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cFLIP_L和cFLIP_S腺病毒载体的构建及其在心肌细胞中的表达 被引量：2
1
作者 刘滴 吴辉 +5 位作者 李云曌 杨俊 杨简 丁家望 范致星 张静 《解剖学杂志》 CAS 2019年第6期557-560,共4页
目的:构建并鉴定cFLIPL和cFLIPS重组质粒,并观察其在乳鼠心肌细胞中表达并检测转染效率.方法:利用基因合成技术获取cFLIPL和cFLIPS基因,分别连接pAd-CMV-GFPa1-IRES载体质粒,并转移至穿梭质粒pAd-cFLIPL和pAd-cFLIPS,经挑选、扩培后进... 目的:构建并鉴定cFLIPL和cFLIPS重组质粒,并观察其在乳鼠心肌细胞中表达并检测转染效率.方法:利用基因合成技术获取cFLIPL和cFLIPS基因,分别连接pAd-CMV-GFPa1-IRES载体质粒,并转移至穿梭质粒pAd-cFLIPL和pAd-cFLIPS,经挑选、扩培后进行酶切验证及测序鉴定、包装、扩增、纯化获得一定滴度的pAd-cFLIPL和pAd-cFLIPS,之后感染原代乳鼠心肌细胞,观察两者在心肌细胞中的荧光表达并用流式细胞仪检测转染效率.结果:酶切验证与理论值相符,测序鉴定结果与目的基因序列一致;pAd-cFLIPL和pAd-cFLIPS感染人胚肾293A细胞后可见大量绿色荧光蛋白表达和聚集,10 d后出现典型的细胞病变,腺病毒包装成功,并测得滴度均为1×10^9 pfu/ml;同时,在荧光显微镜下可见重组腺病毒感染可在乳鼠心肌细胞中稳定表达并发出绿色荧光,流式细胞仪检测结果显示其转染效率为90.30%±3.62%.结论:成功构建cFLIPL和cFLIPS重组腺病毒表达载体且证实其能安全、有效地感染乳鼠心肌细胞. 展开更多
关键词 白细胞介素1β转换酶抑制蛋白 腺病毒载体 质粒 转染 心肌细胞
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氯化钴对人eNOS基因启动子SP3替换改构体转录活性的影响 被引量：2
2
作者 龙宇天 邢飞跃 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期754-757,共4页
目的：构建改造的人血管内皮细胞一氧化氮合酶基因启动子，利用氯化钴诱导的人脐静脉血管内皮细胞-12缺氧模型研究其基因启动子活性变化。方法：含SP1替换SP3突变序列的引物通过PCR构建突变启动子pGL2-eNOS-repSP3载体，将已经构建好的p... 目的：构建改造的人血管内皮细胞一氧化氮合酶基因启动子，利用氯化钴诱导的人脐静脉血管内皮细胞-12缺氧模型研究其基因启动子活性变化。方法：含SP1替换SP3突变序列的引物通过PCR构建突变启动子pGL2-eNOS-repSP3载体，将已经构建好的pGL2-eNOS—repSP3载体和pGL2-eNOS分别转染HUVEC-12细胞，并以之前构建的SP1插入eNOS启动子改构体pGL2-eNOS—insSP1为阳性对照，通过双荧光素酶报告基因技术检测并比较不同浓度氯化钴刺激下eNOS启动子转录活性的变化。结果：成功构建了含SP1替换SP3突变序列的eNOS启动子改构体。氯化钴刺激后转染细胞，改构体eNOS启动子活性在一定范围内呈现随氯化钴剂量增加而升高的趋势；SP1替换SP3的eNOS启动子转录活性与SP1插入的eNOS启动子之间无显著差异。结论：pGL2-eNOS—rep—SP3和pGL2-eNOS—insSP1两种改造方法在转录活性上没有显著差别。 展开更多
关键词 一氧化氮合酶 转染 启动子 内皮细胞 氯化钴
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PEG化壳聚糖质粒纳米粒的制备及其转染的研究 被引量：1
3
