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Identification of differential gene expressions in colorectal cancer and polyp by cDNA microarray 被引量:4
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作者 Yi-Chen Dai Xiao-San Zhu +7 位作者 Qing-Zhen Nan Zhang-Xin Chen Jun-Pei Xie Yu-Ka Fu Yuan-Yuan Lin Qing-Na Lian Qiao-Fang Sang Xiao-Juan Zhan 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2012年第6期570-575,共6页
AIM: TO screen the differential expressed genes in colorectal cancer and polyp tissue samples. METHODS: Tissue specimens containing 16 cases of colorectal adenocarcinoma and colorectal polyp vs nor- mal mucosae were... AIM: TO screen the differential expressed genes in colorectal cancer and polyp tissue samples. METHODS: Tissue specimens containing 16 cases of colorectal adenocarcinoma and colorectal polyp vs nor- mal mucosae were collected and subjected to cDNA microarray and bioinformatical analyses. Quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction (qRT- PCR) was used to confirm some of the cDNA microarray data.RESULTS: The experimental data showed that eight genes were differentially expressed, most of which were upregulated in adenomatous polyp lesions. Forty-six genes expressions were altered in colorectal cancers, of which 29 were upregulated and 17 downregulated, as compared to the normal mucosae. In addition, 18 genes were similarly altered in both adenomatous polyps and colorectal cancer, qRT-PCR analyses confirmed the cDNA microarray data for four of those 18 genes: MTA1, PDCD4, TSC1 and PDGFRA. CONCLUSION: These differentially expressed genes likely represent biomarkers for early detection of co- Iorectal cancer and may be potential therapeutic targets after confirmed by further studies. 展开更多
关键词 Colorectal polyp Colorectal cancer cDNA mi-croarray Quantitative reverse transcription-polymerasechain reaction
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Expression of the B-Cell Lymphoma/Leukemia 11A Gene in Malignant Hematological Cell Lines through Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction
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作者 Yang-jun GAO Don-g-mei HE +3 位作者 Shao-hua CHEN Xiao-juan YAN Xiao-mao HU Yang-qiu LP 《Clinical oncology and cancer researeh》 CAS CSCD 2011年第4期242-246,共5页
The B-cell lymphoma/leukemia 11A (BCL11A) gene is essential for normal lymphoid development and has been associated with hematological malignancies. In the current study, the relative expression level of BCL11A in m... The B-cell lymphoma/leukemia 11A (BCL11A) gene is essential for normal lymphoid development and has been associated with hematological malignancies. In the current study, the relative expression level of BCL11A in malignant hematological cell lines was evaluated through real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR). METHODS The relative expression level of BCLllA mRNA in malignant hematological cell lines was determined through qRT- PCR using SYBR Green I dye. Glyceraldehyde-3-phosphate dehydro- genase was used as the reference gene to confirm the relative expression level of BCL11A gene mRNA. RESULTS The relative expression level of BCL11A mRNA in cell lines from B-cell malignancies was significantly higher compared with that from acute rnyeloid leukemia (P 〈 0.05). Different cell lines with malignant B-cells exhibited a wide range of BCL11A expressions ranging from 27.37 to 93.38. CONCLUSION The overexpression of BCL11A gene mRNA in malignant B-cells might play a role in B-cell lymphoma/leukemia. 展开更多
关键词 B-cell lymphoma/leukemia 11A (BCL11A) malignantB-cells real-time quantitative reverse transcription-polymerasechain reaction.
