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家畜伊氏锥虫弱毒株免疫家兔抗体的消长规律及保护作用 被引量：8
1
作者 陈启军 刘俊华 《兽医大学学报》 CSCD 1990年第3期243-245,共3页
以家畜伊氏锥虫弱毒株免疫家兔12只,然后进行攻虫试验。其中11只被保护,1只发病死亡。以BA-ELISA检测家兔免疫后及攻虫后特异性IgG、IgM的变化,发现免疫后IgG、IgM均于第21d达到峰值;攻虫后IgM于第6d达到峰值,IgG于第9d达到峰值。攻虫后... 以家畜伊氏锥虫弱毒株免疫家兔12只,然后进行攻虫试验。其中11只被保护,1只发病死亡。以BA-ELISA检测家兔免疫后及攻虫后特异性IgG、IgM的变化,发现免疫后IgG、IgM均于第21d达到峰值;攻虫后IgM于第6d达到峰值,IgG于第9d达到峰值。攻虫后,随着免疫组家兔体内特异性IgG、IgM的不断上升,其血液内的锥虫也同时被清除。体外中和试验也表明,特异性抗体对锥虫的感染力具有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 家畜 伊氏锥虫 家兔 抗体 免疫
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伊氏锥虫抗原变异规律 被引量：6
2
作者 沈杰 《中国兽医寄生虫病》 2000年第2期52-54,共3页
国内外已有众多文章报道了伊氏锥虫表面抗原变异现象的特点 ,但均较零散 ,本文将这些报道进行分析综合 ,从中找出共同点 ,归纳出伊氏锥虫抗原变异的一些规律 ,计有伊氏锥虫抗原变异的频率、抗原变异的程序、变异体的数量、优势变异体和... 国内外已有众多文章报道了伊氏锥虫表面抗原变异现象的特点 ,但均较零散 ,本文将这些报道进行分析综合 ,从中找出共同点 ,归纳出伊氏锥虫抗原变异的一些规律 ,计有伊氏锥虫抗原变异的频率、抗原变异的程序、变异体的数量、优势变异体和非优势变异体 ,伊氏锥虫感染动物后第一次发生抗原变异的时间和特点等 ,作者并对尚需继续探索的有关规律性的研究内容也提出了看法。 展开更多
关键词 伊氏锥虫 抗原变异 规律 寄生虫
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体外培养伊氏锥虫变异抗原型的鉴定 被引量：6
3
作者 李国清 汪志楷 沈永林 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期86-90,共5页
用云南株伊氏锥虫克隆后体外培养，培养后于第１８～６０ｄ之间，每间隔一周通过免疫抑制鼠（ＣＹ鼠）克隆，建立了７个克隆群体（代号为０１８，０２５，０３２，０３９，０４６，０５３，０６０），并将其分别与７种克隆特异性抗血清... 用云南株伊氏锥虫克隆后体外培养，培养后于第１８～６０ｄ之间，每间隔一周通过免疫抑制鼠（ＣＹ鼠）克隆，建立了７个克隆群体（代号为０１８，０２５，０３２，０３９，０４６，０５３，０６０），并将其分别与７种克隆特异性抗血清（ＡＳ０１８～０６０）进行免疫溶解和中和试验。结果如下：①０１８和０２５能被ＡＳ０１８和ＡＳ０２５所溶解或中和；②０３２，０３９，０４６，０５３能被ＡＳ０３２，ＡＳ０３９，ＡＳ０４６，ＡＳ０５３所溶解或中和；③０６０只能被ＡＳ０６０所溶解或中和。根据上述结果，将７个克隆群体鉴定为３种变异抗原型（ＶＡＴ），按国际ＶＡＴ命名法，分别命名为ＹｕＴａｔ１·１，ＹｕＴａｔ１·２和ＹｕＴａｔ１·３。又以针对３个ＶＡＴ的抗血清ＡＳ０２５，ＡＳ０３９和ＡＳ０６０与超低温保存的、培养不同天数的克隆前群体进行免疫溶解试验，结果表明；体外培养的伊氏锥虫由混合的ＶＡＴ所组成，随着培养时间的不同，不同ＶＡＴ的比例发生改变。 展开更多
关键词 伊氏锥虫 变异抗原型 体外培养 克隆 鉴定
