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姜黄素对缺血再灌注H9c2心肌细胞凋亡和GSK-3表达及其磷酸化的影响 被引量:9
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作者 虞燕萍 周承亮 +1 位作者 傅云峰 黄先玫 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期240-243,共4页
目的观察姜黄素对缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)H9c2心肌细胞凋亡和糖原合成酶激酶3(GSK-3)表达及其磷酸化的影响。方法利用缺血台氏液对体外培养的H9c2心肌细胞模拟I/R处理,同时随机分为模型组(模拟缺血90min,再灌注30min)、... 目的观察姜黄素对缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)H9c2心肌细胞凋亡和糖原合成酶激酶3(GSK-3)表达及其磷酸化的影响。方法利用缺血台氏液对体外培养的H9c2心肌细胞模拟I/R处理,同时随机分为模型组(模拟缺血90min,再灌注30min)、姜黄素组(再灌注同时加入7.5μmol/L姜黄素)和对照组(正常台氏液培养120min代替模拟I/R),采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,采用Western blot检测GSK-3、酪氨酸磷酸化GSK-3(pTyr-GSK-3)和丝氨酸磷酸化GSK-3(pSer-GSK-3)蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组H9c2细胞凋亡率明显提高(t=10.439,P=0.000),模型组pTyr-GSK-3和pSer-GSK-3表达均显著增加(t=5.208,P=0.006;t=5.854,P=0.004)。与模型组比较,姜黄素组凋亡率及pTyr-GSK-3表达水平显著降低(t=-8.325,P=0.001;t=-3.607,P=0.023),存活率及pSer-GSK-3表达水平显著升高(t=9.165,P=0.001;t=3.747,P=0.02)。结论 GSK-3的酪氨酸和丝氨酸磷酸化可能参与心肌细胞I/R损伤,姜黄素减少I/R心肌细胞凋亡可能与其通过减少酪氨酸磷酸化、增加丝氨酸磷酸化抑制GSK-3活性有关。 展开更多
关键词 姜黄素 心肌细胞 缺血再灌注 糖原合成酶激酶-3 酪氨酸磷酸化蛋白 丝氨酸磷酸化蛋白
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Dyrk1A-ASF-CaMKⅡδ信号通路在EGCG预防腹主动脉缩窄大鼠心肌肥厚中的作用 被引量:1
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作者 陆晓晨 姚健 +2 位作者 盛红专 顾青青 朱健华 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2012年第22期2637-2639,共3页
目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对腹主动脉缩窄大鼠心肌肥厚的影响及可能机制。方法 30只SD大鼠随机均分为腹主动脉缩窄组(A组)、腹主动脉缩窄+EGCG组(B组)和假手术组(C组)。4周后,计算左室重量/体重(LVW/BW)比值以判断大鼠心... 目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对腹主动脉缩窄大鼠心肌肥厚的影响及可能机制。方法 30只SD大鼠随机均分为腹主动脉缩窄组(A组)、腹主动脉缩窄+EGCG组(B组)和假手术组(C组)。4周后,计算左室重量/体重(LVW/BW)比值以判断大鼠心肌肥厚程度,Western blot法检测双特异性酪氨酸磷酸化调控激酶1A(Dyrk1A)和可变剪接因子(ASF)蛋白表达,RT-PCR法检测钙调素依赖蛋白激酶Ⅱδ(CaMKⅡδ)mRNA表达。结果与C组相比,A组大鼠LVW/BW升高,心肌中Dyrk1A蛋白及CaMKⅡδA、B亚型mRNA表达增加,ASF蛋白及CaMKⅡδC亚型mRNA表达下降(P<0.05);而B组能明显逆转A组上述指标的变化(P<0.05)。结论 EGCG可通过调控Dyrk1A-ASF-CaMKⅡδ可变剪接的信号通路预防腹主动脉缩窄大鼠心肌肥厚的发生。 展开更多
关键词 护理人文关怀教育
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磷酸酪氨酸蛋白专一抗体的制备和纯化 被引量:4
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作者 朱曙东 赵文君 张光毅 《生物化学杂志》 CSCD 1997年第5期561-565,共5页
以偶联磷酸化酪氨酸的牛血清白蛋白(BSA)作为免疫原免疫兔获得抗血清.自抗血清中分离获得抗体.自酪胺合成磷酸酪胺,并偶联到溴化氰活化的Sepharose4B上.抗体经磷酸酪胺-Sepharose4B亲和柱纯化,所得抗... 以偶联磷酸化酪氨酸的牛血清白蛋白(BSA)作为免疫原免疫兔获得抗血清.自抗血清中分离获得抗体.自酪胺合成磷酸酪胺,并偶联到溴化氰活化的Sepharose4B上.抗体经磷酸酪胺-Sepharose4B亲和柱纯化,所得抗体专一性强,Dotblot显示:抗体仅对酪氨酸磷酸化的蛋白质包括酪氨酸磷酸化的血清白蛋白,溶菌酶,卵清蛋白起抗原抗体反应,而不识别非酪氨酸磷酸化的溶菌酶,卵清蛋白,也不识别作为免疫原的骨架成分BSA,也不识别丝氨酸磷酸化的卵清蛋白和苏氨酸磷酸化的卵清蛋白. 展开更多
关键词 磷酸酪氨酸蛋白 抗体 制备 提纯
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酪氨酸磷酸化调节激酶1A在阿尔茨海默病中的作用和机制 被引量:1
