异子蓬SabHLH169基因的克隆及抗旱功能分析 被引量：3

1

作者 鄢梦雨 韦晓薇 +1 位作者 曹婧 兰海燕 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期328-339,共12页

碱性螺旋-环-螺旋(basic belix-loop-helix,bHLH)转录因子是真核生物中最大的转录因子家族之一,其成员广泛参与植物生长、发育和胁迫响应。前期在异子蓬(Suaeda aralocaspica)光合作用关键酶PEPC-1的研究中筛选到一个可能与SaPEPC-1启... 碱性螺旋-环-螺旋(basic belix-loop-helix,bHLH)转录因子是真核生物中最大的转录因子家族之一,其成员广泛参与植物生长、发育和胁迫响应。前期在异子蓬(Suaeda aralocaspica)光合作用关键酶PEPC-1的研究中筛选到一个可能与SaPEPC-1启动子相互作用的bHLH转录因子SabHLH169,探明该基因功能将为后期异子蓬bHLH基因的深入研究奠定基础。通过克隆获得该基因,采用生物信息学、实时荧光定量PCR等方法,初步探究SabHLH169基因的耐旱功能。结果显示,SabHLH169包含2 100 bp核苷酸,编码699个氨基酸,其蛋白质C末端具有典型的bHLH结构域,原核表达和Western blot分析表明,SabHLH169重组蛋白能够正确表达,其分子量大小与预测结果一致。过表达SabHLH169的拟南芥转基因株系在萌发期具有更高的耐旱性;干旱胁迫下,转基因拟南芥中3个干旱胁迫相关基因AtRD22、AtRD29A和AtDREB2A以及3个光合作用关键酶基因AtLhcb2、AtRubicso和AtPEPC的表达水平显著升高,且AtPEPC酶活性被显著增强。由此推测,SabHLH169基因可能在干旱胁迫响应中具有潜在功能。 展开更多

关键词 异子蓬 BHLH 干旱胁迫 转基因拟南芥 光合关键酶

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表达外源DsCOR转基因拟南芥的筛选及其抗寒性 被引量：2

2

作者 林强 陈麒民 +1 位作者 田磊 乔代蓉 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期184-188,共5页

为验证播娘蒿抗寒基因DsCOR的抗寒功能,在实验室前期DsCOR基因大量研究的基础上,本研究通过农杆菌介导花序浸染法把诱导型表达载体PBI121-DsCORpro681-DsCOR转入COR15a缺陷型拟南芥中(A-S),筛选获得转DsCOR基因阳性苗(A-I),并测定了A-I... 为验证播娘蒿抗寒基因DsCOR的抗寒功能,在实验室前期DsCOR基因大量研究的基础上,本研究通过农杆菌介导花序浸染法把诱导型表达载体PBI121-DsCORpro681-DsCOR转入COR15a缺陷型拟南芥中(A-S),筛选获得转DsCOR基因阳性苗(A-I),并测定了A-I、A-S和野生型(A-W)拟南芥在4℃低温胁迫下的叶片脯氨酸含量、电解质渗透率和幼苗在-4℃下存活率等抗寒生理指标;使用Real-time quantitative RT-PCR检测A-I在低温胁迫下DsCOR基因的表达规律.结果显示,A-W和A-I两种植株叶片脯氨酸含量在低温处理过程中显著增加,从处理前70μg g^(-1)到处理后12h分别升至453μg g^(-1)和406μg g^(-1)并趋于稳定,A-S叶片脯氨酸含量变化不大(30^(-1)05μg g^(-1)).随着处理时间增加,A-S叶片电解质渗透率升高较明显,36 h后达到45.2%;而A-W和A-I两种植株叶片电解质渗透率最高分别达到14.3%和16.3%.幼苗存活率统计结果显示,A-S缺失COR15a后,在-4℃处理后该株系幼苗全部死亡,而A-W和A-I两个株系都有较高的存活率,分别达到53%和83%.抗寒生理指标结果表明转DsCOR基因拟南芥的抗寒能力已得到显著提高,达到野生型拟南芥水平.Real-time quantitative RT-PCR检测显示DsCOR基因在A-I中表达明显受到低温胁迫诱导.综上,DsCOR基因在COR15a缺陷型拟南芥中实现了成功表达,并显著提高了其抗寒性,最终验证了播娘蒿抗寒基因DsCOR的抗寒功能. 展开更多

关键词 播娘蒿 DsCOR基因 转基因拟南芥 诱导型表达 低温胁迫

原文传递

中间锦鸡儿WRKY75基因对拟南芥耐受盐和ABA能力的影响 被引量：7

3

作者 万永青 毛铭铢 +4 位作者 万东莉 柳金华 王光霞 李国婧 王瑞刚 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期17-25,共9页