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非小细胞肺癌组织中促红细胞生成素及其受体mRNA的表达及意义 被引量:5
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作者 俞婷婷 单莉 韩志刚 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2013年第3期203-206,共4页
目的探讨促红细胞生成素(EPO)及其受体(EPO-R)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及与临床病理参数的关系。方法采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测31例NSCLC组织、相应的癌旁组织及21例肺良性病变组织中EPO和EPO-R的mRNA水平,并分... 目的探讨促红细胞生成素(EPO)及其受体(EPO-R)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及与临床病理参数的关系。方法采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测31例NSCLC组织、相应的癌旁组织及21例肺良性病变组织中EPO和EPO-R的mRNA水平,并分析其水平与NSCLC临床病理参数的关系。结果 EPOmRNA和EPO-RmRNA在NSCLC组织中的相对表达量分别为0.79±0.18和0.60±0.13,在癌旁组织中分别为0.23±0.09和0.17±0.09,在肺良性病变组织中分别为0.19±0.11和0.13±0.09。EPOmRNA和EPO-RmRNA在NSCLC组织中的表达高于癌旁组织和肺良性病变组织,差异有统计学意义(P<0.05)。EPOmRNA和EPO-RmRNA的表达与NSCLC的临床分期、病理分型及吸烟史均无关(P>0.05)。结论 NSCLC中EPO/EPO-RmRNA高表达,提示EPO/EPO-R可能参与肿瘤的发生过程,因此可将其表达水平作为NSCLC的辅助性诊断指标。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 促红细胞生成素 促红细胞生成素受体 逆转录-聚合酶链式反应
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粪便标本小肠结肠炎耶尔森菌筛检方法的比较 被引量:4
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作者 潘凌子 伦永志 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2018年第3期340-343,共4页
目的比较分离培养法、反转录-聚合酶链反应法对腹泻粪便中小肠结肠炎耶尔森菌的检测情况。方法在2016年6月至2017年6月临床收治的腹泻患者中选取368例,均使用分离培养法、反转录-聚合酶链反应法对其粪便中的小肠结肠炎耶尔森菌展开检验... 目的比较分离培养法、反转录-聚合酶链反应法对腹泻粪便中小肠结肠炎耶尔森菌的检测情况。方法在2016年6月至2017年6月临床收治的腹泻患者中选取368例,均使用分离培养法、反转录-聚合酶链反应法对其粪便中的小肠结肠炎耶尔森菌展开检验,对比分析两种方法的检验结果。结果反转录-聚合酶链反应法阳性率为77.17%,比分离培养法的51.09%高,差异有统计学意义(P<0.05);反转录-聚合酶链反应法致病菌株检出率为83.10%,高于分离培养法的59.57%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对腹泻患者粪便标本中的小肠结肠炎耶尔森菌检测时,相较于分离培养法,反转录-聚合酶链反应法阳性检出率更高,可使小肠结肠炎耶尔森菌性腹泻诊断准确率提升。 展开更多
关键词 腹泻 小肠结肠炎耶尔森菌 分离培养法 反转录-聚合酶链反应法
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乳腺癌前哨淋巴结术中分子诊断的研究 被引量:4
5
作者 王永胜 刘艳辉 +7 位作者 欧阳涛 杨新华 吴炅 苏逢锡 孙晓 廖宁 仲伟霞 杨文涛 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期81-85,共5页
目的 评估乳腺癌前哨淋巴结(SLN)术中分子诊断--GeneSearchTM BLN Assay (BLNa)的诊断价值.方法 2009年2至6月,全国6家乳腺中心的479例乳腺癌患者入组本研究.SLN均垂直于长轴切割为1.5~3 mm组织块,术中奇数组织块行BLNa检测,术后... 目的 评估乳腺癌前哨淋巴结(SLN)术中分子诊断--GeneSearchTM BLN Assay (BLNa)的诊断价值.方法 2009年2至6月,全国6家乳腺中心的479例乳腺癌患者入组本研究.SLN均垂直于长轴切割为1.5~3 mm组织块,术中奇数组织块行BLNa检测,术后偶数组织块行逐层切片病理检测(采用间隔150 μm的逐层切片HE染色,每个组织块取6张切片).214例患者的偶数组织块行术中快速冰冻病理(FS)检测,156例患者的所有组织块术中行印片细胞学(TIC)检测.