TFAP2A对肾小球硬化相关基因ADCK4转录调控机制的研究

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作者 张小田 任献国 《天津医药》 CAS 2024年第5期449-453,共5页

目的探索细胞中TFAP2A对局灶节段性肾小球硬化(FSGS)相关基因含aarF结构域的激酶4(ADCK4)的转录调控机制及TFAP2A与ADCK4是否存在特定的结合区域。方法生物信息学分析肾小球硬化基因火山图,ADCK4及TFAP2A表达水平的关系。JASPAR数据库预... 目的探索细胞中TFAP2A对局灶节段性肾小球硬化(FSGS)相关基因含aarF结构域的激酶4(ADCK4)的转录调控机制及TFAP2A与ADCK4是否存在特定的结合区域。方法生物信息学分析肾小球硬化基因火山图,ADCK4及TFAP2A表达水平的关系。JASPAR数据库预测ADCK4基因转录起始位点-464 bp/+206 bp区域包含TFAP2A转录因子结合位点;TFAP2A siRNA浓度分别为5、10、15µmol/L,TFAP2A过表达质粒质量浓度分别为50、100、300µg/L,通过双萤光素酶报告基因实验验证TFAP2A对ADCK4基因启动子水平的调控作用。TFAP2A siRNA及TFAP2A过表达质粒转染细胞,实时荧光定量PCR检测TFAP2A、ADCK4 mRNA表达,蛋白免疫印迹实验检测TFAP2A、ADCK4蛋白表达。染色质免疫沉淀试验验证TFAP2A与ADCK4启动子的特定区域结合。结果生物信息学分析显示FSGS肾组织中RNA-Seq RNA表达上调的基因273个,表达下调的基因219个;ADCK4与TFAP2A表达水平呈正相关(P<0.01)。双萤光素酶报告基因实验证明TFAP2A siRNA浓度为10、15µmol/L的ADCK4启动子相对萤光素酶活性增强,TFAP2A过表达质粒质量浓度为100、300µg/L的ADCK4启动子萤光素酶活性降低(P<0.05)。与对照组相比,实验组ADCK4 mRNA和蛋白表达水平升高;过表达实验中,与对照组比较,实验组ADCK4 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。染色质免疫沉淀试验发现TFAP2A能与ADCK4启动子的特定区域结合。结论转录因子TFAP2A负向调控ADCK4基因表达,增加了调控足细胞重要基因的转录因子成员。 展开更多

关键词 肾小球硬化症 局灶节段性 转录因子ap-2 启动区 遗传 转录调控 含aarF结构域的激酶4

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转录因子TFAP2B在健康人及白癜风患者表皮黑色素细胞中的表达模式

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作者 马晶晶 亢盼 +3 位作者 郭森 坚哲 李春英 李舒丽 《中华皮肤科杂志》 CSCD 北大核心 2024年第1期29-33,共5页

目的探究转录因子TFAP2B在健康人及白癜风患者表皮黑色素细胞中的表达模式.方法收集空军军医大学西京皮肤医院2020年1月至2022年12月明确诊断的5例进展期白癜风患者皮损组织,同时收集性别、年龄匹配的5例来源于整形外科手术剩余皮肤组... 目的探究转录因子TFAP2B在健康人及白癜风患者表皮黑色素细胞中的表达模式.方法收集空军军医大学西京皮肤医院2020年1月至2022年12月明确诊断的5例进展期白癜风患者皮损组织,同时收集性别、年龄匹配的5例来源于整形外科手术剩余皮肤组织作为健康对照.培养永生化的健康人表皮黑色素细胞系PIG1、白癜风表皮黑色素细胞系PIG3V及人表皮原代黑色素细胞,其中原代黑色素细胞分离自西京医院泌尿外科手术切除的3例健康男性包皮组织.采用组织免疫荧光检测TFAP2B、多巴色素互变异构酶(DCT)在健康对照皮肤和白癜风皮损中的表达及定位,细胞免疫荧光和Western印迹法检测TFAP2B在人表皮黑色素细胞中的表达.两组间比较采用t检验,相关性分析采用Pearson相关分析法.结果组织免疫荧光结果显示,TFAP2B仅在人表皮黑色素细胞中表达,且定位于细胞核.Western印迹结果显示,TFAP2B在人表皮黑色素细胞系PIG1及原代黑色素细胞中强表达(相对表达量分别为0.45±0.05和0.36±0.04).组织免疫荧光结果显示,在10例人表皮组织(包括5例健康对照和5例白癜风)中,TFAP2B(623917.5±88784.0)与DCT(2232655.3±588810.4)的荧光强度呈显著正相关(r=0.91,P<0.001).此外,TFAP2B在白癜风皮损表皮黑色素细胞中相对荧光强度(0.12±0.05)显著低于健康对照表皮黑色素细胞(1,t=19.35,P<0.001).Western印迹结果显示,TFAP2B在白癜风表皮黑色素细胞系PIG3V中的相对表达值(0.62±0.09)亦显著低于PIG1细胞(1,t=5.92,P<0.027).结论TFAP2B在人表皮黑色素细胞中特异性高表达,其表达与黑色素细胞标记分子DCT的表达呈显著正相关,在白癜风患者表皮黑色素细胞中明显低表达. 展开更多

