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HAL1基因转化番茄及耐盐转基因番茄的鉴定 被引量：30
1
作者 张荃 王淑芳 +2 位作者 赵彦修 赵可夫 张慧 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期658-662,共5页
采用PCR方法 ,从啤酒酵母中扩增得到可调节植物细胞离子均衡的HAL1基因 ,克隆后序列分析表明 :其开放读码框全长 879bp ,编码一个 2 94个氨基酸的多肽 (分子量 3 2kD)。构建含HAL1和NptⅡ嵌合基因的植物表达框架pRH ,三亲杂交后经农杆... 采用PCR方法 ,从啤酒酵母中扩增得到可调节植物细胞离子均衡的HAL1基因 ,克隆后序列分析表明 :其开放读码框全长 879bp ,编码一个 2 94个氨基酸的多肽 (分子量 3 2kD)。构建含HAL1和NptⅡ嵌合基因的植物表达框架pRH ,三亲杂交后经农杆菌介导的叶圆盘法转化番茄 (中蔬 5号 ) ,在含卡那霉素的培养基上进行转化体的筛选。转基因番茄的PCR、Southern杂交、RT PCR检测以及鲜重、干重和Na+ 、K+ 含量的测定表明 :HAL1基因确已整合到一些转基因番茄的基因组中 ;且转基因植株的耐盐性提高。 展开更多
关键词 HAL1基因 转基因番茄 耐盐性 鉴定
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过量表达叶绿体小分子热激蛋白提高番茄的抗寒性(英文) 被引量：40
2
作者 王丽 赵春梅 +1 位作者 王义菊 刘箭 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期167-174,共8页
小分子热激蛋白与植物耐寒性提高有相关性,但是没有直接的实验证据能证明小分子热激蛋白的存在增加植物抗寒性。我们克隆了番茄叶绿体(定位)小分子热激蛋白cDNA,并将35SCaMV启动子驱动的番茄叶绿体小分子热激蛋白cDNA植物表达构架导入番... 小分子热激蛋白与植物耐寒性提高有相关性,但是没有直接的实验证据能证明小分子热激蛋白的存在增加植物抗寒性。我们克隆了番茄叶绿体(定位)小分子热激蛋白cDNA,并将35SCaMV启动子驱动的番茄叶绿体小分子热激蛋白cDNA植物表达构架导入番茄,测定转基因番茄和未转基因番茄的抗寒性水平。低温处理后,转基因番茄的冷害症状轻于未转基因的番茄;转基因番茄细胞电解质外渗较少、花青素和MDA累积量较低;净光合速率和叶绿体含量高于对照。这些实验结果说明叶绿体小分子热激蛋白的过量表达提高了植物抗寒性。 展开更多
关键词 叶绿体 叶绿体小分子热激蛋白 耐寒性 转基因番茄 热激蛋白
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天花粉蛋白基因转化番茄的研究 被引量：29
3
作者 姜国勇 金德敏 +2 位作者 翁曼丽 郭宝太 王斌 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1999年第3期334-336,共3页
核糖体失活蛋白（ｒｉｂｏｓｏｍｅｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，ＲＩＰ）是一类作用于核糖体，抑制蛋白质合成的蛋白毒素，它具有广谱抗植物病毒和动物病毒的活性，在异种植物中的抗性效应尤其明显。迄今为止，人们已... 核糖体失活蛋白（ｒｉｂｏｓｏｍｅｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，ＲＩＰ）是一类作用于核糖体，抑制蛋白质合成的蛋白毒素，它具有广谱抗植物病毒和动物病毒的活性，在异种植物中的抗性效应尤其明显。迄今为止，人们已经从５０多种植物中分离出６０多种不... 展开更多
关键词 天花粉蛋白基因 转化 转基因番茄
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雄性不育嵌合基因的构建及番茄转化研究 被引量：25
4
作者 张宏 王波 +4 位作者 薛爱群 曹俊 李宝健 谭兆平 黄伟如 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期5-7,共3页
用从烟草里克隆的ＴＡ２９启动子分离自Ｂａｃｉｌｕｓａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ的核糖核酸酶基因ｂａｒｎａｓｅ，构建成雄性不育嵌合基因。再用农杆菌介导法转化番茄子叶，获得了具有雄性不育特征的转基因植株。
关键词 雄性不育 转基因 番茄