该研究从旱生灌木中间锦鸡儿中克隆得到1个CiWRKY75基因。序列分析显示,CiWRKY75开放阅读框长570bp,编码189个氨基酸,含有1个WRKYGQK基序和1个C2H2型锌指结构,属于第二类WRKY转录因子。亚细胞定位显示,CiWRKY75定位于细胞核。实时荧光定... 该研究从旱生灌木中间锦鸡儿中克隆得到1个CiWRKY75基因。序列分析显示,CiWRKY75开放阅读框长570bp,编码189个氨基酸,含有1个WRKYGQK基序和1个C2H2型锌指结构,属于第二类WRKY转录因子。亚细胞定位显示,CiWRKY75定位于细胞核。实时荧光定量PCR检测表明,CiWRKY75基因的表达受盐胁迫和ABA诱导。在拟南芥中过量表达CiWRKY75后,与野生型拟南芥相比,转基因株系种子的萌发率在盐胁迫下降低,并且对盐胁迫的耐受能力明显减弱;ABA处理下,2个转基因株系的种子萌发率(10.3%、9.6%)较野生型(25.9%)明显降低。研究表明,CiWRKY75是中间锦鸡儿对盐和ABA响应的重要调控因子。 展开更多

关键词 中间锦鸡儿 WRKY转录因子 盐胁迫 ABA 转基因拟南芥

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转CiCHS基因拟南芥的黄酮代谢及抗氧化能力分析 被引量：6

4

作者 杨飞芸 刘坤 +2 位作者 崔爽 王瑞刚 李国婧 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期393-400,共8页

该研究克隆了中间锦鸡儿的查尔酮合成酶基因(CiCHS)并转入野生型拟南芥和tt4突变体,用qRT-PCR检测了转基因拟南芥中内源AtCHS基因的表达量,用分光光度法分析了转基因拟南芥的总黄酮、丙二醛含量及DPPH自由基清除能力,用HPLC法检测了转... 该研究克隆了中间锦鸡儿的查尔酮合成酶基因(CiCHS)并转入野生型拟南芥和tt4突变体,用qRT-PCR检测了转基因拟南芥中内源AtCHS基因的表达量,用分光光度法分析了转基因拟南芥的总黄酮、丙二醛含量及DPPH自由基清除能力,用HPLC法检测了转基因拟南芥的柚皮苷含量。结果显示:(1)转基因拟南芥中,内源AtCHS基因的表达量约为野生型的十分之一,总黄酮含量明显高于野生型;HPLC测得转基因株系中柚皮苷含量高于野生型;紫外照射处理前后转基因拟南芥中丙二醛积累量明显少于野生型。(2)转基因株系提取物对DPPH自由基清除能力显著高于野生型。(3)CiCHS基因互补拟南芥tt4突变体,转基因株系的种皮呈现浅棕色。研究表明,中间锦鸡儿CiCHS基因异源表达后生成了柚皮苷,使转基因植物的抗氧化性增强,部分恢复了tt4突变体的种皮颜色。 展开更多

关键词 中间锦鸡儿 查尔酮合成酶 柚皮苷 转基因拟南芥

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过量表达棉花CBF2基因提高转基因拟南芥抗旱耐盐能力 被引量：6

5

作者 陈芸 郑勇 +2 位作者 刘霞 任羽 马刘峰 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期888-900,共13页

CBF/DREB是一类植物中特有的转录因子,在植物抵抗逆境胁迫过程中发挥重要功能。本研究从陆地棉(Gossypium hirsutum L.)Coker 312中克隆获得1个棉花CBF/DREB基因,命名为Gh CBF2,该基因编码一个由216个氨基酸组成的CBF蛋白。序列分析结... CBF/DREB是一类植物中特有的转录因子,在植物抵抗逆境胁迫过程中发挥重要功能。本研究从陆地棉(Gossypium hirsutum L.)Coker 312中克隆获得1个棉花CBF/DREB基因,命名为Gh CBF2,该基因编码一个由216个氨基酸组成的CBF蛋白。序列分析结果显示,Gh CBF2与其他植物的CBF蛋白类似,含有AP2转录因子典型的保守结构域。干旱或高盐胁迫处理明显增加了Gh CBF2基因的表达量。亚细胞定位分析结果发现Gh CBF2定位在细胞核中。将Gh CBF2基因构建到由35S启动子调控的植物表达载体p MD上并转化拟南芥(Arabidopsis thaliana L.),结果表明,在干旱和盐胁迫条件下,过量表达Gh CBF2基因拟南芥的成活率显著高于野生型,并且游离脯氨酸和可溶性糖含量也高于野生型,说明转Gh CBF2基因提高了拟南芥的耐盐抗旱能力。采用实时荧光定量PCR方法分析胁迫相关标记基因COR15A、RD29A和ERD6的表达情况,结果显示转基因株系中的表达量显著高于野生型,说明Gh CBF2参与调控拟南芥干旱和盐胁迫相关基因的表达。 展开更多