结果 BLNa操作呈现良好的学习曲线,各中心的敏感性和特异性差异均无统计学意义(分别P=0.672;P=0.628),中位操作时间约35 min.以病例数为统计对象分析,BLNa的准确性、敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为91.4%、87.5%、92.9%、81.8%、95.3%,其敏感性与FS相似(84.5%,P=0.576),显著优于TIC(75.0%,P=0.049).以淋巴结数为统计对象分析,BLNa的准确性、敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为93.0%、85.6%、94.6%、76.6%、96.9%,其敏感性与FS相似(84.9%,P=0.885),显著优于TIC(70.0%,P=0.007).对于伴有宏转移的SLN,BLNa的敏感性为93.6%,与FS相似(95.6%,P=0.558),显著优于TIC(80.9%,P=0.011);对于伴有微转移的SLN,BLNa的敏感性为57.5%,有优于FS和TIC的趋势(分别44.4%,P=0.356;30.8%,P=0.094).结论 GeneSearchTM BLN Assay检测快速,易于操作,具有较高的准确性和可重复性,其敏感性优于FS和TIC,可作为SLN术中诊断的首选. 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 前哨淋巴结活组织检查 逆转录聚合酶链反应
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人β防御素-4在牙龈组织表达的新发现 被引量:3
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作者 李欣忆 段丁瑜 +2 位作者 王盼盼 韩波 徐屹 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期165-168,共4页
目的探讨牙龈组织中是否存在β防御素-4(hBD-4)及其分布情况。方法收集健康牙龈标本。采用免疫组织化学法检测18例牙龈组织标本hBD-4蛋白水平的分布;提取组织RNA,进行实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real time RT-PCR)检测30例牙龈标本... 目的探讨牙龈组织中是否存在β防御素-4(hBD-4)及其分布情况。方法收集健康牙龈标本。采用免疫组织化学法检测18例牙龈组织标本hBD-4蛋白水平的分布;提取组织RNA,进行实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real time RT-PCR)检测30例牙龈标本中hBD-4基因的表达水平。结果免疫组织化学检测结果显示,18例牙龈样本中有13例检出hBD-4;real time RT-PCR检测结果显示,30例牙龈组织中4例样本检测出hBD-4表达。结论hBD-4在健康牙龈组织中有不同水平的表达和分布,可能在维持牙周组织健康中起作用。 展开更多
关键词 牙龈 人β防御素-4 免疫组织化学 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应
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TACC3 mRNA及蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义 被引量:2
7
作者 侯婧 刘胜春 +4 位作者 李鹍鹏 张力 赵雪云 张作文 黄曼 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2012年第20期1535-1538,共4页
目的:探讨转录相关酸性卷曲蛋白3(transforming acidic coiled-coil proteins,TACC3)mRNA和蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法:收集手术切除乳腺癌及癌旁正常组织标本各85例,进行免疫组织化学染色、RT-PCR、Western blot的检测。... 目的:探讨转录相关酸性卷曲蛋白3(transforming acidic coiled-coil proteins,TACC3)mRNA和蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法:收集手术切除乳腺癌及癌旁正常组织标本各85例,进行免疫组织化学染色、RT-PCR、Western blot的检测。结果:乳腺癌组织中的TACC3 mRNA和蛋白的表达水平高于癌旁组织(P<0.05),且TACC3的表达与乳腺癌的分化程度、肿瘤直径、淋巴结的转移、P53表达相关,而与患者的年龄、是否绝经、ER、PR、Ki-67、HER-2等无明显相关。结论:TACC3在乳腺癌中的表达程度与临床病理特征有关,在乳腺癌发生发展过程中可能具有一定的作用。 展开更多
关键词 TACC3乳腺癌免疫组织化学RT—PCR WESTERN BLOT
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含Apoptin基因重组腺病毒的构建及鉴定 被引量:2
