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重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)基因在鱼腥藻中的克隆 被引量：5
1
作者 李清艳 施定基 +4 位作者 陈翠丽 赵兴贵 邓元告 张越男 吕金印 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期1389-1394,共6页
为了将rhG-CSF基因在鱼腥藻PCC7120中克隆,用于制备口服制剂,利用DNA重组技术,在不改变阅读框的前提下,将hG-CSF基因进行突变,并插入到pUC-19载体上,构建中间载体pUC-G-CSF;将pUC-G-CSF插入到pRL-489的启动子PpsbA的下游,构建穿梭表达载... 为了将rhG-CSF基因在鱼腥藻PCC7120中克隆,用于制备口服制剂,利用DNA重组技术,在不改变阅读框的前提下,将hG-CSF基因进行突变,并插入到pUC-19载体上,构建中间载体pUC-G-CSF;将pUC-G-CSF插入到pRL-489的启动子PpsbA的下游,构建穿梭表达载体pRL-G-CSF;通过三亲接合转移方法,将pRL-G-CSF转入丝状体蓝藻鱼腥藻PCC7120内。本试验得到了有抗生素抗性的鱼腥藻,并用PCR技术检测到rhG-CSF基因在转基因鱼腥藻中存在。 展开更多
关键词 人粒细胞集落刺激因子 鱼腥藻(anabaena sp.)PCC 7120 载体 转基因鱼腥藻 三亲接合转移
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转基因鱼腥藻7120适宜生长条件的初步研究 被引量：6
2
作者 欧阳叶新 施定基 +1 位作者 梁承邺 胡鸿钧 《武汉植物学研究》 CSCD 2003年第5期406-410,共5页
以前的研究报导了将人肿瘤坏死因子基因(TNF-α)成功转入鱼腥藻7120中,这项研究在实验室小规模范围内探讨了其转TNF-α基因鱼腥藻7120的适宜生长条件。结果表明,转基因鱼腥藻7120最适生长温度在25～30℃,最适pH7.0～7.5。不同光照强度... 以前的研究报导了将人肿瘤坏死因子基因(TNF-α)成功转入鱼腥藻7120中,这项研究在实验室小规模范围内探讨了其转TNF-α基因鱼腥藻7120的适宜生长条件。结果表明,转基因鱼腥藻7120最适生长温度在25～30℃,最适pH7.0～7.5。不同光照强度下的净光合放氧速率测定结果表明,转基因鱼腥藻7120与野生型具有一致的光饱和点和光补偿点,且适合在10～700μE.m-2.s-1下生长。外加有机碳源(4g/L葡萄糖)一定程度上可以增加转基因鱼腥藻7120生长速度。对不同藻龄转基因鱼腥藻7120中TNF-α的累积量的检测发现:生长8d左右时转基因鱼腥藻7120中TNF-α累积量达到最大值。这将为产业化生产、适时收获转基因蓝藻提供理论指导,同时讨论了葡萄糖对转基因鱼腥藻7120代谢的调节。 展开更多
关键词 转TNF-α基因鱼腥藻7120 光强 温度 PH 藻龄 葡萄糖
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转人粒细胞集落刺激因子(hG-CSF)基因的鱼腥藻的构建 被引量：1
3
作者 陈翠丽 施定基 《北京联合大学学报》 CAS 2005年第3期60-63,共4页
本研究目的是构建转G-CSF基因的工程鱼腥藻Anabaenasp.。首先将b型G-CSF克隆于中间载体pRL439和穿梭表达载体pDC-8上。通过三亲接合转移将穿梭表达载体pDCG-CSF转入鱼腥藻内。通过PCR扩增的方法在转基因鱼腥藻中检测到G-CSF基因的存在。
关键词 粒细胞集落刺激因子(G-CSF) 转基因鱼腥藻anabaena sp. 三亲接合转移
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转基因鱼腥藻中hTNF-α基因表达与光合作用间的相关性研究 被引量：3
4