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作者 鞠程 臧彩霞 +1 位作者 鲍秀琦 张丹 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1013-1020,共8页
阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种以学习记忆减退和认知功能障碍为特征的中枢神经系统退行性疾病,主要病理学改变为β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)沉积和Tau蛋白异常磷酸化,但其病因及发病机制目前尚未完全阐明。双... 阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种以学习记忆减退和认知功能障碍为特征的中枢神经系统退行性疾病,主要病理学改变为β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)沉积和Tau蛋白异常磷酸化,但其病因及发病机制目前尚未完全阐明。双底物特异性酪氨酸磷酸化调节激酶1A(dual specificity tyrosine-phosphorylation-regulated kinase 1A,DYRK1A)是一种在进化中高度保守的蛋白激酶,与大脑发育异常、神经退行性改变、认知障碍和早发性AD相关。DYRK1A可通过磷酸化多种底物的丝氨酸或苏氨酸残基促进AD疾病中老年斑形成、神经纤维缠结、氧化应激和神经炎症反应,因此DYRK1A可能是防治AD的重要靶点。本文将对DYRK1A的结构、分布、功能及其在AD发病中的作用进行综述,旨在为AD的研究和治疗提供新的思路。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 酪氨酸磷酸化调节激酶1A Β-淀粉样蛋白 TAU蛋白 神经炎症
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槲皮素对血小板衍生生长因子诱导的血管平滑肌细胞酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响 被引量:6
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作者 黄慧 王昌明 +2 位作者 阳耀忠 黄文新 陈建中 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 1999年第1期55-57,共3页
目的:研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂槲皮素(quercetin)对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的血管平滑肌细胞(SMC)酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响。方法:采用噻唑蓝比色法,流式细胞术分析槲皮素对PDGF诱导的SMC增殖的影响,应用免疫印迹... 目的:研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂槲皮素(quercetin)对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的血管平滑肌细胞(SMC)酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响。方法:采用噻唑蓝比色法,流式细胞术分析槲皮素对PDGF诱导的SMC增殖的影响,应用免疫印迹法分析观察槲皮素对PDGF诱导的SMC酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响。结果:与对照组相比,槲皮素处理组可显著地抑制PDGF诱导的SMC增殖及酪氨酸磷酸化蛋白的表达,尤以酪氨酸磷酸化蛋白分子量为85~180kD明显。结论:槲皮素可显著地抑制PDGF诱导的SMC酪氨酸磷酸化蛋白的表达。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 血管平滑肌细胞 PDGF 槲皮素
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基于SH2超亲体的微量样品酪氨酸磷酸化蛋白质组学技术研究进展及应用 被引量:5
6
作者 门丽影 徐锋 徐平 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期2334-2341,共8页
酪氨酸磷酸化是生物体内一种重要的蛋白质磷酸化修饰类型,参与细胞信号转导、细胞迁移、凋亡等众多的生命活动过程。在磷酸化蛋白质组学研究中,由于酪氨酸磷酸化蛋白丰度低且有时起始样品量有限,传统的磷酸化蛋白质组富集方法用于酪氨... 酪氨酸磷酸化是生物体内一种重要的蛋白质磷酸化修饰类型,参与细胞信号转导、细胞迁移、凋亡等众多的生命活动过程。在磷酸化蛋白质组学研究中,由于酪氨酸磷酸化蛋白丰度低且有时起始样品量有限,传统的磷酸化蛋白质组富集方法用于酪氨酸磷酸化肽富集效率较低。微量样品的制备技术以及SH2超亲体的引入正在改变酪氨酸磷酸化蛋白质组研究的现状,现对此进行综述。 展开更多
关键词 酪氨酸磷酸化 SH2超亲体 微量样品 膜蛋白 富集技术
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核酸免疫识别的机制和功能及酪氨酸磷酸化修饰调控
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作者 刘盛铎 徐平龙 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期35-46,共12页
