牛环形泰勒虫病二温式PCR诊断方法的建立及初步应用 被引量：19

1

作者 王振宝 刘启生 +5 位作者 哈森 何晓杰 刘绪斌 孟茹 叶尔保勒 巴音查汗 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第5期59-63,共5页

为建立特异、敏感、快速的二温式PCR诊断方法,根据牛环形泰勒虫裂殖子表面抗原(tams1)基因,设计了一对特异性引物,扩增出大小为154bp基因片段,经克隆、测序分析,与已知基因序列的相似性为96%。用建立的牛环形泰勒虫病二温式PCR诊断方法... 为建立特异、敏感、快速的二温式PCR诊断方法,根据牛环形泰勒虫裂殖子表面抗原(tams1)基因,设计了一对特异性引物,扩增出大小为154bp基因片段,经克隆、测序分析,与已知基因序列的相似性为96%。用建立的牛环形泰勒虫病二温式PCR诊断方法,对从新疆牛环形泰勒虫病流行地区采集的50份全血样品进行诊断,阳性率为88%,而血涂片检出的阳性率只有58%。经试验验证,该方法具有特异性高、敏感性强、重复性和稳定性好等优点。表明本试验所建立的二温式PCR诊断方法可用于牛环形泰勒虫病的临床诊断、隐性感染检测和流行病学调查。 展开更多

关键词 牛 环形泰勒虫 二温式pcr 克隆 诊断 应用

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二温式聚合酶链反应鉴别诊断迟缓爱德华氏菌病 被引量：15

2

作者 邓显文 谢芝勋 +4 位作者 谢丽基 刘加波 谢志勤 庞耀珊 余晓丽 《水生态学杂志》 北大核心 2009年第2期158-160,共3页

根据迟缓爱德华氏菌株23SrDNA基因,设计合成一对引物XZE15、XZE16,建立了二温式聚合酶链反应(PCR)鉴别诊断迟缓爱德华氏菌株的技术。特异性试验表明,对3株迟钝爱德华氏菌株进行PCR扩增出与预期大小相一致的284bp的特异性片段,但对3株钻... 根据迟缓爱德华氏菌株23SrDNA基因,设计合成一对引物XZE15、XZE16,建立了二温式聚合酶链反应(PCR)鉴别诊断迟缓爱德华氏菌株的技术。特异性试验表明,对3株迟钝爱德华氏菌株进行PCR扩增出与预期大小相一致的284bp的特异性片段,但对3株钻鱼爱德华氏菌及其他对照鱼病病原体核酸模板的PCR扩增不出现任何条带;敏感性试验结果显示,该二温式PCR可以检测到10pg的迟钝爱德华氏菌DNA。 展开更多

关键词 二温式pcr 鉴别 爱德华氏菌 迟钝爱德华氏菌

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二温式PCR在特异短核酸探针合成中的应用 被引量：8

3

作者 董倩 黄国强 +2 位作者 叶冰莹 陈由强 陈如凯 《花生学报》 2008年第3期5-10,共6页

经基因库序列比对确定花生白藜芦醇合酶基因(RS)中的特异序列(长度约108 bp)。以此为模板设计分别含有SalI和SacI酶切位点的一对上、下游引物,并应用二温式PCR扩增得到该特异短片段。将该特异片段正向连接到pBlueskriptIIKS(+)的多克隆... 经基因库序列比对确定花生白藜芦醇合酶基因(RS)中的特异序列(长度约108 bp)。以此为模板设计分别含有SalI和SacI酶切位点的一对上、下游引物,并应用二温式PCR扩增得到该特异短片段。将该特异片段正向连接到pBlueskriptIIKS(+)的多克隆位点上,利用T7 RNA聚合酶在体外转录合成地高辛标记的反义特异短核酸探针。该特异短核酸探针的合成为后续RS基因在花生组织器官中表达的RNA原位杂交研究打下了基础。 展开更多

关键词 二温式pcr 花生 白藜芦醇合酶 核酸探针

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驽巴贝斯虫二温式PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：7

4

作者 张杨 达伊力特 +2 位作者 刘进 李佳 巴音查汗 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第6期16-20,共5页

