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棉花黄萎病菌株VD8外泌毒蛋白的生化特性 被引量：18
1
作者 陈旭升 陈永萱 黄骏麒 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 1998年第2期126-128,共3页
棉花黄萎病菌株ＶＤ８外泌毒蛋白的生化特性１陈旭升２陈永萱１黄骏麒（１江苏省农业科学院经济作物研究所，南京２１００１４；２南京农业大学微生物系，南京２１００９５关键词：棉花；黄萎菌株ＶＤ８；毒蛋白；ＦＰＬＣ技术中图法分... 棉花黄萎病菌株ＶＤ８外泌毒蛋白的生化特性１陈旭升２陈永萱１黄骏麒（１江苏省农业科学院经济作物研究所，南京２１００１４；２南京农业大学微生物系，南京２１００９５关键词：棉花；黄萎菌株ＶＤ８；毒蛋白；ＦＰＬＣ技术中图法分类号：Ｓ４３５．６２Ｂｉｏｃｈｅｍ... 展开更多
关键词 棉花 黄萎菌株VD8 毒蛋白 FPLC
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半夏及掌叶半夏毒针晶中共性毒蛋白的研究 被引量：24
2
作者 郁红礼 朱法根 吴皓 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期1037-1042,共6页
目的:寻找天南星科半夏属有毒中药半夏及掌叶半夏毒性物质基础毒针晶中的共有蛋白,研究刺激性相关蛋白的致炎效应。方法:采用溶液内双酶解方法将半夏与掌叶半夏毒针晶中的蛋白降解为混合肽段,采用液相色谱与串联质谱偶联分析降解后的肽... 目的:寻找天南星科半夏属有毒中药半夏及掌叶半夏毒性物质基础毒针晶中的共有蛋白,研究刺激性相关蛋白的致炎效应。方法:采用溶液内双酶解方法将半夏与掌叶半夏毒针晶中的蛋白降解为混合肽段,采用液相色谱与串联质谱偶联分析降解后的肽段,将质谱分析数据与BIOWORKS软件搜索的NCBI绿色植物Viridiplantae蛋白库比对进行蛋白质检索分析。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对半夏、掌叶半夏毒针晶蛋白进行分析,同时采用胶内酶解后液相色谱与串联质谱偶联的方法,分析并鉴定约13kDa蛋白。提取分离半夏中的凝集素蛋白,并采用中性粒细胞迁移试验和测定腹腔渗出液中PGE2的含量,考察毒针晶及凝集素的炎症刺激性效应。结果:半夏及掌叶半夏毒针晶中均含约13kDa的蛋白条带,此条带经鉴定为凝集素类蛋白,且此13kDa蛋白条带为毒针晶中的主要蛋白之一,凝集素类蛋白可诱导中性粒细胞向大鼠腹腔迁移,可显著增加小鼠腹腔渗出液中PGE2的含量。结论:天南星科有毒中药半夏及掌叶半夏毒针晶蛋白中均含有凝集素类蛋白,且此类凝集素蛋白具有显著的致炎作用,是半夏与掌叶半夏毒针晶中的共性毒蛋白。 展开更多
关键词 半夏 掌叶半夏 毒针晶 蛋白鉴定 凝集素蛋白 致炎效应
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法半夏炮制过程对半夏中毒蛋白凝集素蛋白的影响 被引量：18
3
作者 李书晖 郁红礼 +2 位作者 吴皓 张元斌 王卫 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期2546-2551,共6页
为探究法半夏炮制过程对其毒性成分凝集素蛋白的影响,阐释法半夏炮制解毒的科学内涵,该研究采用Western blot法半定量分析炮制前后半夏中活性凝集素蛋白的含量;以甘草汁、石灰水以及两者混合溶液浸泡的方法分别处理半夏及凝集素蛋白,考... 为探究法半夏炮制过程对其毒性成分凝集素蛋白的影响,阐释法半夏炮制解毒的科学内涵,该研究采用Western blot法半定量分析炮制前后半夏中活性凝集素蛋白的含量;以甘草汁、石灰水以及两者混合溶液浸泡的方法分别处理半夏及凝集素蛋白,考察炮制不同时间对毒性蛋白凝集素蛋白含量的影响;采用SDS-PAGE凝胶电泳分析炮制前后溶液及沉淀中凝集素蛋白的条带变化;采用MALDI-TOF技术对炮制前后的蛋白进行相对分子质量定性分析比较。结果显示,生半夏中含凝集素蛋白5.01%,而法半夏中仅含0.04%,表明炮制后活性凝集素含量显著降低;石灰水浸泡1 d、甘草汁浸泡3 d后,生品中凝集素含量显著降低,混合溶液浸泡的影响最大。定性分析发现,使用石灰水浸泡后,凝集素蛋白被分解为小分子的肽段,甘草汁浸泡,可促使凝集素蛋白变性沉淀。法半夏炮制过程中辅料甘草汁和石灰水浸泡均可破坏毒性成分凝集素蛋白结构,显著降低毒性成分凝集素蛋白的含量,此为法半夏炮制解毒机制之一。 展开更多
关键词 半夏 毒性成分 炮制 凝集素蛋白