关键词 棉花 CBF基因 转基因拟南芥 干旱胁迫 盐胁迫

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日本结缕草ZjADH基因对拟南芥的转化及其耐寒性分析 被引量：5

6

作者 张兰 滕珂 +4 位作者 肖国增 梁小红 许立新 尹淑霞 晁跃辉 《草业学报》 CSCD 北大核心 2016年第11期43-49,共7页

为研究日本结缕草ZjADH基因是否与植物耐寒有关,通过DNA重组技术将ZjADH基因插入3302Y质粒中,成功构建了植物表达载体3302Y-ZjADH,通过农杆菌介导的花序侵染法获得具有草铵膦抗性的转基因植株。PCR和qRT-PCR鉴定表明,目的基因已整合入... 为研究日本结缕草ZjADH基因是否与植物耐寒有关,通过DNA重组技术将ZjADH基因插入3302Y质粒中,成功构建了植物表达载体3302Y-ZjADH,通过农杆菌介导的花序侵染法获得具有草铵膦抗性的转基因植株。PCR和qRT-PCR鉴定表明,目的基因已整合入拟南芥基因组中并能够成功表达。对野生型和转基因拟南芥进行低温(4℃)处理和耐寒分析,结果表明,转基因拟南芥对低温胁迫的抵抗能力明显高于未转基因植株。在低温胁迫下,转基因拟南芥中脯氨酸的含量显著高于野生型植株,而活性氧的积累明显低于野生型植株;对转基因植物抗性相关基因的表达分析显示:转基因植物体内SOD、APX及LEA基因的表达水平明显高于未转基因植株,说明ZjADH基因可能通过提高转基因植物体内SOD、APX及LEA的表达活性来增强植物的抗寒性。综上所述,日本结缕草ZjADH基因的表达能够提高转基因植株的耐寒性,对ZjADH基因的研究也为进一步获得抗寒转基因日本结缕草植株奠定理论依据。 展开更多

关键词 ZjADH基因 转基因拟南芥 低温胁迫 脯氨酸 活性氧

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桑树病程相关蛋白基因MuPR1-2的克隆及功能分析 被引量：5

7

作者 张华梁 王红 +5 位作者 刘琪 赵亚楠 赵怀宁 莫瑶瑶 盖英萍 冀宪领 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期979-988,共10页

病程相关蛋白(pathogenesis-related proteins,PRs)是植物体内受病原物或其他环境因子胁迫而诱导表达的一类蛋白质,在植物抗病反应过程中起着非常重要的作用。在桑树叶片中扩增得到MuPR1-2基因(Gen Bank登录号:KC453994),该基因编码区全... 病程相关蛋白(pathogenesis-related proteins,PRs)是植物体内受病原物或其他环境因子胁迫而诱导表达的一类蛋白质,在植物抗病反应过程中起着非常重要的作用。在桑树叶片中扩增得到MuPR1-2基因(Gen Bank登录号:KC453994),该基因编码区全长609 bp,编码蛋白质含有202个氨基酸,具有一个典型的信号肽和PR蛋白结构域以及PR1蛋白所共有的α-β-α夹心结构。将Mu PR1-2与绿色荧光蛋白基因gfp融合转入拟南芥,通过对转基因拟南芥根尖的显微结构观察,证明MuPR1-2蛋白定位于细胞壁或分泌到细胞间隙。转入MuPR1-2基因的拟南芥对丁香假单胞菌番茄致病变种(Pst DC3000)和灰霉菌具有较强的抵抗能力,表明Mu PR1-2在植物防御功能中具有重要作用。 展开更多

关键词 桑树 病程相关蛋白 MuPR1-2基因 基因克隆 转基因拟南芥 抗性

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蒺藜苜蓿叶绿素酸酯a加氧酶(MtCAO)基因的克隆与功能分析 被引量：5