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表达黄瓜花叶病毒外壳蛋白的转基因番茄抗黄瓜花叶病毒侵染 被引量：21
5
作者 程英豪 吴光 +2 位作者 王继伟 潘乃穟 陈章良 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1997年第1期16-21,共6页
通过土壤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导将黄瓜花叶病毒外壳蛋白(CMV CP)的cDNA成功地引入番茄(Lycopersicon esculentum)植株中,并得到转基因植株。用强致病力CMV株系接种后,表达CMV外壳蛋白的转基因植株表现出对CMV侵染的抗... 通过土壤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导将黄瓜花叶病毒外壳蛋白(CMV CP)的cDNA成功地引入番茄(Lycopersicon esculentum)植株中,并得到转基因植株。用强致病力CMV株系接种后,表达CMV外壳蛋白的转基因植株表现出对CMV侵染的抗性。转基因植株RI代的抗性基因以接近3:1比例分离。对R_1代接种CMV后,表达CMV CP的植株病症减轻,发病率、病情指数及病毒积累量明显低于对照。病症出现推迟1个多月。 展开更多
关键词 番茄 转基因番茄 黄瓜花叶病毒 外壳蛋
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胆碱脱氢酶基因的转化及转基因番茄耐盐性的鉴定 被引量：8
6
作者 王淑芳 王峻岭 +1 位作者 赵彦修 张慧 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 2001年第3期248-252,共5页
采用PCR方法从E .coliTG1菌株中扩增得到胆碱脱氢酶 (cholinedehydrogenase ,CDH)基因 (betA) ,其氨基酸编码序列与文献中的资料一致 ,且能在原核表达载体pBV2 2 1中正确表达 ,并表现出活性。构建该基因的植物表达框架pRbA ,经农杆菌介... 采用PCR方法从E .coliTG1菌株中扩增得到胆碱脱氢酶 (cholinedehydrogenase ,CDH)基因 (betA) ,其氨基酸编码序列与文献中的资料一致 ,且能在原核表达载体pBV2 2 1中正确表达 ,并表现出活性。构建该基因的植物表达框架pRbA ,经农杆菌介导叶圆盘法转化番茄 ,对转基因番茄的PCR、Southern、RT PCR分析证实betA已整合到番茄基因组中 ,转基因番茄的耐盐性高于对照番茄。 展开更多
关键词 胆碱脱氢酶基因 转基因番茄 耐盐性
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番茄多聚半乳糖醛酸酶cDNA的克隆及其对番茄中PG表达的反义抑制 被引量：21
7
作者 鞠戎 田颖川 +2 位作者 沈全光 刘存德 莽克强 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第2期96-102,共7页
通过PCR扩增获得了包含多聚半乳糖醛酸酶(PG)全部阅读框架的1.5kb cDNA,经限制酶酶谱和部分序列分析鉴定无误后,将其以反方向插入含两个增强子的35S启动子和Nos3＇端之间,构建成表达PG反义RNA的双元载体,经农杆菌途径转化番茄品种“丽春... 通过PCR扩增获得了包含多聚半乳糖醛酸酶(PG)全部阅读框架的1.5kb cDNA,经限制酶酶谱和部分序列分析鉴定无误后,将其以反方向插入含两个增强子的35S启动子和Nos3＇端之间,构建成表达PG反义RNA的双元载体,经农杆菌途径转化番茄品种“丽春”,获得了60株抗卡那霉素再生植株,经PCR检测,证明有2/3的再生植株有外源PG基因导入,成熟果实的PG粗提液的SDS-PAGE分析表明:若干株系中PG蛋白量较对照有不同程度的下降。PG活性亦同步下降,其中一个株系3~#,PG酶活下降了93％。这些结果表明外源PG基因的反方向导入有效地抑制了内源PG基因的表达。 展开更多
关键词 多聚半乳糖 醛酸酶 转基因番茄
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表达多聚半乳糖醛酸酶反义RNA的转基因番茄分析 被引量：12
8
作者 魏玉凝 李曜东 +1 位作者 马庆虎 宋艳茹 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1996年第3期245-248,共4页
关键词 番茄 多聚半乳糖 醛酸酶 反义RNA 转基因番茄
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转基因番茄研究进展 被引量：18
