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IL-12和IL-15对外周血CIK细胞增殖和对SMMC-7721肝癌细胞杀瘤效果研究 被引量:4
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作者 祝仲珍 傅颖媛 +4 位作者 腾召纯 何丹 熊圆圆 王占科 詹丽英 《国际检验医学杂志》 CAS 2018年第5期521-525,共5页
目的观察常规培养条件下添加白细胞介素(IL)-12、IL-15对细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞增殖的影响,观察不同细胞因子组合培养的CIK细胞的杀瘤作用,为高效率、高质量体外制备肿瘤患者自体CIK细胞制剂提供新思路。方法首先筛选出IL-2、IL-1... 目的观察常规培养条件下添加白细胞介素(IL)-12、IL-15对细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞增殖的影响,观察不同细胞因子组合培养的CIK细胞的杀瘤作用,为高效率、高质量体外制备肿瘤患者自体CIK细胞制剂提供新思路。方法首先筛选出IL-2、IL-12、IL-15最佳添加水平;然后采集健康献血员外周血,分离出单个核细胞后,根据添加的细胞因子种类和组合类型进行分组:A组(IL-2常规培养组)、B组(IL-2^+IL-12组)、C组(IL-2^+IL-15组)、D组(IL-2^+IL-12^+IL-15组)、E组(细胞因子空白对照组);各组单个核细胞分别在培养第0、5、10、15、20天,采用全自动血球计数仪进行CIK细胞计数,锥虫蓝染法检测细胞活性,流式细胞技术检测细胞膜CD3、CD8、CD56阳性率,MTS法测定CIK细胞对肝癌SMMC-7721细胞的杀瘤效果。结果B、C、D组培养第10、15、20天后CIK细胞增殖倍数均明显高于A组(P<0.05);D组培养第10、15、20天CIK细胞增殖倍数均分别明显高于C组(P<0.05)。B、C、D组培养第15、20天CIK细胞膜CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+百分比均分别明显高于A组(P<0.05);D组培养第15、20天CIK细胞膜CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+百分比均分别明显高于B组(P<0.05)。在效靶比5∶1时,各组培养第10、15、20天的CIK细胞对肝癌SMMC-7721细胞的杀伤率均明显高于A组(P<0.05);D、C组培养第10、15、20天CIK细胞对肝癌SMMC-7721细胞的杀伤率分别明显高于B组(P<0.05)。结论 IL-12、IL-15均可促进CIK细胞增殖,IL-15在促进CIK细胞增殖的同时还能增强CIK细胞杀伤肝癌SMMC-7721细胞的活性。 展开更多
关键词 细胞因子诱导的杀伤细胞 白细胞介素12 白细胞介素15 细胞增殖 杀瘤活性
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MiR-191过表达抑制NK细胞的肿瘤杀伤活性和细胞凋亡 被引量:2
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作者 李飞 黄毅 +4 位作者 王丽婷 冉海莹 黄友莹 万瑛 贾正才 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期853-858,共6页
目的研究miR-191过表达对自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)的凋亡和肿瘤杀伤活性的影响。方法通过免疫磁珠阴性分选方法从小鼠脾脏中分离NK细胞,体外用IL-2刺激扩增5~7 d后,采用流式细胞术分析NK细胞的细胞毒活性和凋亡情况。制备... 目的研究miR-191过表达对自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)的凋亡和肿瘤杀伤活性的影响。方法通过免疫磁珠阴性分选方法从小鼠脾脏中分离NK细胞,体外用IL-2刺激扩增5~7 d后,采用流式细胞术分析NK细胞的细胞毒活性和凋亡情况。制备小鼠骨髓、脾脏、淋巴结和胸腺的单细胞悬液,计算细胞总数后,采用流式细胞术分析NK细胞的比例和数量。结果与野生型(WT)小鼠相比,miR-191过表达转基因TgmiR-191小鼠NK细胞的凋亡率及其对小鼠淋巴细胞瘤细胞RMA-S的特异性杀伤活性均显著降低。miR-191过表达可显著增加脾脏和淋巴结的NK细胞数量。结论 miR-191过表达对NK细胞的肿瘤杀伤活性和细胞凋亡有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 自然杀伤细胞 miR-191 肿瘤杀伤活性 凋亡
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Expression of Anti-CD4 Human/Murine Chimeric Antibody and Their Killer Tumor Activity
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作者 沈关心 朱志刚 +3 位作者 朱慧芬 邵静芳 王晓林 熊伟 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 1998年第1期1-4,共4页