作者 赵惠萍 边云飞 +4 位作者 高奋 何军华 马瑜 刘改珍 肖传实 《国际生物医学工程杂志》 CAS 北大核心 2009年第3期146-148,I0001,共4页
目的制备壳聚糖纳米粒并构建聚乙二醇（PEG）化壳聚糖质粒纳米粒，研究其对大鼠主动脉内皮细胞的转染能力及细胞毒性。方法采用离子交联法制备壳聚糖纳米粒，应用喷金扫描电子显微镜检测壳聚糖纳米粒粒径的分布与形态；通过静电吸附作... 目的制备壳聚糖纳米粒并构建聚乙二醇（PEG）化壳聚糖质粒纳米粒，研究其对大鼠主动脉内皮细胞的转染能力及细胞毒性。方法采用离子交联法制备壳聚糖纳米粒，应用喷金扫描电子显微镜检测壳聚糖纳米粒粒径的分布与形态；通过静电吸附作用连接上pGenesil-1质粒（报告基因）；对壳聚糖质粒纳米粒进行PEG化的修饰；应用PEG化壳聚糖质粒纳米粒转染大鼠主动脉内皮细胞；采用噻唑蓝（MTT）法测定壳聚糖纳米粒对细胞的毒性作用。结果喷金扫描电镜检测显示壳聚糖纳米粒呈均匀分散的球形颗粒，平均直径为5nm；PEG化壳聚糖质粒纳米粒能转染大鼠主动脉内皮细胞；MTT结果显示壳聚糖纳米粒对细胞无毒性作用；壳聚糖质粒纳米粒对内皮细胞的转染效率为26％，PEG修饰壳聚糖质粒纳米粒转染细胞，转染率为63．4％。结论对壳聚糖质粒纳米粒进行化学修饰不仅能提高其转染效率，且对细胞无毒性作用。 展开更多
关键词 壳聚糖 纳米粒 质粒 结合 转染
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鸡贫血病毒全长基因感染性分子克隆的构建
4
作者 李秀梅 江丽萍 +5 位作者 郭立力 李颖 朱雅宁 石瑜 杨爱华 陈荣荣 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第8期6-11,共6页
PCR法扩增鸡贫血病毒全长基因组,将2个全长基因组顺向连接插入到pBluescriptΠSK(+)质粒载体中,获得Psk2CAV质粒并转染MDCC-MSB1细胞,盲传4代后,用间接免疫荧光抗体试验(IFA)能检测到特异性荧光。将Psk2CAV质粒DNA于腿部肌肉接种10羽1日... PCR法扩增鸡贫血病毒全长基因组,将2个全长基因组顺向连接插入到pBluescriptΠSK(+)质粒载体中,获得Psk2CAV质粒并转染MDCC-MSB1细胞,盲传4代后,用间接免疫荧光抗体试验(IFA)能检测到特异性荧光。将Psk2CAV质粒DNA于腿部肌肉接种10羽1日龄CAV阴性SPF鸡。剖检结果显示,阳性对照组和Psk2CAV质粒组均有鸡只出现腿肌、胸肌轻微出血,胸腺出现萎缩或出血。组织病理学结果显示,阳性对照组和Psk2CAV质粒组胸腺小叶萎缩,出血、淤血,髓质部萎缩,淋巴细胞减少。通过PCR可以分别从体外感染MDCC-MSB1细胞和体内感染鸡只中扩增到病毒基因片段。本研究证明含有双拷贝CAV的重组质粒Psk2CAV在体内、外均具有感染性,能衍生出病毒,并产生符合自然感染CAV的大体病变和组织病理学变化。 展开更多
关键词 鸡贫血病毒 聚合酶链反应 感染性分子克隆 转染
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p21^(WAF1/CIP1)过表达对人肝癌细胞恶性表型和细胞凋亡的影响 被引量：9
5
作者 杨帆 王文亮 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期99-101,共3页