9
作者 高蓝 傅建熙 王建华 《西北农业大学学报》 CSCD 北大核心 2000年第3期90-95,共6页
综述了转基因技术在培育延熟番茄、抗病虫番茄、抗除草剂番茄、抗逆番茄。
关键词 番茄 转基因育种 延熟性 抗逆性 抗病性
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转葡聚糖酶和防御素基因的番茄植株及其对番茄灰霉病的抗性 被引量：18
10
作者 陈双臣 刘爱荣 邹志荣 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期357-362,共6页
用根癌农杆菌Agrobacterium tumesfaciens介导法，将烟草β-1，3-葡聚糖酶Glucanase基因、苜蓿防御素alfAFP基因及二者双价基因导入番茄Micro—Tom中，以期获得抗灰霉病的转基因株系，并比较验证双价基因是否具有协同作用。绿色荧光蛋... 用根癌农杆菌Agrobacterium tumesfaciens介导法，将烟草β-1，3-葡聚糖酶Glucanase基因、苜蓿防御素alfAFP基因及二者双价基因导入番茄Micro—Tom中，以期获得抗灰霉病的转基因株系，并比较验证双价基因是否具有协同作用。绿色荧光蛋白基因（GFP）活性检测、PCR和Southem杂交检测表明，外源基因分别以1—4个拷贝整合到番茄基因组中。对T1代植株进行接种鉴定表明，转基因植株对灰霉病侵染的抵抗能力较对照明显增强，各株系的抗病能力与外源基因的表达相关，且葡聚糖酶基因和防御素基因对抗灰霉菌表现一定的协同作用。T1株系田间抗病鉴定结果表明，转基因株发病程度不同，病情指数在19—28之间，抗病性均高于对照。所得到的稳定表达的株系可作为抗病育种材料进一步研究。 展开更多
关键词 转基因番茄 葡聚糖酶基因 苜蓿防御素基因 灰霉病
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转基因技术在番茄育种上的应用 被引量：14
11
作者 陈玉辉 许向阳 李景富 《分子植物育种》 CAS CSCD 2004年第1期133-138,共6页
本文综述了基因工程技术在番茄育种上的应用。着重探讨了基因工程在番茄抗病毒、真菌、细菌、抗虫、雄性不育、耐贮运与延迟成熟及抗逆、抗除草剂等方面的最新研究进展 ,并对番茄基因工程的发展进行了展望。
关键词 转基因技术 番茄 基因工程技术 抗病育种 抗虫育种 雄性不育 耐贮运育种
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利用转基因番茄生产人胰岛素的研究 被引量：16
12
作者 陈溪 林忠平 《分子植物育种》 CAS CSCD 2003年第4期581-582,共2页
利用转基因番茄作为生物反应器生产人胰岛素 ,研究以口服方式摄入胰岛素在抑制自身免疫攻击以及预防I型糖尿病中所起到的作用。为了提高人胰岛素在植物细胞中的表达量并正确折叠形成有活性的胰岛素分子 ,用双链法人工合成了人胰岛素基... 利用转基因番茄作为生物反应器生产人胰岛素 ,研究以口服方式摄入胰岛素在抑制自身免疫攻击以及预防I型糖尿病中所起到的作用。为了提高人胰岛素在植物细胞中的表达量并正确折叠形成有活性的胰岛素分子 ,用双链法人工合成了人胰岛素基因 ,该基因全部采用植物偏爱密码子 ,并将B链与A链用一可以形成典型的β转角的 6氨基酸短肽连接起来。分别将其与组成型表达启动子 35S和番茄果实专一性启动子 2A12融合构建了植物表达载体 pCAM 35S Ins和pCAM 2A12 Ins ,并通过农杆菌介导的叶盘转化法分别导入烟草和番茄。用PCR对pCAM 35S Ins转基因烟草进行了鉴定 ,并用Western印迹实验对转基因烟草中胰岛素的表达及其与抗体结合活性进行了初步的鉴定。 展开更多
关键词 转基因番茄 人胰岛素 生物反应器 果实专一性启动子 人工合成
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番茄转TCS基因植株的生物学性状研究 被引量：17
13
作者 姜国勇 翁曼丽 +1 位作者 金德敏 王斌 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期395-396,共2页
研究和比较了番茄转ＴＣＳ基因植株与对照植株的生物学特性。结果显示，转基因植株的生物学性状与对照存在着明显的差异，株高比对照低约４１．５ｃｍ，每序花数比对照多３．２朵，单果重比对照低３７ｇ，叶片叶绿素含量、光合速率及气... 研究和比较了番茄转ＴＣＳ基因植株与对照植株的生物学特性。结果显示，转基因植株的生物学性状与对照存在着明显的差异，株高比对照低约４１．５ｃｍ，每序花数比对照多３．２朵，单果重比对照低３７ｇ，叶片叶绿素含量、光合速率及气孔导度分别比对照高４０．６％、１２．５％和１１．１％，对ＴＭＶ、ＣＭＶ和ＴＢＲＶ有一定抗性，叶片能抑制蚜虫和粉虱的生长。 展开更多
