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抗PD-L1单抗的质量控制研究 被引量：8
1
作者 郭莎 王开芹 +6 位作者 武刚 李萌 崔永霏 俞小娟 张荣建 于传飞 王兰 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期13-22,共10页
目的:研究建立抗程序性死亡受体配体1(programmed cell death protein ligand 1,PD-L1)单抗的质量控制方法。方法:利用成像毛细管等电聚焦电泳(imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis,iCIEF)、肽图对抗PD-L1单抗进行... 目的:研究建立抗程序性死亡受体配体1(programmed cell death protein ligand 1,PD-L1)单抗的质量控制方法。方法:利用成像毛细管等电聚焦电泳(imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis,iCIEF)、肽图对抗PD-L1单抗进行鉴别;利用还原/非还原十二烷基磺酸钠毛细管电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)、分子排阻高效液相色谱(size exclusion-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)、离子交换高效液相色谱(ion exchange-high performance liquid chromatography,IEC-HPLC)对抗PD-L1单抗的纯度进行控制;利用细胞结合抑制法和转基因细胞法测定抗PD-L1单抗的活性;利用光阻法和液流成像分析法对不溶性微粒进行检测和分析。结果:抗PD-L1单抗的iCIEF检测结果具有特征性主峰,肽图检测具有相应特征峰,起到很好的鉴别作用。还原CE-SDS的轻链与重链峰面积之和的百分比为(98.37±0.21)%,非还原CE-SDS主峰峰面积百分比为(96.33±0.15)%;SEC-HPLC单体的峰面积百分比为(99.43±0.02)%;IEC-HPLC酸性区峰面积百分比、主峰峰面积百分比、碱性区峰面积百分比分别为(13.63±0.40)%、(80.00±0.36)%、(6.37±0.15)%。细胞结合抑制法与转基因细胞法的活性检测均呈现剂量反应曲线,反映抗PD-L1单抗剂量依赖性地阻断程序性死亡受体1(programmed cell death protein 1,PD-1)与PD-L1的结合及后续的生物学效应。光阻法检测≥10μm及≥25μm的不溶性微粒数分别为(1.33±0.58)粒·mL^(-1)和(0.00±0.00)粒·mL^(-1);液流成像分析法检测2～10μm、≥10μm及≥25μm的微粒数分别为(1 243.67±242)粒·mL^(-1)、(45.67±16.07)粒·mL^(-1)和(10.00±5.00)粒·mL^(-1),其中,蛋白聚体占87.45%,非蛋白聚体占12.55%。结论:研究建立了抗PD-L1单抗的多种质控方法,为国内抗PD-L1单抗的质量检测提供了参考依据。 展开更多
关键词 抗程序性死亡受体配体1单抗 转基因细胞法 生物学活性 鉴别 纯度测定
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In-cell Western法测定人胰岛素生物学活性
2
作者 王绿音 杨艳枫 +3 位作者 梁誉龄 张慧 李晶 梁成罡 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1000-1006,共7页