8

作者 刘文文 崔会婷 +4 位作者 尉春雪 龙瑞才 康俊梅 杨青川 王珍 《草业学报》 CSCD 北大核心 2020年第5期171-181,共11页

叶绿素含量直接影响植物光合效率,从而决定其生物量。叶绿素酸酯a加氧酶(CAO)催化叶绿素酸酯a转化成叶绿素酸酯b,是叶绿素合成的限速酶之一。本研究克隆了蒺藜苜蓿MtCAO,该基因编码531个氨基酸。进化分析表明,MtCAO与双子叶植物的CAO亲... 叶绿素含量直接影响植物光合效率,从而决定其生物量。叶绿素酸酯a加氧酶(CAO)催化叶绿素酸酯a转化成叶绿素酸酯b,是叶绿素合成的限速酶之一。本研究克隆了蒺藜苜蓿MtCAO,该基因编码531个氨基酸。进化分析表明,MtCAO与双子叶植物的CAO亲缘关系较近。高等植物CAO基因的结构保守,均含有9个外显子。MtCAO主要在绿色组织尤其是叶片中高丰度表达。瞬时表达拟南芥原生质体试验显示,MtCAO-GFP融合蛋白定位于叶绿体。表达模式分析表明,茉莉酸甲酯(MeJA,100μmol·L^-1)及黑暗处理抑制MtCAO的表达,而24 h内NaCl(100 mmol·L^-1)及聚乙二醇(PEG,5%)处理先诱导后抑制其表达,且该基因受昼夜节律调控。这与对MtCAO启动子区顺式作用元件的预测结果一致。类似于超表达AtCAO的拟南芥,超表达MtCAO的拟南芥株系叶色正常,叶绿素含量及鲜重与野生型差异不显著,推测是由于MtCAO高度保守的A结构域中的降解子导致的。 展开更多

关键词 蒺藜苜蓿 叶绿素酸酯a加氧酶 叶绿体定位 昼夜节律 转基因拟南芥

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苹果MdWRKY23基因提高植株抗寒性的功能分析

9

作者 张立华 王文博 +6 位作者 徐玉 张澳宁 吕龙 罗浙星 李兴国 李文慧 韩德果 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期23-33,共11页

为探究MdWRKY23基因对苹果抗寒能力的影响及其抗寒机制,以苹果(Malus domestica)为试验材料,通过基因克隆得到全长为1452 bp的WRKY家族基因MdWRKY23,该基因编码483个氨基酸。亚细胞定位研究发现,MdWRKY23蛋白定位于细胞核。实时荧光定量... 为探究MdWRKY23基因对苹果抗寒能力的影响及其抗寒机制,以苹果(Malus domestica)为试验材料,通过基因克隆得到全长为1452 bp的WRKY家族基因MdWRKY23,该基因编码483个氨基酸。亚细胞定位研究发现,MdWRKY23蛋白定位于细胞核。实时荧光定量PCR结果表明,MdWRKY23基因在植物根、成熟叶和新叶中表达量较高,在根尖表达量较低。低温处理时,MdWRKY23基因在新叶和根中表达量均呈先升后降趋势。与对照植株相比,MdWRKY23基因过表达植株具有更强的低温耐受力,且转基因株系中低温胁迫相关基因表达显著上调。研究表明MdWRKY23基因可显著提高植株抗寒性。 展开更多

关键词 苹果 低温胁迫 MdWRKY23 转基因拟南芥

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棉花E3泛素连接酶基因GhRING1-like的克隆及功能分析 被引量：4

10

作者 夏朝阳 安晓晖 +2 位作者 张中起 葛冬冬 刘康 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期39-50,共12页

[目的]RING(really interesting new gene) finger E3泛素连接酶在植物生长发育和抵御环境胁迫中具有重要作用。克隆棉花RING finger E3泛素连接酶基因GhRING1-like并分析其表达特征和功能,为该基因分子作用机制研究和育种应用奠定基础... [目的]RING(really interesting new gene) finger E3泛素连接酶在植物生长发育和抵御环境胁迫中具有重要作用。克隆棉花RING finger E3泛素连接酶基因GhRING1-like并分析其表达特征和功能,为该基因分子作用机制研究和育种应用奠定基础。[方法]根据棉花表达谱分析,选取并克隆干旱胁迫处理上调表达基因GhRING1-like,qRT-PCR分析GhRING1-like的组织表达特性及其对不同非生物胁迫和激素处理的响应模式;采用瞬时表达对GhRING1-like-GFP融合蛋白进行亚细胞定位分析;通过获得病毒介导的基因沉默(VIGS)棉花和过表达拟南芥植株,分析沉默或过表达GhRING1-like对植株生长发育及其抗旱性的影响。[结果]GhRING1-like基因序列全长996 bp,编码332个氨基酸,其C端含有RING-H_2(C3H_2C3)结构域。GhRING1-like定位于内质网上。GhRING1-like在叶片中优势表达; 200 g·L^(-1)PEG6000诱导处理1 h后瞬时显著上调表达12倍; GhRING1-like对Na Cl、ABA和SA的响应时间都在处理后3 h,上调表达均在5倍左右。干旱胁迫处理后,VIGS沉默GhRING1-like棉花叶片相对含水量和叶绿素荧光参数Fv/Fm分别较未沉默对照降低17.1%和30.6%,而电解质渗透率和丙二醛含量分别较对照提高70.8%和100%。过表达GhRING1-like显著提高了拟南芥种子萌发和幼苗期对于甘露醇引起的渗透胁迫的耐受性;可使营养生长中后期阶段的拟南芥在水分亏缺处理下的存活率提高2.4倍;转基因拟南芥叶片气孔开度降低51.2%,失水率明显降低。干旱胁迫下,过表达GhRING1-like使依赖于ABA诱导表达的At AREB1、At ERD15、AtRD29A上调表达,而对不依赖ABA的干旱胁迫诱导基因At DREB和脯氨酸合成基因At PLD没有影响。[结论]棉花GhRING1-like参与了植物非生物胁迫抗性的调控,主要通过依赖于ABA通路正向调控植物的抗旱反应。 展开更多

