆菌(H.pylori)感染的小鼠模型研究过氧化氢酶和尿素酶B亚单位二价疫苗预防H.pylori感染的作用。方法把实验动物无特定致病菌C57BL/6小鼠分成7组,分别通过灌胃方法给予过氧化氢酶和尿素酶B亚单位(各100μg)加霍乱毒素(CT)(2μg)、过氧化氢酶(100μg)加CT(2μg)、尿素酶B亚单位(100μg)加CT(2μg)、PBS、单纯过氧化氢酶(100μg)、单纯尿素酶B亚单位(100μg)、单纯CT(2μg),共4次。2周后再用活H.pylori灌胃,再4周后处死动物,取胃粘膜行半定量细菌培养检查H.pylori情况。结果实验各组H.pylori完全保护率分别为:过氧化氢酶和尿素酶B亚单位加CT组83.3%(20/24)、过氧化氢酶加CT组41.7%(10/24)、尿素酶B亚单位加CT组54.2%(13/24);生理盐水组、单纯过氧化氢酶、单纯尿素酶B亚单位、单纯CT组根除率均为0%。未完全保护的小鼠,疫苗组H.pylori的定植密度明显低于其它4组(P<0.05)。此外,二价疫苗组的H.pylori完全保护率及定植密度较单价疫苗组均有显著性差异(P<0.05)。结论由过氧化氢酶和尿素酶B亚单位加免疫佐剂组成的二价口服疫苗较单价口服疫苗有更好的免疫预防效果。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 过氧化氢酶 尿素酶B亚单位 疫苗
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幽门螺杆菌UreB核酸疫苗的构建 被引量:3
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作者 徐灿 李兆申 +6 位作者 屠振兴 杜奕奇 孙波 杨骅 龚燕芳 满晓华 许爱芳 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期51-54,共4页
目的 :构建含幽门螺杆菌 (H elicobacter pylori,Hp)尿素酶 B亚单位 (Ure B)基因的核酸疫苗。方法 :抽提 Hp标准菌株 CCUG1 7874基因组 DNA,应用 PCR技术从基因组 DNA扩增 U re B基因 ,克隆入 PUCm T载体 ,检测 U re B基因序列。经过一... 目的 :构建含幽门螺杆菌 (H elicobacter pylori,Hp)尿素酶 B亚单位 (Ure B)基因的核酸疫苗。方法 :抽提 Hp标准菌株 CCUG1 7874基因组 DNA,应用 PCR技术从基因组 DNA扩增 U re B基因 ,克隆入 PUCm T载体 ,检测 U re B基因序列。经过一系列酶切、连接反应将其克隆入真核表达载体 p IRES,转入感受态大肠杆菌 DH5 α,筛选阳性克隆 ,通过 PCR和酶切反应进行鉴定。通过脂质体法将构建好的重组载体 p IRES- Ure B转染 COS- 7细胞 ,Western印迹分析检测 p IRES- U re B表达 Ure B蛋白的免疫原性。 结果 :扩增出长约 1 70 0 bp的 U re B基因 ,与基因库 Hp U re B序列一致 ,PCR和酶切鉴定结果证实成功构建了含 U re B基因的 Hp核酸疫苗 p IRES- U re B,并且 Western印迹分析检测到特异性的蛋白条带。结论 :构建了具有免疫反应性 Ure B基因的 Hp核酸疫苗 。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 ureb 核酸疫苗 尿素酶B亚单位 基因组
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不同幽门螺杆菌菌株ureB和hspA基因同源性分析 被引量:1
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作者 贺松 张德纯 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2008年第6期529-531,共3页
目的研究不同来源幽门螺杆菌菌株的ureB基因和hspA基因的同源性。方法在GenBank中调取全球来源于幽门螺杆菌不同菌株的ureB基因序列23个和中国境内来源于幽门螺杆菌不同菌株的hspA基因序列20个,利用ClustalW 2生物软件,分别对ureB基因和... 目的研究不同来源幽门螺杆菌菌株的ureB基因和hspA基因的同源性。方法在GenBank中调取全球来源于幽门螺杆菌不同菌株的ureB基因序列23个和中国境内来源于幽门螺杆菌不同菌株的hspA基因序列20个,利用ClustalW 2生物软件,分别对ureB基因和hspA基因序列进行同源性比较分析,并建立基因进化树,分析其特点。结果不同国家之间ureB基因序列并不一致,同一国家ureB基因序列相似性较高;中国境内hspA基因序列相似性程度很高。结论中国境内不同幽门螺杆菌菌株ureB基因序列和hspA基因序列的相似性程度都很高,都具有很高的同源性。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 ureb HSPA 基因序列 同源性比较
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幽门螺杆菌ureB基因转染胃上皮细胞及其对细胞的作用
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作者 张静 佘菲菲 +1 位作者 陈月秀 陈豪 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期31-33,i004,共4页
