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利用多重PCR技术同时检测6种棉花转化体的方法研究 被引量:4
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作者 李忆 尹全 刘勇 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期487-494,共8页
【目的】建立1种转基因棉花多重聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)检测方法。【方法】试验选择6种转基因棉花作为多重PCR检测对象,通过引物终浓度配比和引物退火温度的两要素全组合优化多重PCR反应体系,并分析方法灵敏度... 【目的】建立1种转基因棉花多重聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)检测方法。【方法】试验选择6种转基因棉花作为多重PCR检测对象,通过引物终浓度配比和引物退火温度的两要素全组合优化多重PCR反应体系,并分析方法灵敏度。【结果】多重PCR较优的MON1445、GHB614、MON15985、MON88913、LLCOTTON25、MON531引物终浓度为0.25、0.30、0.25、0.16、0.30、0.20μmol·L-1,较优引物退火温度为56℃,方法灵敏度为66个拷贝棉花基因组。利用盲样对上述体系的验证结果显示,所有盲样扩增条带与其含有的转基因转化体完全一致。【结论】本研究建立的体系可用于6种棉花转化体的快速检测。 展开更多
关键词 棉花 多重PCR 特异性引物 检测
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耐盐转基因大豆事件FA8015旁侧序列分离及定性PCR检测 被引量:2
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作者 马阔 仲晓芳 +2 位作者 牛陆 赵倩倩 杨向东 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期854-859,共6页
本研究前期利用转基因技术,将菠菜(Atriplex hortensis)甜菜碱醛脱氢酶编码基因Ah BADH导入栽培大豆Williams 82中,获得耐盐性较强的转基因大豆事件FA8015。为进一步加快该转基因事件生物安全评价,本研究分离了FA8015外源T-DNA旁侧序列... 本研究前期利用转基因技术,将菠菜(Atriplex hortensis)甜菜碱醛脱氢酶编码基因Ah BADH导入栽培大豆Williams 82中,获得耐盐性较强的转基因大豆事件FA8015。为进一步加快该转基因事件生物安全评价,本研究分离了FA8015外源T-DNA旁侧序列,并依据其序列特征,建立事件特异性检测方法。Southern杂交结果表明,转基因事件FA8015外源T-DNA为单拷贝插入。利用基因组重测序技术,获得转基因大豆事件FA8015的基因组信息,并与参考基因组Williams 82做比较,初步确定转基因大豆事件FA8015外源T-DNA片段整合位点。然后根据整合位点,设计融合大豆基因组和T-DNA序列的引物,获得了1 160 bp的左边界旁侧序列,包括405 bp的大豆基因组序列和750 bp的T-DNA序列;右边界获得了1 254 bp的旁侧序列,其中601 bp为T-DNA片段,653 bp为大豆基因组序列;序列分析证明转基因事件FA8015的T-DNA整合位点为Chr15染色体的25129882位点,整合方式为正向单拷贝插入,与Southern杂交和重测序结果一致。依据PCR结果设计事件特异性引物,建立了转基因大豆事件FA8015转化体特异性检测方法。该方法特异性强、灵敏度高,可快速识别该转基因大豆事件的身份,为该转化事件及其衍生品的安全性和监管提供技术支撑。 展开更多
关键词 大豆 耐盐 转基因事件 重测序 旁侧序列 定性PCR检测 耐盐
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转基因玉米转化体特异性寡核苷酸芯片检测方法的研制 被引量:10
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作者 路兴波 武海斌 +3 位作者 王敏 李宝笃 杨崇良 孙红炜 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1432-1438,共7页
根据7种转基因玉米Bt11、Bt176、Mon810、Mon863、TC1507、GA21和NK603的重组DNA结构,利用Primerpremier5.0引物设计软件分别设计转化体特异性引物,优化PCR反应条件,对引物特异性及灵敏度进行验证。结果表明,所设计引物特异性强,灵敏度... 根据7种转基因玉米Bt11、Bt176、Mon810、Mon863、TC1507、GA21和NK603的重组DNA结构,利用Primerpremier5.0引物设计软件分别设计转化体特异性引物,优化PCR反应条件,对引物特异性及灵敏度进行验证。结果表明,所设计引物特异性强,灵敏度达0.1%。在植物基因组与外源基因的连接区域,利用PrimerPremier5.0和Oligo6.0软件分别设计和筛选7种转基因玉米40merOligo转化体特异性探针,制备转基因玉米的寡核苷酸芯片,并对芯片检测的特异性、重复性及检测灵敏度进行检验。证明所设计探针特异性强,灵敏度达0.01%。与PCR检测方法相比,基因芯片检测法灵敏度高、特异性强,可有效检测及鉴定多种转基因玉米,大大提高检测的准确率和效率。 展开更多
关键词 转基因玉米 转化体特异性 寡核苷酸芯片 Oligo探针 灵敏度
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转基因玉米Bt176品系特异性环介导等温扩增检测方法的研究 被引量:7