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伊氏锥虫同工酶、蛋白质和抗原组分的比较研究 被引量：5
4
作者 王云飞 沈杰 郑韧坚 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第5期463-468,共6页
本文采用生化技术对八个中国伊氏锥虫株及一个布氏锥虫株的同工酶、蛋白质和抗原组分进行比较研究。根据同工酶电泳结果,可将伊氏锥虫和与其形态上不能区分的布氏锥虫区别开来,亦可将伊氏锥虫分为两个酶株群(Z1、Z2)。根据SDS-聚丙烯酰... 本文采用生化技术对八个中国伊氏锥虫株及一个布氏锥虫株的同工酶、蛋白质和抗原组分进行比较研究。根据同工酶电泳结果,可将伊氏锥虫和与其形态上不能区分的布氏锥虫区别开来,亦可将伊氏锥虫分为两个酶株群(Z1、Z2)。根据SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦电泳和免疫印迹试验的结果,可将酶株群Z1分成五个不同多肽群(株)。本研究结果表明,中国伊氏锥虫遗传变异程度较低,是一个相对稳定的种群。 展开更多
关键词 同功酶 伊氏锥虫 蛋白 抗原
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伊氏锥虫体外培养株的建立及其HGPRT活性测定 被引量：6
5
作者 王祥生 孙恩贵 +4 位作者 刘小芳 杨发青 谢超 董文其 顾为望 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期39-44,共6页
用带虫培养法和带虫传代法建立了伊氏锥虫体外培养株，无论有、无饲养细胞，虫体均能快速增殖。培养７０ｄ以上，虫体仍保持原有生物学特性，对小鼠有感染性，活力旺盛，在体外能连续培养传代。虫数最高达２．４８×１０６／ｍＬ，... 用带虫培养法和带虫传代法建立了伊氏锥虫体外培养株，无论有、无饲养细胞，虫体均能快速增殖。培养７０ｄ以上，虫体仍保持原有生物学特性，对小鼠有感染性，活力旺盛，在体外能连续培养传代。虫数最高达２．４８×１０６／ｍＬ，群体增倍时间为８．８６～１０．８ｈ。液氮保存、复苏后的虫体可在饲养细胞上立即增殖。培养中发现由巨噬细胞转化的巨核母细胞对虫体生长有促进作用，经胰酶消化能与虫体一道连续传代。通过ＨＡＴ选择性培养液测定，伊氏锥虫对氨基喋呤不敏感，试验组虫体与对照一样生长良好，证明伊氏锥虫具有次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转化酶（ＨＧＰＲＴ） 展开更多
关键词 伊氏锥虫 体外培养 巨核母细胞 HGPRT
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同一克隆两个不同变异体的伊氏锥虫在兔体内抗原变异研究 被引量：4
6
作者 王权 沈杰 +1 位作者 周勇志 周金林 《中国兽医寄生虫病》 2000年第1期4-7,共4页
为了解伊氏锥虫在兔体内感染后期抗原变异的情况及比较同一克隆不同变异体锥虫在兔体内抗原变异情况,用伊氏锥虫安徽株单虫克隆ShTat1.2感染兔,在兔体30天中每隔3天及感染后51、54、57天(兔58天死亡)分离兔血中锥虫并克隆,获得13个克隆... 为了解伊氏锥虫在兔体内感染后期抗原变异的情况及比较同一克隆不同变异体锥虫在兔体内抗原变异情况,用伊氏锥虫安徽株单虫克隆ShTat1.2感染兔,在兔体30天中每隔3天及感染后51、54、57天(兔58天死亡)分离兔血中锥虫并克隆,获得13个克隆锥虫群体,经间接免疫荧光试验和ABC酶标记试验鉴定为10个抗原性互不相同的抗原变异体(VariableAntigenType,VAT),其中早期(感染锥虫30天内)9个,后期1个;早期锥虫一般3天发生1次抗原变异,后期7天内无变异。用同样的血清学方法检测,得知ShTat1.2锥虫感染早期的VATS中的6个与ShTat1.1锥虫在同种动物体内同期获得的VATS相同,但VATS出现次序不同。结果表明伊氏锥虫感染早期比感染后期抗原变异频繁,同一克隆锥虫不同变异体在兔体内变异次序不相同。 展开更多
