泛素特异性加工酶2的研究进展 被引量：6

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作者 茅幸 张志刚 吴慧娟 《国际病理科学与临床杂志》 CAS 2012年第5期400-405,共6页

泛素特异性加工酶2(ubiquitin-specific protease 2,USP2)是一种重要的去泛素化酶,通过特异性识别靶蛋白,使靶蛋白去泛素化并阻碍其降解,以调控细胞内靶蛋白数量和活性,从而参与细胞功能的调节。USP2-45及USP2-69是USP2基因选择性剪接... 泛素特异性加工酶2(ubiquitin-specific protease 2,USP2)是一种重要的去泛素化酶,通过特异性识别靶蛋白,使靶蛋白去泛素化并阻碍其降解,以调控细胞内靶蛋白数量和活性,从而参与细胞功能的调节。USP2-45及USP2-69是USP2基因选择性剪接而形成的两种不同亚型,在不同组织、细胞和不同发育阶段均有表达,且与细胞周期调控,骨骼肌纵向生长、肌细胞分化、离子通道、生精作用及生物钟调控等关系密切。本文结合当前研究进展,系统阐述USP2的两种亚型的结构、分布及功能,为进一步研究USP2与疾病的关系打下理论基础。 展开更多

关键词 泛素特异性加工酶2 去泛素化酶 泛素蛋白酶体通路

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泛素特异性蛋白酶2、微RNA-432-5p在食管癌组织中表达及临床意义 被引量：1

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作者 金一鸣 高娜 +1 位作者 门学千 向国卿 《安徽医药》 CAS 2023年第5期945-949,共5页

目的 探讨食管癌组织泛素特异性蛋白酶2(USP2)、微RNA-432-5p(miR-432-5p)的表达及临床意义。方法 选取2014年6月至2016年6月在辽宁省肿瘤医院接受外科手术治疗的93例食管癌病人作为研究对象,取手术切除的食管癌组织及其癌旁组织,采用... 目的 探讨食管癌组织泛素特异性蛋白酶2(USP2)、微RNA-432-5p(miR-432-5p)的表达及临床意义。方法 选取2014年6月至2016年6月在辽宁省肿瘤医院接受外科手术治疗的93例食管癌病人作为研究对象,取手术切除的食管癌组织及其癌旁组织,采用免疫组织化学法检测USP2的表达情况,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测组织中USP2 mRNA、miR-432-5p表达水平,以食管癌组织中miR-432-5p表达水平平均数分为miR-432-5p低表达组和miR-432-5p高表达组,分析食管癌组织USP2、miR-432-5p表达与食管癌病人临床病理特征的关系;使用生物信息学Targetscan网站搜索USP2、miR-432-5p是否存在结合位点,进一步分析食管癌组织USP2、miR-432-5p的相关性;采用Kaplan-Meier法分析USP2、miR-432-5p表达与食管癌病人预后的关系。结果 食管癌组织中USP2 mRNA表达水平(2.53±0.71比1.05±0.36)、USP2阳性率(55.91%比6.45%)明显高于癌旁组织(P<0.05),miR-432-5p表达水平明显低于癌旁组织(0.31±0.12比1.03±0.34,P<0.05);食管癌组织浸润深度(肌层)、TNM分期(Ⅲ期)、低分化、有淋巴结转移的食管癌组织中USP2阳性表达率均高于浸润深度(外膜)、TNM分期(Ⅰ、Ⅱ期)、中高分化、无淋巴结转移的食管癌组织(P<0.05),食管癌组织浸润深度(肌层)、TNM分期(Ⅲ期)、低分化、有淋巴结转移的食管癌组织中miR-432-5p表达水平均低于浸润深度(外膜)、TNM分期(Ⅰ、Ⅱ期)、中高分化、无淋巴结转移的食管癌组织(P<0.05);生物信息学Targetscan网站显示,USP2、miR-432-5p存在结合位点,进一步经Spearman法分析结果显示食管癌组织中USP2、miR-432-5p表达呈负相关(P<0.05),Kaplan-Meier结果显示USP2阳性表达者、miR-432-5p低表达者5年总体生存率低于USP2阴性组者、miR-432-5p高表达者(分别为16.032、7.210,P<0.05)。结论 USP2、miR-432-5p异常表达可能与食管癌的发生及预后有关,检测USP2、miR-432-5p水平对食管癌的早期 展开更多