关键词 E3泛素连接酶 干旱胁迫 实时荧光定量PCR 病毒介导的基因沉默(VIGS) 转基因拟南芥

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过表达粗山羊草AetHIPP28增强拟南芥的耐镉性

11

作者 程在 魏加练 +1 位作者 杜旭烨 王洪程 《陕西师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期21-30,共10页

小麦(Triticum aestivum)D基因组供体粗山羊草(Aegilops tauschii)具有多种抵御生物和非生物胁迫的基因,是小麦遗传改良的主要基因库;重金属相关异戊二烯化植物蛋白(heavy metal-associated isoprene plant protein,HIPP)在调控植物的... 小麦(Triticum aestivum)D基因组供体粗山羊草(Aegilops tauschii)具有多种抵御生物和非生物胁迫的基因,是小麦遗传改良的主要基因库;重金属相关异戊二烯化植物蛋白(heavy metal-associated isoprene plant protein,HIPP)在调控植物的金属离子平衡和解毒过程中具有重要作用。通过农杆菌介导获得过表达粗山羊草AetHIPP28的转基因拟南芥,并利用一系列生理生化分析研究转基因拟南芥对镉(Cd)胁迫的响应。结果表明,AetHIPP28定位于细胞核和质膜上。过表达AetHIPP28可以显著增强拟南芥对Cd的耐受性,促进Cd胁迫下的拟南芥根系生长。在Cd的胁迫下,转基因拟南芥的活性氧(reactive oxygen species,ROS)积累显著低于野生型,而抗氧化酶活性显著高于野生型。过表达AetHIPP28明显抑制了Cd 2+的跨膜内流,并增加了Cd在根部的积累。以上结果表明,过表达AetHIPP28通过调节拟南芥中ROS的积累和抗氧化酶的活性,并改变Cd 2+在根部的内流和分布,提高拟南芥对Cd的耐受性。上述结果为了解AetHIPP28应对Cd胁迫的反应机制提供了一定参考。 展开更多

关键词 粗山羊草 AetHIPP28 CD胁迫 转基因拟南芥

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毛果杨×美洲黑杨Ptd-ERF71基因异源表达及功能

12

作者 杨波 刘念 +1 位作者 王倩文 陈俏丽 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期1-9,共9页

杨树叶锈病是杨树上的一种严重病害,对“三北”防护林体系造成极大威胁。ERF亚家族是植物所特有的AP2/ERF转录因子家族的一个主要亚家族,在植物抗病等生物胁迫响应中发挥重要作用。对E4锈菌具有耐病性的杂交杨‘2114’在接种E4锈菌12 h... 杨树叶锈病是杨树上的一种严重病害,对“三北”防护林体系造成极大威胁。ERF亚家族是植物所特有的AP2/ERF转录因子家族的一个主要亚家族,在植物抗病等生物胁迫响应中发挥重要作用。对E4锈菌具有耐病性的杂交杨‘2114’在接种E4锈菌12 h后,Ptd-ERF71持续上调表达。为探究Ptd-ERF71表达在‘2114’与E4锈菌互作过程中的调控作用,对Ptd-ERF71进行基因克隆及生物信息学分析,并采用Gateway转基因技术构建过表达载体,在拟南芥中进行异源表达并验证其功能。结果表明:Ptd-ERF71基因具有AP2保守结构域,属于ERF亚家族。将Ptd-ERF71在拟南芥中进行遗传转化,筛选并获得Ptd-ERF71基因过表达植株Ptd-ERF71-OE#1和Ptd-ERF71-OE#2。拟南芥Ptd-ERF71-OE#1、Ptd-ERF71-OE#2和At-RAP2.6L-OE(拟南芥Ptd-ERF71同源基因过表达株系)对透明壳孢菌感病性均显著高于拟南芥Col-0(WT),但At-RAP2.6L的拟南芥突变体株系At-rap2.6l与WT的感病性无显著差异。进一步分析表明,Ptd-ERF71基因过表达可能影响XGA-β1,3、ATL79、ZFCCCH67等植物防御相关基因表达,抑制‘2114’对E4侵染的过度防御,从而降低免疫反应对生长的影响。这种抑制作用在拟南芥与病原物的亲和型互作关系中促进拟南芥的感病性。 展开更多

关键词 杨树叶锈病 ERF 落叶松-杨栅锈菌 转基因拟南芥

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珍稀泌盐植物长叶红砂RtSOD基因的克隆及功能分析 被引量：4

13

作者 索雅飞 杜超 +2 位作者 李宁宁 王燕 王迎春 《草业学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期98-110,共13页