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作者 凌莉 刘静宇 +5 位作者 易敏英 吴少云 刘津 蔡颖 李志勇 高东微 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期310-313,共4页
根据转基因玉米品系Bt176外源插入片段与玉米基因组序列设计和筛选品系特异性引物,并对反应体系和反应条件进行优化,最终建立转基因玉米品系Bt176的品系特异性LAMP检测方法。对该方法进行了灵敏度、特异性和稳定性评价。评价结果表明:... 根据转基因玉米品系Bt176外源插入片段与玉米基因组序列设计和筛选品系特异性引物,并对反应体系和反应条件进行优化,最终建立转基因玉米品系Bt176的品系特异性LAMP检测方法。对该方法进行了灵敏度、特异性和稳定性评价。评价结果表明:该方法定性检测低限为0.5%,特异性和稳定性均达到100%。 展开更多
关键词 环介导等温扩增 品系特异性 转基因玉米品系Bt176 检测
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环介导等温扩增法检测转基因玉米MIR604 被引量:3
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作者 凌莉 刘津 +5 位作者 易敏英 吴少云 蔡颖 刘静宇 高东微 李志勇 《食品科技》 CAS 北大核心 2012年第12期305-310,共6页
根据转基因玉米品系MIR604外源插入片段与玉米基因组序列设计和筛选品系特异性引物,并对反应体系和反应条件进行优化,最终建立转基因玉米品系MIR604的品系特异性LAMP检测方法。对该方法进行了灵敏度、特异性和稳定性评价,评价结果表明:... 根据转基因玉米品系MIR604外源插入片段与玉米基因组序列设计和筛选品系特异性引物,并对反应体系和反应条件进行优化,最终建立转基因玉米品系MIR604的品系特异性LAMP检测方法。对该方法进行了灵敏度、特异性和稳定性评价,评价结果表明:该方法定性检测低限为0.5%,特异性和稳定性均达到100%。 展开更多
关键词 环介导等温扩增 品系特异性 转基因玉米品系MIR604 检测
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Uncertainty in Detecting Specific Fragment of Genetically Modified Maize Event NK603 by Real-time Fluorescence Quantitative PCR
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作者 Jun SONG Shaorong LEI +6 位作者 Yong LIU Dong WANG Wenjuan LIU Quan YIN Bing XIANG Fuli ZHANG Lijuan CHANG 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2014年第4期4-7,共4页
In this study, the event-specific real-time fluorescence quantitative PCR method established by Siehuan Academy of Agricultural Sciences was employed to detect the content of flanking fragment (specific fragment) in... In this study, the event-specific real-time fluorescence quantitative PCR method established by Siehuan Academy of Agricultural Sciences was employed to detect the content of flanking fragment (specific fragment) in samples containing 2% genetically modified maize event NK603. The uncertainty of detection results was evaluated based on various uncertainty sources, such as PCR amplification system, data analysis and micropipette. The results showed that A-type uncertainty ( uA ), B-type uncertainty ( uB ), combined standard uncertainty ( uC ) and expanded uncertainty ( U95 ) were 0. 000 8,0.1301,0. 001 and 0. 002, respectively; the final detection result was 1.9% ±0.002. Thus, the main uncertainty in detecting flanking fragment of genetically modified maize event NK603 with realtime fluorescence quantitative PCR method was derived from the random effect in the experimental process. 展开更多
关键词 transgenic maize event NK603 Flanking fragment content UNCERTAINTY
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