关键词 食管肿瘤 泛素特异性蛋白酶2 微RNA-432-5p 临床病理特征

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子宫颈鳞状细胞癌组织中泛素特异性蛋白酶4和基质金属蛋白酶2的表达及意义 被引量：5

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作者 周林艳 罗居东 +1 位作者 严菊芳 万美珍 《安徽医药》 CAS 2018年第11期2165-2168,2281,共5页

目的观察宫颈鳞状细胞癌及癌旁正常宫颈组织中泛素特异性蛋白酶4(USP4)和基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达,探讨两者在宫颈鳞状细胞癌发生、发展中的作用及相关性,并分析两者与各临床病理因素的关系。方法收集常州市金坛区人民医院病理科201... 目的观察宫颈鳞状细胞癌及癌旁正常宫颈组织中泛素特异性蛋白酶4(USP4)和基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达,探讨两者在宫颈鳞状细胞癌发生、发展中的作用及相关性,并分析两者与各临床病理因素的关系。方法收集常州市金坛区人民医院病理科2010年1月至2013年12月70例宫颈鳞状细胞癌组织及癌旁组织,采用免疫组化检测USP4和MMP2的表达。结果 USP4和MMP2在宫颈鳞状细胞癌中的表达率分别为61.4%,44.3%,而在癌旁组织中的表达分别为8.0%,4.3%。它们在有淋巴结转移的宫颈癌组织中表达率分别为80.0%,90.7%,在无淋巴结转移的宫颈癌组织的表达分别为47.5%,56.1%。在浸润深度≥1/2间质的宫颈癌组织中的表达分别为62.2%,83.8%,在<1/2间质的宫颈癌组织中的表达为29.2%,37.5%,与淋巴结转移及浸润深度呈正相关(P<0.05),但与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级无关(P>0.05)。且USP4和MMP2在宫颈鳞癌组织中的表达呈正相关(P<0.05)。结论 USP4和MMP2表达可能与宫颈鳞状细胞癌的发生发展有关,可作为预后判断和治疗指导的参考指标之一。 展开更多

关键词 子宫颈肿瘤 鳞状细胞癌 泛素特异性蛋白酶4 基质金属蛋白酶2 免疫组织化学

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小鼠 Usp2基因序列分析、真核表达载体构建和启动子功能鉴定

4

作者 张宇 李超 +5 位作者 马天天 马白荣 李丹 周栋 靳亚平 陈华涛 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第9期49-59,共11页

为了分析小鼠泛素特异性蛋白酶2(USP2)2种主要转录本(Usp 2-45和Usp 2-69)及其编码蛋白的理化特性,构建Usp 2-45真核表达载体和Usp 2启动子荧光素酶报告质粒,探究生物钟系统对Usp 2不同转录本启动子的调控作用,本试验利用在线软件对小鼠... 为了分析小鼠泛素特异性蛋白酶2(USP2)2种主要转录本(Usp 2-45和Usp 2-69)及其编码蛋白的理化特性,构建Usp 2-45真核表达载体和Usp 2启动子荧光素酶报告质粒,探究生物钟系统对Usp 2不同转录本启动子的调控作用,本试验利用在线软件对小鼠Usp 2-45和Usp 2-69基因进行生物信息学分析;克隆Usp 2-45基因的蛋白编码序列(CDS)并构建pcDNA3.1-Usp2-45-Flag重组载体,转染至小鼠NIH3T3胚胎成纤维细胞后,利用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测Usp2-45在mRNA和蛋白水平的表达;扩增Usp 2-45和Usp 2-69的启动子片段,并构建其荧光素酶报告质粒,通过双荧光素酶报告试验检测Usp 2启动子对生物钟核心转录因子脑肌类芳香烃受体核转位蛋白1(BMAL1)和昼夜运动输出周期蛋白(CLOCK)的应答活性;通过构建不同长度的Usp 2-45启动子荧光素酶报告质粒鉴定其生物钟转录调控功能区。结果显示,小鼠USP2-45和USP2-69蛋白均为不稳定蛋白,亲水性强,无跨膜区域和信号肽,且基因的CDS区高度保守;pcDNA3.1-Usp2-45-Flag重组质粒的酶切和测序结果与预期一致,转染重组质粒组的Usp2-45在mRNA和蛋白水平的表达均显著高于对照组(P<0.01)。双荧光素酶报告试验结果显示,Usp 2-69启动子对BMAL1/CLOCK无应答活性,而不同长度的Usp 2-45启动子对BMAL1/CLOCK均具有显著应答活性,活性由强到弱依次为1368、2004和998 bp。结果表明,本试验系统分析了小鼠USP2的理化性质和结构特性,成功构建了pcDNA3.1-Usp2-45-Flag真核表达载体,初步鉴定了生物钟系统选择性调控Usp 2-45节律性转录的启动子功能区。 展开更多