作者 李爽 张芃芃 +6 位作者 冉亮 施定基 宋东辉 赵兴贵 邓元告 张越男 王昌禄 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期609-612,共4页
分析了培养光强对转基因鱼腥藻生长和hTNF-α基因表达的影响,以及转基因鱼腥藻IB02的光合放氧活性、光系统Ⅰ及光系统Ⅱ活性。发现光强对转基因鱼腥藻IB02的生长和hTNF-α基因表达都有促进;hTNF-α基因在鱼腥藻中的表达率与真正光合、... 分析了培养光强对转基因鱼腥藻生长和hTNF-α基因表达的影响,以及转基因鱼腥藻IB02的光合放氧活性、光系统Ⅰ及光系统Ⅱ活性。发现光强对转基因鱼腥藻IB02的生长和hTNF-α基因表达都有促进;hTNF-α基因在鱼腥藻中的表达率与真正光合、光系统Ⅰ和光系统Ⅱ活性存在一定的联系。hTNF-α基因表达同时对宿主的光合放氧特性也产生了显著的影响,与正对照相比转基因藻光呼吸速率增强68%,饱和点降低66%,说明转基因鱼腥藻的代谢负荷增加,并在低光强下生长比野生型快。 展开更多
关键词 转基因鱼腥藻IB02 光合作用 基因表达
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葡萄糖浓度对转人肿瘤坏死因子-α鱼腥藻IB02培养过程的影响 被引量：2
5
作者 朱学义 张明华 +3 位作者 章华西 张芃芃 宋东辉 施定基 《生物技术通讯》 CAS 2008年第2期255-258,共4页
目的:通过在培养基中添加葡萄糖的方法,提高转基因鱼腥藻的产量和人肿瘤坏死因子(hTNF)-α的表达率。方法:在葡萄糖浓度为0～300mmol/L的范围内,进行了转hTNF-α鱼腥藻IB02的摇瓶混合营养培养,用比浊法和酶联免疫法测定转基因鱼腥藻的... 目的:通过在培养基中添加葡萄糖的方法,提高转基因鱼腥藻的产量和人肿瘤坏死因子(hTNF)-α的表达率。方法:在葡萄糖浓度为0～300mmol/L的范围内,进行了转hTNF-α鱼腥藻IB02的摇瓶混合营养培养,用比浊法和酶联免疫法测定转基因鱼腥藻的生长和hTNF-α的表达。结果:添加葡萄糖的藻液最高生长密度是未添加葡萄糖的3.5倍,且hTNF-α的表达率也提高至4倍。结论:在各种葡萄糖浓度下,葡萄糖的利用都不明显。 展开更多
关键词 人肿瘤坏死因子-Α 转基因鱼腥藻 混合培养 葡萄糖
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pH法防止转基因蓝藻向环境释放 被引量：1
6
作者 殷嵘 顾娟 +5 位作者 施定基 吴倩萍 庄旻敏 何培民 栾必荣 贾睿 《生物技术》 北大核心 2017年第6期592-600,共9页
[目的]防止转基因蓝藻(Anabaena sp.PPC 7120)在制备对虾抗白斑综合征病毒口服药过程中向环境释放,保证制药安全性。[方法]用不同pH处理转基因蓝藻,并在不同时间、温度和光照下观察效果,并用响应面法优化处理条件。[结果]最佳处理条件为... [目的]防止转基因蓝藻(Anabaena sp.PPC 7120)在制备对虾抗白斑综合征病毒口服药过程中向环境释放,保证制药安全性。[方法]用不同pH处理转基因蓝藻,并在不同时间、温度和光照下观察效果,并用响应面法优化处理条件。[结果]最佳处理条件为:pH≤2.5、t≥50 min、T≥30℃或pH≥12、t≥120 min、T≥30℃,杀藻率为100%。两个优化组合分别为:pH 2.12、温度29.96℃、时间33.9 min或pH 12.33、温度31.75℃、时间96.8 min。pH处理后的转基因蓝藻在平板上不能再继续生长。[结论]pH法对转基因蓝藻的杀藻率可达100%,有效防止了转基因蓝藻在制备对虾口服剂过程中发生环境释放。 展开更多
关键词 PH 杀藻率 转基因蓝藻 环境释放 重组药物安全性 响应面法 重组药物制备
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转rhG-CSF基因鱼腥藻的重组基因及蛋白检测
7