为了建立一种能快速、特异、敏感地检测马驽巴贝斯虫的方法,根据GenBank中的驽巴贝斯虫(Babesia caballi)Bc-48基因序列设计了一对特异性引物,建立检测驽巴贝斯虫的二温式PCR方法。该方法能够特异地扩增155bp的片段,与双芽巴贝斯虫、环... 为了建立一种能快速、特异、敏感地检测马驽巴贝斯虫的方法,根据GenBank中的驽巴贝斯虫(Babesia caballi)Bc-48基因序列设计了一对特异性引物,建立检测驽巴贝斯虫的二温式PCR方法。该方法能够特异地扩增155bp的片段,与双芽巴贝斯虫、环形泰勒虫、马泰勒虫、瑟氏泰勒虫均无交叉反应,能检测到的最低DNA拷贝数为5.17×102 copies/μL。应用所建立的方法检测了采集于和静县焉耆马匹样品,结果显示,马驽巴贝斯虫感染率为69.51%(57/82),与血液涂片检查结果37.8%(31/82)相比,其检出率更高。表明该二温式PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性,可用于马驽巴贝斯虫病的早期诊断。 展开更多

关键词 马驽巴贝斯虫 Bc-48 基因 样品检测

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基于环形泰勒虫Tams1基因多态性的二温式-PCR检测方法的建立 被引量：5

5

作者 罗金 刘光远 +1 位作者 田占成 谢俊仁 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第20期4300-4309,共10页

【目的】环形泰勒虫作为牛科动物重要的血液原虫对养牛业产生了重大危害。近年来针对该病原Tams1基因的诊断方法及候选疫苗筛选进行了大量工作。但研究证明该基因多态性对诊断及免疫效果存在影响。基于此,本研究对Tams1基因多态性特征... 【目的】环形泰勒虫作为牛科动物重要的血液原虫对养牛业产生了重大危害。近年来针对该病原Tams1基因的诊断方法及候选疫苗筛选进行了大量工作。但研究证明该基因多态性对诊断及免疫效果存在影响。基于此,本研究对Tams1基因多态性特征进行了分析,并为该病的诊断建立一种实施有效的检测方法。【方法】参考GenBank中公布的环形泰勒虫Tams1基因的核苷酸序列,设计特异性引物。PCR扩增,获得了846 bp的核苷酸片段。将该基因片段与GenBank中主要的12种已知不同区域虫株的相应氨基酸序列进行比较分析。在保守区设计引物,以Tams1基因标准阳性质粒为模板建立环形泰勒虫病的二温式-PCR检测方法。经优化的方法用于田间样品的检测。【结果】该基因编码281个氨基酸,碱性氨基酸48个,酸性氨基酸42个,疏水性氨基酸100个。系统发生树结果显示,环形泰勒虫甘肃株与安哥拉、土耳其、巴林地方株亲缘关系较近。新疆株与意大利、西班牙地方株关系较近,而与甘肃株亲缘关系相对较远。这一结果通过环形泰勒虫不同国家地方株的氨基酸序列对齐结果可以得到进一步的说明。建立的二温式-PCR检测方法,可检测到0.31 fg.μL-1血液中感染虫体的量。特异性结果表明,仅有环形泰勒虫基因组DNA检测为阳性,其它对照虫种基因组模板均表现为阴性,且与感染牛的其它梨形虫无交叉反应。本实验建立的环形泰勒虫二温式-PCR方法对收集的335份野外样品进行检测,阳性检出率为16.33%,显微镜检测阳性率为2.25%,两者符合率100%。与普通PCR比较,二温式-PCR在敏感性方面没有显著差异,但其特异性更高,且该方法反复升温降温时间消耗短。【结论】环形泰勒虫Tams1基因不同地方株存在明显的差异。其氨基酸序列的多态性特征差异显著。因此该基因作为潜在候选抗原应注重多肽疫苗的设计� 展开更多

关键词 环形泰勒虫 Tams1 多态性 二温式-pcr 检测方法

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牛新孢子虫二温式PCR检测方法的建立与应用 被引量：5

6

作者 季新成 王文 +2 位作者 牛国辉 郑培 张玲 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第8期17-20,共4页