关键词 泛素特异性蛋白酶2 生物钟 生物信息学 真核表达载体 荧光素酶报告质粒

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紫菀酮对去泛素化酶2活性的抑制作用 被引量：3

5

作者 谢文娟 秦东军 +2 位作者 张健 周虎臣 吴英理 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1563-1567,共5页

目的从天然产物中发现新的去泛素化酶2(USP2)抑制剂。方法利用泛素荧光检测试剂盒进行USP2抑制剂筛选。100μmol/L紫菀酮(SH)处理NB4细胞不同时间,Western blotting检测USP2底物蛋白Cyclin D1表达变化,流式细胞术检测细胞周期分布,分子... 目的从天然产物中发现新的去泛素化酶2(USP2)抑制剂。方法利用泛素荧光检测试剂盒进行USP2抑制剂筛选。100μmol/L紫菀酮(SH)处理NB4细胞不同时间,Western blotting检测USP2底物蛋白Cyclin D1表达变化,流式细胞术检测细胞周期分布,分子对接技术分析SH与USP2结合情况。结果体外筛选结果显示:SH抑制USP2活性,50%抑制浓度(IC50值)为69μmol/L。Western blotting检测结果显示:SH引起USP2底物蛋白Cyclin D1表达水平降低。流式细胞术检测结果显示:SH处理NB4细胞48 h时,S和G2/M期细胞减少,并出现典型的细胞凋亡峰(Sub-G1峰);分子对接结果显示:SH的氧原子及其骨架中心和USP2的K503、W439、R363及D440对于两者之间的结合起到重要作用。结论 SH能够抑制USP2活性,为发展新的USP2抑制剂提供了先导化合物。 展开更多

关键词 去泛素化酶2 抑制剂 紫菀酮 分子对接

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siRNA干扰USP7表达对喉癌细胞生物学特性的影响 被引量：2

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作者 周芨 邓世山 +1 位作者 严达忠 刘海 《重庆医学》 CAS 北大核心 2016年第12期1616-1619,共4页

目的通过小干扰RNAs(siRNA)干扰泛素特异性蛋白酶7(USP7)在喉癌细胞中的表达,来探讨USP7对喉癌细胞生物学特性的影响。方法自行设计并使用高效siRNA在喉癌HEP2细胞株特异性干扰USP7表达,然后利用CCK-8法、Transwell小室迁移实验和流式... 目的通过小干扰RNAs(siRNA)干扰泛素特异性蛋白酶7(USP7)在喉癌细胞中的表达,来探讨USP7对喉癌细胞生物学特性的影响。方法自行设计并使用高效siRNA在喉癌HEP2细胞株特异性干扰USP7表达,然后利用CCK-8法、Transwell小室迁移实验和流式细胞术观察USP7干扰后对喉癌细胞增殖、迁移能力和凋亡的影响。结果自行设计的siRNA可高效抑制喉癌HEP2细胞USP7mRNA及蛋白表达,显著抑制喉癌细胞的增殖、迁移能力,促进喉癌细胞的凋亡。结论 siRNAUSP7可以显著抑制喉癌细胞增殖和迁移能力,并促进凋亡,提示USP7可能是晚期喉癌治疗的一个重要靶标。 展开更多

关键词 喉肿瘤 泛素特异性蛋白酶7 HEP2细胞 RNA 小分子干扰 细胞凋亡

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泛素特异性蛋白酶1、核转运蛋白α2在子宫内膜异位症患者异位内膜组织中表达及临床意义

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作者 王婷 曹爱娥 +1 位作者 邱春萍 朱根海 《中国优生与遗传杂志》 2022年第7期1140-1144,共5页