关键词 白癜风 黑素细胞 表皮 转录因子ap-2 多巴色素互变异构酶 表达模式

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转录因子AP-2α对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及其机制 被引量：3

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作者 王莹 兰小琴 +3 位作者 李美宁 解军 张悦红 程牛亮 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期776-779,785,共5页

目的:研究转录因子活化蛋白-2α(transcription factor activator protein-2α,AP-2α)对人结肠癌SW480细胞增殖的抑制作用及其相关机制。方法:构建pcDNA3.1(+)-AP-2α重组质粒,利用脂质体分别介导重组质粒pcDNA3.1(+)-AP-2α和空质粒pc... 目的:研究转录因子活化蛋白-2α(transcription factor activator protein-2α,AP-2α)对人结肠癌SW480细胞增殖的抑制作用及其相关机制。方法:构建pcDNA3.1(+)-AP-2α重组质粒,利用脂质体分别介导重组质粒pcDNA3.1(+)-AP-2α和空质粒pcDNA3.1(+)转染SW480细胞,以正常SW480细胞作为空白对照;采用RT-PCR和Western印迹法检测转染48h后各组细胞中AP-2α的表达水平;采用电泳迁移率分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测转染重组质粒后SW480细胞表达的AP-2α是否具有DNA结合活性;用MTT法研究AP-2α基因转染24、48、72h后SW480细胞的增殖情况;采用流式细胞术分析各组的细胞周期变化,Western印迹法检测细胞内p21/WAF1的表达水平。结果:转染pcDNA3.1(+)-AP-2α重组质粒48h后,SW480细胞内AP-2αmRNA含量以及蛋白水平均显著升高,并且具有较强的DNA结合活性;MTT结果提示,转染AP-2α基因后SW480细胞增殖趋缓;细胞周期分析结果提示,转染AP-2α基因48h后G0/G1期细胞比例较正常细胞增加(P<0.05);转染AP-2α基因48h后,SW480细胞内p21/WAF1表达增加。结论:AP-2α可抑制SW480细胞的增殖,其抑制作用很可能与激活p21/WAF1表达有关。 展开更多

关键词 结肠肿瘤 转录因子ap-2 细胞增殖 基因表达

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转录因子激活蛋白-2α、雌激素受体-β和基质金属蛋白酶-9在扁平苔藓皮损中的表达 被引量：1

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作者 张紫燕 白莉 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期339-342,共4页

目的探讨转录因子激活蛋白-2α（AP-2α）、雌激素受体-β（ER-β）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在扁平苔藓皮损中的表达及意义。方法选取30例扁平苔藓皮损和30例正常人皮肤组织，应用免疫组化SP法观察ER—β和MMP-9的表达，采用RT—PCR... 目的探讨转录因子激活蛋白-2α（AP-2α）、雌激素受体-β（ER-β）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在扁平苔藓皮损中的表达及意义。方法选取30例扁平苔藓皮损和30例正常人皮肤组织，应用免疫组化SP法观察ER—β和MMP-9的表达，采用RT—PCR和Western印迹法检测AP-2α、ER—β和MMP-9基因及其蛋白水平。结果扁平苔藓皮损中AP-2st、ER-β、MMP-9mRNA的相对表达水平为0．488±0．039、0．365±0．032和1．237±0．027，与正常组织相比，AP-2α、ER—β表达下降（P值均〈0．01），而MMP-9表达升高（P〈0．01）。Western印迹检测结果与RT—PCR相似，即AP-2st、ER-β蛋白表达下降（P值均〈0．01），而MMP-9表达升高。AP-2α的表达与ER—β的表达呈正相关（r=0．89，P〈0．01），与MMP-9的表达呈负相关（r=-0．91，P〈0．01）。结论ER-β表达的下调和MMP-9表达的上调可能是AP-2st表达下调引起调控下游靶基因异常所致，可能为扁平苔藓的发病环节之一。 展开更多

关键词 扁平苔藓 转录因子ap-2 雌激素受体Β 基质金属蛋白酶9

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转录因子 AP-2在泌尿生殖系统肿瘤中的研究进展

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作者 谢宇 范刚 张健 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2015年第7期548-550,共3页

转录因子激活蛋白-2（AP-2）在肿瘤细胞的增殖、分化、癌变及化疗耐药方面扮演着重要角色。AP-2在不同泌尿生殖系统肿瘤组织中分别呈现出抑癌或促癌的双向调控效应。研究 AP-2在泌尿生殖系统肿瘤中的作用及作用机制可为相关肿瘤的诊治... 转录因子激活蛋白-2（AP-2）在肿瘤细胞的增殖、分化、癌变及化疗耐药方面扮演着重要角色。AP-2在不同泌尿生殖系统肿瘤组织中分别呈现出抑癌或促癌的双向调控效应。研究 AP-2在泌尿生殖系统肿瘤中的作用及作用机制可为相关肿瘤的诊治提供新的思路和方向。 展开更多