关键词 伊氏锥虫 克隆 抗原变异 抗原变异体 兔
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水牛伊氏锥虫病免疫胶体金试纸条的研制及初步应用 被引量：6
7
作者 孟盟 曹池 +4 位作者 陈汉忠 刘明如 王华俊 奉彬 陈国宝 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期988-993,共6页
为建立一种快速、简便、适应现场应用的水牛伊氏锥虫病诊断方法,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗伊氏锥虫VSG抗原的OB6单克隆抗体,在硝酸纤维素膜上包被纯化的抗伊氏锥虫VSG抗原的TB7单克隆抗体和兔抗小鼠IgG,作为检... 为建立一种快速、简便、适应现场应用的水牛伊氏锥虫病诊断方法,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗伊氏锥虫VSG抗原的OB6单克隆抗体,在硝酸纤维素膜上包被纯化的抗伊氏锥虫VSG抗原的TB7单克隆抗体和兔抗小鼠IgG,作为检测带和质控带,然后优化条件,研制成检测伊氏锥虫病的免疫胶体金试纸条。通过交叉试验表明该试纸条与衣原体、弓形虫、旋毛虫、巴贝斯焦虫和大片吸虫无交叉反应。该试纸条最低可以检出1∶3 200倍稀释的伊氏锥虫VSG抗原(浓度为3.11mg.mL-1)。应用该试纸条对230份水牛血清样本进行初步检测,同时用ELISA做平行试验,阳性符合率为88.2%。结果证明该试纸条是一种快速、灵敏、特异的水牛伊氏锥虫病的检测方法,为水牛伊氏锥虫病的现场检测诊断和预控提供了有效的方法。 展开更多
关键词 伊氏锥虫病 单克隆抗体 胶体金 试纸条
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应用质粒PTK探针鉴定锥虫的初步研究 被引量：3
8
作者 郑韧坚 王云飞 +2 位作者 沈杰 王爱华 周勇志 《中国兽医寄生虫病》 1993年第1期1-4,共4页
用^(32)P标记质粒探针PTK_1、PTK_(1.1)和PTK_(1·2),对12株中国伊氏锥虫的斑点杂交试验显示,3个探针均能与8株具有正常动基体的伊氏锥虫杂交,而不与其余4株异常动基体伊氏锥虫杂交,对正常动基体株的敏感度为10~2虫体。探针PTK_1亦... 用^(32)P标记质粒探针PTK_1、PTK_(1.1)和PTK_(1·2),对12株中国伊氏锥虫的斑点杂交试验显示,3个探针均能与8株具有正常动基体的伊氏锥虫杂交,而不与其余4株异常动基体伊氏锥虫杂交,对正常动基体株的敏感度为10~2虫体。探针PTK_1亦能与马媾疫锥虫杂交,敏感度为10~2个虫体。但PTK_1与布氏锥虫仅发生微弱的杂交反应,敏感度为10~5个虫体。试验表明伊氏锥虫株之间的kDNA微环是同源的,伊氏锥虫与马媾疫锥虫和布氏锥虫的kDNA微环存在着共同序列。 展开更多
关键词 质粒探针 鉴定 伊氏锥虫 马媾疫锥虫 布氏锥虫 斑点杂交法
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伊氏锥虫病的诊断及防控研究现状
9
作者 陈永艳 杜承 王晓钧 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1571-1578,共8页
