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去泛素化酶UCHL3维持FLT3-ITD阳性急性髓性白血病细胞存活的功能研究
1
作者 胡家诚 朱倩 +2 位作者 王佳琦 吴英理 雷虎 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1383-1393,共11页
目的·探究FMS样的酪氨酸激酶3 (FMS-like tyrosine kinase 3,FLT3)近膜区的内部串联重复(FLT3-ITD)阳性急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞中存在表达差异的去泛素化酶及其对FLT3-ITD阳性AML细胞功能的影响。方法... 目的·探究FMS样的酪氨酸激酶3 (FMS-like tyrosine kinase 3,FLT3)近膜区的内部串联重复(FLT3-ITD)阳性急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞中存在表达差异的去泛素化酶及其对FLT3-ITD阳性AML细胞功能的影响。方法·采用Western blotting检测外源性导入FLT3-ITD质粒和使用FLT3-ITD抑制剂对部分去泛素化酶蛋白表达量的影响;利用癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)公共数据库分析泛素羧基末端水解酶L3 (ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase L3,UCHL3)在FLT3-ITD阳性患者中的表达情况及与AML患者预后的相关性;利用短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)技术在FLT3-ITD阳性AML细胞系中敲低所筛选出的去泛素化酶;采用细胞计数、CCK-8法、流式细胞术、瑞氏染色检测所筛选出的去泛素化酶对AML细胞功能的影响以及敲低相应的去泛素化酶或使用其抑制剂与全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)的合加效应。结果·Ba/F3细胞中表达FLT3-ITD后能够显著诱导UCHL3的表达,而在FLT3-ITD阳性的MOLM-13和MV4-11细胞系中抑制FLT3-ITD的活性后能够显著抑制UCHL3的表达,该抑制作用具有时间和浓度依赖性。利用数据库分析发现FLT3的表达与UCHL3的表达量在AML中具有显著正相关性(P=0.000),并且UCHL3表达量与AML患者生存率存在显著负相关性(P=0.016)。敲低UCHL3对FLT3-ITD阳性AML细胞有抑制增殖和促进凋亡的作用,且敲低UCHL3后细胞核型发生显著改变,分化相关转录因子PU.1和C/EBPβ表达显著升高。UCHL3敲低显著增强了100 nmol/L ATRA诱导的MOLM-13和MV4-11细胞凋亡,并且相应的凋亡相关蛋白PARP1、caspase 9和caspase 3均发生明显剪切。同时,敲低UCHL3的细胞在ATRA处理后出现更多核体积变小、核凹陷、呈杆状或不规则状的细胞特征。ATRA与UCHL3抑制剂TCID合加的量效反应曲线表明,TCID与ATRA协同能够抑制MOLM-13和MV4-11细胞活率。结论·FLT3-ITD上调UCHL3促进AML细 展开更多
关键词 泛素羧基末端水解酶l3 急性髓系白血病 FMS样的酪氨酸激酶3 FMS样的酪氨酸激酶3近膜区的内部串联重复 全反式维甲酸
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去泛素化酶UCHL5在甲状腺癌组织中表达的临床意义及其与肿瘤细胞恶性行为的关系 被引量：2
2
作者 任力 马珊 +5 位作者 冯超 顾毅 刘彤 张博维 陈超 宋哲 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期671-677,共7页
目的:探究泛素羧基端水解酶5(ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase L5,UCHL5)在甲状腺癌(thyroid carcinoma,TC)组织中表达的临床意义及其体外生物学效应。方法:TCGA数据库分析UCHL5在TC组织中的表达及其与患者预后的关系,临床收集... 目的:探究泛素羧基端水解酶5(ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase L5,UCHL5)在甲状腺癌(thyroid carcinoma,TC)组织中表达的临床意义及其体外生物学效应。方法:TCGA数据库分析UCHL5在TC组织中的表达及其与患者预后的关系,临床收集四川省人民医院血管·甲状腺外科2018年5月至2019年7月期间手术切除的TC及癌旁组织各82例,体外培养TC细胞KTC-1及WRO并慢病毒转染UCHL5过表达及相应对照载体,qPCR及Western blotting检测组织及细胞中UCHL5及B-Raf原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(B-Raf proto-oncogene serine/threonine-protein kinase,BRAF)的mRNA和蛋白表达水平,CCK-8检测细胞增殖能力,划痕修复实验及Transwell检测细胞侵袭及迁移能力。结果:UCHL5在TC组织中呈低表达(P<0.01),在TNM分期高的患者肿瘤组织中表达重新上调(P<0.01),UCHL5的表达与BRAF表达及患者TNM分期显著相关(P<0.01),而与患者年龄、性别、病理类型及BRAF突变无显著联系(P>0.05)。体外KTC-1及WRO细胞中过表达UCHL5可显著促进细胞BRAF的表达及细胞的增殖、转移能力(均P<0.01)。结论:UCHL5在TC组织中低表达,但在肿瘤进展时UCHL5表达上调,TC患者UCHL5高表达提示预后较差;同时UCHL5在体外可促进TC细胞的恶性行为。 展开更多
关键词 甲状腺癌 泛素羧基端水解酶5 KTC-1细胞 WRO细胞 恶性增殖 肿瘤转移
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