核酸天然免疫识别是一种普遍存在且高度保守的免疫应答机制,负责监测和响应病原体入侵或组织损伤,进而在宿主防御、自身免疫反应、细胞命运决定以及肿瘤发生发展中发挥关键作用。酪氨酸磷酸化作为一类主要的蛋白质翻译后修饰机制,在核... 核酸天然免疫识别是一种普遍存在且高度保守的免疫应答机制,负责监测和响应病原体入侵或组织损伤,进而在宿主防御、自身免疫反应、细胞命运决定以及肿瘤发生发展中发挥关键作用。酪氨酸磷酸化作为一类主要的蛋白质翻译后修饰机制,在核酸识别通路中发挥重要调控功能。其中,介导核酸免疫识别通路的核心成员环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)、干扰素基因刺激因子(STING)以及TANK结合激酶1(TBK1)等蛋白均受到酪氨酸磷酸化修饰引发的活性调控,进而影响生理或病理条件下宿主的抗病毒防御和抗肿瘤免疫能力。本文综述了酪氨酸激酶和酪氨酸磷酸化修饰在核酸免疫识别中的调控作用及研究现状,讨论了靶向酪氨酸磷酸化在抗肿瘤免疫中的功能和潜在应用,以期为理解并拓展全新的抗肿瘤手段提供思路。 展开更多
关键词 天然免疫 肿瘤免疫 酪氨酸磷酸化 酪氨酸激酶 信号转导 蛋白质修饰 环鸟苷酸-腺苷酸合成酶-干扰素基因刺激因子 综述
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Cytoskeleton-associated protein tyrosine phosphorylation involved in induction of differentiation in mouse melanoma cells
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作者 Chunhong Yan Rui Han 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1999年第4期335-339,共5页
The malignancy of a cancer is due partly to its poor differentiation. Genistein, a protein tyrosine kinase inhibitor, is found to induce the highly malignant B16-BL6 mouse melanoma cells to differentiate to mature phe... The malignancy of a cancer is due partly to its poor differentiation. Genistein, a protein tyrosine kinase inhibitor, is found to induce the highly malignant B16-BL6 mouse melanoma cells to differentiate to mature phenotypes. When Triton X-100 insoluble fraction of the differentiated cells is prepared and analyzed, tyrosine phosphorylation levels of three cytoskeleton-associated proteins (65, 60 and 53 ku respectively) are found to decrease dramatically. But no any change is found when phosphotyrosine contents of the cytosol fraction or the total cellular protein preparations are evaluated. It is concluded that cytoskeleton-associated protein tyrosine phosphorylation may be involved in the control of differentiation of cancer cells. The decrease of phosphotyrosine contents of cytoskeleton-associated proteins may be one of the important mechanisms underlying the differentiation induction of cancer cells by anticancer agents. 展开更多
关键词 cytoskeleton-associated protein protein tyrosine phosphorylATION cancer cell DIFFERENTIATION protein tyrosine ki-nase inhibitor.
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过表达PTPα促进K562细胞体外增殖能力和体内致瘤性
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作者 王红洁 蔡蓉 +4 位作者 李珂 许伟榕 乔福峰 郑新民 卢健 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期757-763,共7页