关键词 转基因 番茄 天花粉蛋白基因 生物学性状
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利用转基因标记NPTⅡ快速、规模化纯合转基因番茄 被引量：16
14
作者 欧阳波 龙芳 +1 位作者 张扬勇 叶志彪 《武汉植物学研究》 CSCD 北大核心 2006年第1期12-16,共5页
利用卡那霉素喷施方法对带有NPTⅡ标记基因和双价外源基因(烟草渗调蛋白基因AP24和菜豆几丁质酶基因Chi)的转基因番茄的3个世代在温室或田间环境进行规模化筛选,成功获得8个单拷贝转基因纯合植株。含有单个拷贝NPTⅡ标记基因的转基因株... 利用卡那霉素喷施方法对带有NPTⅡ标记基因和双价外源基因(烟草渗调蛋白基因AP24和菜豆几丁质酶基因Chi)的转基因番茄的3个世代在温室或田间环境进行规模化筛选,成功获得8个单拷贝转基因纯合植株。含有单个拷贝NPTⅡ标记基因的转基因株系后代,对卡那霉素的抗感分离符合3∶1的孟德尔分离比例,T2代中一些株系表现为对卡那霉素全抗,表明这些株系的外源基因已经纯合,这一结果在T3代中进一步得到证实。但对于含有两个拷贝外源基因的转基因株系,外源基因的遗传则比较复杂。同时,结合Km喷施和多重PCR技术对外源基因的异常遗传进行了初步分析。用PCR分析进一步证实了该方法的准确性,该方法是对转基因番茄进行大规模、快速遗传分析的理想方法。 展开更多
关键词 NPTⅡ 卡那霉素 多重PCR 转基因番茄 遗传分析
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转双价水解酶基因番茄植株对枯萎病抗性的提高(英文) 被引量：13
15
作者 欧阳波 李汉霞 叶志彪 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 2003年第3期179-184,共6页
利用根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)介导 ,首次将菜豆几丁质酶和烟草β 1 ,3 葡聚糖酶双价水解酶基因导入番茄品种A5 3(Lycopersiconescu lentumcv .A5 3)中 ,获得批量转基因再生植株。对外源基因的PCR和Southern杂交结果表明 ... 利用根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)介导 ,首次将菜豆几丁质酶和烟草β 1 ,3 葡聚糖酶双价水解酶基因导入番茄品种A5 3(Lycopersiconescu lentumcv .A5 3)中 ,获得批量转基因再生植株。对外源基因的PCR和Southern杂交结果表明 ,外源基因已经整合到番茄基因组中 ,其拷贝数 1～ 8个不等。Northern杂交和卡那霉素喷施表明目的基因和标记基因均已得到表达 ,抗病性鉴定初步表明转基因植株对枯萎病的抗性显著提高。 展开更多
关键词 转基因番茄 菜豆几丁质酶 烟草葡聚糖酶 枯萎病
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人促红细胞生成素基因在番茄中的表达 被引量：8
16
作者 贺竹梅 曹俊 +1 位作者 李宝健 黄兴奇 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1998年第2期155-159,共5页
通过子叶与农杆菌（ＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓＡＧＬ１）共培养，将表达载体ｐＨＬＰＥ中的人促红细胞生成素（ｈＥＰＯ，一种人来源的典型糖蛋白）基因（ｅｐｏ）导入番茄，然后用卡那霉素进行筛选，获得了抗... 通过子叶与农杆菌（ＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓＡＧＬ１）共培养，将表达载体ｐＨＬＰＥ中的人促红细胞生成素（ｈＥＰＯ，一种人来源的典型糖蛋白）基因（ｅｐｏ）导入番茄，然后用卡那霉素进行筛选，获得了抗性植株。经点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析，证明部分抗性植株中整合了ｅｐｏ基因。通过对转基因番茄植株叶片的粗提蛋白进行ＥＰＯＥＬＩＳＡ检测，结果表明，ｈＥＰＯ在番茄中的表达量为约４００ｐｇ／ｇ叶片。经用转基因植株叶片粗提蛋白饲喂依赖于ＥＰＯ的ＴＦ１细胞，表明番茄ＥＰＯ具有体外（ｉｎｖｉｔｒｏ）生物活性，这暗示用植物生产的ＥＰＯ可作为体外药物加以应用。 展开更多
关键词 促红细胞生成素 转基因番茄 生物活性