关键词 转录因子ap-2 泌尿生殖系统肿瘤

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转录因子活化蛋白-2α对人脐静脉内皮细胞ECV304细胞凋亡和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3活化的影响

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作者 李军利 陈平 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期931-934,共4页

【摘要】目的探讨转录因子活化蛋白-2α（AP-2α）对香烟提取物（CSE）所致半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase 3）的活化及人脐静脉内皮细胞株ECV304凋亡的影响。方法按照不同浓度CSE将ECV304细胞分为0．0％、2．5％、5．0％、10．0％... 【摘要】目的探讨转录因子活化蛋白-2α（AP-2α）对香烟提取物（CSE）所致半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase 3）的活化及人脐静脉内皮细胞株ECV304凋亡的影响。方法按照不同浓度CSE将ECV304细胞分为0．0％、2．5％、5．0％、10．0％、15．0％、20．0％CSE组；再将5．0％CSE组按照不同处理时间分为0、6、12、18、24、36和48h组，按照不同转染腺病毒载体（Ad）分为Ad-AP-2α组、对照腺病毒载体（Ad-BgⅡ）组和对照组，按照不同转染基因及处理因素分为Ad—AP-2α＋5％CSE 24h组、Ad—BgⅡ＋5％CSE24h组及对照＋5％CSE 24h组。每组3例。采用腺病毒介导的转染、双苯甲亚胺染核和Western blot等方法观察过表达AP-2α对CSE诱导的ECV304凋亡和Caspase 3活化的影响。采用Bartlett法进行方差齐性检验，两组间比较用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，多个样本均数的多重比较采用LSD—t检验，多个样本率的比较采用χ^2检验。结果2．5％CSE组的细胞增殖能力（吸光度值为0．754±0．109）明显高于对照组（吸光度值为0．630±0．086），其余浓度组的细胞增殖能力逐渐下降，并呈浓度依赖的方式。随着5．0％CSE作用时间延长，细胞凋亡率从（5．0±1．0）％逐渐增到（72．6±12．1）％；转染24h时，AP-2α的蛋白相对含量的积分吸光度值（0．882±0．014）明显高于对照组（0．635±0．005）；过表达AP-2α使5．0％CSE诱导的细胞凋亡率从（7．5±0．9）％降至（0．9±0．4）％，Caspase 3蛋白相对含量从0．484±0．025降至0．300±0．020。结论AP-2α可以抑制ECV304细胞中CSE诱导的Caspase 3活化及细胞凋亡。 展开更多

关键词 烟草 内皮细胞 细胞凋亡 转录因子ap-2

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重叠延伸PCR法构建小鼠Sumf1基因的定点突变真核表达载体 被引量：8

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作者 帅勇 胡兴旺 +3 位作者 易朵 王成 赵晓蒙 周畅 《生命科学研究》 CAS CSCD 2009年第5期430-436,共7页

前期通过染色质免疫沉淀技术（chromatin immunoprecipitation assay，CHIP）筛选出了转录因子activator protein．2 alpha（AP-2α）的靶基因Sumf1．采用重叠延伸PCR定点诱变技术，对AP．2α在Sumf1内含子片段上的两个结合位点的碱基... 前期通过染色质免疫沉淀技术（chromatin immunoprecipitation assay，CHIP）筛选出了转录因子activator protein．2 alpha（AP-2α）的靶基因Sumf1．采用重叠延伸PCR定点诱变技术，对AP．2α在Sumf1内含子片段上的两个结合位点的碱基进行定点突变，并构建定点突变表达载体．DNA测序表明，Sumf1内含子片段103—111bp，411～419bp两处的碱基已分别由GCCGTCAGG突变为GAAGTCCTG，由GCCTCTAGG突变为GGATCTCTG，成功实现定点诱变，为进一步研究AP-2α对基因Sumf1的表达调控奠定了基础． 展开更多

关键词 转录因子ap-2α 硫酸酯酶修饰因子Sumf1 重叠延伸PCR 定点诱变

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动脉导管未闭患儿TFAP-2B基因突变的研究 被引量：7

8

作者 陈轶维 赵武 +4 位作者 李奋 吉炜 傅启华 张志芳 王剑 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期900-904,共5页