From the mouse hybridoma cell line secreting an anti-CD4 monoclonal antibody (McAb), total RNA was prepared. The VH and VL genes were amplified by RT-PCR with family specific primer pairs. The PCR products were cloned... From the mouse hybridoma cell line secreting an anti-CD4 monoclonal antibody (McAb), total RNA was prepared. The VH and VL genes were amplified by RT-PCR with family specific primer pairs. The PCR products were cloned into pGEM-T vectors, then tranfected into JM109. The VH and VL genes were snalyzed by automatic DNA sequencer. According to Kabat classification, the VH and VL genes belong to the mouse ig heavy subgroup Ⅱ(A) and x chain subgroupⅢ, respectively. The VH and VL genes were subcloned into pr1-Expr and Pk Expr respectively, then transfected into XL2-Blue. The VH- Pr1 and VL- pk were trans feeted by electroporation into mouse myeloma cell X63Ag8. 653. The transfectoma cells were selected by G418 screening, and then supernatant of cultured transfectoma were analyzed by ELISA and immunofluorescence techniques.We have acquired transfectoma cells secreting anti-CD4 chimeric antibodies.These chimeric antibodies are able to kill tumor cells specifically in vitro. 展开更多
关键词 anti-CD4 monoclonal antibody chimeric antibodys tumor-killing activity
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重组人GM-CSF单纯疱疹病毒注射液(OrienX010)肿瘤细胞杀伤活性检测方法的优化
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作者 孙冬梅 王艳辉 +3 位作者 王立谦 赵凤颖 马艳秋 王宁 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期2101-2109,共9页
目的:优化重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)单纯疱疹病毒注射液(OrienX010)对肿瘤细胞人乳腺癌细胞(michigan cancer foundation-7,MCF-7)的杀伤活性检测方法。方法:在不... 目的:优化重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)单纯疱疹病毒注射液(OrienX010)对肿瘤细胞人乳腺癌细胞(michigan cancer foundation-7,MCF-7)的杀伤活性检测方法。方法:在不同时间加入不同浓度的活性氧(reactive oxygen species,ROS)抑制剂/ROS清除剂,确定对试验影响最小,且能有效去除活性氧的条件。对优化后的方法进行精密度和适用性验证。分别采用优化前、后的方法对同一批号OrienX010样品进行3次肿瘤细胞杀伤活性检测,确定优化前、后方法是否有统计学差异。用不同代次的MCF-7细胞进行试验来确定细胞可使用代次。结果:在加入CCK-8(Cell Counting Kit-8)试剂前30 min左右,每孔加入50倍稀释的ROS抑制剂/ROS清除剂10μL为最佳条件。同一试验人员于同1 d 6次测定OrienX010的杀伤活性感染复数(multiplicity of infection,MOI)半数有效量(median effective dose,ED_(50))的RSD为15.1%,符合可接受标准;2名实验人员于不同日每人重复测定6次OrienX010的MOI ED_(50)的RSD为20.5%,符合可接受标准。对多批次的OrienX010进行肿瘤细胞杀伤活性检测,检测结果均符合质量标准。采用优化前、后的方法对同一批号OrienX010样品进行3次肿瘤细胞杀伤活性检测,t Stat>t双尾临界值,说明优化前、后2组数据的平均值有显著性差异。MCF-7细胞检测到P 39,检测结果均合格且稳定。结论:优化后的方法有效消除了ROS对肿瘤细胞杀伤活性检测的影响,该方法具有良好的精密度及适用性,可用于重组人GM-CSF单纯疱疹病毒注射液(OrienX010)的肿瘤细胞杀伤活性检测;优化前、后的方法有统计学差异;MCF-7细胞可使用到P 39。 展开更多
关键词 优化 OrienX010 人乳腺癌细胞(MCF-7细胞) 活性氧 肿瘤细胞杀伤活性 CCK-8
原文传递
硒酸酯多糖增强荷瘤小鼠免疫功能和自身肿瘤杀伤活性的作用 被引量:2
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作者 魏虎来 赵怀顺 贾正平 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1997年第4期281-283,共3页
本文研究了硒酸酯多糖(KSC)对荷S180肉瘤小鼠NK细胞活性、LAK细胞活性、IL-2分泌能力和自身肿瘤杀伤活性(ATK)的影响及抑癌效应.结果表明,KSC(40mg/kg·d×9d,ig)能增强荷瘤鼠NK细胞和LAK细胞活性,促进脾细胞产生IL-2,增强ATK活... 本文研究了硒酸酯多糖(KSC)对荷S180肉瘤小鼠NK细胞活性、LAK细胞活性、IL-2分泌能力和自身肿瘤杀伤活性(ATK)的影响及抑癌效应.结果表明,KSC(40mg/kg·d×9d,ig)能增强荷瘤鼠NK细胞和LAK细胞活性,促进脾细胞产生IL-2,增强ATK活性;加强环磷酰胺(Cy,20mg/kg·d×9d,ip)的抑瘤作用,并能拮抗Cy对免疫活性细胞的抑制效应.体外用rIL-2激活荷瘤鼠脾淋巴细胞可诱生或增强ATK活性.本研究结果提示,KSC上调肿瘤宿主NK细胞和LAK细胞活性及IL-2的分泌水平,增强ATK活性,可作为生物反应调节剂(BRM)应用于肿瘤生物治疗. 展开更多