根据已发表的犬新孢子虫种属特异性基因片段Nc-5基因序列设计合成一对特异性引物,采用均匀设计方法对引物浓度、Mg2+浓度、dNTP、Taq酶和退火温度进行了优化,建立了检测牛新孢子虫的二温式PCR方法。该方法对牛新孢子虫DNA的检测灵敏度为... 根据已发表的犬新孢子虫种属特异性基因片段Nc-5基因序列设计合成一对特异性引物,采用均匀设计方法对引物浓度、Mg2+浓度、dNTP、Taq酶和退火温度进行了优化,建立了检测牛新孢子虫的二温式PCR方法。该方法对牛新孢子虫DNA的检测灵敏度为23.5 fg/反应。应用该方法对50份全血和8份流产胎儿样本进行了检测,有3份全血和1份流产胎儿样本为阳性。与三步法PCR相比较,该二温式PCR方法检测时间缩短了30 min,且方法具有快速、灵敏、准确、特异等优点,可用来对牛新孢子虫病的检测。 展开更多

关键词 新孢子虫 二温式pcr 均匀设计 牛

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牛病毒性腹泻二温式PCR检测方法的建立 被引量：4

7

作者 范晴 谢芝勋 +5 位作者 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 谢丽基 彭宜 《中国奶牛》 2010年第10期1-3,共3页

根据牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的5’端非编码区设计了1对可以扩增244bp BVDV某段基因序列的特异性引物,优化建立了BVD的二温式PCR快速检测方法。特异性试验和敏感性试验结果表明,该方法只对BVDV模板进行扩增,而对其他对照病毒的检测均为阴... 根据牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的5’端非编码区设计了1对可以扩增244bp BVDV某段基因序列的特异性引物,优化建立了BVD的二温式PCR快速检测方法。特异性试验和敏感性试验结果表明,该方法只对BVDV模板进行扩增,而对其他对照病毒的检测均为阴性;最低能检测到1pg牛病毒性腹泻病毒RNA。本研究所建立的BVD二温式PCR方法是一种快速、特异、敏感的检测方法。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻 二温式pcr 检测

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双温多重PCR鉴定猪早期胚胎性别的研究 被引量：3

8

作者 李小平 袁婷 +5 位作者 高飞 武蓉 黄永业 段新平 谢万华 逄大欣 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第14期34-36,共3页

通过PCR扩增哺乳动物雄性决定基因SRY来鉴定胚胎的性别在畜牧业生产上已经得到广泛应用,优化技术路线,缩短鉴定时间对后期实验的成功有非常重要的意义。根据猪的SRY基因和GAPDH(内标)基因序列,分别设计并合成两对引物,通过双温PCR反应... 通过PCR扩增哺乳动物雄性决定基因SRY来鉴定胚胎的性别在畜牧业生产上已经得到广泛应用,优化技术路线,缩短鉴定时间对后期实验的成功有非常重要的意义。根据猪的SRY基因和GAPDH(内标)基因序列,分别设计并合成两对引物,通过双温PCR反应实现对猪早期胚胎性别的快速鉴定,结果表明:母猪只能扩增出404bp的GAPDH基因片段,而公猪能同时扩增出309bp的SRY基因片段和404bp的GAPDH基因片段。阳性率为100%,鉴定时间较常规时间缩短2h时。表明该检测方法快速、准确。该方法为在转基因克隆动物研究中快速鉴定胎儿成纤维细胞系的性别提供了可靠的技术保证。 展开更多

关键词 SRY基因 双温pcr 多重pcr 性别鉴定

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牛卵形巴贝斯虫病二温式PCR诊断方法的建立 被引量：2

9

作者 田万年 王妍慧 +2 位作者 薛书江 贾立军 张守发 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第9期38-40,共3页

为建立一种特异、敏感、快速的牛卵形巴贝斯虫病诊断方法。根据GenBank已报道的牛卵形巴贝斯虫18S rRNA基因(LC125457)设计合成了1对引物,通过条件优化,建立了牛卵形巴贝斯虫病二温式PCR诊断方法。该方法能扩增出464 bp的牛卵形巴贝斯... 为建立一种特异、敏感、快速的牛卵形巴贝斯虫病诊断方法。根据GenBank已报道的牛卵形巴贝斯虫18S rRNA基因(LC125457)设计合成了1对引物,通过条件优化,建立了牛卵形巴贝斯虫病二温式PCR诊断方法。该方法能扩增出464 bp的牛卵形巴贝斯虫特异性基因片段,测序结果与已知基因序列同源性为100%。对牛卵形巴贝斯虫基因组DNA的最小检测量为16 fg/μL,与牛瑟氏泰勒虫、牛巴贝斯虫和双芽巴贝斯虫均无交叉反应。二温式PCR诊断方法具有较高的特异性和敏感性,可用于牛卵形巴贝斯虫病的快速诊断和流行病学调查。 展开更多