目的 探究泛素特异性蛋白酶1(USP1)、核转运蛋白α2(KPNA2)在子宫内膜异位症患者在位、异位内膜组织中表达及临床意义。方法 选取海南妇产科医院2019年2月至2021年10月住院的67例子宫内膜异位症患者为研究对象,取其在位内膜组织和异位... 目的 探究泛素特异性蛋白酶1(USP1)、核转运蛋白α2(KPNA2)在子宫内膜异位症患者在位、异位内膜组织中表达及临床意义。方法 选取海南妇产科医院2019年2月至2021年10月住院的67例子宫内膜异位症患者为研究对象,取其在位内膜组织和异位内膜组织,收集患者剖宫产分娩次数、囊肿直径等临床指标;同期选取行全子宫切除的70例患者的正常子宫内膜组织作为对照。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time qPCR)法检测组织USP1mRNA、KPNA2 mRNA表达水平,采用免疫组织化学法检测组织USP1、KPNA2蛋白表达水平;采用Pearson法及Spearman等级相关分析异位内膜组织中USP1 mRNA与KPNA2 mRNA及其蛋白表达的相关性。结果 正常子宫内膜组织、在位内膜组织、异位内膜组织中USP1 mRNA、KPNA2 mRNA表达水平及蛋白阳性率依次升高(P<0.05)。异位内膜组织中USP1 m RNA与KPNA2 m RNA表达呈正相关(r=0.646,P<0.05)。异位内膜组织中USP1与KPNA2蛋白表达呈正相关(r=0.589,P<0.05)。子宫内膜异位症患者异位内膜组织中USP1、KPNA2蛋白表达与年龄、剖宫产分娩次数、痛经无关(P>0.05),与囊肿直径、浸润深度有关(P<0.05)。结论 USP1与KPNA2在子宫内膜异位症患者异位内膜组织中呈高表达,且二者与囊肿直径、浸润深度有密切联系。 展开更多

关键词 子宫内膜异位症 泛素特异性蛋白酶1 核转运蛋白α2 子宫内膜组织

原文传递

泛素特异性蛋白酶2a的原核表达纯化及酶活性分析

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作者 张万方 孙寅玮 +3 位作者 王孟慧 黄向瑜 樊松乐 徐磊 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第3期352-358,共7页

目的为了探讨泛素特异性蛋白酶2a(USP2a)在肿瘤发生发展中的催化机制,构建USP2a C末端催化结构域原核表达质粒p ET28a-USP2a-C,分析USP2a C末端催化结构域的活性情况。方法利用荧光检测方法测定USP2a-C的酶促动力常数,并采用液相色谱-... 目的为了探讨泛素特异性蛋白酶2a(USP2a)在肿瘤发生发展中的催化机制,构建USP2a C末端催化结构域原核表达质粒p ET28a-USP2a-C,分析USP2a C末端催化结构域的活性情况。方法利用荧光检测方法测定USP2a-C的酶促动力常数,并采用液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/MS)分析USP2a的肽酶和异肽酶活性。结果结果表明获得了可溶性表达的USP2a-C融合蛋白,酶促动力学分析USP2a-C水解底物Ub-AMC的催化效率Kcat/Km=2.53×105mol/(L·s);LC-MS/MS分析结果表明USP2a-C能有效分解Di-Ub和Ub-V77两种不同性质的底物,并且两者之间的催化活性差异无统计学意义。结论获得了可溶性表达的USP2a-C蛋白,并且分析证明其具有完整的去泛素化酶的活性。 展开更多

