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mTORC1-TFEB信号通路对肝脏缺血再灌注损伤模型大鼠肝细胞线粒体结构和肝功能的影响 被引量：1
1
作者 唐天豪 张莹 +4 位作者 吕宗伟 胡玉香 黄平 张玉 潘宁波 《贵州医科大学学报》 CAS 2023年第5期537-544,共8页
目的探讨mTORC1-TFEB信号通路对肝脏缺血再灌注损伤模型大鼠肝细胞线粒体结构及肝功能的影响。方法36只SD雄性大鼠随机均分为对照组、模型组及药物组,药物组大鼠术前3 d注射雷帕霉素溶液[2.0 mL/(kg·d)]、对照组和模型组大鼠注射... 目的探讨mTORC1-TFEB信号通路对肝脏缺血再灌注损伤模型大鼠肝细胞线粒体结构及肝功能的影响。方法36只SD雄性大鼠随机均分为对照组、模型组及药物组,药物组大鼠术前3 d注射雷帕霉素溶液[2.0 mL/(kg·d)]、对照组和模型组大鼠注射等体积生理盐水,药物组和模型组大鼠麻醉后开腹夹闭第一肝门再放开制作肝缺血再灌注损伤模型、对照组大鼠仅手术但不夹闭肝门,分别在术后24 h、72 h取大鼠肝脏组织HE染色观察肝脏组织细胞损伤程度,透射电镜分析肝细胞线粒体的超微结构变化,比色法检验肝脏组织谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)浓度水平,蛋白印迹实验(Western blot)和实时荧光PCR(RT-PCR)检测磷酸化mTORC1(p-mTORC1)和转录因子EB(TFEB)蛋白和mRNA表达。结果HE染色结果显示,对照组肝脏组织细胞在术后各个时间点未见明显异常(P>0.05),而药物组大鼠肝脏损伤程度在各个时间点均较模型组轻(P<0.05),药物组和模型组术后72 h肝损伤的程度较术后24 h减轻(P<0.05);透射电镜结果显示,在各个时间点,对照组线粒体的超微结构形态正常,药物组线粒体超微结构损伤均较模型组轻,药物组和模型组术后72 h线粒体损伤程度较术后24 h减轻;术后24 h及72 h,药物组及模型组AST、ALT表达水平高于对照组,且模型组高于药物组(P<0.05),药物组及模型组p-mTORC1的蛋白和mRNA表达水平低于对照组、而TFEB的蛋白和mRNA表达水平高于对照组,且药物组p-mTORC1的蛋白和mRNA表达水平低于模型组、而TFEB的蛋白和mRNA表达水平高于模型组(P<0.05),术后72 h药物组及模型组的AST、ALT和TFEB相关表达水平较术后24 h降低,而p-mTORC1相关表达水平较术后24 h升高(P<0.05)。结论mTORC1-TFEB信号通路对肝脏缺血再灌注损伤模型大鼠有保护作用,其机制可能与减轻线粒体损伤、改善肝功能有关。 展开更多
关键词 mTORC1 tfeb 线粒体 电镜 肝脏 缺血再灌注损伤
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2型糖尿病脑病小鼠海马中转录因子EB活性与自噬功能的变化 被引量：1
2
作者 陈奕馨 程丽珍 +1 位作者 林祎嘉 苗雅 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期162-170,共9页
目的·探讨2型糖尿病脑病小鼠海马中转录因子EB(transcription factor EB,TFEB)及上游蛋白活性和自噬功能的变化。方法·选取20只健康的8周龄雄性C57BL/6J小鼠,随机分为2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)组和对照(CON)... 目的·探讨2型糖尿病脑病小鼠海马中转录因子EB(transcription factor EB,TFEB)及上游蛋白活性和自噬功能的变化。方法·选取20只健康的8周龄雄性C57BL/6J小鼠,随机分为2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)组和对照(CON)组,每组10只。T2DM组通过高脂饲料喂养和注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)造模;CON组以普通饲料喂养,注射等体积柠檬酸钠缓冲液。2组小鼠每周检测随机血糖及体质量,第10周进行Morris水迷宫行为学实验。