关键词 卵形巴贝斯虫 18S rRNA基因 二温式pcr

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应用二温式PCR检测家蚕核型多角体病毒的方法 被引量：2

10

作者 覃玥 陈保善 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期565-570,共6页

为了简便、快速、准确地检测家蚕核型多角体病毒(Bm NPV),以Bm NPV广西分离株的多角体蛋白基因(polh)序列(Gen Bank登录号:JQ991011.1)设计引物,以感染Bm NPV(广西宜州分离株)2 h的5龄家蚕幼虫中肠组织提取的DNA为模板,建立二温式PCR检... 为了简便、快速、准确地检测家蚕核型多角体病毒(Bm NPV),以Bm NPV广西分离株的多角体蛋白基因(polh)序列(Gen Bank登录号:JQ991011.1)设计引物,以感染Bm NPV(广西宜州分离株)2 h的5龄家蚕幼虫中肠组织提取的DNA为模板,建立二温式PCR检测Bm NPV的方法,最终确定的最佳反应体系为:10×PCR buffer 1.5μL,5 mmol/L Mg Cl22μL,2.5mmol/L d NTP 0.5μL,10μmol/L上、下游引物各1μL,5 U/μL Taq DNA聚合酶0.1μL,18 ng/μL模板DNA 1μL,加水至总体积15μL。确定的最佳反应条件为:94℃预变性3 min;95℃15 s,延伸和退火温度合并为62℃30 s,共25个循环。按上述条件PCR扩增得到大小约309 bp的特异性片段,测序结果与已知polh基因序列的相似度为100%。与普通PCR检测方法比较,采用二温式PCR方法对样本的检测时间节省1.5 h,反应特异性强,灵敏度高(能被检测的最小感病组织基因组DNA的质量浓度为1.8 pg/μL),并且选择最初2 h感病的幼虫中肠组织为检测材料,因而可用于家蚕血液型脓病的早期诊断。 展开更多

关键词 家蚕核型多角体病毒 多角体蛋白基因 二温式pcr 反应条件

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美洲幼虫腐臭病二温式PCR诊断方法的建立及应用 被引量：2

11

作者 何晓杰 阿曼吐尔.阿黑哈提 +4 位作者 叶尔保勒 史秀丽 齐鑫 皮志媛 王振宝 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期288-291,共4页

【目的】为建立蜂及蜂产品中美洲幼虫腐臭病(AFB)二温式PCR诊断方法。【方法】选取幼虫芽孢杆菌基因保守序列设计一对特异性引物,优化反应参数,进行特异性、敏感性和重复性试验验证,建立了诊断AFB的二温式PCR方法。【结果】扩增出130 b... 【目的】为建立蜂及蜂产品中美洲幼虫腐臭病(AFB)二温式PCR诊断方法。【方法】选取幼虫芽孢杆菌基因保守序列设计一对特异性引物,优化反应参数,进行特异性、敏感性和重复性试验验证,建立了诊断AFB的二温式PCR方法。【结果】扩增出130 bp的特异性片段,与参考株序列相似性为100%,DNA灵敏度检测幼虫芽孢杆菌达到33 fg/PCR体系,重复性良好。应用该方法对40份实验室模拟样本和50份临床样本进行了检测,与预期结果一致。【结论】该方法具有特异、灵敏、准确等优点,可用于蜂及蜂产品中AFB的快速诊断。 展开更多

关键词 美洲幼虫腐臭病 二温式pcr 建立

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牛瑟氏泰勒虫二温式PCR快速检测技术的建立及初步应用 被引量：2