关键词 泛素特异性蛋白酶2 酶活性分析 液相色谱-质谱联用技术

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去泛素化酶USP2对米色脂肪产热功能的影响

9

作者 徐跃洁 白宁宁 +2 位作者 米日阿依·阿里木江 杨颖 潘洁敏 《医学研究杂志》 2021年第7期31-36,共6页

目的探讨去泛素化酶2(ubiquitin-specific protease 2,USP2)在白色脂肪棕色化过程中的作用及其潜在机制。方法运用实时定量PCR和Western blot法检测USP2在小鼠代谢组织中的表达谱。检测米色脂肪细胞诱导分化过程中(0、2、4、6、8天)USP2... 目的探讨去泛素化酶2(ubiquitin-specific protease 2,USP2)在白色脂肪棕色化过程中的作用及其潜在机制。方法运用实时定量PCR和Western blot法检测USP2在小鼠代谢组织中的表达谱。检测米色脂肪细胞诱导分化过程中(0、2、4、6、8天)USP2 mRNA和蛋白表达。建立小鼠白色脂肪棕色化模型,检测USP2 mRNA的表达。利用药物干预成熟脂肪细胞激活交感神经-肾上腺素通路,检测USP2 mRNA和蛋白表达。使用USP2特异性抑制剂ML364处理成熟米色脂肪细胞,检测产热相关基因的变化。结果USP2在小鼠代谢器官中均有表达,且在肌肉中表达最高。USP2在米色脂肪细胞自然分化过程中表达量逐渐增加。在寒冷刺激和游泳训练建立的小鼠白色脂肪棕色化模型中,其皮下腹股沟白色脂肪组织和肩胛部棕色脂肪组织中USP2的mRNA表达显著升高。利用ISO和cAMP干预成熟米色脂肪细胞后,USP2 mRNA和蛋白表达明显升高。利用USP2特异性抑制剂ML364干预成熟米色脂肪细胞后,产热相关基因mRNA表达明显下调,UCP1蛋白表达下降。结论USP2参与米色脂肪细胞的发生、发展过程,抑制USP2的活性会影响其产热功能。 展开更多

关键词 去泛素化酶2 白色脂肪细胞 棕色脂肪细胞 米色脂肪细胞 棕色化

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泛素特异性蛋白酶2a的表达及催化机制

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作者 张万方 《西北大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期561-567,共7页

研究USP2a在肿瘤发生发展中的催化机制,设计引物对USP2a的关键氨基酸残基Asn218,Cys223,His464和Asn482进行点突变,分析突变后对USP2a催化活性以及底物特异性的影响。利用荧光检测方法测定USP2a-WT和USP2a-Ms的酶促动力常数,并采用LC-MS... 研究USP2a在肿瘤发生发展中的催化机制,设计引物对USP2a的关键氨基酸残基Asn218,Cys223,His464和Asn482进行点突变,分析突变后对USP2a催化活性以及底物特异性的影响。利用荧光检测方法测定USP2a-WT和USP2a-Ms的酶促动力常数,并采用LC-MS/MS与SDS-PAGE方法分析USP2a-WT和USP2a-Ms的异肽酶活性,获得了可溶性表达的USP2a-WT和USP2a-Ms重组蛋白。结果表明,氨基酸残基Cys223和His464突变后酶失去活性,其余突变体分解底物Ub-AMC的催化效率与野生型无显著差异,氨基酸残基Asn218和Asn482单独突变后对酶活性没有显著影响,但双突变体USP2a-N218A/D482A则显著降低酶活性。USP2a的氨基酸残基Cys223和His464直接参与酶的催化反应;氨基酸残基Asn218和Asn482可能通过形成Asn218-Asn482电子对在催化过程中起到稳定氨基酸残基His464的作用。 展开更多

关键词 泛素特异性蛋白酶2 酶活性分析 Ub-AMC Di—Ub

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USP7-MDM2-p53信号轴对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

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作者 魏伟 赵慧娟 刘湘翠 《现代肿瘤医学》 CAS 2024年第2期214-220,共7页