行为学实验结束后,行经腹腔注射葡萄糖耐量检测(intraperitoneal glucose tolerance test,IPGTT);之后处死小鼠,留取血液和海马样本。用ELISA试剂盒检测血浆中胰岛素含量;通过Western blotting检测海马组织中淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)、tau蛋白、磷酸化tau(p-tau)蛋白、自噬溶酶体相关蛋白[包括溶酶体相关膜糖蛋白1(lysosomalassociated membrane protein 1,LAMP1)、微管相关蛋白1A/1B-轻链3(microtubule-related protein 1A/1B-light chain 3,LC3)、P62]、TFEB、磷酸化TFEB(p-TFEB)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)、磷酸化m TOR(p-m TOR)与溶酶体钙调通道蛋白MCOLN1(mucolipin TRP cation channel 1,MCOLN1)的表达。采用免疫荧光染色检测小鼠海马组织中β-淀粉样蛋白(β-peptide,Aβ)和p-tau蛋白的沉积。结果·与CON组相比,T2DM组小鼠体质量、随机血糖、血浆中胰岛素水平和IPGTT结果均显著升高(均P<0.05)。水迷宫行为学实验中,T2DM组小鼠逃避潜伏期较CON组显著延长,在目标象限中的停留时间显著缩短,穿越平台次数显著减少(均P<0.05),提示T2DM组小鼠已出现学习记忆功能下降。与CON组相比,T2DM组小鼠的海马组织中Aβ、APP、tau、p-tau蛋白表达水平与p-tau/tau显著升高,自噬相关蛋白LAMP1表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著下降,P62表达水平显著升高,TFEB和MCOLN1蛋白表达水平显著下降,p-TFEB、m TOR、p-m TOR表达与p-m TO 展开更多
关键词 糖尿病脑病 自噬 转录因子eb 溶酶体钙调通道蛋白 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
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有氧锻炼通过TFEB-自噬溶酶体途径减轻慢性脑缺血大鼠认知功能障碍的研究 被引量：2
3
作者 李志伟 崔小丽 +3 位作者 刘杨 刘小玲 吕桦 刘军 《脑与神经疾病杂志》 2020年第8期476-480,共5页
目的观察有氧锻炼对慢性脑缺血大鼠TFEB-自噬溶酶体途径及认知功能障碍的影响。方法SD大鼠随机分为3组:对照组、慢性脑缺血组和慢性脑缺血+有氧锻炼组。用双侧颈总动脉结扎的方法建立慢性脑缺血模型。有氧锻炼组进行跑步锻炼12w。用Mor... 目的观察有氧锻炼对慢性脑缺血大鼠TFEB-自噬溶酶体途径及认知功能障碍的影响。方法SD大鼠随机分为3组:对照组、慢性脑缺血组和慢性脑缺血+有氧锻炼组。用双侧颈总动脉结扎的方法建立慢性脑缺血模型。有氧锻炼组进行跑步锻炼12w。用Morris水迷宫比较各组大鼠的空间学习能力。用苏木精-伊红染色比较各组大鼠海马神经元损伤的状况。用Western-blotting比较各组大鼠海马组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p62、LAMP-1、CTSD以及核内TFEB的含量。结果与对照组相比,慢性脑缺血组大鼠平均逃避潜伏期显著延长,隐匿平台象限停留时间显著缩短,通过隐匿平台次数显著降低;形态异常的海马神经元显著增加,Western-blotting显示,LC3/LC3、LAMP-1、CTSD以及核内TFEB显著降低,p62显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与慢性脑缺血组相比,有氧锻炼组大鼠平均逃避潜伏期显著缩短,隐匿平台象限停留时间显著延长,通过隐匿平台次数显著增加;形态异常的海马神经元显著减少,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、LAMP-1、CTSD以及核内TFEB显著升高,p62显著降低;差异有统计学意义(P<0.05)。结论有氧锻炼通过激活TFEB-自噬溶酶体途径减轻慢性脑缺血所致的大鼠认知功能障碍。 展开更多