长叶红砂是一种强旱生泌盐盐生植物,对盐渍荒漠环境具有极强的适应性。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)在植物抵御逆境胁迫过程中发挥着重要作用。本研究利用已有长叶红砂转录组数据库中SOD基因的已知序列设计引物,采用PCR方... 长叶红砂是一种强旱生泌盐盐生植物,对盐渍荒漠环境具有极强的适应性。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)在植物抵御逆境胁迫过程中发挥着重要作用。本研究利用已有长叶红砂转录组数据库中SOD基因的已知序列设计引物,采用PCR方法克隆得到大小为663bp、编码220个氨基酸的SOD基因的开放阅读框,并将其定名为RtSOD。预测该基因编码蛋白分子量为55.90kDa,理论等电点5.11。多重序列比对分析结果显示该蛋白属于Cu/Zn SOD家族,与其他植物中SOD蛋白同源性较高。系统进化分析结果显示RtSOD基因与刚毛柽柳的SOD基因亲缘关系较近。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析结果显示NaCl、4℃、PEG、H_2O_2及ABA处理均能诱导该基因表达。构建RtSOD真核表达载体,将其转化到拟南芥中,结果发现:盐、干旱胁迫条件下,转RtSOD基因拟南芥的生长状况明显优于野生型,转基因株系抗氧化酶活性(SOD、POD、CAT)和脯氨酸含量较野生型显著升高,H_2O_2及MDA含量较野生型显著降低。qRT-PCR检测发现转基因拟南芥中响应逆境胁迫相关基因的表达量均显著高于野生型。上述结果说明RtSOD基因的过表达可提高转基因植物的抗逆性,进一步说明RtSOD参与长叶红砂对非生物胁迫的响应,是该植物抗氧化系统中的重要元件。 展开更多

关键词 长叶红砂 超氧化物歧化酶 非生物胁迫 转基因拟南芥

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拟南芥AtGluRS相互作用蛋白质VDAC及其转基因植物表型分析 被引量：3

14

作者 何菡 严金平 +4 位作者 张建军 刘震 张皖蓉 童仕波 杨毅 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期398-402,共5页

电压依赖性阴离子通道蛋白质(voltage-dependent anion channel,VDAC)是拟南芥谷氨酰tRNA合成酶(AtGluRS)相互作用的蛋白质.为了研究VDAC蛋白的功能和作用,通过构建VDAC稳定表达载体,农杆菌介导的方法转化拟南芥,筛选和鉴定出VDAC过量... 电压依赖性阴离子通道蛋白质(voltage-dependent anion channel,VDAC)是拟南芥谷氨酰tRNA合成酶(AtGluRS)相互作用的蛋白质.为了研究VDAC蛋白的功能和作用,通过构建VDAC稳定表达载体,农杆菌介导的方法转化拟南芥,筛选和鉴定出VDAC过量和抑制表达植株.研究结果证实VDAC的过量和抑制表达植株影响气孔关闭和种子萌发.VDAC的过量表达导致植株对ABA敏感,VDAC的抑制表达降低了植株对ABA的敏感性.推测VDAC蛋白可能参与ABA信号途径. 展开更多

关键词 转基因拟南芥 ABA AtGluRS VDAC

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转耐辐射球菌irrE基因提高拟南芥盐胁迫耐受性的表型分析 被引量：4

15

作者 童仕波 文国琴 +2 位作者 林敏 杨毅 李旭锋 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2010年第4期90-94,共5页

耐辐射球菌中的irrE基因作为一种全局性调节因子,在抵御极端辐射照射时起着至关重要的作用。利用农杆菌介导的花序浸染法,将irrE基因转化拟南芥,筛选和鉴定出表达irrE的植株,并分析了转基因植株的盐胁迫耐受能力。结果显示,转irrE拟南... 耐辐射球菌中的irrE基因作为一种全局性调节因子,在抵御极端辐射照射时起着至关重要的作用。利用农杆菌介导的花序浸染法,将irrE基因转化拟南芥,筛选和鉴定出表达irrE的植株,并分析了转基因植株的盐胁迫耐受能力。结果显示,转irrE拟南芥表现出对盐胁迫的耐受性提高;在盐胁迫下,转基因拟南芥体内脯氨酸含量比野生型有明显的提高。RNA半定量分析显示转基因植株中AtNHX1表达水平升高。因此推测irrE基因在转基因拟南芥中调控了AtNHX1的表达,引起了植株的盐胁迫耐受性提高。 展开更多

关键词 转基因拟南芥 irrE基因 盐胁迫

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VpSBP3基因负向调控转基因拟南芥盐胁迫抗性 被引量：4

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作者 陈果 曲衍杰 +4 位作者 任桓质 于柏 张玉刚 祝军 侯鸿敏 《青岛农业大学学报（自然科学版）》 2021年第1期7-14,共8页