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作者 陈漉 金宁一 +6 位作者 李霄 刘立明 贾鹏 刘妍 高鹏 陆蕴松 迟宝荣 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第31期3505-3509,共5页
目的:构建携凋亡素(Apoptin)基因重组腺病毒,为进一步研究Apoptin基因抗肿瘤作用分子机制建立基础.方法:利用BamHⅠ和SpeⅠ双酶切质粒pVAX1-Apoptin,获得Apoptin片段并连接入pacAd5 CMV K-N pA,构建含Apoptin基因的穿梭质粒pacAd5-Apopt... 目的:构建携凋亡素(Apoptin)基因重组腺病毒,为进一步研究Apoptin基因抗肿瘤作用分子机制建立基础.方法:利用BamHⅠ和SpeⅠ双酶切质粒pVAX1-Apoptin,获得Apoptin片段并连接入pacAd5 CMV K-N pA,构建含Apoptin基因的穿梭质粒pacAd5-Apoptin.利用PacⅠ单酶切对pacAd5-Apoptin和腺病毒基因组质粒(pAd5)进行线性化处理后应用脂质体介导法共转染AAV-293细胞,分别利用蚀斑纯化和RT-PCR、Western blot等方法对重组病毒进行筛选和鉴定,并测定所获得重组病毒的滴度.结果:所构建重组腺病毒中的Apoptin基因得到了正确转录,表达产物的相对分子质量约为13kDa,与CVA阳性对照一致;所获得重组腺病毒可有效表达Apoptin蛋白,该蛋白与CAV阳性血清具有反应原性,重组病毒滴度为1011PFU/L.结论:成功构建含Apoptin基因的重组腺病毒,所获得重组病毒的滴度可以满足体内外实验要求. 展开更多
关键词 Apoptin基因 腺病毒载体 基因治疗 逆转 录-聚合酶链反应 免疫印迹法
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人可溶性肿瘤坏死因子受体1基因原核表达及活性鉴定
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作者 傅蕾 彭仕芳 +1 位作者 谭德明 刘洪波 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2007年第13期1494-1499,共6页
目的:构建人可溶性肿瘤坏死因子受体1基因的原核表达质粒,诱导sTNFR1-MBP融合蛋白表达,观察表达产物的生物学活性.方法:以HeLa细胞的总RNA为模板.用RT- PCR方法扩增sTNFR1全编码区基因片段,构建含有目的片段的T载体克隆及原核表达载体pM... 目的:构建人可溶性肿瘤坏死因子受体1基因的原核表达质粒,诱导sTNFR1-MBP融合蛋白表达,观察表达产物的生物学活性.方法:以HeLa细胞的总RNA为模板.用RT- PCR方法扩增sTNFR1全编码区基因片段,构建含有目的片段的T载体克隆及原核表达载体pMAL-c2x重组质粒亚克隆,经异丙基-β-D半乳糖苷酶(IPTG)诱导重组质粒菌表达sTNFR1,以淀粉树脂亲和层析法纯化重组蛋白,并对重组蛋白进行序列分析和Western blot鉴定.MTT法测定重组蛋白的生物学活性的测定.结果:经DNA序列分析和Western blot鉴定,成功构建了人sTNFR1重组质粒基因工程菌;在IPTG的诱导下,重组质粒菌能表达sTNFR1- MBP融合蛋白,SDS-PAGE显示在66 kDa处有一特异性表达条带;纯化的sTNFR1-MBP融合蛋白经Western blot证实具有生物学活性;生物活性实验(MTT法)显示可有效地封闭TNF-α对OSG7701的细胞毒性作用,随着重组蛋白浓度的增高(0.2,2,20,40,80 mg/L),对TNF-α细胞毒效应的抑制作用增强,细胞死亡率依次为69.98%±1.52%,60.05%±2.18%,46.27%±2.48%,37.02%±3.17%,1.83%±0.59%,1.71%±0.61%.结论:成功获得了具有生物学活性的人sTNFR1-MBP融合蛋白,为进一步研究奠定了基础. 展开更多
关键词 人可溶性肿瘤病坏死因子受体1 原核表达 免疫印迹 细胞毒性作用
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前列腺癌患者外周血单个核细胞PSA mRNA表达
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作者 毛建华 张灵 +7 位作者 计国义 潘玉琢 高洪文 王伟华 孔祥波 赵丹 李扬 赵雪俭 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期470-472,共3页