关键词 有氧锻炼 大鼠 微管相关蛋白轻链3 溶酶体相关膜蛋白-1 组织蛋白酶D 转录因子eb
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转录因子EB通过细胞自噬调节肿瘤进展的作用及机制 被引量：1
4
作者 张梦婷 吕晓名 +1 位作者 王岚枫 陈志平 《赣南医学院学报》 2022年第6期576-582,共7页
转录因子EB(Transcription factor EB,TFEB)作为小眼畸形转录因子家族(Microphthalmia transcriptionfactor E,MiT-TFE)成员之一,是参与溶酶体生物合成和自噬的主要调控因子。自噬是众多肿瘤发生发展的重要机制,可以通过靶向TFEB调控肿... 转录因子EB(Transcription factor EB,TFEB)作为小眼畸形转录因子家族(Microphthalmia transcriptionfactor E,MiT-TFE)成员之一,是参与溶酶体生物合成和自噬的主要调控因子。自噬是众多肿瘤发生发展的重要机制,可以通过靶向TFEB调控肿瘤的发生发展。本文主要从TFEB的分子生物学性质、TFEB核定位的激活、TFEB在肿瘤中的作用、TFEB在临床中的应用方面进行阐述。通过大量文献阅读,我们发现TFEB的激活在各种肿瘤中发挥促进作用,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(Mammalian target of rapamycin complex 1,mTORC1)、蛋白激酶C(Protein kinase C,PKC)、蛋白激酶B(Protein kinase B,PKB/AKT)、细胞外信号调节激酶2(Extracellular signalregulated protein kinase 2,ERK2)、生发中心激酶样激酶(Germinal-center kinase-like kinase,GLK)、钙调磷酸酶等通过控制TFEB细胞核定位的激活来调节自噬,从而在肿瘤及其他疾病的发生和发展中扮演着重要的角色。因此,TFEB可以作为肿瘤研究的新靶点,为肿瘤治疗提供新的方向。 展开更多
关键词 转录因子eb 自噬 肿瘤 雷帕霉素靶蛋白复合物1
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远隔缺血处理对大鼠脑组织TFEB-溶酶体功能影响的研究 被引量：1
5
作者 李志伟 崔小丽 +3 位作者 刘杨 刘小玲 吕桦 刘军 《脑与神经疾病杂志》 2020年第5期305-309,共5页
目的观察远隔缺血处理(RIPC)对大鼠脑组织转录因子EB(TFEB)-溶酶体功能的影响。方法SD大鼠随机分为3组:对照组、RIPC 24h组和RIPC 10d组。1次RIPC为3个循环的大鼠双后肢缺血-再灌注处理,每个循环缺血10 min,再灌注10 min。RIPC 24h组给... 目的观察远隔缺血处理(RIPC)对大鼠脑组织转录因子EB(TFEB)-溶酶体功能的影响。方法SD大鼠随机分为3组:对照组、RIPC 24h组和RIPC 10d组。1次RIPC为3个循环的大鼠双后肢缺血-再灌注处理,每个循环缺血10 min,再灌注10 min。RIPC 24h组给予RIPC 1次,RIPC 10d组给予RIPC1次.d^-1,共10d。RIPC处理结束后留取大鼠血清,ELISA进行组织蛋白酶B(CTSB)测定,取出大鼠脑组织,ELISA进行CTSB测定,Western-blot进行溶酶体相关膜蛋白-1(LAMP-1)、TFEB测定。结果三组大鼠血清CTSB无差异,与对照组比较,RIPC 24h组大鼠脑组织CTSB以及细胞核内TFEB的含量明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。RIPC 10d组大鼠进一步增加。与对照组相比,RIPC 24h组大鼠脑组织LAMP-1的含量有增加趋势,但差异无统计学意义;RIPC 10d组大鼠脑组织LAMP-1的含量明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论RIPC可能通过激活脑组织TFEB,促进大鼠脑组织溶酶体相关蛋白的表达,增强溶酶体功能。 展开更多