伊氏锥虫病是由锥虫属的伊氏锥虫(Trypanosoma evansi,T.evansi)感染哺乳动物引起的一种血液原虫病,也称“苏拉”,广泛分布于全球。我国农业农村部将伊氏锥虫病归为多种动物共患的三类动物疫病,其可造成马属动物、骆驼、水牛等的贫血、... 伊氏锥虫病是由锥虫属的伊氏锥虫(Trypanosoma evansi,T.evansi)感染哺乳动物引起的一种血液原虫病,也称“苏拉”,广泛分布于全球。我国农业农村部将伊氏锥虫病归为多种动物共患的三类动物疫病,其可造成马属动物、骆驼、水牛等的贫血、消瘦、甚至死亡,对畜牧业造成了巨大的经济损失。此外,T.evansi可能还具有人畜共患的潜力,因此对其进行准确诊断至关重要。但由于锥虫亚属间亲缘关系密切,并且存在抗原变异和免疫逃逸,导致T.evansi的鉴别诊断十分困难。本文对伊氏锥虫病的病原学、免疫机制、鉴别诊断和防控现状等方面进行综述,旨在为其鉴别诊断和防治提供科学的参考依据。 展开更多
关键词 T.evansi 免疫逃逸 检测技术 分离培养 疫苗进展
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牛羊四种寄生虫病联合诊治技术的研究与应用 被引量：5
10
作者 张雪娟 孙仁寅 +6 位作者 刘恩勇 毛光琼 冯尚连 朱家新 阳爱国 宋灿明 彭又新 《浙江农业学报》 CSCD 2000年第4期183-186,共4页
首次建立的酶标SPADot ELISA联检牛羊血矛线虫、血吸虫、伊氏锥虫和肝片吸虫病技术(简称四联 ) ,已在浙江、湖北、四川、安徽等省 6 2个县市试用 56万余头 ,据 50个县市对其中 194 90头份与酶标SPADot ELISA检测牛羊血吸虫、伊氏锥虫和... 首次建立的酶标SPADot ELISA联检牛羊血矛线虫、血吸虫、伊氏锥虫和肝片吸虫病技术(简称四联 ) ,已在浙江、湖北、四川、安徽等省 6 2个县市试用 56万余头 ,据 50个县市对其中 194 90头份与酶标SPADot ELISA检测牛羊血吸虫、伊氏锥虫和肝片吸虫病技术 (简称三联 )进行比较结果表明 ,四联与三联法 ,其血吸虫病、伊氏锥虫病和肝片吸虫病阳性符合率依次达 99.13% ,99.0 5%和 99.2 1%。同时 ,对四联法血清学阳性的 4 6 6 0头份与查病原体法进行比较结果 ,血矛线虫病、血吸虫病、伊氏锥虫病和肝片吸虫病阳性符合率分别为 97.59% ,99.2 8% ,95.17%和 98.10 %。对查出血清学阳性的牛羊用研配的广谱、高效、系列抗虫剂进行防治。据不完全统计 ,牛羊经防治 ,其血矛线虫病、血吸虫病、伊氏锥虫病和肝片吸虫病阳性率分别由 1998年的 13.5%～ 37.9% ,0 .3%～ 34.0 % ,9.4 %～ 55.2 %和 17.2 %～ 6 9.6 % ,依次降至 1999年的 0 .9%～ 6 .7% ,0 %～ 6 .1% ,3 0 %～ 10 .7%和 4 .3%～ 13.1% ,分别下降 12 .6～ 31.2个 ,0 .3～ 2 7.9个 ,6 .4～ 4 4 .5个和 13.0～ 56 .5个百分点 ; 展开更多
关键词 寄生虫病 血吸虫病 联合诊断 联合防治 牛 羊
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二重PCR快速检测牛伊氏锥虫和牛巴贝斯虫的研究 被引量：5
11
作者 石云良 黄维义 +4 位作者 张为宇 韦家周 张诗新 韦志坚 张宇 《广西农业科学》 CAS CSCD 2010年第2期163-166,共4页
根据伊氏锥虫ITS序列(FJ416612)和GenBank报道的牛巴贝斯虫棒状结合蛋白1序列(FJ588013),设计合成2对特异性诊断引物,建立了牛伊氏锥虫和牛巴贝斯虫的二重PCR诊断方法。结果表明,建立的二重PCR诊断方法可扩增出牛伊氏锥虫和牛巴贝斯虫... 根据伊氏锥虫ITS序列(FJ416612)和GenBank报道的牛巴贝斯虫棒状结合蛋白1序列(FJ588013),设计合成2对特异性诊断引物,建立了牛伊氏锥虫和牛巴贝斯虫的二重PCR诊断方法。