PTEN-FAK信号传导通路在白血病细胞迁移、侵袭中的作用 被引量：29

1

作者 成志勇 郭晓玲 +5 位作者 李世辉 王素云 杨晓阳 薛芳 温树鹏 潘崚 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期115-120,共6页

目的探讨肿瘤抑制基因10号染色体缺失的磷酸酶基因（PTEN）对人慢性粒细胞白血病细胞系K562增殖和凋亡的影响以及PTEN-FAK信号传导通路在白血病细胞迁移、侵袭中的作用。方法将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白的腺病毒（Ad-PTEN-GFP）... 目的探讨肿瘤抑制基因10号染色体缺失的磷酸酶基因（PTEN）对人慢性粒细胞白血病细胞系K562增殖和凋亡的影响以及PTEN-FAK信号传导通路在白血病细胞迁移、侵袭中的作用。方法将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白的腺病毒（Ad-PTEN-GFP）及空载体腺病毒（Ad-GFP）转染K562细胞和慢性粒细胞白血病急变期患者白血病细胞，用MTT法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡率，荧光定量PCR（FQ-PCR）检测PTEN mRNA、FAK mRNA水平变化，Western blot方法检测蛋白水平变化，Transwell小室检测K562细胞及原代白血病细胞迁移及侵袭能力。结果Ad-PTEN-GFP以感染复数为200转染K562细胞后，与Ad-GFP组相比，最大生长抑制率为35．2％；Transwell小室结果显示，转染Ad-GFP组漏入下室内荧光细胞数量为转染Ad-PTEN-GFP组漏入下室细胞数量的9．1倍；转染PTEN基因后原代细胞侵袭迁移能力亦减弱。转染PTEN基因后K562细胞FAK、p-FAK蛋白表达下调为Ad-GFP组的0．72与0．16倍。结论PTEN可能通过下调FAK及P-FAK表达抑制白血病细胞增殖、迁移及侵袭能力。 展开更多

关键词 基因 PTEN 信号传导 transwell小室 K562细胞

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PTEN基因转染对白血病细胞VEGF调控作用的影响 被引量：17

2

作者 成志勇 潘崚 +5 位作者 牛志云 梁文同 贾志强 颜晓燕 姚丽 杨敬慈 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期815-821,共7页

目的:探讨在白血病细胞中与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin hemology dele-ted on chromosome ten gene,PTEN)对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体1(VEGF receptor... 目的:探讨在白血病细胞中与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin hemology dele-ted on chromosome ten gene,PTEN)对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体1(VEGF receptor 1,VEGFR1)调控作用的影响。方法:将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及空载体腺病毒(Ad-GFP)转染人慢性粒细胞白血病急变细胞株K562,实时荧光定量PCR法检测不同转染组细胞中PTEN、VEGF和VEGF1 mRNA表达水平,Western印迹法检测PTEN、VEGF、Akt和磷酸化Akt蛋白的表达水平,并采用Transwell小室侵袭实验检测不同转染组细胞的侵袭性。通过MTT实验及FCM法检测PTEN基因对脐静脉内皮细胞株ECV304增殖和凋亡的影响。通过鸡胚尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)体内血管生长实验检测PTEN基因对鸡胚血管生成的影响。结果:与空载体腺病毒(Ad-GFP)相比,Ad-PTEN-GFP转染人白血病细胞K562后,VEGF及其受体的表达被明显抑制,并呈剂量依赖性负相关;同时,Ad-PTEN-GFP转染后K562细胞侵袭能力明显减弱。PTEN基因转染能够抑制血管内皮细胞ECV304增殖,并促进其细胞凋亡,细胞周期阻滞在S期。PTEN基因转染可明显抑制CAM血管生长。结论:肿瘤抑制基因PTEN能够抑制内皮细胞增殖和白血病细胞侵袭,其作用机制可能是负调控白血病细胞VEGF表达以及抑制肿瘤血管新生。 展开更多

关键词 PTEN基因 基因转染 人白血病细胞 VEGF 调控作用 endothelial growth factor gene transfection 肿瘤抑制基因 实验检测 腺病毒 人慢性粒细胞白血病 GFP 血管生长 血管内皮生长因子 细胞侵袭 脐静脉内皮细胞株 及其受体 表达水平 WESTERN印迹法 transwell小室

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Transwell侵袭实验测定M受体对胆管癌细胞侵袭的影响 被引量：7