目的:检测前列腺癌患者及对照者外周血单个核细胞前列腺特异性抗原(PSA)mRNA表达,并探讨其临床意义。方法:选择39例前列腺癌患者,12例健康体检者作为对照,取5mL静脉血,肝素抗凝,Ficoll密度梯度离心分离外周血单个核细胞,RT-PC... 目的:检测前列腺癌患者及对照者外周血单个核细胞前列腺特异性抗原(PSA)mRNA表达,并探讨其临床意义。方法:选择39例前列腺癌患者,12例健康体检者作为对照,取5mL静脉血,肝素抗凝,Ficoll密度梯度离心分离外周血单个核细胞,RT-PCR检测PSA mRNA表达。结果:①39例前列腺癌患者外周血单个核细胞PSA mRNA表达阳性检出率66.7%(26/39),其中血清PSA〉20.0μg·L^-1者23例,PSA mRNA表达阳性检出率87.9%(20/23);血清PSA≤20.0μg·L^-1者16例,PsA mRNA表达阳性检出率37.5%(6/16)。对照组未见阳性表达。②16例血清PSA≤20.0μg·L^-1的前列腺癌患者PSA mRNA阳性表达的Gleason评分为;1~4分0/3,5~7分1/8,8~10分5/5,6例阳性者均为中、低分化癌。结论:外周血单个核细胞PSA mRNA的检测在血清PSA〉20.0μg·L^-1的前列腺癌患者中具有较高的敏感度,是一种可靠的检测方法。血清PSA≤20.0μg·L^-1的前列腺癌患者外周血单个核细胞PSA mRNA的检测可以预示微转移的发生。 展开更多
关键词 前列腺特异性抗原 前列腺肿瘤 单个核细胞 逆转录聚合酶链反应
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基于Qβ噬菌体的A群轮状病毒装甲RNA标准参考样品的研制
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作者 张奇 逄凤娇 +5 位作者 江艳华 李风铃 姚琳 王联珠 谭志军 翟毓秀 《中国食品卫生杂志》 北大核心 2018年第4期346-352,共7页
目的基于Qβ噬菌体装甲RNA技术构建内含A群轮状病毒(Rotavirus,RV)检测靶标的装甲RNA(Rotavirus armored RNA,AR-RV),并开展系统的初步定值、均匀性、稳定性研究。方法人工合成核酸片段QβSNRV,该片段5'端至3'端依次为Qβ噬菌... 目的基于Qβ噬菌体装甲RNA技术构建内含A群轮状病毒(Rotavirus,RV)检测靶标的装甲RNA(Rotavirus armored RNA,AR-RV),并开展系统的初步定值、均匀性、稳定性研究。方法人工合成核酸片段QβSNRV,该片段5'端至3'端依次为Qβ噬菌体成熟酶编码基因、衣壳蛋白编码基因、包装位点序列、RV检测靶标cDNA序列、多克隆位点序列,并将其克隆到pET-28a(+)载体中构建重组质粒pET-QβSNRV。将pET-QβSNRV转化大肠埃希菌BL21(DE3)并诱导表达,利用氯化铯密度梯度超速离心、丙烯葡聚糖凝胶层析纯化AR-RV后电镜观察,并参照GB/T 15000.3—2008《标准样品工作导则(3)标准样品定值的一般原则和统计方法》规定的方法与原则对制备的AR-RV开展定值、均匀性和稳定性研究。结果十二烷基硫酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)结果证实重组质粒在大肠埃希菌中有目的条带表达,大小约为14.1 kDa;经氯化铯密度梯度超速离心、丙烯葡聚糖凝胶层析纯化的AR-RV无杂蛋白干扰;电镜下可见结构完整的病毒样颗粒,大小约为25 nm;定值结果显示,AR-RV中检测靶标RNA的含量为(1.02±0.3)×107copies/μl;均匀性分析结果为F=0.66<F0.05(9,20),表明样品均匀性良好;稳定性结果表明,AR-RV在37℃可保存15 d、25℃可保存15 d、4℃可保存50 d、-20℃至少可保存270 d、-80℃至少可保存360 d。结论本研究基于Qβ噬菌体制备的AR-RV拷贝数高,均匀性和稳定性良好,可为RV分子检测提供安全、稳定的标准参考样品。 展开更多
关键词 轮状病毒 装甲RNA Qβ噬菌体 标准参考样品 实时荧光逆转录-聚合酶链式反应
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AGS细胞系中12-LOX的表达及其抑制剂对细胞增殖的影响 被引量:4
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作者 黄彩云 陈丰霖 +2 位作者 李建英 陈治新 王小众 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第14期1652-1657,共6页
目的:探讨人胃癌细胞系AGS中12-脂肪氧化酶(12- lipoxygenase,12-LOX)的表达情况及其抑制剂黄芩甙元(baicalein)对AGS细胞增殖的影响. 方法:AGS在含100 mL/L小牛血清+100 kU/L青、链霉素的RPMI1640培养基中常规培养.用RT-PCR 检测12-LOX... 目的:探讨人胃癌细胞系AGS中12-脂肪氧化酶(12- lipoxygenase,12-LOX)的表达情况及其抑制剂黄芩甙元(baicalein)对AGS细胞增殖的影响. 方法:AGS在含100 mL/L小牛血清+100 kU/L青、链霉素的RPMI1640培养基中常规培养.用RT-PCR 检测12-LOX在AGS中的表达情况,分别以20,40, 80 μmol/L baicalein干预细胞,用四氮唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)法在24,48,72 h 测量细胞吸光度,检测baicalein对细胞增殖的影响:用倒置显微镜和电子显微镜进行形态观察;通过脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和吖啶橙-溴化乙锭(AO-EB)染色法检测细胞凋亡指数. 