结果表明,建立的二重PCR诊断方法可扩增出牛伊氏锥虫和牛巴贝斯虫的特异性条带,大小分别为213bp和360bp,最低检出量分别为4.00pg和0.38pg。但对牛双芽巴贝斯虫、分歧巴贝斯虫、环形泰勒虫、附红细胞体、巴氏杆菌不敏感。用该二重PCR方法对95份水牛样品和134份奶牛样品进行检测,结果发现,水牛伊氏锥虫的感染率为13.7%(13/95)、牛巴贝斯虫的感染率为7.4%(7/95),无混合感染;奶牛伊氏锥虫的感染率为3.7%(5/134)、牛巴贝斯虫的感染率为0(0/134)。说明该二重PCR方法具有敏感、快速、特异的特点,适用于牛伊氏锥虫和牛巴贝斯虫的流行病学调查。 展开更多
关键词 二重PCR 牛伊氏锥虫 牛巴贝斯虫 快速检测
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伊氏锥虫TR酶的初步研究 被引量：5
12
作者 钟淑梅 郑韧坚 +2 位作者 沈杰 周勇志 王云飞 《中国兽医寄生虫病》 CAS 1997年第2期9-11,共3页
国外研究者已报道在布氏锥虫、枯氏锥虫、刚果锥虫中发现了存在TR酶，此酶是锥虫代谢的重要酶之一。伊氏锥虫TR酶研究尚属空白。本研究目的是为了确定伊氏锥虫中是否存在TR酶。我们利用分光光度法测出了伊氏锥虫中有TR酶活性，但无GR酶... 国外研究者已报道在布氏锥虫、枯氏锥虫、刚果锥虫中发现了存在TR酶，此酶是锥虫代谢的重要酶之一。伊氏锥虫TR酶研究尚属空白。本研究目的是为了确定伊氏锥虫中是否存在TR酶。我们利用分光光度法测出了伊氏锥虫中有TR酶活性，但无GR酶活性；测出了TR酶的Km值和Vm值；发现了治疗锥虫药物安锥赛和盐酸锥双净对TR酶有抑制作用，抑制率分别达28％和31％；比较了七林中国伊氏锥虫和布氏锥虫每毫克蛋白中TR酶活力，其中安徽株活力最强。所以中国伊氏锥虫中存在着TR酶。 展开更多
关键词 伊氏锥虫 TR酶 家畜 防治
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直接PCR法检测血液中伊氏锥虫感染 被引量：5
13
作者 陆绍红 陈睿 +2 位作者 楼涤 张乐 张雪娟 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2006年第4期204-207,共4页
为建立伊氏锥虫动基体DNA(KinetoplastDNA,kDNA)的PCR扩增技术,血液直接PCR法检测伊氏锥虫的感染,本文以伊氏锥虫kDNA片段为靶扩增DNA设计引物,确定最适PCR反应条件,建立kDNA片段的PCR扩增技术,应用直接扩增缓冲液(Ampdirect)从感染小... 为建立伊氏锥虫动基体DNA(KinetoplastDNA,kDNA)的PCR扩增技术,血液直接PCR法检测伊氏锥虫的感染,本文以伊氏锥虫kDNA片段为靶扩增DNA设计引物,确定最适PCR反应条件,建立kDNA片段的PCR扩增技术,应用直接扩增缓冲液(Ampdirect)从感染小鼠的滤纸血标本直接PCR检测伊氏锥虫。结果发现,PCR扩增伊氏锥虫kDNA片段分子量为364bp,能检测的最小DNA量是0·06pg,与布氏锥虫、活动锥虫没有交叉反应。应用直接扩增缓冲液不需进行样本的DNA抽提,直接PCR能检测感染小鼠的早期滤纸血样本,敏感性高于镜检法。本实验建立的直接PCR法检测伊氏锥虫具有较高的敏感性和特异性,方法快捷,可进一步应用于伊氏锥虫病的早期诊断以及现场调查。 展开更多
关键词 伊氏锥虫 直接PCR 动基体DNA(kDNA) 血液
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伊氏锥虫和布氏锥虫动基体DNA酶切电泳比较 被引量：3
14
作者 郑韧坚 王云飞 +2 位作者 沈杰 周勇志 钟淑梅 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 1995年第7期9-10,共2页