目的:探讨泛素特异性蛋白酶7(USP7)调节Mdm2 p53结合蛋白同源物(MDM2)-p53轴对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:Western blot检测人子宫内膜癌组织、癌旁组织、人子宫内膜上皮细胞hEEC及人子宫内膜癌细胞系Ishikawa、HE... 目的:探讨泛素特异性蛋白酶7(USP7)调节Mdm2 p53结合蛋白同源物(MDM2)-p53轴对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:Western blot检测人子宫内膜癌组织、癌旁组织、人子宫内膜上皮细胞hEEC及人子宫内膜癌细胞系Ishikawa、HEC-1-A、KLE中USP7蛋白表达。将Ishikawa细胞分为NC组、P22077(USP7抑制剂)组、pcDNA组、pcDNA-MDM2组、P22077+pcDNA组、P22077+pcDNA-MDM2组,CCK-8法和克隆形成实验检测Ishikawa细胞增殖;流式细胞术检测Ishikawa细胞凋亡与细胞周期变化;Western blot检测Ishikawa细胞中USP7、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、周期素依赖性激酶2(CDK2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、MDM2、p53蛋白表达。以RG7388(MDM2抑制剂)或PFT-α(p53抑制剂)与20μmol/L P22077共处理Ishikawa细胞48 h以验证USP7-MDM2-p53信号轴上下游关系。结果:USP7蛋白在子宫内膜癌组织和细胞中高表达,且Ishikawa细胞中USP7蛋白表达量最高,因此,选择Ishikawa细胞为研究对象。与NC组比较,P22077组Ishikawa细胞OD 450值、克隆形成率、S期和G 2/M期细胞数、USP7、CyclinD1、CDK2、MDM2蛋白表达降低,细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期细胞数、p53、Bax蛋白表达升高(P<0.05);与NC组、pcDNA组比较,pcDNA-MDM2组Ishikawa细胞OD 450值、克隆形成率、S期和G 2/M期细胞数、USP7、CyclinD1、CDK2、MDM2蛋白表达升高,细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期细胞数、p53、Bax蛋白表达降低(P<0.05);与P22077组、P22077+pcDNA组比较,P22077+pcDNA-MDM2组Ishikawa细胞OD 450值、克隆形成率、S期和G 2/M期细胞数、USP7、CyclinD1、CDK2、MDM2蛋白表达升高,细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期细胞数、p53、Bax蛋白表达降低(P<0.05)。p53为USP7-MDM2通路下游分子。结论:抑制USP7表达可能通过下调MDM2来激活p53进而抑制Ishikawa细胞增殖、促进细胞凋亡及周期停滞。 展开更多

关键词 泛素特异性蛋白酶7 Mdm2 p53结合蛋白同源物(MDM2)-p53轴 子宫内膜癌 增殖 凋亡 细胞周期

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曲妥珠单抗治疗前后乳腺癌中USP39、EphA2的表达量及其与肿瘤病理特征的相关性 被引量：4

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作者 沈俐萍 王坤 《海南医学院学报》 CAS 2017年第10期1410-1413,共4页

目的:研究曲妥珠单抗治疗前后乳腺癌中泛素特异蛋白酶39(USP39)和Eph受体酪氨酸激酶A2(EphA2)的表达量及其与肿瘤病理特征的相关性。方法:收集2013年5月~2016年9月曲妥珠单抗治疗前后的乳腺癌组织,检测乳腺癌中USP39、EphA2以及增殖抑... 目的:研究曲妥珠单抗治疗前后乳腺癌中泛素特异蛋白酶39(USP39)和Eph受体酪氨酸激酶A2(EphA2)的表达量及其与肿瘤病理特征的相关性。方法:收集2013年5月~2016年9月曲妥珠单抗治疗前后的乳腺癌组织,检测乳腺癌中USP39、EphA2以及增殖抑制基因、侵袭促进基因的表达量,计算治疗后乳腺癌中USP39、EphA2表达量的四分位数。结果:治疗后乳腺癌中USP39、EphA2、Sam68、Gab2的mRNA表达量显著低于治疗前,ALEX1、PTPN14、ARID1A的mRNA表达量显著高于治疗前;不同USP39、EphA2 mRNA表达量乳腺癌中ALEX1、PTPN14、ARID1A、Sam68、Gab2的mRNA表达量差异有统计学意义(P<0.05);USP39、EphA2的mRNA表达量越高,ALEX1、PTPN14、ARID1A的表达量越低,Sam68、Gab2的mRNA表达量越高。结论:曲妥珠单抗治疗能够通过抑制USP39、EphA2的表达来影响肿瘤的恶性生物学行为及病理特征。 展开更多

关键词 乳腺癌 曲妥珠单抗 人表皮生长因子受体-2 泛素特异蛋白酶39 Eph受体酪氨酸激酶A2

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CDDO-Me对三阴性乳腺癌细胞泛素特异性蛋白酶2a活性及细胞增殖的抑制作用 被引量：1

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作者 季艳杰 罗浩 +6 位作者 蔡海燕 刘欣宇 金诗佳 粟深月 徐含章 雷虎 吴英理 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期1025-1032,共8页