探讨蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)在血液肿瘤细胞中的特异性表达,研究过量表达PTPα对人红白血病细胞K562生物学行为的影响及在裸鼠体内致瘤能力的改变.首先应用RT-PCR和Western印迹检测3种不同类型造血系肿瘤细胞(K562、NB4、Jurkat T)... 探讨蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)在血液肿瘤细胞中的特异性表达,研究过量表达PTPα对人红白血病细胞K562生物学行为的影响及在裸鼠体内致瘤能力的改变.首先应用RT-PCR和Western印迹检测3种不同类型造血系肿瘤细胞(K562、NB4、Jurkat T)中PTPα的表达水平.根据检测结果,选择K562细胞作为研究对象,利用脂质体将PTPα真核表达载体转染K562细胞,通过G418筛选获得阳性克隆,RT-PCR和Western印迹验证过表达情况;经MTT法检测细胞增值能力的改变;用流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞分化状态;并将阳性克隆细胞皮下接种裸鼠,观察PTPα基因转染前后细胞系在裸鼠体内的致瘤能力及瘤体的组织化学变化.上述实验结果表明,通过G418压力筛选获得了PTPα高表达多克隆细胞系K562-PTPα;经体外增殖实验分析,实验组K562-PTPα细胞与未转染组细胞K562和转染空载体组细胞K562-splice相比,细胞生长速度增快,G2/M期细胞比例增加(P<0.05),而细胞分化状态无明显变化;裸鼠体内致瘤实验显示,K562组、K562-splice组和K562-PTPα组平均瘤重分别为(1.1±0.3)g、(1.3±0.2)g和(2.5±0.5)g;病理切片显示,K562-PTPα组瘤体组织分化程度较对照组低、恶性程度高,细胞的致瘤能力增强(P<0.01).综上所述,过表达PTPα使K562细胞具有更强的体外增殖能力和体内致瘤性,表明PTPα可能在造血系统恶性肿瘤的发生发展中发挥促进作用. 展开更多
关键词 蛋白质酪氨酸磷酸化 蛋白质酪氨酸磷酸酶α 人红白血病 K562细胞
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LncRNA00067110通过靶向Cabyr调控B16-F10细胞增殖、凋亡和黑色素生成 被引量:1
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作者 杨婉赟 Ajab Khan +4 位作者 贾琼 胡世雄 焦丁兴 于雷涛 范瑞文 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期799-808,共10页
长非编码RNA(lncRNA)是一类转录长度大于200个核苷酸的非编码RNA。现已证明,多个lncRNA是潜在的癌症治疗靶点。LncRNA00067110是从小鼠黑色素瘤B16-F10细胞和正常黑色素细胞转录物组图谱中发现的差异表达基因。为研究lncRNA00067110是... 长非编码RNA(lncRNA)是一类转录长度大于200个核苷酸的非编码RNA。现已证明,多个lncRNA是潜在的癌症治疗靶点。LncRNA00067110是从小鼠黑色素瘤B16-F10细胞和正常黑色素细胞转录物组图谱中发现的差异表达基因。为研究lncRNA00067110是否调控B16-F10细胞的增殖、凋亡和黑色素生成,本文通过LncTar预测和双荧光酶活性验证了钙结合酪氨酸磷酸化调节蛋白(Cabyr)和lncRNA00067110存在靶向关系。通过构建lncRNA00067110的过表达载体,转染B16-F10细胞,经过对B16-F10细胞的转录图谱分析,并对细胞增殖、凋亡和黑色素生成的表型以及相关基因表达变化进行了检测。结果显示,lncRNA00067110靶向Cabyr,在过表达lncRNA00067110的B16细胞中,17个基因呈差异表达。其中,Cabyr的表达被上调,细胞增殖相关基因MEK/ERK/MNK/CREB和黑色素生成相关基因TYR家族成员及CREB的mRNA和蛋白质水平显著被下调,凋亡相关基因AKT和Bcl-2的mRNA水平和蛋白质丰度被上调。进一步通过细胞增殖和凋亡的表型的变化验证了lncRNA00067110的功能。结果提示,lncRNA00067110通过靶向Cabyr,调控相关基因表达,从而抑制B16-F10细胞的增殖和黑色素生成,并诱导黑色素瘤细胞的凋亡,可能成为治疗和抑制黑色素瘤的新的靶点。 展开更多
关键词 lncRNA00067110 B16-F10 增殖 凋亡 黑色素生成 钙结合酪氨酸磷酸化调节蛋白(Cabyr)
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非小细胞肺癌患者组织及外周血中CABYR的表达及意义
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作者 盛思源 卢传刚 +1 位作者 周蕾 杨志英 《湘南学院学报(医学版)》 2023年第3期6-10,共5页
目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌组织和外周血中钙离子结合酪氨酸磷酸化调节蛋白(CABYR)的表达水平,探讨CABYR作为非小细胞肺癌患者肿瘤标志物的临床意义。方法收集NSCLC患者肿瘤组织及其对应癌旁组织、肺癌患者和正常人外周血,同... 目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌组织和外周血中钙离子结合酪氨酸磷酸化调节蛋白(CABYR)的表达水平,探讨CABYR作为非小细胞肺癌患者肿瘤标志物的临床意义。方法收集NSCLC患者肿瘤组织及其对应癌旁组织、肺癌患者和正常人外周血,同时收集食道癌患者肿瘤组织及其对应癌旁组织作为其他肿瘤对照,用实时荧光定量PCR检测肺癌组织和外周血中CABYR-a/b mRNA的表达;用免疫组织化学法(IHC)检测肺癌组织及其对应癌旁组织中CABYR的表达水平。结果免疫组化证实NSCLC组织中有CABYR的表达;恶性与癌旁组织CABYR-a/b相对表达比值大于1的患者,在NSCLC患者肿瘤组织中CABYR-a/b mRNA的表达率(58.33%)明显高于食道癌组织(12.5%);与正常人外周血相比,NSCLC患者外周血中CABYR-a/b mRNA的表达水平略上调,但无统计学意义(P>0.05);与293T细胞株比较,CABYR-a/b在肺癌细胞株A549和H1650中的表达显著增高(P<0.01)。结论CABYR在NSCLC患者肿瘤组织和外周血中的表达均上调,对NSCLC的诊断和免疫治疗具有一定的临床价值,可能作为NSCLC的生物标志物,为非小细胞肺癌的免疫治疗提供一个新的靶点。 展开更多
关键词 钙离子结合酪氨酸磷酸化调节蛋白 非小细胞肺癌 肿瘤睾丸抗原
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