限制性内切酶ＭｂｏＩ、ＤｄｅＩ、ＨｉｎｆＩ和ＴａｑＩ对市氏锥虫ＫＤＮＡ进行酶切后，电泳中均显示出多条ＤＮＡ区带，其总Ｋｂ数约等于２０ｋｂ，内各限制酶对伊氏锥虫ＫＤＮＡ消化后均显示出１至２条区带，总和约１ｋｂ，明显区别... 限制性内切酶ＭｂｏＩ、ＤｄｅＩ、ＨｉｎｆＩ和ＴａｑＩ对市氏锥虫ＫＤＮＡ进行酶切后，电泳中均显示出多条ＤＮＡ区带，其总Ｋｂ数约等于２０ｋｂ，内各限制酶对伊氏锥虫ＫＤＮＡ消化后均显示出１至２条区带，总和约１ｋｂ，明显区别于布氏锥虫。 展开更多
关键词 伊氏锥虫 布氏锥虫 限制性内切酶 动基体
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伊氏锥虫感染的昆明小鼠血常规变化和病理组织学观察
15
作者 甘露 诺明达来 +3 位作者 郑会珍 金敏 李永畅 巴音查汗 《动物医学进展》 北大核心 2024年第2期79-83,共5页
为了解伊氏锥虫感染昆明小鼠的血常规和病理组织学变化,人工感染昆明小鼠、制作血液涂片、检测血常规、分子生物学(PCR)鉴定、病理组织切片,结果显示伊氏锥虫对小鼠具有较高的致病性,随着感染天数的增加,白细胞(WBC)、中性粒细胞计数(N... 为了解伊氏锥虫感染昆明小鼠的血常规和病理组织学变化,人工感染昆明小鼠、制作血液涂片、检测血常规、分子生物学(PCR)鉴定、病理组织切片,结果显示伊氏锥虫对小鼠具有较高的致病性,随着感染天数的增加,白细胞(WBC)、中性粒细胞计数(NEU)、红细胞压积(HCT)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)、血小板计数(PLT)值逐渐降低,淋巴细胞百分数(LYM%)、红细胞平均体积(MCV)、红细胞分布宽度的标准差(RDWR-SD)、血小板平均容积(MPV)值在死亡时明显升高,健康小鼠血常规正常。对比试验和对照小鼠各器官大小,感染小鼠脾脏、肝脏,心脏均明显变大,肺脏及肾脏变化较小。PCR鉴定在799 bp处出现目的条带,与预期片段大小相符。病理组织学观察,试验小鼠脾脏淤血,髓质间可见大量红细胞,出现较多形态改变的淋巴滤泡;肝脏中央静脉、小叶间静脉淤血,肝细胞肿胀,肝窦间隙变窄;肺脏肺泡肿胀较明显,肺泡壁增宽,支气管出现纤维化,间质可见炎症细胞;心脏中心肌纤维稍肿胀,颗粒变性,颜色加深,并伴有较多的伊氏锥虫虫体;肾小囊间隙变窄,肾小管上皮细胞肿胀,管腔变窄;对照组小鼠均未出现病理变化。研究结果可为伊氏锥虫病的诊断与预防提供理论依据。 展开更多
关键词 伊氏锥虫 昆明小鼠 病理切片 血常规
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伊氏锥虫伊犁株扩繁及其PFR基因克隆表达和生物信息学分析 被引量：3
16
作者 甘露 郑会珍 +6 位作者 诺明达来 刘燕 金敏 何文文 温丽翠 李永畅 巴音查汗·盖力克 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期469-478,共10页
【目的】本研究旨在研究锥虫入侵宿主细胞的机制并为其检测方法的建立奠定基础。【方法】采用已分离保存的伊氏锥虫在昆明白小鼠体内进行培养繁殖,对其鞭毛束旁棒(PFR)基因进行克隆,并构建系统发育树。通过生物信息学方法分析和预测PFR... 【目的】本研究旨在研究锥虫入侵宿主细胞的机制并为其检测方法的建立奠定基础。【方法】采用已分离保存的伊氏锥虫在昆明白小鼠体内进行培养繁殖,对其鞭毛束旁棒(PFR)基因进行克隆,并构建系统发育树。通过生物信息学方法分析和预测PFR蛋白的理化特性、亲疏水性、跨膜区结构、二级结构和三级结构;构建原核表达载体pET28a-PFR,用Western blotting检测PFR重组蛋白的反应原性。【结果】在昆明白小鼠体内成功扩繁伊氏锥虫伊犁株,第5天染虫率达到最高;PFR基因PCR扩增片段大小为834 bp,与冈比亚布氏锥虫PFR基因(XP_011775815.1)相似性为99.52%,基于PFR蛋白氨基酸序列的进化树显示,该虫株与冈比亚布氏锥虫的亲缘关系也最近。