12

作者 丁晓双 夏晓辉 +2 位作者 张晓轩 海旭楠 许应天 《畜牧与兽医》 北大核心 2013年第7期26-29,共4页

为建立一种牛瑟氏泰勒虫快速检测技术,根据GenBank上已发表的牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因序列(D84447)设计1对特异性引物,扩增出大小为244 bp的基因片段,经克隆、测序分析,与已知基因序列同源性为100%。用该对引物建立的牛瑟氏泰勒虫... 为建立一种牛瑟氏泰勒虫快速检测技术,根据GenBank上已发表的牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因序列(D84447)设计1对特异性引物,扩增出大小为244 bp的基因片段,经克隆、测序分析,与已知基因序列同源性为100%。用该对引物建立的牛瑟氏泰勒虫二温式PCR能检测出的最高敏感度为171 fg/μL,与牛新孢子虫、弓形虫和卵形巴贝斯虫不产生交叉反应,对48份临床血液样本进行检测,阳性检出率为66.67%。用同一对引物对28份临床血液样本分别进行二温式PCR和三温式PCR检测,阳性符合率为95%,总符合率为96.43%。结果表明,该方法具有快速、敏感、特异等优点,可用于牛瑟氏泰勒虫病的快速临床诊断及流行病学调查。 展开更多

关键词 牛瑟氏泰勒虫 P23基因 二温式pcr

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牛瑟氏泰勒虫二温式PCR检测方法的建立及应用 被引量：2

13

作者 钱年超 贾立军 +3 位作者 薛书江 张影 黄国明 张守发 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1150-1153,共4页

为建立一种能快速、特异、敏感地检测牛瑟氏泰勒虫的方法,根据GenBank中的牛瑟氏泰勒虫MPSP基因(GQ180198.1)设计合成了1对特异性引物,建立了检测牛瑟氏泰勒虫的二温式PCR方法。该方法与犬新孢子虫、猪支原体和弓形虫RH株均无交叉反应,... 为建立一种能快速、特异、敏感地检测牛瑟氏泰勒虫的方法,根据GenBank中的牛瑟氏泰勒虫MPSP基因(GQ180198.1)设计合成了1对特异性引物,建立了检测牛瑟氏泰勒虫的二温式PCR方法。该方法与犬新孢子虫、猪支原体和弓形虫RH株均无交叉反应,能检测到的最低DNA含量为1.7pg/μL。结果表明,该二温式PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性。本研究为牛瑟氏泰勒虫的快速检测提供了一种方法。 展开更多

关键词 瑟氏泰勒虫 MPSP基因 二温式聚合酶链反应

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新孢子虫二温式PCR检测方法的建立及应用 被引量：1

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作者 陈千林 王振宝 +3 位作者 宋迎春 刘梦丽 许正茂 巴音查汗 《动物医学进展》 北大核心 2016年第4期30-34,共5页

根据新孢子虫Nc2基因保守区设计特异性引物,应用均匀设计法优化反应中Taq DNA聚合酶、引物浓度和退火温度等,建立新孢子虫二温式PCR检测方法。结果显示,扩增条带与预期目的片段大小(266bp)相符,未扩增出弓形虫等虫种的阳性DNA片段;扩增... 根据新孢子虫Nc2基因保守区设计特异性引物,应用均匀设计法优化反应中Taq DNA聚合酶、引物浓度和退火温度等,建立新孢子虫二温式PCR检测方法。结果显示,扩增条带与预期目的片段大小(266bp)相符,未扩增出弓形虫等虫种的阳性DNA片段;扩增片段经克隆、测序发现与引物基因序列的同源性为100%;最低检出量为32.5fg/μL,是三步法PCR的10-1倍,但循环时间缩短了38min;重复3次对10-4、10-5、10-6和10-7稀释的阳性质粒进行二温扩增,10-7稀释均未出现扩增条带。同时对156份牛全血DNA进行检测,检出率为10.90%(17/156),与《新孢子虫病检疫技术规范》(SN/T 3499—2013)的检出符合率为83.33%(30/36),二者检测结果差异性不显著(P>0.05)。由此可见,建立的二温式PCR检测方法可用于临床诊断和日常监测新孢子虫,为监控"带虫宿主"提供技术支撑。 展开更多

关键词 新孢子虫 Nc2基因 二温式pcr

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贝类派琴虫二温式PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：1

15

作者 谢丽基 谢芝勋 +4 位作者 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 范晴 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第4期63-65,共3页