3

作者 刘昆鹏 张炳远 +1 位作者 卢云 姚如永 《国际外科学杂志》 2011年第5期298-301,F0003,共5页

目的 探讨Transwell体外侵袭模型适用于胆管癌侵袭性研究的实验条件和方法.观察M受体兴奋剂及拈抗剂对胆管癌侵袭力的影响.方法 将不同浓度（0.5×10^5/mL、1.0×10^5/mL、1.5×10^5/mL、2.0×10^5/mL）的胆管癌细胞200... 目的 探讨Transwell体外侵袭模型适用于胆管癌侵袭性研究的实验条件和方法.观察M受体兴奋剂及拈抗剂对胆管癌侵袭力的影响.方法 将不同浓度（0.5×10^5/mL、1.0×10^5/mL、1.5×10^5/mL、2.0×10^5/mL）的胆管癌细胞200μL置入Transwell小室侵袭模型,分别培养12 h、24 h、36 h、48 h,观察不同浓度细胞在不同时间穿透基质凝胶多空滤膜的细胞数.选取最适浓度的胆管癌细胞与匹罗卡品共同加入 Transwell 的上室,调整小室内匹罗卡品浓度分别为0 mmol/L、0.1 mmol/L、0．3mmol／L、0．5mmol／L，培养最适时间后染色计数小室膜上的细胞数。调整浓度分别为0．01mmol／L、0．01mmol／L、0．05mmol／L、0．1mmol／L的阿托品对应匹罗卡品浓度分别为0、0．3mmoL／L、0．3rrmaol／L、0．3mmol／L与胆管癌细胞共同加入Transwell小室培养后染色计数。结果随着作用时间及细胞浓度的增加，穿透基质胶的细胞数随之增多，但当时间超过36h，细胞浓度大于1．0×10^5／mL时增长趋于平稳。加入匹罗卡品后，对照组与实验组比较差异有统计学意义（P〈0．05），实验组高中低浓度之间的差异无统计学意义。单阿托品组与空白对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。加入匹罗卡品及阿托品后，单阿托品组与实验组比较，差异有统计学意义（P〈0．05），低中高浓度组之间差异无统计学意义。结论36h的侵袭时间和1．0×10^5／mL的细胞浓度最能体现不同药物或试剂对胆管癌细胞的侵袭能力的影响，而受细胞浓度和侵袭时间的影响较小。胆管癌细胞可能存在M受体，并且在胆管癌的浸润和转移中具有重要作用。 展开更多

关键词 transwell小室 胆管癌 M受体 体外侵袭

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SATB1基因沉默抑制食管鳞状细胞癌TE-1中肿瘤干细胞样细胞侵袭及迁移能力 被引量：7

4

作者 李晓雷 徐俊 +2 位作者 胡欣 何文武 郑银彬 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2018年第17期2674-2679,共6页

背景:近来有研究证实SATB1与肿瘤的发生及发展有关,但其在肿瘤转移中的机制尚不明确。目的:观察特异性干扰SATB1基因表达对食管鳞状细胞癌TE-1中肿瘤干细胞样细胞侵袭、迁移的影响。方法:采用免疫磁珠分选法从人食管鳞状细胞癌TE-1中分... 背景:近来有研究证实SATB1与肿瘤的发生及发展有关,但其在肿瘤转移中的机制尚不明确。目的:观察特异性干扰SATB1基因表达对食管鳞状细胞癌TE-1中肿瘤干细胞样细胞侵袭、迁移的影响。方法:采用免疫磁珠分选法从人食管鳞状细胞癌TE-1中分选p75^(NTR)阳性细胞与p75^(NTR)阴性细胞,检测p75^(NTR)阳性细胞的体外增殖能力及克隆形成能力。取对数生长期的p75^(NTR)阳性肿瘤干细胞样细胞,转染组利用Lipofectamine 2000脂质体法将SATB1基因si RNA转染至细胞中,同时设置空载体转染的p75^(NTR)阳性细胞为对照,转染后72 h,采用Western blot法检测2组细胞SATB1蛋白表达,Transwell小室实验检测2组细胞的迁移及侵袭能力,Western blot与q RT-PCR法检测基质金属蛋白酶2/9的表达。结果与结论:(1)与p75^(NTR)阴性细胞比较,p75^(NTR)阳性细胞培养3,5,7 d的细胞增殖明显加快(P<0.05);(2)p75^(NTR)阳性细胞的克隆形成率明显高于p75^(NTR)阴性细胞(P<0.05);(3)转染后72 h后,转染组SATB1基因蛋白表达明显低于对照组(P<0.05),迁移能力与侵袭能力明显低于对照组(P<0.05),基质金属蛋白酶2/9的基因及蛋白表达明显低于对照组(P<0.05);(4)结果提示,以si RNA干扰SATB1基因后,可抑制食管鳞状细胞癌TE-1肿瘤干细胞样细胞侵袭、迁移,可能与其下调基质金属蛋白酶2/9的表达有关。 展开更多

关键词 食管肿瘤 肿瘤干细胞 RNA干扰 淋巴细胞 肿瘤浸润 组织工程 食管鳞状癌 SATB1基因 细胞侵袭 细胞迁移 基质金属蛋白酶 基因沉默 transwell小室 细胞转染 克隆形成 p75^(NTR)

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骨髓间充质干细胞作为胰腺癌基因治疗载体的实验研究 被引量：6