研究幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)ureB基因重组子转染胃上皮细胞后对胃上皮细胞的作用。用PCR方法从Hp标准株NCTC116 37中获取ureB全长基因 ,将其开放读码框架定向克隆入真核表达载体pcDNA3 1;获得的重组子转染SGC 790 1细胞 ,... 研究幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)ureB基因重组子转染胃上皮细胞后对胃上皮细胞的作用。用PCR方法从Hp标准株NCTC116 37中获取ureB全长基因 ,将其开放读码框架定向克隆入真核表达载体pcDNA3 1;获得的重组子转染SGC 790 1细胞 ,筛选耐潮霉素的细胞克隆 ,用RT PCR方法检测细胞内ureB基因在转录水平的表达 ;分别用荧光染色技术、MTT、流式细胞术检测UreB对细胞表型、增殖、凋亡及细胞周期的影响。UreB阳性表达的细胞 (SureB)胞膜出芽、细胞皱缩 ;用MTT法检测细胞增殖 ,结果表明 ,SureB细胞与SpcDNA3 1细胞比较 (pcDNA3 1转染的细胞 ) ,生长增殖无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,流式细胞术检测细胞凋亡结果显示 ,SureB的凋亡率显著高于SpcDNA3 1(P值为 0 0 0 7) ;细胞周期分析显示 ,SureB细胞有S期比率增高、G2 M、G0 G1 期比率下降的趋势。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 ureb 细胞增殖 细胞凋亡 基因转染
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幽门螺杆菌感染小鼠及其抗原免疫小鼠后体液免疫应答的比较 被引量:3
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作者 郭刚 曾韦锟 +3 位作者 刘开云 邹全明 王毅超 解庆华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期27-29,共3页
目的 比较BALB/c小鼠感染H .pylori后以及经H .pyloriUreB抗原口服免疫后的体液免疫应答的差异。方法80只BALB/c小鼠分为感染组和免疫组。感染组灌喂H .pylori小鼠适应株 ;免疫组灌喂重组H .pyloriUreB抗原和佐剂LTB。在试验的 0、2、6... 目的 比较BALB/c小鼠感染H .pylori后以及经H .pyloriUreB抗原口服免疫后的体液免疫应答的差异。方法80只BALB/c小鼠分为感染组和免疫组。感染组灌喂H .pylori小鼠适应株 ;免疫组灌喂重组H .pyloriUreB抗原和佐剂LTB。在试验的 0、2、6和 10周时每组分别取 10只小鼠收集唾液及血液标本 ,用ELISA法检测抗UreBIgG和IgA抗体 ,同时采集胃组织作H .pylori感染检测。结果 感染组小鼠在灌喂H .pylori后 2、6、10周 ,感染率均为 10 0 % ,其血清中抗UreBIgG增高明显 ,但血清及唾液中均未见IgA的明显升高 ;免疫组小鼠在初次免疫后第 6、10周时 ,血清及唾液中抗UreBIgG和IgA抗体均显著升高。结论 H .pylori感染BALB/c小鼠不能诱导其产生明显的特异性黏膜免疫应答 。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 尿素酶 免疫应答 BALB/C小鼠 抗原
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用单表位合成肽抗原荧光偏振免疫法检测抗幽门螺旋杆菌尿素酶的抗体 被引量:3
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作者 张文红 王琰 +2 位作者 郭慧芳 白玉杰 阎小君 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期371-374,共4页
目的:应用单表位合成肽抗原,建立一种新的基于荧光偏振技术(fluorescencepolarization,FP)的抗体检测方法。方法:用幽门螺旋杆菌(Helicobacterpylori,Hp)尿素酶B(UreB)的单表位合成分支肽抗原免疫小鼠,以ELISA法分析免疫的效果。分析FIT... 目的:应用单表位合成肽抗原,建立一种新的基于荧光偏振技术(fluorescencepolarization,FP)的抗体检测方法。方法:用幽门螺旋杆菌(Helicobacterpylori,Hp)尿素酶B(UreB)的单表位合成分支肽抗原免疫小鼠,以ELISA法分析免疫的效果。分析FITC标记的合成肽抗原在不同浓度时的FP值,用FP技术分析抗原表位的抗原性以及不同稀释比例的血清样品对FP检测的影响。分别应用FPIA法和ELISA法,对126例样品进行Hp感染检测,对FPIA的检测数据进行受试者工作特征曲线(receiveroperatingcharacteristiccurve,ROC)分析。结果:UreB的单表位抗原肽具有较强的抗原性和免疫原性;1.0nmol/L的FITC标记肽可用于FPIA检测,血清样品做1∶25稀释时可明显区分阳性和阴性检测结果。与ELISA方法检测的结果相比较,用基于UreB单表位合成肽抗原的FPIA法检测Hp感染的灵敏度为85.7%,特异度为98%。结论:应用UreB单表位合成肽抗原,可对抗UreB的抗体进行快速FPIA检测,用此法检测抗体在疾病的临床诊断中具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 抗原表位 合成肽 荧光偏振 幽门螺旋杆菌 尿素酶B
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幽门螺杆菌尿素酶B基因的克隆与重组基因的表达 被引量:3
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作者 楼屹 朱红音 +2 位作者 顾伟齐 萧树东 谢毅 《胃肠病学》 1999年第1期15-17,共3页
目的:获得大量纯化的尿素酶B蛋白,为下一步的幽门螺杆菌疫苗研制作准备。方法:采用PCR方法克隆尿素酶B基因,利用基因工程技术进行基因重组,构建表达工程菌。结果:通过对载体、培养条件的优化选择,实现了尿素酶B编码基因在... 目的:获得大量纯化的尿素酶B蛋白,为下一步的幽门螺杆菌疫苗研制作准备。方法:采用PCR方法克隆尿素酶B基因,利用基因工程技术进行基因重组,构建表达工程菌。结果:通过对载体、培养条件的优化选择,实现了尿素酶B编码基因在大肠杆菌中的高效表达。结论:克隆到的尿素酶B编码基因和表达的蛋白,其氨基酸序列与文献报道一致。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 尿素酶B 基因 表达
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