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转基因番茄育种和产业化研究进展 被引量：12
17
作者 王军 邹志荣 《中国农学通报》 CSCD 2004年第3期22-25,共4页
综述了番茄转基因技术在培育抗病虫害、抗除草剂、抗逆、延迟成熟、品质改良番茄品种和番茄雄性不育系育种方面的应用,以及中国转基因番茄的快繁和产业化研究进展。
关键词 转基因番茄 育种 产业化进展 抗病基因 抗转基因 抗除草剂基因 品质改良
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口蹄疫病毒VP1基因在番茄中的表达及转基因番茄对豚鼠诱导免疫保护 被引量：10
18
作者 潘丽 张永光 +9 位作者 王永录 王宝琴 谢庆阁 方玉珍 王文秀 蒋守田 王炜 孙元 吕建亮 刘力宽 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期796-801,共6页
构建克隆有O型口蹄疫病毒China99株VP1基因的植物双元表达载体pBin438/VP1。通过农杆菌介导法转化番茄子叶,经卡那霉素抗性筛选,获得60株抗性植株。对抗性植株分别做PCR、RT-PCR检测目的基因的整合与转录,ELISA筛选约40%的卡那抗性植株... 构建克隆有O型口蹄疫病毒China99株VP1基因的植物双元表达载体pBin438/VP1。通过农杆菌介导法转化番茄子叶,经卡那霉素抗性筛选,获得60株抗性植株。对抗性植株分别做PCR、RT-PCR检测目的基因的整合与转录,ELISA筛选约40%的卡那抗性植株阳性,分别提取两株ELISA和Western blot检测阳性的转基因番茄叶片蛋白与弗氏佐剂乳化,于0、15、30d经肌肉途径免疫豚鼠,第三次免疫后28d用100ID50的同源强毒攻击,根据豚鼠抗体水平的消长动态和免疫豚鼠抗强毒攻击的保护率进行转基因植物疫苗免疫原性的评估。结果表明,双元表达载体pBin438/VP1构建正确,PCR、RT-PCR结果证实口蹄疫病毒VP1基因已整合到番茄基因组并在转录水平表达,ELISA和Western blot检测重组蛋白能够与FMDV阳性血清反应。转基因番茄第三次免疫豚鼠后21d血清效价最高可达1∶64,攻毒后两组免疫豚鼠保护率分别达80%和40%,证明转基因番茄表达的VP1蛋白具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 VP1基因 转基因番茄 豚鼠 免疫原性
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基因转化技术在番茄育种上的应用 被引量：8
19
作者 栾雨时 张汉卿 韩玉珠 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 1996年第4期100-105,共6页
从基因转化技术中土壤农杆菌介导的原理及方法入手，综述了几年来国内外通过转化获得的各种转基因番茄在科研。
关键词 基因转化 番茄 育种
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萝卜抗真菌蛋白基因Rs-AFPs在大肠杆菌中的表达及其转化番茄的研究 被引量：8
20
作者 邓晓东 费小雯 胡新文 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期361-363,共3页
通过基因工程手段将萝卜抗真菌蛋白基因Rs AFP1( 2 ) 插入大肠杆菌表达载体pTrxFus中并诱导表达 ,其融合表达产物约 2 2kD ,约占总可溶蛋白的 0 .4 5 % (0 .5 % )。抑菌活性试验表明 :重组Rs AFP1( 2 ) 有抑菌活性 ,其中Rs AFP2 较Rs A... 通过基因工程手段将萝卜抗真菌蛋白基因Rs AFP1( 2 ) 插入大肠杆菌表达载体pTrxFus中并诱导表达 ,其融合表达产物约 2 2kD ,约占总可溶蛋白的 0 .4 5 % (0 .5 % )。抑菌活性试验表明 :重组Rs AFP1( 2 ) 有抑菌活性 ,其中Rs AFP2 较Rs AFP1抑菌活性强。构建了Rs AFP2 基因的植物表达载体pBIAFP2 。利用农杆菌介导法将pBIAFP2 导入番茄中 ,并诱导出完整的植株 32株。对其中 2 8株进行PCR和PCR SouthernBlot检测 ,其中 17株呈阳性。对经PCR SouthernBlot检测呈阳性的植株进行SouthernBlot检测 ,6株呈阳性。 展开更多
关键词 萝卜抗真菌蛋白基因 大肠杆菌 转基因 番茄 基因表达 生物杀菌剂
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