5

作者 崔凤鸣 朱海涛 +2 位作者 包善华 潘一明 谢敏 《现代医学》 2011年第4期387-392,共6页

目的:研究小鼠骨髓间充质干细胞对胰腺癌的聚集作用。方法:体外分离培养纯化绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞,通过Transwell共培养体系观察骨髓间充质干细胞向胰腺癌细胞PNAC-1的迁移;建立裸鼠胰腺癌移植瘤模型,经尾静脉回输骨... 目的:研究小鼠骨髓间充质干细胞对胰腺癌的聚集作用。方法:体外分离培养纯化绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞,通过Transwell共培养体系观察骨髓间充质干细胞向胰腺癌细胞PNAC-1的迁移;建立裸鼠胰腺癌移植瘤模型,经尾静脉回输骨髓间充质干细胞至荷瘤鼠体内,荧光显微镜动态观察肿瘤组织及其他脏器组织中骨髓间充质干细胞的分布及含量。结果:通过贴壁培养获得小鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测证实,CD44+CD45-、CD90+CD45-细胞均占细胞总数90%以上;Transwell共培养提示骨髓间充质干细胞向胰腺癌细胞PANC-1迁移,且随着肿瘤细胞数的增多,细胞迁移的数量增多(P<0.05);体内实验证实,骨髓间充质干细胞向胰腺癌组织特异性地靶向聚集,10 d内随着时间的延长骨髓间充质干细胞在胰腺癌组织中逐渐增多(P<0.05),10 d后增加不明显。结论:小鼠骨髓间充质干细胞体外向胰腺癌细胞迁移,体内向胰腺癌组织靶向聚集。 展开更多

关键词 胰腺癌 骨髓间充质干细胞 靶向治疗载体 transwell小室 细胞迁移

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Src激酶抑制剂PP2对人胃癌细胞生物学行为的影响 被引量：6

6

作者 于虹 怀娜 马秀梅 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期822-826,共5页

目的:探讨Src激酶抑制剂PP2对人胃癌SGC-7901细胞生长、迁移、侵袭和诱导血管形成等生物学行为的影响。方法:通过Western印迹法检测PP2作用对SGC-7901细胞中Src激酶活化的影响;分别采用MTT法、划痕实验、Transwell小室法和体外诱导血管... 目的:探讨Src激酶抑制剂PP2对人胃癌SGC-7901细胞生长、迁移、侵袭和诱导血管形成等生物学行为的影响。方法:通过Western印迹法检测PP2作用对SGC-7901细胞中Src激酶活化的影响;分别采用MTT法、划痕实验、Transwell小室法和体外诱导血管形成分析实验观察PP2对SGC-7901细胞生长、迁移、基质侵袭和诱导血管形成等生物学行为的影响。结果:MTT法检测结果提示,15μmol/L PP2作用人胃癌SGC-7901细胞12 h时能明显抑制细胞的增殖;5和10μmol/L PP2均能抑制SGC-7901细胞的迁移、侵袭和诱导血管的形成,且其抑制能力随PP2浓度的增加而逐渐增强。结论:Src激酶抑制剂PP2具有抑制人胃癌SGC-7901细胞生长、迁移、侵袭和诱导血管形成的能力,可能对胃癌具有一定的治疗效果。 展开更多

关键词 SRC激酶 抑制剂 人胃癌 细胞生物学行为 cells human gastric carcinoma SGC-7901细胞 血管形成 体外诱导 侵袭 迁移 WESTERN印迹法 transwell小室 生长 细胞的增殖 MTT法 逐渐增强 治疗效果 抑制能力 形成分析

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Transwell小室环境下小鼠不同器官微环境对人舌癌细胞生长的影响 被引量：4

7

作者 郭梦竹 牟云 +3 位作者 于大海 梁飞新 温琦涛 王振瑞 《临床口腔医学杂志》 2016年第5期269-272,共4页

目的:探讨骨髓和淋巴结微环境对人舌癌细胞SCC-9生长的影响。方法:利用Transwell小室建立微环境与SCC-9共培养体外模型,分为5组:SCC-9单独培养组(对照组),SCC-9+Balb/c小鼠骨髓共培养组,SCC-9+Balb/c小鼠淋巴结共培养组,SCC-9+Balb/c裸... 目的:探讨骨髓和淋巴结微环境对人舌癌细胞SCC-9生长的影响。方法:利用Transwell小室建立微环境与SCC-9共培养体外模型,分为5组:SCC-9单独培养组(对照组),SCC-9+Balb/c小鼠骨髓共培养组,SCC-9+Balb/c小鼠淋巴结共培养组,SCC-9+Balb/c裸鼠骨髓共培养组,SCC-9+Balb/c裸鼠淋巴结共培养组。采用直接计数法分别于24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h检测SCC-9的数量。结果:利用Transwell小室成功构建骨髓、淋巴结微环境与SCC-9共培养体外模型。计数结果显示,SCC-9在Balb/c裸鼠淋巴结共培养组中的增殖程度高于其他4组(P<0.05);在Balb/c裸鼠骨髓,Balb/c小鼠骨髓和淋巴结共培养组中均低于对照组(P<0.05),且抑制程度无明显差异(P>0.05)。结论:不同微环境可能通过不同的肿瘤休眠机制,控制肿瘤细胞的增殖与休眠,最终被动形成淋巴转移的靶向性。 展开更多

关键词 transwell小室 共培养 舌癌细胞 微环境 肿瘤休眠

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共培养人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)和兔关节软骨细胞诱导hUC-MSCs分化成软骨细胞 被引量：4