目的 发现我国动脉导管未闭（patent ductus arteriosus,PDA）患儿分子遗传方面缺陷,为PDA早期预防及遗传咨询提供支持.方法 收集100例单纯性PDA患儿的临床资料和外周静脉血样本,以100名健康儿童为对照.应用聚合酶链式反应（polymerase ... 目的 发现我国动脉导管未闭（patent ductus arteriosus,PDA）患儿分子遗传方面缺陷,为PDA早期预防及遗传咨询提供支持.方法 收集100例单纯性PDA患儿的临床资料和外周静脉血样本,以100名健康儿童为对照.应用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增TFAP-2B基因的全部外显子和外显子两侧部分内含子,并对扩增片段进行双向测序.应用BLAST程序将所测TFAP-2B基因序列与GeneBank中的已知序列进行对比以检测基因突变.采用逆转录聚合酶链式反应（reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR）对1例家族史阳性患儿及其家属共16人TFAP-2B部分cDNA片段进行扩增,扩增产物直接进行双向序列测定.结果 基因分析显示,在1例家族史阳性患儿及其患病亲属中,TFAP-2B第3内含子剪接位点＋5位发生突变[intron3（＋5）G＞A],患儿TFAP-2B基因部分cDNA巢式PCR扩增结果 提示3号外显子完全缺失.此外,还发现了一个新的单核苷酸多态性,即转录起始点上游第34位的鸟嘌呤变为腺嘌呤,这个多态在PDA患者和健康对照组的频率分布差异有统计学意义（Z=-2.513,P=0.012）.结论 TFAP-2B基因突变能够导致家族型PDA. 展开更多

关键词 动脉导管未闭 转录因子ap-2 突变

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TFAP2A对肾小球硬化相关基因NPHS2的转录调控作用观察

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作者 张小田 周国平 《山东医药》 CAS 2023年第32期20-24,共5页

目的观察转录因子AP-2α(TFAP2A)对肾小球硬化相关基因NPHS2的转录调控作用。方法基于GEO数据库及GEO Profiles数据集,比较肾透明细胞癌组织与正常肾组织中NPHS2、TFAP2A的表达差异。构建含NPHS2基因5′侧翼区域重组报告质粒,预测NPHS2... 目的观察转录因子AP-2α(TFAP2A)对肾小球硬化相关基因NPHS2的转录调控作用。方法基于GEO数据库及GEO Profiles数据集,比较肾透明细胞癌组织与正常肾组织中NPHS2、TFAP2A的表达差异。构建含NPHS2基因5′侧翼区域重组报告质粒,预测NPHS2基因的-519 bp~+20 bp启动子区包含转录因子TFAP2A的结合位点。培养HEK-293T细胞,对照siRNA组转染control siRNA,实验组分别转染TFAP2A siRNA(浓度分别为5、10、15 pmol/µL)和TFAP2A过表达质粒(质量浓度分别为50、100、300 ng/mL),通过双萤光素酶报告基因实验验证TFAP2A对NPHS2基因启动子水平的调控作用。将HEK-293T细胞分为对照组、干扰组及过表达组,分别转染con‐trol siRNA、TFAP2A siRNA及TFAP2A过表达质粒;采用荧光定量PCR检测TFAP2A、NPHS2 mRNA,采用Western blotting法检测NPHS2蛋白。结果肾透明细胞癌组织中TFAP2A、NPHS2表达低于正常肾组织。成功构建含NPHS2基因5′侧翼区域重组报告质粒,NPHS2基因转录起始位点上游-519 bp~+20 bp区域包含两个TFAP2A转录因子结合位点。双萤光素酶报告基因实验结果显示,与对照siRNA组相比,转染5、10、15 pmol/µL TFAP2A siRNA的实验组细胞NPHS2启动子荧光素酶活性均增强,转染300 ng/mL TFAP2A过表达质粒的实验组细胞NPHS2启动子荧光素酶活性降低(P均<0.05)。干扰组NPHS2 mRNA及蛋白表达高于对照组,过表达组NPHS2 mRNA及蛋白表达低于对照组(P均<0.05)。结论NPHS2启动子-519 bp~+20 bp区域存在潜在的TFAP2A转录因子结合位点;TFAP2A可下调NPHS2的启动子活性、mRNA及蛋白表达。 展开更多

关键词 转录因子ap-2α NPHS2基因 肾小球硬化 转录调控

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VIPR1启动子甲基化促进转录因子AP-2α下调VIPR1的表达并促进肝细胞癌的生长 被引量：1

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作者 宁诗雨 何春梅 +2 位作者 郭泽皓 张豪 莫之婧 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期957-965,共9页