葡萄作为世界上重要的落叶果树,具有较高的经济、生态以及社会效益。近年来,葡萄受到盐胁迫的影响,导致其产量与品质都有所降低。本研究利用同源克隆法获得VpSBP3转录因子,并利用花絮浸染法将其转入拟南芥中获得转基因株系。在盐胁迫下... 葡萄作为世界上重要的落叶果树,具有较高的经济、生态以及社会效益。近年来,葡萄受到盐胁迫的影响,导致其产量与品质都有所降低。本研究利用同源克隆法获得VpSBP3转录因子,并利用花絮浸染法将其转入拟南芥中获得转基因株系。在盐胁迫下,测定了野生对照、pCAMBIA2300空载体对照和VpSBP3转基因拟南芥株系的萌发率、根长、电导率、MDA含量等指标。结果发现在盐胁迫条件下,相较于对照,转基因株系的种子萌发率更低、根长更短、相对电导率和丙二醛的含量更高。表明该转录因子可能在转基因拟南芥盐胁迫响应中具有负向调控作用,这为以后SBP家族基因在葡萄抗逆性方面的研究奠定了前期理论基础。 展开更多

关键词 盐胁迫 VpSBP3基因 转基因拟南芥

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玉米ZmEREB46基因调控耐渍性功能探究

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作者 唐开媛 梁昆 +2 位作者 张彦军 王兴荣 邱法展 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期139-147,共9页

为鉴定和发掘玉米渍水胁迫抗性基因,克隆玉米ERF家族成员ZmEREB46(Zm00001d015759)基因,同时对该基因进行重测序分析、功能变异位点鉴定以及表达模式分析,并进一步在模式植物拟南芥中初步探究ZmEREB46参与耐渍的功能。结果显示,ZmEREB4... 为鉴定和发掘玉米渍水胁迫抗性基因,克隆玉米ERF家族成员ZmEREB46(Zm00001d015759)基因,同时对该基因进行重测序分析、功能变异位点鉴定以及表达模式分析,并进一步在模式植物拟南芥中初步探究ZmEREB46参与耐渍的功能。结果显示,ZmEREB46编码1个AP2/EREBP类转录因子;相较于耐渍自交系A3237,ZmEREB46基因编码区及启动子区在渍水敏感自交系A3239中分别存在1个G/A的转换以及1个911 bp片段插入,911bp片段的插入显著抑制了渍水敏感自交系A3239中ZmEREB46基因的表达;亚细胞定位结果显示,ZmEREB46定位在细胞核中;荧光定量PCR结果显示,ZmEREB46受渍水胁迫诱导上调表达,渍水处理8 h后ZmEREB46在耐渍自交系A3237中的表达量是渍水敏感自交系A3239中的2倍。结果表明,ZmEREB46在拟南芥中过量表达提高了拟南芥苗期的耐渍性。 展开更多

关键词 玉米 渍水胁迫 乙烯响应因子 ZmEREB46 转基因拟南芥

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转甜瓜CmSAMDC基因拟南芥的获得及其耐盐性研究 被引量：3

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作者 刘长命 张显 王永琦 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1179-1186,共8页

该研究以哥伦比亚生态型野生拟南芥为材料,将甜瓜CmSAMDC基因构建到植物双元表达载体pCAMBIA1304上,采用农杆菌介导法转入拟南芥,在含有50mg/L潮霉素(Hyg)MS固体培养基上筛选转基因后代,并利用T3代转基因幼苗进行耐盐性分析。结果显示:... 该研究以哥伦比亚生态型野生拟南芥为材料,将甜瓜CmSAMDC基因构建到植物双元表达载体pCAMBIA1304上,采用农杆菌介导法转入拟南芥,在含有50mg/L潮霉素(Hyg)MS固体培养基上筛选转基因后代,并利用T3代转基因幼苗进行耐盐性分析。结果显示:(1)成功构建了植物超表达载体35S∷CmSAMDC,并经农杆菌介导法转化拟南芥,潮霉素抗性筛选后获得了转CmSAMDC基因拟南芥T3代植株。(2)转CmSAMDC基因拟南芥T3代幼苗在含100、150、200mmol/L NaCl培养基中,侧根长势比野生型植株更为健壮;在200mmol/L NaCl浇灌处理后,转CmSAMDC基因T3代植株仍能维持正常生长,而野生型植株的生长明显受到抑制;在400mmol/L NaCl浇灌处理后16d,野生型植株逐渐死亡,而转基因植株仍能继续存活;对盐胁迫后植株的脂质过氧化程度(MDA)测定显示,野生型植株MDA水平较转基因植株上升更为明显。研究表明,过表达甜瓜CmSAMDC基因增强了转基因拟南芥的耐盐性。 展开更多