8

作者 罗二梅 张家文 +2 位作者 胡笑轲 唐明乔 宇丽 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2014年第1期82-87,共6页

目的探讨兔膝关节软骨细胞和人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)的共培养对hUC-MSCs成软骨诱导分化的影响及共培养的最佳比例。方法分离培养hUC-MSCs和兔膝关节软骨细胞并鉴定其特异性。在Transwell体系中,按1∶4,1∶3,1∶2,1∶1,2∶1,3∶1及... 目的探讨兔膝关节软骨细胞和人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)的共培养对hUC-MSCs成软骨诱导分化的影响及共培养的最佳比例。方法分离培养hUC-MSCs和兔膝关节软骨细胞并鉴定其特异性。在Transwell体系中,按1∶4,1∶3,1∶2,1∶1,2∶1,3∶1及4∶1的比例(hUC-MSCs:兔膝关节软骨细胞)共培养。倒置相差显微镜观察细胞的形态与增殖;甲苯胺蓝染色及免疫荧光染色分别检测葡萄糖胺聚糖(GAG)和Ⅱ型胶原(COL2A1)(蛋白水平定性);并对各组细胞爬片进行GAG、COL2A1定量检测;同时用实时定量荧光PCR(pPCR)检测GAG、COL2A1 mRNA表达,观察共培养前后细胞的基质分泌情况。结果共培养21 d后,阳性对照组和实验组细胞甲苯胺蓝染色及免疫荧光反应均呈阳性;GAG、COL2A1含量及mRNA表达量1∶4实验组均要高于其他实验组和阳性对照组。结论 hUC-MSCs和兔关节软骨细胞的共培养可明显促进hUC-MSCs向软骨样细胞诱导分化,且最佳共培养比例为1∶4。 展开更多

关键词 transwell小室 人脐带间充质干细胞 兔膝关节软骨细胞 共培养 成软骨诱导

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基于iTRAQ技术的猪精子释放蛋白Transwell小室分离及差异性分析 被引量：4

9

作者 葛晨玲 李珣 +5 位作者 王晓晔 梁莹莹 陈志英 杜倩 唐胤晟 胡传活 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期29-37,共9页

【目的】探索分离猪附睾头部精子释放蛋白的新方法,确定释放蛋白的功能特点及信号通路。【方法】利用Transwell小室独特的共培养系统,充分利用0.4μm聚碳酸酯膜分离精子释放的蛋白。使用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术分析释放的... 【目的】探索分离猪附睾头部精子释放蛋白的新方法,确定释放蛋白的功能特点及信号通路。【方法】利用Transwell小室独特的共培养系统,充分利用0.4μm聚碳酸酯膜分离精子释放的蛋白。使用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术分析释放的蛋白,对鉴定到的差异蛋白,使用GO数据库描述蛋白功能,运用KEGG数据库Pathway分析,确定差异蛋白最主要的生化代谢途径和信号转导途径,同时用IPR数据库对差异蛋白的结构域进行非冗余分析。【结果】Transwell小室上、下室共鉴定到542种蛋白,其中,464种蛋白表达量显著上调,78种蛋白表达量显著下调。差异蛋白主要参与跨膜转运、离子运输、ATP合成等生物过程。差异蛋白主要参与的信号通路为醛固酮调节的钠盐吸收、囊泡转运、EGFR酪氨酸激酶抑制等。硫氧还蛋白、半乳糖、糖苷水解酶等构成差异蛋白的主要结构域,为蛋白发挥作用提供结构基础。【结论】Transwell小室分离蛋白的方法切实有效,iTRAQ技术在附睾头部精子释放蛋白中成功鉴定出差异蛋白,差异性分析及功能注释为探究差异蛋白参与的生命活动及功能奠定了基础。 展开更多

关键词 附睾 transwell小室 同位素标记相对和绝对定量技术 差异蛋白

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丹红注射液对共培养体系中平滑肌细胞舒张的影响及其作用机制研究 被引量：4

10

作者 王冰瑶 吴晓燕 樊官伟 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1169-1175,共7页