PFR蛋白分子式为C_(1416)H_(2286)N_(416)O_(442)S_(11),理论等电点为5.74,是一种碱性、亲水性及不稳定蛋白,没有跨膜区和信号肽,有10个潜在抗原表位;主要定位于细胞质中;PFR蛋白二级结构主要由α-螺旋组成(占92.34%),三级结构与二级结构一致。成功构建伊氏锥虫PFR基因表达质粒pET28a-PFR,经诱导时间、温度和IPTG浓度等条件优化后发现,浓度为1 mmol/L IPTG于37℃诱导重组菌液6 h时,PFR蛋白表达量最高,并且以包涵体的形式表达;Western blotting结果显示,重组蛋白与伊氏锥虫阳性血清反应为阳性。【结论】本试验成功在昆明白小鼠体内扩繁出伊氏锥虫,克隆了马伊氏锥虫PFR基因,构建了PFR原核表达载体,诱导表达出PFR重组蛋白,该蛋白具有良好的反应原性,为后续该蛋白功能和马伊氏锥虫的致病相关机制研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 伊氏锥虫 鞭毛束旁棒(PFR) 原核表达 遗传进化 生物信息学分析
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新疆边境地区马、驼锥虫病流行病学调查 被引量：4
17
作者 刘志强 郭会玲 +4 位作者 金映红 薛晶 阿布都 吉恩斯 努尔.库尔玛那里 《草食家畜》 2019年第1期60-64,共5页
为了解中哈边境地区马、骆驼感染伊氏锥虫病流行情况,本试验用哈萨克斯坦国立农业大学研发的伊氏锥虫病检测试剂盒(补体结合试验CF)与现场全血接种小白鼠试验相结合,对中哈边境地区伊犁州昭苏县、阿勒泰地区吉木乃县和塔城地区裕民县10... 为了解中哈边境地区马、骆驼感染伊氏锥虫病流行情况,本试验用哈萨克斯坦国立农业大学研发的伊氏锥虫病检测试剂盒(补体结合试验CF)与现场全血接种小白鼠试验相结合,对中哈边境地区伊犁州昭苏县、阿勒泰地区吉木乃县和塔城地区裕民县10个乡的马、骆驼采集血样(n=512),疑似病症的骆驼全血接种试验动物小白鼠。伊氏锥虫病检测试剂盒(补体结合试验CF)检测结果显示,马匹的阳性率3.96%(16/404),驼的阳性率4.62%(5/108)。接种小白鼠9 d后发病,尾尖采血镜检可看大量虫体;本试验为新疆与哈萨克斯坦边境地区伊氏锥虫病流行病学基础资料提供参考。 展开更多
关键词 伊氏锥虫病 检测试剂盒(补体结合试验CF) 流行病学调查
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新疆部分养马区域马匹血源性和虻源性伊氏锥虫PCR检测
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作者 金敏 甘露 +5 位作者 杨敏 普浩 马爱军 石文玉 刘诗语 巴音查汗·盖力克 《动物医学进展》 北大核心 2024年第10期119-122,共4页
为了解新疆部分养马区域马伊氏锥虫感染情况,保障当地马伊氏锥虫病的综合防控和马产业的健康发展,论文采集了不同区域马体表吸血虻(n=157)、疑似血液样本(n=238)进行PCR检测,并将结果分析及防疫建议提供给马场。通过对虻的形态学鉴定及... 为了解新疆部分养马区域马伊氏锥虫感染情况,保障当地马伊氏锥虫病的综合防控和马产业的健康发展,论文采集了不同区域马体表吸血虻(n=157)、疑似血液样本(n=238)进行PCR检测,并将结果分析及防疫建议提供给马场。通过对虻的形态学鉴定及其特异性基因(COI)和携带病原ISG 65基因扩增、测序、同源性比对,鉴定和检测了采样区域放牧马体表吸血虻及其携带病原情况。结果显示,伊犁、阿勒泰、塔城等地马血源性伊氏锥虫PCR阳性率分别为29.6%(16/54)、12.8%(17/133)、19.6%(10/51);马虻鉴定为突额瘤虻,其虻源性伊氏锥虫PCR携带率为35%。研究结果表明马锥虫具有一定的感染率,对该病进行病原监测和综合防控十分重要。 展开更多