结果:AGS细胞中存在12-LOXmRNA表达;MTT显示baicalein大致呈时间、剂量依赖性抑制细胞增殖(各组间P<0.01,除外40 μmol/L 24 h组与48 h组);AGS细胞存活率最高为82.1%,最低为38.4%.倒置显微镜下可见baicalein干预后的细胞皱缩,部分细胞胞体变圆,脱离贴壁状态,成为悬浮细胞;电镜下可见baicalein干预后的细胞出现了凋亡的特征性改变:核染色质边集及凋亡小体形成;AO-EB染色法显示除0μmol/L组不同时间点细胞凋亡指数无显著差异外(P>0.05),其余各干预组细胞凋亡指数均有显著差异(P<0.01);TUNEL染色法显示48 h时,baicalein 80μmol/L细胞调亡指数为38.37±0.36%而0 μmol/L组细胞调亡指数为7.27±0.21%,两组间存在显著差异(P<0.01). 结论:人胃癌细胞AGS中存在12-LOXmRNA表达,其特异性抑制剂baicalein能抑制AGS细胞增殖并促进其凋亡. 展开更多
关键词 AGS细胞系 12-LOX 表达 抑制剂 细胞增殖 胃癌
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糖尿病患者活动性人巨细胞病毒感染监测及临床意义 被引量:5
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作者 徐冉行 林伟良 +1 位作者 刘文虎 凌志强 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1195-1198,共4页
目的监测糖尿病患者活动性人巨细胞病毒(HCMV)感染,并探讨其临床意义。方法在HCMV pp65基因内自行设计一对引物,建立RT-PCR检测727例糖尿病患者及230名健康献血者外周血白细胞HCMVpp65 mRNA转录水平,同时应用抗体捕获酶联免疫法检测HCMV... 目的监测糖尿病患者活动性人巨细胞病毒(HCMV)感染,并探讨其临床意义。方法在HCMV pp65基因内自行设计一对引物,建立RT-PCR检测727例糖尿病患者及230名健康献血者外周血白细胞HCMVpp65 mRNA转录水平,同时应用抗体捕获酶联免疫法检测HCMV pp65-IgM。结果糖尿病患者HCMV-IgM及mRNA阳性率分别为11.14%和16.64%,与对照组(0.87%、2.17%)相比均差异有统计学意义(P<0.01);比较不同年龄段HCMV感染率,结果发现发病年龄<30岁的患者中HCMV-mRNA阳性率明显高于其他年龄组,从病程来看,病程<1年的糖尿病患者HCMV-mRNA阳性检出率最高。结论糖尿病患者易发生活动性的HCMV感染,RT-PCR检测HCMV pp65和抗体捕获HCMV pp65特异性IgM可快速有效地确诊HCMV活动性感染的发生。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 糖尿病 抗体捕获酶联免疫 RT-PCR
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牙龈卟啉单胞菌HA2基因与牙周病关系的研究 被引量:4
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作者 张荃 杨秋波 杨圣辉 《北京口腔医学》 CAS 2007年第4期181-185,共5页
目的利用PCR及RT-PCR检测慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P·g)HA2的DNA和RNA水平,探讨其分布规律及与牙周病的关系。方法12例慢性牙周炎患者共采集36个龈下菌斑标本,记录临床指标(探诊深度、临... 目的利用PCR及RT-PCR检测慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P·g)HA2的DNA和RNA水平,探讨其分布规律及与牙周病的关系。方法12例慢性牙周炎患者共采集36个龈下菌斑标本,记录临床指标(探诊深度、临床附着水平、牙龈指数、菌斑指数、龈沟出血指数),PCR及RT-PCR扩增龈下菌斑标本中的P·g HA2基因,扩增产物经琼脂糖电泳、拍照,应用计算机软件GeneTools扫描并计量其中的相对核酸含量。结果P·g HA2在DNA水平上的检出率为92%,在RNA水平上的检出率为86%。P·g HA2的DNA水平与探诊深度及牙龈指数之间存在正相关关系(P<0·01);P·g HA2的RNA水平与牙龈指数之间存在正相关关系(P<0·05)。结论P·g HA2基因广泛存在于慢性牙周炎患者的龈下菌斑中,且P·g HA2在DNA和RNA水平上与牙周状态关系密切,提示P·g HA2可能是P·g致病因子之一。 展开更多
关键词 牙龈卟啉单胞菌 HA2 聚合酶链反应 逆转录聚合酶链反应 慢性牙周炎
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双氯芬酸的抗增殖作用与细胞内环氧酶-2表达水平的关系 被引量:4
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作者 陈娜娜 吴曙光 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期590-592,597,共4页