目的探讨ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１过表达对人肝癌细胞恶性表型和细胞凋亡的影响。方法用带有ｐ２１的真核表达载体ＰＣＥＰ，经基因转染，使其在有ｐ５３突变的人肝细胞癌细胞系（ＨＣＣ９２０４）中表达；通过流式细胞仪、透射电镜... 目的探讨ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１过表达对人肝癌细胞恶性表型和细胞凋亡的影响。方法用带有ｐ２１的真核表达载体ＰＣＥＰ，经基因转染，使其在有ｐ５３突变的人肝细胞癌细胞系（ＨＣＣ９２０４）中表达；通过流式细胞仪、透射电镜和ＤＮＡ电泳确定凋亡细胞。结果转基因后Ｇ１期细胞增加，并且在Ｇ１期前出现一凋亡峰，凋亡细胞占被检细胞总数的２２５％；电镜下可见部分细胞体积缩小，胞膜完整，有出芽现象，细胞器结构完整，致密的染色质边集于核膜内侧，呈明显的凋亡细胞的形态；琼脂糖凝胶电泳出现ＤＮＡ梯形条带。转染ｐ２１后，细胞的恶性表型发生了逆转，表现为细胞在软琼脂中克隆形成能力降低，ＢｒｄＵ掺入量Ａ值由对照组的１．３８±０．１１明显下降为０．７７±０．０６（Ｐ＜０．０５）。结论ＰＣＥＰｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１能够抑制肝癌细胞的生长及诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 肝肿瘤 基因转染 细胞凋亡
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nm23-H1基因稳定转染肺癌细胞的鉴定 被引量：5
6
作者 郑海霞 周清华 +3 位作者 申东兰 彭安 何艳玲 曹菊秀 《癌变．畸变．突变》 CAS CSCD 2011年第2期145-147,共3页
目的:通过稳定、高效、低毒的基因转染方法将nm23-H1基因导入该基因缺失的人肺大细胞癌株L9981,从基因及蛋白水平鉴定nm23-H1基因转染肺癌细胞的建立。方法:以JM109为宿主菌,转化质粒载体PCMV-neo-Bam-nm23-H1,制备nm23-H1基因的真核表... 目的:通过稳定、高效、低毒的基因转染方法将nm23-H1基因导入该基因缺失的人肺大细胞癌株L9981,从基因及蛋白水平鉴定nm23-H1基因转染肺癌细胞的建立。方法:以JM109为宿主菌,转化质粒载体PCMV-neo-Bam-nm23-H1,制备nm23-H1基因的真核表达载体;利用阳离子脂质体Lipofectamine介导,将nm23-H1基因导入L9981细胞株。采用RT-PCR技术检测转染后nm23-H1基因的表达,并用Western blot技术检测转染后nm23-H1蛋白的表达。结果:转染后的L9981细胞株中可检测到nm23-H1 mRNA及nm23-H1蛋白的阳性表达。结论:建立表达nm23-H1基因的肺癌细胞株L9981,为研究nm23-H1对肺癌恶性转移表型的逆转作用作基础准备。 展开更多
关键词 NM23-H1 基因转染 肺癌细胞 肿瘤转移
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新型肽-DNA复合颗粒性疫苗的制备方法 被引量：1
7
作者 唐艳 吴玉章 +5 位作者 刘宏利 赵建平 倪兵 贾正才 周伟 邹丽云 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期229-231,235,共4页
目的研究、优化新型颗粒性肽-DNA复合疫苗的制备方法。方法以DNA沉淀试验、DNA阻滞试验、DNaseⅠ保护试验和电镜分析对该疫苗颗粒的制备参数进行优化。结果在NaCl浓度为87.5mmol/L,电荷比为2的制备条件下,该疫苗形成直径为20nm的均一颗... 目的研究、优化新型颗粒性肽-DNA复合疫苗的制备方法。方法以DNA沉淀试验、DNA阻滞试验、DNaseⅠ保护试验和电镜分析对该疫苗颗粒的制备参数进行优化。结果在NaCl浓度为87.5mmol/L,电荷比为2的制备条件下,该疫苗形成直径为20nm的均一颗粒,并可有效介导DNA疫苗所携带基因的表达。结论该研究为颗粒性肽-DNA复合疫苗获得良好的免疫学效应奠定了基础。 展开更多
关键词 基因转染 阳离子肽 疫苗制备 多聚赖氨酸
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