目的研究丹红注射液在共培养体系中通过人脐静脉内皮细胞(Ea.Hy926)对大鼠胸主动脉平滑肌细胞(A7r5)舒张的影响及其作用机制。方法以A7r5、Ea.Hy926为细胞模型,用Western blotting法检测丹红注射液对单独培养的A7r5细胞中肌球蛋白轻链(M... 目的研究丹红注射液在共培养体系中通过人脐静脉内皮细胞(Ea.Hy926)对大鼠胸主动脉平滑肌细胞(A7r5)舒张的影响及其作用机制。方法以A7r5、Ea.Hy926为细胞模型,用Western blotting法检测丹红注射液对单独培养的A7r5细胞中肌球蛋白轻链(MLC)和磷酸化MLC(P-MLC)蛋白表达的影响;检测其对A7r5细胞内钙离子浓度的影响;用RT-PCR法检测A7r5细胞钙调蛋白(Ca M)m RNA表达的变化,MTT法观察其对重组人血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的A7r5细胞增殖的影响;最后用Transwell小室建立共培养体系,分别用Western blotting法和ELISA法检测丹红注射液对共培养体系中A7r5细胞MLC、P-MLC的蛋白表达以及环磷酸腺苷(c AMP)分泌的影响。结果丹红注射液(10μL/m L)能降低单独培养的A7r5细胞中P-MLC/MLC的值(P<0.05)和Ca M m RNA表达(P<0.01),对细胞内钙离子浓度和MLC蛋白表达无显著影响,也可降低共培养体系中A7r5细胞P-MLC/MLC值(P<0.05),并增加c AMP的分泌(P<0.01),此外还能抑制PDGF-BB诱导的A7r5细胞增殖(P<0.01)。结论丹红注射液能通过降低P-MLC/MLC值和Ca M的m RNA表达直接使平滑肌舒张,也能通过促进内皮细胞释放舒血管因子间接增加共培养体系中平滑肌细胞c AMP的分泌,使平滑肌细胞舒张。 展开更多

关键词 丹红注射液 肌球蛋白轻链 共培养体系 人脐静脉内皮细胞 transwell小室

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Transwell小室环境下兔成骨样细胞与骨髓基质干细胞的共培养及成骨分化 被引量：4

11

作者 张树鹰 段大波 +1 位作者 张力 王稚英 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第19期3438-3441,共4页

背景:以往在体外采用地塞米松、生长因子或用成骨样细胞与骨髓间充质干细胞按1∶1混合培养诱导成骨均存在种种局限。目的:观察在 Transwell小室环境下成骨样细胞与骨髓基质干细胞体外共培养及成骨样细胞定向诱导骨髓基质干细胞向成骨细... 背景:以往在体外采用地塞米松、生长因子或用成骨样细胞与骨髓间充质干细胞按1∶1混合培养诱导成骨均存在种种局限。目的:观察在 Transwell小室环境下成骨样细胞与骨髓基质干细胞体外共培养及成骨样细胞定向诱导骨髓基质干细胞向成骨细胞分化的可行性。方法:取第 3代乳兔成骨样细胞与第3代兔骨髓基质干细胞接种共培养于Transwell小室内,成骨样细胞接种于培养板底层,骨髓基质干细胞接种于 Transwell膜内膜上作为实验组。以骨髓基质干细胞单独接种于Transwell 小室内,下层为基础培养液作为对照组。结果与结论:实验组共培养骨髓基质干细胞明显向成骨细胞分化,细胞碱性磷酸酶活性显著高于对照组(P < 0.05)。实验组骨髓基质干细胞茜素红染色强阳性,可见呈红色结节,经PT-PCR扩增后,可见成骨启动基因核心结合因子α1的表达;对照组未见矿化结节。说明应用Transwell小室可实现成骨样细胞与骨髓基质干细胞体外共培养,并能定向诱导骨髓基质干细胞向成骨细胞分化。 展开更多

关键词 成骨样细胞 transwell小室 骨髓基质干细胞 共培养 成骨分化 兔

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芒果苷对淋巴瘤Raji细胞增殖、侵袭及相关基因Tiam1表达的影响 被引量：4

12

作者 丁丁 彭志刚 +4 位作者 刘振芳 马劼 杨杰 邓东红 罗军 《广西医科大学学报》 CAS 2010年第6期852-855,共4页

目的:观察芒果苷对人淋巴瘤Raji细胞增殖、侵袭能力及T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)表达的影响,以探讨芒果苷抗淋巴瘤的初步作用机制。方法:用MTT法检测芒果苷对人淋巴瘤Raji细胞增殖的影响,用Transwell侵袭实验检测芒果苷对Raji细... 目的:观察芒果苷对人淋巴瘤Raji细胞增殖、侵袭能力及T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)表达的影响,以探讨芒果苷抗淋巴瘤的初步作用机制。方法:用MTT法检测芒果苷对人淋巴瘤Raji细胞增殖的影响,用Transwell侵袭实验检测芒果苷对Raji细胞侵袭能力的抑制作用,用RT-PCR法检测芒果苷作用Raji细胞后对Tiam1的mRNA表达的影响。结果:MTT法发现,不同浓度的芒果苷分别与Raji细胞共同孵育72 h后,芒果苷对Raji细胞增殖抑制作用具有明显的剂量和时间依赖性。Transwell侵袭实验发现,用不同药物浓度的芒果苷作用Raji细胞24 h后,可抑制Raji细胞穿透Transwell小室,随着药物浓度的增加其穿透滤膜的细胞数明显具有剂量依赖性。分别用不同浓度的芒果苷作用Raji细胞24 h后,发现Tiam1的mRNA表达量明显减少,且呈明显的量效关系。结论:芒果苷能抑制人淋巴瘤Raji细胞的增殖和侵袭,其机制可能与同细胞侵袭有密切关系的Tiam1的mRNA表达下调有关。 展开更多

关键词 芒果苷 人淋巴瘤 Raji细胞 增殖抑制作用 细胞侵袭 相关基因 Tiaml mRNA表达 transwell小室 药物浓度 侵袭能力 不同浓度 RT-PCR法检测 时间依赖性 剂量依赖性 TIAM1 MTT法 作用机制 诱导因子 实验检测