目的探讨血管活性肠肽受体1(VIPR1)在肝细胞癌(HCC)组织中低表达的转录调控机制和生物学功能。方法肝癌细胞系Hep3B和Huh7常规培养,实验分为VIPR1启动子野生型组、启动子突变载体1组、启动子突变载体2组和启动子突变载体1+2组。双荧光... 目的探讨血管活性肠肽受体1(VIPR1)在肝细胞癌(HCC)组织中低表达的转录调控机制和生物学功能。方法肝癌细胞系Hep3B和Huh7常规培养,实验分为VIPR1启动子野生型组、启动子突变载体1组、启动子突变载体2组和启动子突变载体1+2组。双荧光素酶报告基因实验检测AP-2α表达对VIPR1启动子活性的影响;DNA甲基化转移酶抑制剂(DAC)处理肝癌细胞,焦磷酸测序法检测VIPR1启动子甲基化水平的变化;染色质免疫共沉淀检测AP-2α与VIPR1启动子的结合能力;Westernblot检测AP-2α的敲减作用以及VIPR1的表达;Westernblot检测两种细胞株中VIPR1的差异表达;qPCR和Westernblot检测VIPR1过表达和敲减效果;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;CCK8实验检测细胞增殖。建立裸鼠移植瘤模型,检测LV-NC组和LV-VIPR1组中肿瘤的体积和质量。结果与VIPR1启动子野生型组相比,启动子突变载体1+2与AP-2α表达质粒共转染后,荧光素酶活性明显恢复(P<0.05);DAC处理后,VIPR1启动子甲基化水平降低,并且随着甲基化程度减弱,与VIPR1启动子结合的AP-2α显著减少(P<0.01);敲减AP-2α后,VIPR1表达上升;Huh7细胞株中VIPR1表达低于Hep3B细胞株,在两种细胞株中成功构建了VIPR1过表达和敲减模型,VIPR1过表达增加了G2/M期的细胞数量(P<0.01),凋亡细胞显著增加(P<0.001),细胞增殖受到抑制(P<0.001),而VIPR1敲低则相反。体内实验表明VIPR1过表达组的肿瘤体积减小(P<0.001),肿瘤量降低(P<0.05)。结论HCC中VIPR1的启动子甲基化促进了转录因子AP-2α的结合,并且抑制了VIPR1表达,而VIPR1过表达可使细胞周期阻滞在G2/M期,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖和肿瘤生长。 展开更多

关键词 转录因子ap-2α 肝细胞癌 甲基化 肿瘤生长 血管活性肠肽受体1

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猪源转录因子AP-2δ通过增强rep基因启动子活性促进猪圆环病毒2型的复制 被引量：1

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作者 王越 宋东峰 +4 位作者 林翠 李佳容 王胜男 顾金燕 周继勇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1985-1995,共11页

本研究旨在探究猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2, PCV2)能否借助rep基因启动子区的转录因子结合位点调控自身基因转录,并寻找参与这一调控过程的宿主因子。凝胶迁移实验证实rep基因启动子具有核蛋白结合活性。DNA-pull down联... 本研究旨在探究猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2, PCV2)能否借助rep基因启动子区的转录因子结合位点调控自身基因转录,并寻找参与这一调控过程的宿主因子。凝胶迁移实验证实rep基因启动子具有核蛋白结合活性。DNA-pull down联合液相-串联质谱分析鉴定到了可与rep基因启动子结合的猪源转录因子AP-2δ(Porcine transcription factor AP-2δ, poTFAP2δ)。双荧光素酶报告基因试验、实时荧光定量PCR、免疫印迹及间接免疫荧光等试验证明poTFAP2δ不仅可以特异性地增强rep基因启动子活性,而且可以在PCV2感染过程中促进rep和cap基因的转录、翻译及PCV2病毒滴度。文中揭示了PCV2利用宿主蛋白促进自身增殖的分子机制,为进一步从病毒与宿主互作角度阐明PCV2的致病机制提供新的研究思路,亦为PCV2高效疫苗的研制提供理论基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 rep基因启动子 转录因子结合位点 猪源转录因子ap-2δ

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AP-2α对大肠癌SW620细胞增生的影响及其作用机制 被引量：1

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作者 杜叶平 李美宁 +3 位作者 张悦红 赵志兰 郝华 程牛亮 《肿瘤研究与临床》 CAS 2009年第3期151-154,共4页

目的研究转录因子激活蛋白-2d（AP-2α）对大肠癌细胞株SW620增生能力的影响及可能的作用机制。方法构建pcDNA3．1（＋）-AP-2α重组质粒，采用脂质体介导质粒转染人SW620细胞，利用MTT法检测其对SW620细胞增生能力的影响；荧光定量PCR... 目的研究转录因子激活蛋白-2d（AP-2α）对大肠癌细胞株SW620增生能力的影响及可能的作用机制。方法构建pcDNA3．1（＋）-AP-2α重组质粒，采用脂质体介导质粒转染人SW620细胞，利用MTT法检测其对SW620细胞增生能力的影响；荧光定量PCR方法和Western印迹法检测转染前后各组细胞中雌激素受体-β（ER-β）表达水平的变化。结果转染AP-2α后SW620细胞内AP-2α mRNA含量及蛋白表达水平显著升高。MTT结果提示，转染AP-2α基因后SW620细胞增生速度受到抑制。转染AP-2α基因后ER-β mRNA和蛋白表达增加，且在转染48h增加最为明显，ER—β mRNA和蛋白质分别增加了94．47％和54．67％，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论AP-2α可抑制SW620细胞的增生，其抑制机制很可能与增强ER-β的表达有关。 展开更多

关键词 肠肿瘤 SW620细胞 转录因子ap-2α 转染 雌激素受体Β

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转录因子激活蛋白-2α重组质粒的构建及其对肾透明细胞癌细胞增殖能力的影响 被引量：1