关键词 马 伊氏锥虫 PCR检测 虻
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伊氏锥虫抗原变异型及其优势代表变异体的分离鉴定 被引量：4
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作者 何木荣 王祥生 +3 位作者 陈汉忠 曾小飞 李晓栩 张居作 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期186-190,共5页
以连续克隆分离的方法,从1株水牛伊氏锥虫中分离到40个克隆群体,从中分离鉴定出18个抗原变异型。经间接免疫荧光试验检测,发现其中2个抗原变异型(即HbTat1.18和HbTat1.15)分别能与约80%和60%克隆群体的血清发生较强的阳性反应,初步确定... 以连续克隆分离的方法,从1株水牛伊氏锥虫中分离到40个克隆群体,从中分离鉴定出18个抗原变异型。经间接免疫荧光试验检测,发现其中2个抗原变异型(即HbTat1.18和HbTat1.15)分别能与约80%和60%克隆群体的血清发生较强的阳性反应,初步确定这2个抗原变异型为该虫株的优势代表变异体。这为伊氏锥虫免疫预防、免疫诊断、分子诊断以及遗传进化等的研究奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 伊氏锥虫 抗原 变异型 优势代表变异体
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伊氏锥虫HGPRT缺陷株驯化及生物学特性观察 被引量：2
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作者 王祥生 刘小芳 +4 位作者 刘俊华 赵文忠 刘全 董文其 曲利芝 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期156-160,共5页
为了获得伊氏锥虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转化酶（ＨＧＰＲＴ）缺陷株，用不同浓度的８－氮鸟嘌呤（８－ＡＧ）和８－ＡＧ加紫外线照射的方法，对伊氏锥虫体外培养株进行了为期６０～１０１ｄ诱导驯化。结果，以每毫升含８－ＡＧ４０μ... 为了获得伊氏锥虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转化酶（ＨＧＰＲＴ）缺陷株，用不同浓度的８－氮鸟嘌呤（８－ＡＧ）和８－ＡＧ加紫外线照射的方法，对伊氏锥虫体外培养株进行了为期６０～１０１ｄ诱导驯化。结果，以每毫升含８－ＡＧ４０μｇ的培养液培养驯化，再配合紫外线照射，以及以每毫升含８－ＡＧ６０μｇ的培养液培养驯化，均获得了伊氏锥虫ＨＧＰＲＴ缺陷株。试验表明，培养虫体经过２～３个死亡期后逐步进入适应期，虫数升高到（１．５～２．５）×１０６／ｍＬ，饲养细胞通常于２～５ｄ变黑、崩解，应适时更换。培养驯化的１３株克隆虫株，经６－巯基鸟嘌呤（６－ＴＧ）抗性测定，１０株存活。克隆株在３倍量氨基喋呤的ＨＡＴ选择性培养液中死亡。生物学试验表明，ＨＧＰＲＴ缺陷株在无ＨＴ的培养液中生长良好，对小鼠致病力有下隆的趋势，虫血症和小鼠死亡时间比对照组延长１倍多。抗体凝集试验表明，ＨＧＰＲＴ缺陷株未发生抗原变异现象。超微结构显示，ＨＧＰＲＴ缺陷株的动基体、核和核仁比对照组明显增大，核膜电子密度区也明显增宽。 展开更多
关键词 伊氏锥虫 HGPRT缺陷株 驯化 生物学特性
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