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Transwell小室共培养条件下RPE促进Mller细胞的增殖和迁移(英文) 被引量：2

13

作者 马洪梅 张晓梅 +3 位作者 付小玻 李伟军 乌兰 王巍 《国际眼科杂志》 CAS 2008年第2期219-222,共4页

目的:观察在体外共培养系统中RPE对Mller细胞的影响。方法:Transwell小室共培养RPE和Mller细胞,MTT法、细胞计数法,测定Mller增殖和迁移的情况。结果:Mller细胞增殖的实验:Mller细胞的增殖,除了3h与6h,24h与48h之外,在其他各... 目的:观察在体外共培养系统中RPE对Mller细胞的影响。方法:Transwell小室共培养RPE和Mller细胞,MTT法、细胞计数法,测定Mller增殖和迁移的情况。结果:Mller细胞增殖的实验:Mller细胞的增殖,除了3h与6h,24h与48h之外,在其他各时间点之间差别有统计学意义。Mller细胞与RPE共培养组和Mller细胞单独培养组两组之间差别有统计学意义。Mller细胞迁移的实验:Mller细胞迁移,除了3h和6h之外,在其他各时间点之间差别有统计学意义。Mller细胞与RPE共培养组和Mller细胞单独培养组两组之间差别有统计学意义。在析因设计实验中,与RPE共培养、缺氧条件,这两个因素都可以分别作为独立的因素促进Mller细胞的增殖和迁移,而两者不存在协同作用。结论:正常和缺氧条件下RPE促进Mller的增殖、迁移,随共培养时间的延长RPE促进Mller增殖、迁移的作用加强。缺氧条件下RPE与Mller细胞间的相互作用在视网膜增殖性疾病中起到了重要的作用。 展开更多

关键词 transwell小室 缺氧 视网膜色素上皮细胞 Müiler细胞

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在Transwell小室中分离培养人脐静脉内皮细胞的研究 被引量：2

14

作者 张又枝 黄琦 任平 《湖北科技学院学报（医学版）》 2015年第2期96-97,103,共3页

目的建立一种在特殊材料Transwell培养小室中分离培养原代人脐静脉内皮细胞的技术。方法采用酶消化法分离得到人脐静脉内皮细胞(HUVEC),免疫荧光法检测内皮因子Ⅷ予以鉴定,待长满后用不含EDTA的0.25%胰酶传代到Transwell小室中,观察小室... 目的建立一种在特殊材料Transwell培养小室中分离培养原代人脐静脉内皮细胞的技术。方法采用酶消化法分离得到人脐静脉内皮细胞(HUVEC),免疫荧光法检测内皮因子Ⅷ予以鉴定,待长满后用不含EDTA的0.25%胰酶传代到Transwell小室中,观察小室中HUVEC的生长情况。结果在脐带长度一定的情况下,HUVEC分离所得到细胞的多少以及细胞的状态与胰酶的用量、时间、温度及是否含EDTA关系密切。本研究胰酶消化时间在室温(25℃左右)情况下要消化30min,用的胰酶是含EDTA和不含EDTA的胰酶1∶1混合;长满之后传代消化的胰酶只能用不含EDTA的胰酶消化,时间以在镜下的细胞状态为准。结论在特殊材料Transwell小室中成功分离培养HUVEC,一定要在比较温和的条件下消化HUVEC,这样才可能得到活力比较好、数量比较多的细胞。 展开更多

关键词 人脐静脉内皮细胞 transwell小室 胰酶

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Transwell小室环境下人脂肪干细胞对不同年龄成纤维细胞功能的影响 被引量：2

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作者 杜云鹏 沈为民 申霄 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1632-1636,共5页

目的:研究在Transwell小室环境条件下,脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)分别对青年人来源和老年人来源成纤维细胞功能的影响及其差异。方法:从人脂肪组织中分离、培养ADSCs,从青年人和老年人皮肤组织中分离、培养青年人来... 目的:研究在Transwell小室环境条件下,脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)分别对青年人来源和老年人来源成纤维细胞功能的影响及其差异。方法:从人脂肪组织中分离、培养ADSCs,从青年人和老年人皮肤组织中分离、培养青年人来源成纤维细胞和老年人来源成纤维细胞,用Transwell小室建立共培养模型,细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测共培养后成纤维细胞增殖情况,RT-PCR检测共培养后成纤维细胞Ⅰ型胶原、基质金属激酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)、β-半乳糖苷酶m RNA表达。结果:(1)共培养后老年人和青年人实验组成纤维细胞增殖分别高于老年人和青年人对照组成纤维细胞(P=0.000),且青年人实验组增殖高于老年人实验组(P=0.000)。(2)共培养后老年人和青年人实验组成纤维细胞的Ⅰ型胶原和β-半乳糖苷酶m RNA表达分别高于老年人和青年人对照组成纤维细胞(P=0.000),且青年人实验组的Ⅰ型胶原和β-半乳糖苷酶m RNA表达均高于老年人实验组(P=0.002、P=0.000)。(3)共培养后老年人和青年人实验组成纤维细胞的MMP-1 m RNA表达分别低于老年人和青年人对照组成纤维细胞(P=0.000),青年人实验组的MMP-1 m RNA表达低于青年人实验组(P=0.055),差异无统计学意义,此结果的产生可能与共培养后青年人成纤维细胞和老年人成纤维细胞增殖均较活跃,产生的MMP-1均较少有关。结论:ADSCs与成纤维细胞共培养,能促进不同年龄成纤维细胞的增殖能力和胶原蛋白的分泌能力。 展开更多