目的:利用in-cell Western(ICW)技术研究基于转基因细胞的人胰岛素生物学活性测定方法。方法:以CHO-INSR B1284为靶细胞,用不同浓度的人胰岛素刺激靶细胞,采用ICW技术检测人胰岛素受体酪氨酸磷酸化水平,进行人胰岛素的体外生物学活性测... 目的:利用in-cell Western(ICW)技术研究基于转基因细胞的人胰岛素生物学活性测定方法。方法:以CHO-INSR B1284为靶细胞,用不同浓度的人胰岛素刺激靶细胞,采用ICW技术检测人胰岛素受体酪氨酸磷酸化水平,进行人胰岛素的体外生物学活性测定;根据《中华人民共和国药典》2020年版通则9401“生物制品生物活性/效价测定方法”对该方法进行专属性、相对准确度、中间精密度、线性与范围等方法学验证;以重组人胰岛素国家标准品为参比品,采用本方法测定人胰岛素原料药及其他人胰岛素类似物的生物学活性相对效价。结果:不同浓度的人胰岛素作用于CHO-INSR B1284细胞后具有较好的剂量依赖性;5个效价浓度的待测品经8次测定,相对效价的几何均值分别为:(63.76±4.38)%,(78.01±5.97)%,(99.52±4.62)%,(122.84±7.4)%,(151.71±8.81)%,相对偏倚均在±5%范围内,对应的几何变异系数(GCV,%)均<11%,GCV的置信上限均<20%;采用该方法能有效检测人胰岛素及其胰岛素类似物的效价。结论:利用ICW技术的人胰岛素体外生物学活性测定法专属性强、准确度高、精密度好,可作为人胰岛素生物学活性的常规检测方法。 展开更多
关键词 生物学活性 人胰岛素 转基因细胞 in-cell Western 方法学验证
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均相时间分辨荧光法测定人胰岛素生物学活性
3
作者 王绿音 杨艳枫 +4 位作者 张孝明 吕萍 张慧 李晶 梁成罡 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期3223-3228,共6页
建立基于均相时间分辨荧光免疫分析技术的人胰岛素体外生物学活性测定方法。利用CHO-INSR B1284转基因细胞,通过均相时间分辨荧光免疫分析系统检测人胰岛素的体外生物学活性;对靶细胞铺板密度、药物的量效范围、刺激时间等关键参数进行... 建立基于均相时间分辨荧光免疫分析技术的人胰岛素体外生物学活性测定方法。利用CHO-INSR B1284转基因细胞,通过均相时间分辨荧光免疫分析系统检测人胰岛素的体外生物学活性;对靶细胞铺板密度、药物的量效范围、刺激时间等关键参数进行优化;验证方法的专属性、相对准确度、中间精密度、线性与范围,以及细胞的传代稳定性;以重组人胰岛素国家标准品为参比品,将本研究建立的方法应用于其他人胰岛素类似物原料药、制剂的生物学活性测定。结果表明人胰岛素及其类似物存在剂量效应曲线,R^(2)>0.995,符合四参数方程y=(A-D)/[1+(x/C)^(B)]+D。本方法专属性良好,64%、80%、100%、125%、156%共5个效价浓度的待测品相对效价(n=8)的几何均值、相对偏倚、几何变异系数(GCV,%)均符合《中华人民共和国药典》2020版四部通则9401的要求;且方法可适用于其他胰岛素类似物的生物学活性测定。该方法操作简便、耗时短、准确度高、精密度好,可用于胰岛素类产品的生物学活性评价和质量控制。 展开更多
关键词 生物学活性 人胰岛素 转基因细胞 均相时间分辨荧光技术 方法学验证
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PU微胶囊的合成、表征及降解性能研究 被引量：2
4
作者 张志斌 彭雪林 +2 位作者 郝静 陈慧清 单连海 《世界科技研究与发展》 CSCD 2007年第2期86-89,共4页
本文采用预聚-扩链-中和-分散溶解法，一步合成出聚氨酯（PU）水溶液，再用凝聚相分离法合成出Pu微胶囊。由傅立叶变换红外光谱（FT—IR）研究了PU微胶囊的化学结构；使用差示扫描量热仪（DSC），对PU微胶囊的玻璃化转变及微相分离结构... 本文采用预聚-扩链-中和-分散溶解法，一步合成出聚氨酯（PU）水溶液，再用凝聚相分离法合成出Pu微胶囊。由傅立叶变换红外光谱（FT—IR）研究了PU微胶囊的化学结构；使用差示扫描量热仪（DSC），对PU微胶囊的玻璃化转变及微相分离结构进行了研究；通过扫描电子显微镜（SEM）的观测，对PU微胶囊的表面及剖面形态进行了研究，并测定出PU微胶囊直径约2．5mm，内腔直径50～600μm，膜孔直径为20～120nm；研究了PU微胶囊在磷酸缓冲液（PBS）中的降解行为，发现本实验合成的PU微胶囊基本上是不降解的。这种PU微胶囊有利于转基因CHO细胞的包覆，有利于临床应用中进行腹腔植入。 展开更多
关键词 转基因CHO细胞 凝聚相分离 PU微胶囊 微相分离结构
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