目的检测体外培养的人肝细胞癌HepG2、Hep3B细胞和正常肝细胞系L02、QSG7701细胞以及正常人皮肤成纤维细胞Fb环氧酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)mRNA的表达,观察环氧酶抑制剂双氯芬酸(diclofenac)对上述细胞增殖的影响,以探讨双... 目的检测体外培养的人肝细胞癌HepG2、Hep3B细胞和正常肝细胞系L02、QSG7701细胞以及正常人皮肤成纤维细胞Fb环氧酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)mRNA的表达,观察环氧酶抑制剂双氯芬酸(diclofenac)对上述细胞增殖的影响,以探讨双氯芬酸抗增殖作用与细胞内COX-2表达的关系。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测各种细胞系COX-2mRNA的表达水平,采用cellcounting kit-8(CCK-8)细胞计数法测定药物作用72h后的细胞增殖活性,绘制生长曲线。结果肝细胞癌HepG2、Hep3B细胞和正常肝细胞L02均高表达COX-2mRNA,正常肝细胞QSG7701微弱表达COX-2mRNA,正常人皮肤成纤维细胞Fb不表达COX-2mRNA。双氯芬酸在10~200μmol·L^-1内呈浓度依赖性地抑制HepG2、Hep3B和L02细胞的增殖,作用72h的半数抑制浓度分别为76.41、35.21和87.44μmol·L^-1。双氯芬酸对QSG7701的抑制作用较弱,半数抑制浓度为170.23μmol-L^-1,对Fb细胞仅在浓度超过200μmol·L^-1时才表现出细胞毒性。结论环氧酶抑制剂双氯芬酸特异性地抑制COX-2mRNA高表达的肝细胞癌HepG2、Hep3B细胞和正常肝细胞L02的增殖.提示双氯芬酸通过COX-2途径起抗增殖作用。 展开更多
关键词 双氯芬酸 肝细胞癌 细胞增殖 环氧酶-2 逆转录聚合酶链反应
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海产品中溶藻弧菌的分离及多种方法鉴定效果的比较 被引量:4
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作者 赵晓娟 汪琦 +4 位作者 王紫薇 刘莉 韩笑 曹佳悦 曾静 《中国食品卫生杂志》 2017年第6期671-675,共5页
目的了解北京市市售海产品中溶藻弧菌的污染情况,并对使用不同方法鉴定溶藻弧菌的效果进行比较。方法样品经碱性蛋白胨水增菌后,分别于硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖(TCBS)琼脂培养基和科玛嘉弧菌显色培养基上划线培养,实时荧光聚合酶链... 目的了解北京市市售海产品中溶藻弧菌的污染情况,并对使用不同方法鉴定溶藻弧菌的效果进行比较。方法样品经碱性蛋白胨水增菌后,分别于硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖(TCBS)琼脂培养基和科玛嘉弧菌显色培养基上划线培养,实时荧光聚合酶链式反应(PCR)法鉴定可疑菌落。以rpoB基因测序方法为参考,比较了实时荧光PCR和VITEK两种方法的鉴定效果。结果对北京市水产品市场随机采集的116份海产品进行了检测,实时荧光PCR法鉴定出溶藻弧菌阳性样品95份,检出率高达82%。使用科玛嘉弧菌显色培养基的检出率高于TCBS培养基,分别为82%(95/116)和72%(83/116)。经rpoB基因核苷酸序列测定确定95株疑似菌株为溶藻弧菌。采用VITEK 2 COMPACT GN鉴定卡对这95株菌株进行鉴定,31株鉴定为溶藻弧菌,其余未能得到准确的鉴定结果。结论北京市市售海产品中溶藻弧菌检出率高。科玛嘉弧菌显色培养基比TCBS琼脂培养基更适于溶藻弧菌的分离,实时荧光PCR法的鉴定效果优于VITEK法。 展开更多
关键词 溶藻弧菌 分离鉴定 RPOB基因 实时荧光聚合酶链式反应 VITEK 2 COMPACT 海产品 食源性致病菌
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我国非肠道传播非甲非乙型肝炎(丙型)病毒NS3蛋白的部份cDNA克隆及序列分析 被引量:4
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作者 丛勉尔 刘崇柏 +1 位作者 孟宗达 陈淑芬 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第1期1-6,共6页
用15ml非肠道传播非甲非乙型肝炎病人的混合血清提取病毒RNA,经逆转录和聚合酶链反应(PCR)扩增,获得583个核苷酸的非肠道传播非甲非乙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白的cDNA片段.该片段与美国报道的同片段HCV cDNA原型比较,核酸序列同源性为80.9... 用15ml非肠道传播非甲非乙型肝炎病人的混合血清提取病毒RNA,经逆转录和聚合酶链反应(PCR)扩增,获得583个核苷酸的非肠道传播非甲非乙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白的cDNA片段.该片段与美国报道的同片段HCV cDNA原型比较,核酸序列同源性为80.9%,氨基酸序列同源性为93.2%。与日本报道的同片段J1 HCV cDNA相比较,核酸序列和氨基酸序列的同源性分别为92.6%和95.2%。用α-^(32)P同位素标记该片段,与HCV病人血清出现杂交反应。 展开更多