关键词 人脂肪干细胞 人成纤维细胞 transwell小室 共培养

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前列腺癌细胞Transwell小室体外侵袭模型的建立及应用价值研究 被引量：2

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作者 高伟 陈强 +3 位作者 牛海涛 刘青山 刁会丰 刘军 《现代生物医学进展》 CAS 2012年第8期1462-1465,共4页

目的:建立前列腺癌细胞transwell小室体外侵袭模型,并探讨该侵袭模型在前列腺癌转移研究方面的意义。方法:将200μl2组前列腺癌细胞加入Transwell小室侵袭模型上室分别培养12、24、36、48h,加入侵袭模型上室的细胞取不同浓度(1.0×... 目的:建立前列腺癌细胞transwell小室体外侵袭模型,并探讨该侵袭模型在前列腺癌转移研究方面的意义。方法:将200μl2组前列腺癌细胞加入Transwell小室侵袭模型上室分别培养12、24、36、48h,加入侵袭模型上室的细胞取不同浓度(1.0×105、2.0×105、3.0×105、4.0×105/m1)温箱中培养,在不同时间点观察不同浓度的前列腺癌细胞穿过基质膜的细胞数,测定2组前列腺癌细胞系的侵袭能力。结果:穿过ECM胶聚碳酸酯膜的细胞在第12h较少,而随着时间的延长逐渐增多。细胞穿膜在24小时前后最显著;同时,穿过人工基底膜的细胞数随着细胞浓度增高而增多,但细胞浓度大于3.0×105/ml时,穿过人工基底膜的细胞数无明显变化。结论:本实验成功建立了前列腺癌细胞Transwell小室体外侵袭模型,其在前列腺癌研究方面具有较高的应用价值。该侵袭模型的建立可间接判断肿瘤的侵袭力并且对探明前列腺癌的转移机制及影响因素具有重要意义。 展开更多

关键词 前列腺癌细胞 transwell小室 肿瘤侵润

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大鼠视网膜Müller细胞在高糖、氧化应激、缺氧中的表现 被引量：1

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作者 李春花 冯朝晖 +4 位作者 张雪 田冰玉 雷晓琴 周婷洁 马为梅 《中国医药导报》 CAS 2019年第15期18-20,40,F0003,F0004,共6页

目的观察Sprague-Dawley(SD)大鼠视网膜Müller细胞在高糖、氧化应激、缺氧三种病理环境下的特征,为糖尿病视网膜病变的防治提供新的研究依据。方法体外培养SD大鼠视网膜Müller细胞,并用谷氨酰胺合成酶(GS)鉴定。将传2代的细... 目的观察Sprague-Dawley(SD)大鼠视网膜Müller细胞在高糖、氧化应激、缺氧三种病理环境下的特征,为糖尿病视网膜病变的防治提供新的研究依据。方法体外培养SD大鼠视网膜Müller细胞,并用谷氨酰胺合成酶(GS)鉴定。将传2代的细胞随机分为四组:对照组、高糖组、氧化应激组、缺氧组。倒置显微镜观察细胞形态学改变,免疫荧光染色法观察细胞GS和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的变化,Transwell小室观察细胞迁移能力。结果体外成功培养并鉴定鼠Müller细胞,四组Müller细胞功能均受损,氧化应激组以及缺氧组结构受损明显,失去正常形态。缺氧组中α-SMA的表达呈阳性,并且在Transwell小室中发生迁移的细胞数明显多于其他组,差异有统计学意义(P < 0.05)。结论高糖、氧化应激、缺氧均可导致Müller细胞功能受损,缺氧可诱导Müller细胞转化为具有迁移能力的肌纤维样细胞,提示Müller细胞参与了增生性糖尿病视网膜病变的发病过程。 展开更多

关键词 SD大鼠 视网膜MÜLLER细胞 糖尿病视网膜病变 上皮细胞间质转化 transwell小室

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磁刺激对体外原代神经元迁移的影响 被引量：1

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作者 杨云凤 吴碧华 《南昌大学学报（医学版）》 CAS 2014年第2期20-23,F0003,共5页