根据GenBank中派琴虫的基因保守序列,设计了一对特异性引物,通过对二温式PCR扩增条件的优化,研究建立了检测贝类派琴虫的二温式PCR方法。该方法对派琴虫模板进行扩增,得到与试验设计相符的276bp的特异性扩增带,而对马尔太虫、单孢子虫... 根据GenBank中派琴虫的基因保守序列,设计了一对特异性引物,通过对二温式PCR扩增条件的优化,研究建立了检测贝类派琴虫的二温式PCR方法。该方法对派琴虫模板进行扩增,得到与试验设计相符的276bp的特异性扩增带,而对马尔太虫、单孢子虫、副溶血弧菌、溶藻弧菌和河弧菌等病原体的扩增,结果全为阴性。敏感性试验结果表明,该技术最低能检测到1fg的派琴虫质粒DNA。用该二温式PCR对贝类样品进行检测,结果从广西的牡蛎检出派琴虫27份,连云港的菲律宾蛤仔检出派琴虫12份,温州的溢蛏中检出6份,结果提示,建立的半套式PCR方法可以用于贝类派琴虫的临床快速检测。 展开更多

关键词 贝类 派琴虫 二温式pcr

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贝类折光马尔太虫二温式PCR检测方法的建立及初步应用

16

作者 谢丽基 谢芝勋 +4 位作者 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 范晴 《畜牧与兽医》 北大核心 2013年第4期18-21,共4页

根据GenBank中折光马尔太虫的基因保守序列,设计了一对特异性引物,通过对二温式PCR扩增条件的优化,建立了检测贝类折光马尔太虫的二温式PCR方法。该方法对折光马尔太虫模板进行扩增,得到与试验设计相符的266 bp的特异性扩增带,而对单孢... 根据GenBank中折光马尔太虫的基因保守序列,设计了一对特异性引物,通过对二温式PCR扩增条件的优化,建立了检测贝类折光马尔太虫的二温式PCR方法。该方法对折光马尔太虫模板进行扩增,得到与试验设计相符的266 bp的特异性扩增带,而对单孢子虫、派琴虫、副溶血弧菌、溶藻弧菌和河弧菌等病原体的扩增,结果全为阴性。敏感性试验结果表明,该技术最低能检测到1 fg的折光马尔太虫质粒DNA。用该二温式PCR对福建沿海的贝类样品进行检测,结果从溢蛏中检出折光马尔太虫12份,结果提示了福建沿海的养殖贝类中存在折光马尔太虫的感染,建立的二温式PCR方法可用于贝类折光马尔太虫的临床快速检测。 展开更多

关键词 贝类 折光马尔太虫 二温式pcr

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贝类单孢子虫二温式PCR检测方法的建立及初步应用

17

作者 谢丽基 谢芝勋 +4 位作者 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 范晴 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第7期73-75,共3页

为了建立检测贝类单孢子虫的二温式PCR方法,试验根据GenBank中单孢子虫的基因保守序列设计了1对特异性引物,并对二温式PCR扩增条件进行优化。结果表明:用二温式PCR方法对单孢子虫模板进行扩增,得到与试验设计相符的333 bp特异性扩增带,... 为了建立检测贝类单孢子虫的二温式PCR方法,试验根据GenBank中单孢子虫的基因保守序列设计了1对特异性引物,并对二温式PCR扩增条件进行优化。结果表明:用二温式PCR方法对单孢子虫模板进行扩增,得到与试验设计相符的333 bp特异性扩增带,而对折光马尔太虫、派琴虫、副溶血弧菌、溶藻弧菌和河弧菌等病原体进行扩增,结果全为阴性;该方法最低能检测到1 fg的单孢子虫质粒DNA。 展开更多

关键词 贝类 单孢子虫 二温式pcr

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Ⅰ群禽腺病毒通用型二温式PCR和VPCR方法的建立及初步应用

18

作者 赵磊 刘畅 +4 位作者 刘欣超 王旋 黄佳佳 阮来田 张训海 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2021年第3期47-55,共9页