关键词 HCV 非甲非乙肝炎 逆转录
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癌-睾丸抗原SSX基因在肝细胞癌中mRNA水平的表达及意义 被引量:3
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作者 肖瑞雪 农蔚霞 +2 位作者 宋琼 陈芳 何少健 《中国医药导报》 CAS 2013年第5期4-6,共3页
目的观察癌-睾丸抗原SSX基因在肝癌组织和肝癌细胞株中mRNA水平的表达情况,探究该基因家族的表达与肝癌的诊断、治疗的关系,进而评价该基因家族作为肝癌免疫治疗靶点和多价肿瘤疫苗研制的可行性。方法对28例肝细胞癌和癌旁组织、3例肝... 目的观察癌-睾丸抗原SSX基因在肝癌组织和肝癌细胞株中mRNA水平的表达情况,探究该基因家族的表达与肝癌的诊断、治疗的关系,进而评价该基因家族作为肝癌免疫治疗靶点和多价肿瘤疫苗研制的可行性。方法对28例肝细胞癌和癌旁组织、3例肝硬化组织以及肝癌细胞株7404、HePG2、7721采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测癌-睾丸抗原SSX基因在mRNA水平的表达情况。结果 SSX-1、SSX-2、SSX-3在肝癌癌旁组织和肝硬化组织中均不表达。在收集的肝细胞癌组织中SSX-1、SSX-3基因表达阳性率较高(53.6%、57.1%),SSX-2表达阳性率相对较低(35.7%),其中SSX-1、SSX-2、SSX-3三种基因共同表达的有6例(21.4%),至少有两种SSX基因表达的有23例(82.1%)。结论癌-睾丸抗原某些SSX基因在肝细胞癌中高频率表达与肝癌的发生、发展有关,同时基因的共同表达结果又为多价瘤苗的研究提供了实验方向。 展开更多
关键词 肝细胞癌 肝癌细胞株 SSX 逆转录多聚酶链反应
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表皮生长因子受体蛋白和基因在口腔复发性阿弗他溃疡中表达的变化及意义 被引量:3
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作者 孙鹏 付小兵 +2 位作者 陈伟 张建强 闫颖 《口腔医学》 CAS 2004年第1期5-7,共3页
目的 观察表皮生长因子受体 (EGFR)在口腔复发性阿弗他溃疡 (RAU)组织中蛋白和基因表达变化。方法 用免疫组化和RT PCR技术检测EGFR在RAU中表达的变化。结果 RAU组织中EGFR的mRNA表达明显下降 (P <0 .0 5 )。EGFR在正常黏膜和RAU... 目的 观察表皮生长因子受体 (EGFR)在口腔复发性阿弗他溃疡 (RAU)组织中蛋白和基因表达变化。方法 用免疫组化和RT PCR技术检测EGFR在RAU中表达的变化。结果 RAU组织中EGFR的mRNA表达明显下降 (P <0 .0 5 )。EGFR在正常黏膜和RAU中表达水平较低 ,阳性表达位于细胞膜、胞质 ,正常黏膜中表达主要位于基底细胞层中。在RAU中该蛋白表达水平明显降低 (P <0 .0 5 )。结论 RAU中的EGFR表达受抑 。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体 复发性阿弗他溃疡 免疫组织化学 逆转录聚合酶链式反应
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喉癌患者多药耐药相关蛋白基因的表达及其临床意义 被引量:2
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作者 蔡晓岚 王天铎 +1 位作者 范献良 董频 《临床耳鼻咽喉科杂志》 CSCD 1999年第1期23-25,共3页
研究多药耐药相关蛋白基因(MRPmRNA)的表达与喉癌患者临床病理特征之间的关系。方法:应用逆转录一多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,检测了35例喉癌患者MRPmRNA的表达。结果:喉癌组织中MRPmRNA阳性表达... 研究多药耐药相关蛋白基因(MRPmRNA)的表达与喉癌患者临床病理特征之间的关系。方法:应用逆转录一多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,检测了35例喉癌患者MRPmRNA的表达。结果:喉癌组织中MRPmRNA阳性表达率为45.7%(16/35),其阳性表达强度在晚期肿瘤中明显增高(P<0.05),且与肿瘤颈淋巴结转移明显相关(P<0.01)。结论:MRPmRNA在喉癌中的表达,不仅提示其在多药耐药中的重要作用,亦影响肿瘤播散、转移等生物学特性。 展开更多
关键词 喉肿瘤 抗药性 基因表达 药物疗法 RT-PCR
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