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作者 马明辉 武翀 +6 位作者 赵超飞 姚远新 孟庆禹 罗国雄 张瑜 马鑫 张旭 《解放军医学院学报》 CAS 2016年第7期773-778,共6页

目的构建转录因子激活蛋白-2α(transcription factor AP-2 alpha,TFAP2α)重组真核质粒及其稳转细胞株,研究过表达TFAP2α对肾透明细胞癌细胞增殖能力的影响。方法采用反转录PCR方法从293T细胞全基因组DNA中扩增TFAP2α基因编码序列,... 目的构建转录因子激活蛋白-2α(transcription factor AP-2 alpha,TFAP2α)重组真核质粒及其稳转细胞株,研究过表达TFAP2α对肾透明细胞癌细胞增殖能力的影响。方法采用反转录PCR方法从293T细胞全基因组DNA中扩增TFAP2α基因编码序列,运用质粒酶切、连接及转化构建重组真核质粒p LV-EGFP(2A)Puro-TFAP2α,测序鉴定。利用慢病毒包装系统将重组质粒转染入293T细胞,制备病毒悬液转染质粒入肾透明细胞癌细胞系786-O和Caki-2中,嘌呤霉素加压筛选,形成稳定转染细胞株后扩大培养,并通过实时定量PCR法和Western Blot法检测转染细胞中TFAP2α的m RNA和蛋白的表达。通过MTS实验、平板克隆实验和细胞周期检测,观察未转染质粒组、转染空载体组和转染重组质粒组细胞增殖和周期的变化。结果成功构建重组真核质粒p LV-EGFP(2A)Puro-TFAP2α和稳定转染过表达TFAP2α的786-O和Caki-2细胞株。重组质粒组TFAP2αm RNA表达水平和蛋白表达水平均明显高于未转染组和空载体组(P<0.05)。MTS实验中,重组质粒组490 nm处光吸收值较未转染组和空载体组显著降低(P<0.05)。平板克隆实验中,重组质粒组的平板克隆率较未转染组和空载体组亦显著降低(P<0.05)。与未转染组和空载体组比较,重组质粒组G_0/G_1期细胞比例显著升高(P<0.05),S期细胞比例显著降低(P<0.05),G_2/M期细胞比例无统计学差异(P>0.970)。结论过表达TFAP2α能明显降低肾透明细胞癌细胞系786-O和Caki-2细胞增殖能力,影响细胞周期变化,停留在G_0/G_1期的细胞明显增加,而S期的细胞明显减少,使其发生G_1/S期阻滞从而抑制细胞增殖。 展开更多

关键词 转录因子激活蛋白-2α 质粒 肾透明细胞癌 增殖

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动脉导管未闭患儿TFAP2B基因变异筛查

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作者 孙瑾 韩波 +3 位作者 魏美丽 杨文巍 王介忠 刘永蛟 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2013年第3期72-75,共4页

目的检测动脉导管未闭(PDA)患儿TFAP2B基因序列,探讨TFAP2B基因变异与PDA的关系。方法选取74例PDA患儿为病例组,100例健康儿童为对照组,分别收集外周血并提取基因组DNA。应用聚合酶链反应扩增TFAP2B基因的全部外显子及其两侧的部分内含... 目的检测动脉导管未闭(PDA)患儿TFAP2B基因序列,探讨TFAP2B基因变异与PDA的关系。方法选取74例PDA患儿为病例组,100例健康儿童为对照组,分别收集外周血并提取基因组DNA。应用聚合酶链反应扩增TFAP2B基因的全部外显子及其两侧的部分内含子,采用Sanger测序法对扩增片段进行测序。将所测得序列与Genbank及NCBI数据库中TFAP2B基因序列进行比对,以识别TFAP2B基因有无突变或多态性。应用χ2检验比较TFAP2B基因多态在病例组和对照组之间的频率分布差异。结果病例组和对照组TFAP2B基因均发现1个新的单核苷酸多态位点(SNP),TFAP2B基因第1外显子编码区上游第34位鸟嘌呤转变为腺嘌呤(c.1-34G→A)。该位点等位基因及基因型在病例组和对照组间的频率分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TFAP2B基因c.1-34G→A单核苷酸多态位点与动脉导管未闭之间无明显相关。 展开更多

关键词 动脉导管未闭 TFap2B 基因突变 单核苷酸多态性 儿童

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转录因子激活蛋白-2α在肿瘤中的作用与研究进展

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作者 马明辉 范阳 +3 位作者 高宇 张瑜 马鑫 张旭 《解放军医学院学报》 CAS 2016年第8期893-896,共4页