目的：体外观察磁刺激对原代神经元迁移的影响。方法原代培养 SD 大鼠皮质神经元，分为正常组（control，C 组）、假刺激组（shame，S 组）、40％最大输出强度组（40％ of maximum intensity of stimulation，0．4T 组）、60％最大输出... 目的：体外观察磁刺激对原代神经元迁移的影响。方法原代培养 SD 大鼠皮质神经元，分为正常组（control，C 组）、假刺激组（shame，S 组）、40％最大输出强度组（40％ of maximum intensity of stimulation，0．4T 组）、60％最大输出强度组（60％ of maximum intensity of stimulation，0．6T 组）。各组细胞接种于 transwell 小室内，自细胞接种后第2～6天接受磁刺激，连续刺激5 d，各组细胞于第6天同一时间染色，将 transwell 小室倒置，光学显微镜下计数。结果C 组有（2．6±0．548）个、S 组有（3．0±0．707）个细胞迁移，2组比较差异无统计学意义（P ＞0．05）；0．4T 组有（17．40±1．673）个、0．6T 组有（18．40±1．572）个细胞迁移，迁移的数量较 C 组及 S 组明显增多（P ＜0．05）。结论磁刺激可促进体外原代神经元迁移。 展开更多

关键词 磁刺激 原代神经元 transwell小室 体外 大鼠

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干细胞因子复合PluronicF-127治疗大鼠下颌骨缺损的研究 被引量：1

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作者 王蕾 刘苗 周健 《口腔医学》 CAS 2013年第7期433-437,共5页

目的通过实验观察复合干细胞因子的凝胶PluronicF-127对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,BMSCs)定向迁移的作用及其对大鼠下颌骨骨创伤后愈合的影响。方法①使用Transwell小室进行SCF凝胶组、空白对照组对骨髓间充... 目的通过实验观察复合干细胞因子的凝胶PluronicF-127对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,BMSCs)定向迁移的作用及其对大鼠下颌骨骨创伤后愈合的影响。方法①使用Transwell小室进行SCF凝胶组、空白对照组对骨髓间充质干细胞BMSCs的体外趋化实验,并对迁移细胞进行计数。②在30只清洁级SD大鼠双侧下颌骨分别制造直径3 mm骨缺损模型,统一在右侧注射复合材料,左侧为对照。并在术后1、2、4、6、8周分别取6只处死并取出下颌骨观察,拍摄X线片比较骨缺损情况;将标本固定切片后分别进行碱性磷酸酶与CD34免疫组化染色,进行染色评分和新生血管计数,t检验统计分析评判结果。结果体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞,趋化实验结果显示SCF凝胶组的迁移细胞数量大于空白对照组(P<0.05);下颌骨手术大鼠术后1～8周创口内复合材料逐渐吸收,术后碱性磷酸酶免疫组化染色评分实验组高于对照组(P<0.05),术后1～2周实验组成血管数多于对照组(P<0.05),而4～8周无明显区别(P>0.05)。结论复合SCF的凝胶对BMSCs在体外有一定趋化作用,在大于自愈骨缺损的体内骨创愈合中能发挥促成骨和成血管作用,加快愈合进程。 展开更多

关键词 干细胞生长因子 骨髓间充质干细胞 transwell小室 碱性磷酸酶 CD34 SD大鼠

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外周血单个核细胞介导乙型肝炎病毒感染的transwell小室体外模型研究 被引量：1

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作者 魏俊妮 张玥 +2 位作者 高雪芬 薛淑莲 王素萍 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期347-350,共4页

目的观察感染HBV的PBMC经人绒毛膜癌滋养层细胞（Bewo细胞）构建的胎盘屏障迁移情况，探讨PBMC作为载体转运HBV的生物学作用。方法培养并用细胞计数试剂盒-8检测培养Bewo细胞和PBMC的增殖和活性。用HBVDNA含量为5×10^6拷贝／mL的... 目的观察感染HBV的PBMC经人绒毛膜癌滋养层细胞（Bewo细胞）构建的胎盘屏障迁移情况，探讨PBMC作为载体转运HBV的生物学作用。方法培养并用细胞计数试剂盒-8检测培养Bewo细胞和PBMC的增殖和活性。用HBVDNA含量为5×10^6拷贝／mL的乙型肝炎患者血清100μL感染PBMC后，用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）荧光染料标记感染的细胞，transwell小室建立Bewo细胞和感染HBV的PBMC共培养模型。用流式细胞仪检测感染HBV的PBMC迁移情况，荧光定量PCR法检测transwell下室中PBMCHBVDNA含量。结果PBMC、Bewo细胞均在接种24h左右开始增殖，120h左右开始进入生长停滞期。transwelt小室共培养0、12、24和48h，下室中绿色荧光标记的PBMC量分别为（0．445±0．021）％、（21．180±4．653）％、（34．830±7．156）％和（64．185±3．161）％，随着培养时间的延长，下室中检测到的标有绿色荧光的PBMC量越多（F=68．983，P=0．001）。共培养24、48h时，下室PBMCHBVDNA分别为（1．925±0．431）×10^3、（2．565±0．361）×10^3拷贝／mL，即下室中的PBMc发生感染。结论PBMC可以作为HBV肝外感染的靶细胞，利用transwell小室构建胎盘滋养层屏障可以为体外研究HBV跨胎盘传播提供新思路。 展开更多

关键词 肝炎病毒 乙型 外周血单个核细胞 BEWO细胞 transwell小室

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