关键词 硒酸酯多糖 NK细胞 LAK细胞 S180肉瘤 生物疗法
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AUGMENTATION OF IMMUNE FUNCTIONS AND AUTOLOGOUS TUMOR-KILLING ACTIVITY BY KAPPA-SELENOCARRAGEENAN IN MICE BEARING SARCOMA 180 被引量:1
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作者 魏虎来 贾正平 赵怀顺 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 1998年第3期40-43,共4页
Objective: To study the enhancement of the immune functions and autologous tumor killing (ATK) activity by kappa selenocarrageenan (KSC) in mice bearing sarcoma 180. Methods: To measure the effects of KSC and/or Cy... Objective: To study the enhancement of the immune functions and autologous tumor killing (ATK) activity by kappa selenocarrageenan (KSC) in mice bearing sarcoma 180. Methods: To measure the effects of KSC and/or Cyclophosphamide (Cy) on natural killer (NK) activity, lymphokine activated killer (LAK) activity, the produc tion of interleukin 2 (IL 2), ATK activity and the growth of sarcoma 180 (S 180 ). Results: KSC promoted NK activity, LAK activity and ATK activity in vivo , increased IL 2 production at 40 mg/kg/d×9d. It also enhanced the antitumor action of Cy (20 mg/kg/d×9d) and offset the inhibition of Cy on immunocopetent cells. The ATK activity in splenocytes of S 180 bearing mice could be induced and increased by recombinant interleukin 2 (rIL 2) in vitro . Conclusion: KSC has an up regulating effect on the immune functions and ATK activity in tumor bearing mice. It can be used as a biological response modifier (BRM) in cancer biotherapy. 展开更多
关键词 Kappa selenocarrageenan Cyclophospha mide Natural killer cells Lymphokine activated killer cells Interleukin 2 Autologous tumor killing activity Sarcoma 180.
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冷冻保存对NK细胞活率及其肿瘤杀伤效果的影响 被引量:1
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作者 刘春香 张怡(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第24期3010-3014,共5页
目的:对比新鲜及冻存复苏的NK细胞的存活率及肿瘤杀伤效果,以便评价冻存的同种异体NK细胞作为即用型产品应用于临床治疗的可行性。方法:利用台盼蓝染色法对冻存前、冻存3个月复苏后及复苏后4℃存放24 h时NK细胞进行存活率检测;通过ELIS... 目的:对比新鲜及冻存复苏的NK细胞的存活率及肿瘤杀伤效果,以便评价冻存的同种异体NK细胞作为即用型产品应用于临床治疗的可行性。方法:利用台盼蓝染色法对冻存前、冻存3个月复苏后及复苏后4℃存放24 h时NK细胞进行存活率检测;通过ELISA方法对冻存前后NK细胞IFN-γ表达量检测;利用流式细胞术对其表面活化性受体表达情况进行检测的同时利用RTCA S16系统检测其对A549肿瘤细胞的杀伤作用。结果:冻存复苏后细胞活率为(92.17±1.37)%,复苏后4℃保存24 h后仍为(79.97±1.22)%;新鲜NK和冻存NK细胞的IFN-γ分泌量分别为(5967.0±517.8)pg/ml和(4861.0±941.4)pg/ml,二者未见显著性差异(P>0.05),同时,NK细胞冻存后受体NCR2及NKG2D较冻存前均未有明显下降;对A549细胞的杀伤作用中,效靶比(E∶T)为10∶1和5∶1时,冻存复苏NK的杀伤效果与新鲜培养NK细胞无显著性差异,仅在高效靶比(E∶T=20∶1)时冻存NK杀伤作用低于新鲜NK的杀伤作用(P<0.05)。结论:经过对比研究表明,冷冻保存的NK细胞满足临床应用所要求的活率和高效杀伤肿瘤细胞能力,可以发展成为即用型细胞药物,具有广泛的临床应用前景。 展开更多
关键词 新鲜NK 冻存NK 细胞活率 肿瘤杀伤活性
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