转录因子激活蛋白-2α(transcription factor AP-2 alpha,TFAP2α)是一种能与DNA特异性结合的转录因子,它参与调节正常细胞增殖分化及胚胎发育,并通过调控信号转导来开启、关闭、增强或减弱多种靶基因的表达,对肿瘤细胞的增殖、分化、... 转录因子激活蛋白-2α(transcription factor AP-2 alpha,TFAP2α)是一种能与DNA特异性结合的转录因子,它参与调节正常细胞增殖分化及胚胎发育,并通过调控信号转导来开启、关闭、增强或减弱多种靶基因的表达,对肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭及转移发挥重要调控作用。近年来国内外对TFAP2α基因在肿瘤中的作用进行了大量研究,TFAP2α在多种肿瘤组织中存在异常表达,且表达程度与肿瘤类型、临床分期、病理分化程度等有着密切的关系,它在不同肿瘤中发挥促癌或抑癌的作用。本文重点介绍TFAP2α基因的结构和功能及其在肿瘤发生发展中的作用。 展开更多

关键词 转录因子激活蛋白-2α 基因 肿瘤 分子生物学

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大肠癌中转录因子Spl与AP-2α的表达及其相关性

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作者 苗晋华 杜叶平 +3 位作者 牛金柱 武春梅 徐丽萍 许淑秀 《肿瘤研究与临床》 CAS 2010年第11期767-770,共4页

目的探讨转录因子特化蛋白1（Spl）与转录因子激活蛋白-2α（AP-2α）在大肠癌发生、发展过程中的表达情况及其表达的相关性。方法采用实时荧光定量PCR的方法分析60例大肠癌组织及癌旁正常组织中SplmRNA及AP-2αmRNA表达差异，分析其与... 目的探讨转录因子特化蛋白1（Spl）与转录因子激活蛋白-2α（AP-2α）在大肠癌发生、发展过程中的表达情况及其表达的相关性。方法采用实时荧光定量PCR的方法分析60例大肠癌组织及癌旁正常组织中SplmRNA及AP-2αmRNA表达差异，分析其与患者临床资料、病理参数之间的关系，探讨60例大肠癌组织中Sp1mRNA与AP-2αmRNA表达的相关性。结果大肠癌组织、癌旁正常组织Sp1 mRNA相对表达值（RQ）分别为13．621±2．433，6．464±1．757；AP-2αdmRNARQ值分别为3．264±0．877，17．484±3．608；大肠癌组织中Sp1mRNA的表达显著高于癌旁正常组织，AP-2αmRNA含量显著低于正常组织，差异均具有统计学意义（P〈0．01）；大肠癌组织SplmRNA和AP-2αmRNA表达率分别在患者不同性别、年龄≥或〈60岁、不同肿瘤部位各自差异均无统计学意义（P〉0．05）；在大肠癌的不同组织学分级及Duke分期中，Sp1呈现出过表达状态，则AP-2α呈现出表达降低或缺失状态；60例大肠癌组织中Sp1与AP-2α的表达具有相关性（r=-0．849，P〈0．001），且呈负相关关系（-1〈r〈0）。结论转录因子Spl在大肠癌组织中表达上调，而AP-2α则呈现低表达或缺失状态，Spl与AP-2α的表达呈现一定的负相关关系，提示Sp1与AP-2α可能为肿瘤的诊断和治疗提供新的依据。 展开更多

关键词 肠肿瘤 转录因子特化蛋白1 转录因子激活蛋白-2α 聚合酶链反应

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靶向转录因子AP-2的Decoy核酸对肿瘤细胞增殖的抑制作用 被引量：1

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作者 王雪根 叶青 +4 位作者 陈武领 冯莹 韦策 刘晖 欧阳平凯 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期523-527,共5页

ecoy核酸是与靶转录因子具有高亲和性的双链寡聚核酸 ,通过竞争性抑制转录因子与调控区域的结合 ,调控转录来改变下游基因的异常表达 ,从而抑制肿瘤恶性增殖 .用MTT比色法 ,体外筛选结合转录因子AP 2的decoy核酸药物 ,结果K2 0 6对多种... ecoy核酸是与靶转录因子具有高亲和性的双链寡聚核酸 ,通过竞争性抑制转录因子与调控区域的结合 ,调控转录来改变下游基因的异常表达 ,从而抑制肿瘤恶性增殖 .用MTT比色法 ,体外筛选结合转录因子AP 2的decoy核酸药物 ,结果K2 0 6对多种肿瘤细胞生长有显著的抑制作用 ,在异植人肿瘤细胞NCI H4 6 0的裸鼠模型中 ,静脉注射高中低三剂量组的decoy核酸K2 0 6 ,抑瘤率分别达 71 8%、6 4 4 %及 5 7 3% (V V) .通过凝胶阻抑试验 ,验证了K2 0 6与转录因子产生特异性结合 . 展开更多

关键词 转录因子ap-2 decoy核酸 转录调控 肿瘤

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油菜沪油15中AP2/ERF-B3亚族转录因子的克隆和生物信息学分析 被引量：9

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作者 庄静 周熙荣 +6 位作者 孙超才 管帮超 彭日荷 乔玉山 章镇 熊爱生 姚泉洪 《分子细胞生物学报》 CSCD 北大核心 2008年第3期192-206,共15页