关键词 甜瓜 CmSAMDC 转基因拟南芥 耐盐性 激素

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过表达胡杨PeAnn1负调控拟南芥的抗旱性 被引量：3

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作者 武霞 张一南 +5 位作者 赵楠 张莹 赵瑞 李金克 周晓阳 陈少良 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期14-25,共12页

【目的】Annexins是原核生物和真核生物中普遍存在的一大类膜联蛋白家族,能够参与氧化胁迫、热胁迫、干旱胁迫和盐胁迫等许多胁迫响应过程。但在胡杨中,对膜联蛋白家族在抗逆性中的作用情况还缺乏了解。本文研究胡杨Anneixn1在植物耐受... 【目的】Annexins是原核生物和真核生物中普遍存在的一大类膜联蛋白家族,能够参与氧化胁迫、热胁迫、干旱胁迫和盐胁迫等许多胁迫响应过程。但在胡杨中,对膜联蛋白家族在抗逆性中的作用情况还缺乏了解。本文研究胡杨Anneixn1在植物耐受渗透胁迫和干旱中的作用。【方法】本研究对渗透胁迫诱导的PeAnn1基因表达进行检测,对Pe Ann1进行相关生物信息学分析,与毛白杨、拟南芥、大豆和水稻膜联蛋白基因家族成员进行序列比对和系统进化树分析,以过表达PeAnn1拟南芥(PeAnn1-OE1和PeAnn1-OE2)、Annexin1突变体(atann1)和野生型拟南芥(WT)为实验材料,利用不同浓度甘露醇处理(0、150、200、250、300 mmol/L)模拟渗透胁迫,并对各株系进行土壤干旱和复水处理,测定了不同处理株系的萌发率、根长、叶绿素含量及荧光参数、过氧化氢含量、抗氧化酶活性和基因表达等指标,分析了不同基因型拟南芥的抗旱性。【结果】短期渗透胁迫处理诱导了胡杨叶片中PeAnn1基因的上调表达。PeAnn1基因序列与毛白杨PtAnn1相似度最高,与PtAnn1亲缘关系较近。在甘露醇培养基上,过表达PeAnn1拟南芥的生存率和根长生长受到明显的抑制,且随着甘露醇浓度的升高,差异显著(P <0.05)。土壤干旱8 d后测得的转基因拟南芥的叶绿素SPAD值、PSⅡ最大光量子效率(F_v/F_m)、实际光合量子产量(ΦPSⅡ)和相对电子传递速率(ETR)均显著低于野生型和突变体(P <0.05)。复水后,PeAnn1转基因拟南芥光合参数的恢复程度也较低。在渗透胁迫下,转基因植株抗氧化物酶SOD、POD、CAT的活性以及编码基因的表达量显著低于野生型和突变体,不能清除过多活性氧,导致氧化伤害。【结论】以上结果表明,过表达PeAnn1降低了拟南芥对水分逆境的抗性。 展开更多

关键词 胡杨 膜联蛋白 抗旱性 活性氧 转基因拟南芥

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马尾松谷胱甘肽过氧化物酶PmGPX6基因cDNA克隆及转化拟南芥耐旱性初步研究 被引量：3

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作者 蔡琼 丁贵杰 文晓鹏 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2016年第6期839-846,共8页

[目的]克隆马尾松谷胱甘肽过氧化物酶基因,并对其进行功能研究。[方法]采用RACE技术克隆基因c DNA序列,实时荧光定量PCR检测基因在马尾松干旱胁迫下的表达模式,花序浸泡法转化拟南芥,并对转基因与野生型拟南芥的生长表型和根系生长进行... [目的]克隆马尾松谷胱甘肽过氧化物酶基因,并对其进行功能研究。[方法]采用RACE技术克隆基因c DNA序列,实时荧光定量PCR检测基因在马尾松干旱胁迫下的表达模式,花序浸泡法转化拟南芥,并对转基因与野生型拟南芥的生长表型和根系生长进行分析。利用荧光显微镜技术对转基因拟南芥不定根进行GFP荧光检测。[结果]克隆到1个871 bp的GPX基因全长c DNA序列,命名为Pm GPX6。Pm GPX6包括513 bp的完整开放阅读框,编码170个氨基酸残基。Pm GPX6蛋白与油松Pt GPX蛋白同源性达95%。Pm GPX6在马尾松根中高表达,茎、叶中表达量低。在干旱胁迫下,Pm GPX6在根、茎、叶中的表达量均在第15天达到最大,随后出现下降趋势。过表达Pm GPX6与野生型拟南芥植株在正常水分条件下表型与根长差异不大,但在干旱胁迫下,转基因植株根系更长。转基因拟南芥根在蓝色光激发下能发出强烈的绿色荧光,表明Pm GPX6基因能高效表达。[结论]推测Pm GPX6可能参与马尾松干旱胁迫应答。 展开更多

关键词 马尾松 谷胱甘肽过氧化物酶 转基因拟南芥 抗旱性

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