作者 赵兴贵 李清艳 +1 位作者 李爽 施定基 《海洋通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期108-111,共4页
提取质粒进行PCR和酶切鉴定人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)基因成功转入鱼腥藻7120中,并用酶联免疫方法测得转基因鱼腥藻7120-G-CSF中G-CSF蛋白在第21d表达量达到最大。对转基因蓝藻的生长曲线、叶绿素a含量测定结果表明,rhG-CSF基因转... 提取质粒进行PCR和酶切鉴定人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)基因成功转入鱼腥藻7120中,并用酶联免疫方法测得转基因鱼腥藻7120-G-CSF中G-CSF蛋白在第21d表达量达到最大。对转基因蓝藻的生长曲线、叶绿素a含量测定结果表明,rhG-CSF基因转化蓝藻后,对蓝藻前中期的生长影响不大,但21d后生长速度下降,同时外源蛋白表达也达到最大值,这有利于转基因藻的大规模培养。 展开更多
关键词 人粒细胞集落刺激因子 PCR 酶切 转基因鱼腥藻7120-G—CSF G-CSF蛋白表达量
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转rhG-CSF基因鱼腥藻的筛选及生理特性研究
8
作者 赵兴贵 施定基 《盐业与化工》 CAS 北大核心 2007年第2期28-31,共4页
用酶联免疫方法测得转基因鱼腥藻7120-G-CSF中G-CSF蛋白最大表达量为总可溶性蛋白的0.1006%。对转基因蓝藻的生长曲线、叶绿素含量和光合放氧量测定结果表明,rhG-CSF基因转化蓝藻后,对蓝藻前中期的生长影响不大,但20d后生长速度下降,这... 用酶联免疫方法测得转基因鱼腥藻7120-G-CSF中G-CSF蛋白最大表达量为总可溶性蛋白的0.1006%。对转基因蓝藻的生长曲线、叶绿素含量和光合放氧量测定结果表明,rhG-CSF基因转化蓝藻后,对蓝藻前中期的生长影响不大,但20d后生长速度下降,这时外源蛋白表达也达到最大值。另外对外加碳源和氮源对转基因藻生长影响做了初步探索。 展开更多
关键词 转基因鱼腥藻7120—G—CSF G—CSF蛋白表达量 光合放氧 碳源 氮源
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TNF_α基因在鱼腥藻 71 2 0中的表达及其产物的亲和层析纯化 被引量：7
9
作者 施定基 叶欣 +7 位作者 钟晖 蔡以滢 邵宁 彭国宏 董晓军 王春梅 欧阳叶新 李振甲 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2001年第1期46-50,共5页
用转入TNF_α基因并稳定表达了 4年多的丝状体蓝藻———鱼腥藻 712 0 (Anabaenasp .PCC 712 0 ) ,研究比较了在培养液中氮源 (NaNO3 )和碳源 (NaAc)对转基因藻生长和TNF_α基因的不同影响。氮源能稳定外源蛋白的表达 ,而碳源则影响细... 用转入TNF_α基因并稳定表达了 4年多的丝状体蓝藻———鱼腥藻 712 0 (Anabaenasp .PCC 712 0 ) ,研究比较了在培养液中氮源 (NaNO3 )和碳源 (NaAc)对转基因藻生长和TNF_α基因的不同影响。氮源能稳定外源蛋白的表达 ,而碳源则影响细胞壁的合成。通过比较几种不同的破碎细胞的方法 ,发现超声破碎得到的可溶性总蛋白含量和TNF_α含量均要比冻融法高出 1倍左右 ,经过细胞破碎、硫酸铵分级沉淀、常压离子交换液相层析后 ,除去杂蛋白及大量容易堵柱的糖类等物质 ,最后通过亲和柱层析 ,分离出了纯的目标蛋白———重组肿瘤坏死因子 (TNF_α)。经凝胶电泳鉴定为单一的谱带 ,分子量为 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子α 转基因蓝藻 鱼腥藻7120 亲和层析 表达 产物
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