AP2/ERF转录因子家族广泛存在于植物中,参与植物细胞周期、生长发育以及生物和非生物胁迫相关基因表达调控。本文利用油菜UniGene数据库,以拟南芥AP2/ERF-B3亚族转录因子保守序列为信息探针,分离得到2个油菜AP2/ERF-B3亚族的转录因子Bna... AP2/ERF转录因子家族广泛存在于植物中,参与植物细胞周期、生长发育以及生物和非生物胁迫相关基因表达调控。本文利用油菜UniGene数据库,以拟南芥AP2/ERF-B3亚族转录因子保守序列为信息探针,分离得到2个油菜AP2/ERF-B3亚族的转录因子BnaERFB3-1和BnaERFB3-2。通过PCR和RT-PCR方法分别从双低甘蓝型油菜沪油15的DNA和cDNA中克隆了上述基因。序列分析显示,克隆的BnaERFB3-1-Hy15和BnaERFB3-2-Hy15转录因子与电子克隆的基因序列差异很小,均只有1个氨基酸位点不同,且都没有内含子。从氨基酸序列的相似性、组成成分、理化性质、疏水性/亲水性、序列比对、进化树、功能域、二级结构、三级结构、无序化特性等方面进行了预测和较为全面的分析。结果显示BnaERFB3-1-Hy15和BnaERFB3-2-Hy15是亲水性蛋白,在蛋白质的三级结构上与AtERF5相似,BnaERFB3-1-Hy15和BnaERFB3-2-Hy15蛋白无序化程度大于拟南芥AtERF5。通过分析EST丰度显示,BnaERFB3-1的表达集中在种子中,而BnaERFB3-2的表达则集中在根中。另外,将上述基因分别构建入酵母表达载体和植物双元表达载体,为深入研究该基因在油菜抗逆调控中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 转录因子ap2/ERF—B3亚族 生物信息学 进化树 油菜沪油15

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棉花中一个新型转录因子GhWRI1的表达特征与功能分析 被引量：5

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作者 李鑫 王正明 +1 位作者 薛伟 初明光 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期80-86,共7页

AP2(APETALA2)/EREBP(ethylene-responsive element binding protein)是一类特异性存在于植物中的转录因子,在植物中的许多代谢过程都起着十分重要的作用。从棉花中分离并获得了一个新的AP2基因GhWRI1,该基因长1 314 bp,所编码的蛋白含... AP2(APETALA2)/EREBP(ethylene-responsive element binding protein)是一类特异性存在于植物中的转录因子,在植物中的许多代谢过程都起着十分重要的作用。从棉花中分离并获得了一个新的AP2基因GhWRI1,该基因长1 314 bp,所编码的蛋白含有437个氨基酸,分子量约为48 kD,pI为5.77。序列分析结果显示,GhWRI1蛋白含有2个AP2结构域,该蛋白属于AP2家族;与GFP蛋白的融合表达试验结果显示,在洋葱表皮细胞中,GhWRI1是特异性在细胞核中表达的。Real-time RT-PCR数据显示GhWRI1主要在真叶、根、纤维以及种子中表达,而且其在纤维和种子中的表达量是随着发育时间的推移而不断升高的。同时构建了GhWRI1与LUC共表达的载体,通过检测LUC的活性来反映GhWRI1的表达量,试验数据显示,当GhWRI1与LUC共表达后,LUC的活性提高了约20倍。试验结果都显示GhWRI1是一个很强的转录激活子。 展开更多

关键词 WRI1基因 转录因子 ap2结构域 转录激活试验 棉花

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大豆GmTINY1基因的克隆与表达分析 被引量：3

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作者 黄方 何慧 +2 位作者 迟英俊 盖钧镒 喻德跃 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期2174-2179,共6页

采用基因芯片技术,从大豆中鉴定了一个荚优势表达基因。利用生物信息学的方法,拼接了该基因的全长序列,并通过RT-PCR克隆了该基因。Blast检索分析表明,该基因编码一个具有AP2结构域的转录因子,且与拟南芥DREB类蛋白TINY的氨基酸相似度最... 采用基因芯片技术,从大豆中鉴定了一个荚优势表达基因。利用生物信息学的方法,拼接了该基因的全长序列,并通过RT-PCR克隆了该基因。Blast检索分析表明,该基因编码一个具有AP2结构域的转录因子,且与拟南芥DREB类蛋白TINY的氨基酸相似度最高,将该基因命名为GmTINY1。GmTINY1包含一个735bp的开放阅读框,编码244个氨基酸残基。GmTINY1与拟南芥TINY和TINY2蛋白的相似度分别为59%与62%。系统发生分析表明,GmTINY1、TINY和TINY2位于一个分支,且同属于DREB亚家族。实时定量RT-PCR检测表明,GmTINY1基因在荚中高丰度表达,在花中的表达量也较高,在根中的表达量较低,而在叶片中未检测到表达。基因芯片信息分析结果表明,GmTINY1在种子发育的子叶期的种脐部分高丰度表达。由此推论,GmTINY1基因在大豆生殖器官发育中可能发挥调控作用,可能与种子发育过程中种脐的形成有关。 展开更多

关键词 大豆 转录因子 ap2 TINY DREB

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