目的·在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞中研究筛选得到的泛素特异性蛋白酶2a(ubiquitin-specific protease 2a,USP2a)抑制剂甲基巴多索隆(bardoxolone methyl,CDDO-Me)对USP2a活性及细胞增殖的影响。方法&#... 目的·在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞中研究筛选得到的泛素特异性蛋白酶2a(ubiquitin-specific protease 2a,USP2a)抑制剂甲基巴多索隆(bardoxolone methyl,CDDO-Me)对USP2a活性及细胞增殖的影响。方法·利用泛素特异性蛋白酶抑制剂筛选系统筛选得到USP2a抑制剂CDDO-Me,采用分子对接分析技术预测CDDO-Me与USP2a的结合情况,采用细胞热迁移实验(cellular thermal shift assay,CETSA)检测CDDO-Me与3种TNBC细胞株内USP2a蛋白的结合情况。通过Western blotting检测USP2a的底物β连环素(β-catenin)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)蛋白水平以及凋亡相关蛋白胱天蛋白酶3(caspase3)和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1[poly(ADP-ribose)polymerase1,PARP1]的变化。利用细胞活性检测试剂盒8(cell counting kit-8,CCK8)检测CDDO-Me对TNBC细胞增殖的影响。MDA-MB-468细胞瞬时转染pLVX(pLVX组)或pLVX-USP2a(pLVX-USP2a组)质粒,经CDDO-Me处理后,采用Western blotting检测β-catenin和TRAF6的蛋白水平,流式细胞术检测细胞周期以及台盼蓝拒染法检测活细胞数。结果·CDDO-Me在体外可以抑制USP2a活性,50%抑制浓度为3.84μmol/L。分子对接分析结果显示,CDDO-Me可以和USP2a的His456残基之间形成氢键,和Phe409、Tyr514残基之间具有疏水相互作用。CETSA实验结果显示,CDDO-Me能够和3种TNBC细胞中的USP2a蛋白结合。Western blotting结果显示,CDDO-Me可以下调USP2a底物β-catenin和TRAF6的蛋白水平,而相同浓度的CDDO-Me处理USP2a过表达的MDA-MB-468细胞,发现β-catenin和TRAF6蛋白水平未出现明显降低。CDDO-Me呈剂量依赖性抑制TNBC细胞的增殖,使细胞发生caspase3活化和PARP1的剪切并且导致细胞出现S期和G2/M期阻滞。与pLVX组相比,pLVX-USP2a组活细胞数目更多,细胞也未出现周期阻滞。结论·CDDO-Me可以抑制TNBC细胞中USP2a的活性,并且抑制TNBC细胞的增殖,诱导其凋亡。 展开更多

关键词 甲基巴多索隆 泛素特异性蛋白酶2a 三阴性乳腺癌 泛素特异性蛋白酶抑制剂筛选系统 Β连环素 肿瘤坏死因子受体相关蛋白6

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泛素特异性修饰酶2-69对大鼠系膜细胞内饰胶蛋白聚糖表达和泛素化降解的调节

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作者 骆伟丽 茅幸 +3 位作者 孙建勇 赵仲华 张志刚 吴慧娟 《中国循证儿科杂志》 CSCD 北大核心 2015年第4期297-301,共5页

目的研究泛素特异性修饰酶2-69(USP2-69)对系膜细胞(MC)内饰胶蛋白聚糖(DCN)表达和泛素化的调节作用。方法 1培养MC细胞,采用Western blot法检测大鼠肾MC内USP2-69的表达;2采用免疫共沉淀、激光共聚焦和免疫荧光法,检测MC内USP2-69是否... 目的研究泛素特异性修饰酶2-69(USP2-69)对系膜细胞(MC)内饰胶蛋白聚糖(DCN)表达和泛素化的调节作用。方法 1培养MC细胞,采用Western blot法检测大鼠肾MC内USP2-69的表达;2采用免疫共沉淀、激光共聚焦和免疫荧光法,检测MC内USP2-69是否与DCN结合,并观察两者在MC内的定位;3将pRK5-USP2-69-HA质粒瞬时转染MC后,用Western blot法检测HA、USP2-69和DCN的蛋白表达,用免疫共沉淀法检测DCN的泛素化水平;4采用USP2-69siRNA处理MC,用PCR检测USP2-69和DCN的mRNA表达,用time-course Western blot法检测DCN的半衰期,Western blot法检测DCN的下游效应分子(TGF-β1和ColⅣ)的蛋白表达。结果 1 USP2-69在MC、肝细胞(BRL-3A)和足细胞(GEC)内均有表达,其在MC内的基础蛋白表达水平显著高于BRL-3A和GEC[MCs:(0.27±0.05),BRL-3A:(0.035±0.009),GEC:(0.012±0.004),P<0.01]。2 MC总蛋白经DCN抗体免疫沉淀后,可检测到USP2-69的表达;经USP2-69抗体免疫沉淀后,可检测到DCN表达;且在MC胞质内,代表USP2-69蛋白的荧光与代表DCN蛋白的荧光存在共定位。3转染pRK5-USP2-69-HA质粒的MC内可检测到代表外源性USP2-69表达的HA蛋白,USP2-69和DCN蛋白表达的升高,同时DCN的泛素化水平明显降低。4经USP2-69 RNA干扰的MC内DCN的mRNA水平没有明显改变,但其半衰期明显缩短(3 h),且TGF-β1和ColⅣ的蛋白表达均明显升高。结论大鼠肾MC内USP2-69可与DCN相结合,及两者在胞质内共定位,USP2-69能够降低MC内DCN的泛素化水平及提高DCN蛋白总量并促进其功能。 展开更多