关键词 远隔缺血处理 大鼠 组织蛋白酶B 溶酶体相关膜蛋白-1 转录因子eb
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姜黄素干预通过促进自噬改善氯化锰所致的大鼠神经行为损伤 被引量：1
6
作者 来丽叶 窦长松 +4 位作者 智翠娜 陈洁 马雪 赵鹏 姚碧云 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期400-411,共12页
目的:探讨姜黄素(curcumin,CUR)对锰中毒大鼠神经损伤的干预效应及其机制。方法:成年雄性SD大鼠60只,随机分为5组,每组12只。(1)空白对照组:通过腹腔注射(intraperitoneal injection,ip)给予0.9%(质量分数)生理盐水,并通过灌胃(intragas... 目的:探讨姜黄素(curcumin,CUR)对锰中毒大鼠神经损伤的干预效应及其机制。方法:成年雄性SD大鼠60只,随机分为5组,每组12只。(1)空白对照组:通过腹腔注射(intraperitoneal injection,ip)给予0.9%(质量分数)生理盐水,并通过灌胃(intragastric,ig)给予双蒸水(double distilled water,ddH_(2)O);(2)锰中毒模型组:ip给予MnCl_(2)15 mg/kg(Mn^(2+) 6.48 mg/kg),ig给予ddH_(2)O;(3)单独姜黄素组:ip给予0.9%生理盐水,ig给予CUR 300 mg/kg;(4)MnCl_(2)+CUR1组:ip给予MnCl_(2)15 mg/kg,ig给予CUR 100 mg/kg;(5)MnCl_(2)+CUR2组:ip给予MnCl_(2)15 mg/kg,ig给予CUR 300 mg/kg。5组大鼠每周给药5 d,连续给予4周。旷场实验、转棒实验检测动物的探索行为、焦虑抑郁状态、运动及平衡能力,Morris水迷宫(Morris water maze,MWM)实验检测动物的学习、记忆能力。每组6只大鼠进行脑纹状体HE染色和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)检查,并且其中2只大鼠一侧纹状体进行透射电镜(transmission electron microscope,TEM)观察。每组另外6只大鼠的一侧纹状体利用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)测定锰含量,另一侧纹状体用免疫印迹(Western blotting,WB)检测α-突触核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)、细胞质和细胞核转录因子EB(transcription factor EB,TFEB)、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、p-mTOR、Beclin1、P62和微管相关蛋白轻链蛋白3(microtubule-associated protein light chain-3,LC3)表达水平,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transterase-mediated dUTP nick end labeling;TUNEL)检测大鼠纹状体多巴胺能神经元凋亡。结果:旷场和转棒实验中,锰中毒模型组水平运动距离、直立次数、中央区运动时间和运动距离、在棒时间、在棒圈数较空白对照组显著降低(P<0.05),而MnCl_(2)+CUR2组的上述指标均较锰中毒模型组显著增加(P<0.05)。MWM定位航行实验第3、4天时,锰中毒模型组逃避潜伏期和� 展开更多
关键词 锰中毒 姜黄素 转录因子eb 自噬
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重组质粒pcDNA3.1(+)-TFEB-HA的构建、表达及鉴定
7
作者 韩纳姝 方荣沣 +1 位作者 王振江 李薇 《生物化工》 2022年第2期43-45,共3页