为建立快速检测Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-I)血清型通用PCR方法,根据FAdV-Ⅰ12个血清型基因保守区设计引物,建立了二温式PCR和VPCR方法。结果显示:本研究建立的FAdV-Ⅰ二温式PCR方法,在90℃~94℃变性3 s、70℃~74℃退火兼延伸8 s,循环35~40次时... 为建立快速检测Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-I)血清型通用PCR方法,根据FAdV-Ⅰ12个血清型基因保守区设计引物,建立了二温式PCR和VPCR方法。结果显示:本研究建立的FAdV-Ⅰ二温式PCR方法,在90℃~94℃变性3 s、70℃~74℃退火兼延伸8 s,循环35~40次时,最快可在15 min内完成扩增;对分属5个种的5个血清型毒株检测都呈阳性,对EDSV、NDV、沙门菌等12种禽常见病原核酸检测呈阴性;最低检测质粒拷贝数为13.9 copies/μL,最低检测病毒滴度为100.3 EID50/0.1 mL;对源于FAdV-4感染致死SPF鸡的心脏、肝脏、脾脏等14种样品核酸提取物检测均为阳性。建立的VPCR,在92℃变性0 s、70℃退火延伸0 s,40次循环时,可23 min完成,其最低检测质粒拷贝数亦为13.9 copies/μL;对150份采集自安徽省部分地区样品及送检病料的检测与分析显示,所建立的二温式PCR和VPCR总阳性检出均率为30.7%,其符合率为100%。本研究表明,所建立的通用型二温式PCR和VPCR方法,均可用于Ⅰ群FAdV的快速检测与鉴定。 展开更多

关键词 Ⅰ群禽腺病毒 通用型 二温式pcr Vpcr 快速诊断

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BVDV与IBRV二重二温式PCR检测方法的建立及应用 被引量：1

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作者 赵辉 梁晓珊 +3 位作者 王雪妍 高瑞 谢玉杰 许立华 《农业科学研究》 2023年第2期1-5,共5页

针对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的5′非翻译区(5′UTR)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的gB基因分别选取2对引物,建立这2种病毒的二重二温式PCR检测方法,该方法特异性高,可检出BVDV与IBRV,与牛轮状病毒等均无交叉反应;对BVDV与IBRV的最低检... 针对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的5′非翻译区(5′UTR)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的gB基因分别选取2对引物,建立这2种病毒的二重二温式PCR检测方法,该方法特异性高,可检出BVDV与IBRV,与牛轮状病毒等均无交叉反应;对BVDV与IBRV的最低检测质量浓度为1.32、0.047 mg/L。使用该方法对采集自宁夏地区的113份具有BVDV与IBRV临床症状的牛的粪便进行检测,结果显示BVDV与IBRV的阳性检出率分别为12.39%、22.12%,2种病原体混合感染的阳性检出率为7.08%。与单重二温式PCR检测结果进行比较,得出BVDV阳性符合率为93.33%,IBRV阳性符合率为92.53%,2种病原体混合感染的阳性符合率为100%。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 牛传染性鼻气管炎病毒 二重二温式pcr 检测

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应用二温式PCR检测诊断爱德华氏菌病 被引量：3

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作者 邓显文 谢芝勋 +4 位作者 刘加波 庞耀珊 谢志勤 谢丽基 董建宝 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期32-34,46,共4页

根据爱德华氏菌(Edwardsiella)的16S rDNA基因序列设计一对特异性引物,用二温式PCR对6株爱德华氏菌均扩增出与预期大小相一致的576 bp产物,而对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、温和气单胞菌(Aeromonas sobria)、荧光假单胞菌(Pseu... 根据爱德华氏菌(Edwardsiella)的16S rDNA基因序列设计一对特异性引物,用二温式PCR对6株爱德华氏菌均扩增出与预期大小相一致的576 bp产物,而对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、温和气单胞菌(Aeromonas sobria)、荧光假单胞菌(Pseudcmonas fluoroscercs)、柱状屈挠杆菌(Cytophaga columnaris)、链球菌(Streptococcus)、葡萄球菌(Staphylococci)、弧菌(Vibrio)、大肠杆菌(Escherichia colibacillus)和沙门氏菌(Salmonella)等10种病原体的扩增,结果全为阴性。该二温式PCR可以检测到1 pg的爱德华氏菌DNA模板和48个菌体。本实验建立的二温式PCR为爱德华氏菌病的早期诊断与有效的防治提供了快速检测方法,对水产品的食品安全有重要的意义。 展开更多

关键词 爱德华氏菌(Edwardsiella) 二温式pcr 检测

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