关键词 饰胶蛋白聚糖 泛素特异性修饰酶2-69 系膜细胞

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泛素特异性蛋白酶2的生理功能及调控机制 被引量：1

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作者 马天天 马白荣 +1 位作者 靳亚平 陈华涛 《生命科学》 CSCD 北大核心 2022年第8期1018-1026,共9页

泛素特异性蛋白酶2(ubiquitin specific peptidase 2,USP2)是去泛素化酶家族(deubiquitylating enzymes,DUBs)的重要成员,通过特异性去除靶蛋白的泛素化修饰,阻碍靶蛋白的降解,从而调控机体各项生理过程。USP2通过可变剪切产生USP2-45和... 泛素特异性蛋白酶2(ubiquitin specific peptidase 2,USP2)是去泛素化酶家族(deubiquitylating enzymes,DUBs)的重要成员,通过特异性去除靶蛋白的泛素化修饰,阻碍靶蛋白的降解,从而调控机体各项生理过程。USP2通过可变剪切产生USP2-45和USP2-69,这两种变体在各种生理过程中发挥的作用不尽相同。该文详细梳理了USP2-45和USP2-69在肿瘤发生、葡萄糖代谢、神经性疾病、骨骼肌分化、细胞凋亡以及雄性生殖等多种病理/生理过程中的作用,并进一步探讨了USP2与生物钟系统之间的互作机制,为深入解析USP2的生理功能以及生物钟调控Usp2转录的分子机制提供参考借鉴。 展开更多

关键词 泛素特异性蛋白酶2 选择性剪切 去泛素化 生物钟

原文传递

去泛素化酶在巨大儿胎盘中的表达及调控机制

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作者 张敏 吴炜 +2 位作者 江华 付自强 汤秋勤 《中国现代医药杂志》 2020年第1期5-7,共3页

目的探讨足月胎盘中去泛素化酶(USP2a)在巨大儿中的调控机制。方法随机选取我院2014年9月~2015年6月分娩的巨大儿29例,另选择同期住院足月分娩正常体重儿31例,采用ELISA技术检测两组产妇胎盘中USP2a蛋白表达;采用Real Time PCR技术检测... 目的探讨足月胎盘中去泛素化酶(USP2a)在巨大儿中的调控机制。方法随机选取我院2014年9月~2015年6月分娩的巨大儿29例,另选择同期住院足月分娩正常体重儿31例,采用ELISA技术检测两组产妇胎盘中USP2a蛋白表达;采用Real Time PCR技术检测其下游底物MDM2、CCND1及FASN在两组胎盘中的mRNA表达水平;进一步检测两组孕妇胎盘中MDM2及P53的蛋白表达。结果与对照组相比,巨大儿胎盘中USP2a蛋白含量升高,其下游底物MDM2 mRNA表达水平和蛋白含量高于对照组,P53的蛋白含量低于对照组(P<0.05)。结论胎盘中USP2a的表达水平与巨大儿密切相关。USP2a可能特异性识别靶蛋白MDM2,通过去泛素化作用影响胎盘中MDM2、P53表达水平,进一步影响胎盘的生长发育,从而导致巨大儿的发生。 展开更多

关键词 USP2a MDM2/P53通路 去泛素化 巨大儿 调控机制

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