本文构建了pcDNA3.1(+)-TFEB-HA重组质粒,并转染了HeLa细胞进行表达。经Western Blot检测,转染pcDNA3.1(+)-TFEB-HA重组质粒的HeLa细胞成功表达了TFEB蛋白,为研究TFEB对细胞生长的影响提供了有利工具。
关键词 质粒构建 转录因子eb(tfeb) Western Blot
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跨膜蛋白106B通过ERK/CREB信号通路调控黑色素生成
8
作者 周兆琦 Ajab Khan +2 位作者 贾琼 胡世雄 范瑞文 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1386-1393,共8页
TMEM106B是一种二型跨膜蛋白质,定位于神经元细胞树突中的核内体和溶酶体中,能够调控神经元细胞树突中溶酶体的逆向转运,对于神经元树突的分支和维持发挥重要作用。哺乳动物的黑色素细胞来源于神经嵴细胞,胞内黑素体来源于早期核内体,但... TMEM106B是一种二型跨膜蛋白质,定位于神经元细胞树突中的核内体和溶酶体中,能够调控神经元细胞树突中溶酶体的逆向转运,对于神经元树突的分支和维持发挥重要作用。哺乳动物的黑色素细胞来源于神经嵴细胞,胞内黑素体来源于早期核内体,但TMEM106B是否在黑色素细胞中发挥功能未有报道。现有研究表明,TFEB与溶酶体的合成和功能有关,在神经元细胞中,TMEM106B表达促进了TFEB的核转位,而在黑色素瘤细胞中,TFEB和MITF存在互相调控的作用。因此,本研究通过TMEM106B在黑色素细胞过表达的方法,研究TMEM106B调控黑色素的生成作用及其可能的作用机制。研究表明,TMEM106B定位于黑色素细胞的细胞质中,提示其可能在黑色素细胞中有重要作用。将构建的TMEM106B表达载体转染到黑色素细胞中,与对照组相比,CREB和MITF的mRNA水平有明显的增加(P<0.001),其中,CREB增加最明显;通过免疫印迹分析,p-ERK蛋白表达水平明显增加(P<0.001),导致黑色素生成相关蛋白MITF、TYR、TYRP1和TYRP2表达上调。黑色素含量分析显示,TMEM106B过表达可使真黑素(P<0.05)和总黑素(P<0.001)含量增加,然而褐黑素减少(P<0.001)。以上结果表明,在黑色素细胞中,TMEM106B通过调控CREB/ERK信号通路调控黑色素生成。 展开更多
关键词 跨膜蛋白106B 转录因子eb 神经嵴细胞 树突 黑色素颗粒
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缺血性脑卒中后促进转录因子EB核转位改善神经元自噬流障碍的分子机制
9
作者 李尚丹 邓仪昊 何红云 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期208-213,共6页
脑卒中(cerebral stroke)是由脑动脉出血或梗塞引起的急性脑血管病,约80%的脑卒中临床病例为缺血性脑卒中。自噬流障碍是导致神经元缺血性损伤的重要致病因素,而如何改善自噬流障碍从而减轻缺血性脑损伤的策略仍需深入探究。研究表明,... 脑卒中(cerebral stroke)是由脑动脉出血或梗塞引起的急性脑血管病,约80%的脑卒中临床病例为缺血性脑卒中。自噬流障碍是导致神经元缺血性损伤的重要致病因素,而如何改善自噬流障碍从而减轻缺血性脑损伤的策略仍需深入探究。研究表明,转录因子EB(transcription factor EB,TFEB)是自噬-溶酶体信号通路的关键调节分子。TFEB的活性由其磷酸化水平决定,磷酸化的TFEB通过与14-3-3黏附蛋白结合存留于胞质,当其去磷酸化后则快速向核内转位,进而上调“协同溶酶体表达与调控(coordinated lysosomal expression and regulation,CLEAR)”信号,促进溶酶体生成及自噬相关基因转录,从而增强自噬流。本文重点就TFEB核转位改善缺血性脑卒中神经元自噬流障碍的分子机制进行详细阐述,旨在为脑卒中治疗及脑缺血病理研究提供参考。 展开更多
关键词 缺血性脑卒中 转录因子eb核转位 自噬流障碍 溶酶体功能 神经保护
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