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苏云金芽孢杆菌及其在害虫防治上的应用(综述) 被引量：8
4
作者 姚江 《连云港师范高等专科学校学报》 2002年第1期36-41,共6页
苏云金芽孢杆菌 (Bacillusthuringiensis,简称Bt)自 1 90 1年发现以来 ,一直在微生物学、昆虫学和生物化学等方面受到研究者的关注。由于Bt能形成对许多昆虫具特异性毒力的杀虫蛋白 ,因此从 1 959年开始Bt已被制成杀虫剂防治鳞翅目害虫... 苏云金芽孢杆菌 (Bacillusthuringiensis,简称Bt)自 1 90 1年发现以来 ,一直在微生物学、昆虫学和生物化学等方面受到研究者的关注。由于Bt能形成对许多昆虫具特异性毒力的杀虫蛋白 ,因此从 1 959年开始Bt已被制成杀虫剂防治鳞翅目害虫。近 1 0年来 ,随着分子生物学和遗传工程技术的成熟和发展 ,使人们增加了有关晶体形成的分子生物学知识。Bt的杀虫活性主要是其能产生含有杀虫晶体蛋白 (ICPs)的伴孢晶体。一些杀虫蛋白基因 (又称cry基因 )已经成功用于转基因抗虫植物中。本文将从Bt微生物学、Bt制剂在害虫防治中以及Btcry基因在转基因抗虫植物中的应用等方面作一综述。 展开更多
关键词 应用 综述 苏云金芽孢杆菌 杀虫蛋白 害虫防治 生物学 伴孢晶体 杀虫谱 转基因抗虫植物 昆虫
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蚯蚓毒素及其去除方法的初步研究 被引量：12
5
作者 张祖珣 何俐明 +2 位作者 于培兰 杨典洱 刘华 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2001年第3期112-113,共2页
目的　研究蚯蚓毒素的来源及其成分 ,探索其去除方法。方法对蚯蚓应激分泌液进行透析、可见及紫外分光光度法检测透析袋内外液组分、电泳分析蛋白组分、动物体内试验检测毒性。结果蚯蚓应激分泌液的蛋白组分显示剧毒性 (最小致死量为 0 ... 目的　研究蚯蚓毒素的来源及其成分 ,探索其去除方法。方法对蚯蚓应激分泌液进行透析、可见及紫外分光光度法检测透析袋内外液组分、电泳分析蛋白组分、动物体内试验检测毒性。结果蚯蚓应激分泌液的蛋白组分显示剧毒性 (最小致死量为 0 .2 42mg/kg)。PAGE分离主要有两条带 ;蚯蚓对不同刺激产生的应激分泌液成分相同。结论蚯蚓应激分泌液的蛋白组分有毒 ,用加盐或微电流刺激方法可去除毒素。 展开更多
关键词 蚯蚓 应激分泌液 毒性蛋白 中药
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新杀虫剂HNPC-A9908对蛋白核小球藻生理生化特性的影响 被引量：11
6
作者 欧晓明 雷满香 +1 位作者 王晓光 樊德方 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期154-158,共5页
以蛋白核小球藻为材料,采用室内植物生长箱培养方法,研究了HNPC-A9908[O-(3-苯氧苄基)-2-甲硫基-1-(4-氯苯基)丙基酮肟醚]对小球藻细胞的致毒机理。结果表明,低浓度时HNPC-A9908对蛋白核小球藻蛋白质含量具有刺激增加的作用;随着浓度的... 以蛋白核小球藻为材料,采用室内植物生长箱培养方法,研究了HNPC-A9908[O-(3-苯氧苄基)-2-甲硫基-1-(4-氯苯基)丙基酮肟醚]对小球藻细胞的致毒机理。结果表明,低浓度时HNPC-A9908对蛋白核小球藻蛋白质含量具有刺激增加的作用;随着浓度的加大,藻细胞蛋白质含量逐渐降低。同时藻细胞超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性也表现出类似的趋势,说明SOD和POD活性的降低打破了小球藻细胞内活性氧产生与清除之间的正常平衡状态,是HNPC-A9908造成藻细胞活性氧过量产生和积累,进而引起藻细胞膜脂过氧化伤害的主要原因之一。 展开更多
关键词 杀虫剂 HNPC—A9908 蛋白核小球藻 生理生化特性
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苏云金芽孢杆菌杀蚊菌株研究进展 被引量：9
7
作者 周燕 朱英芝 姜明国 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期4614-4623,共10页
苏云金芽孢杆菌作为生物杀虫剂已有近百年历史,其杀虫谱包括从鳞翅目、鞘翅目、膜翅目、双翅目到线虫甚至是癌症细胞,对农林业生产以及医学领域研究具有非常重要的作用。全球每年死于蚊媒疾病的数目惊人。本综述首先介绍了首个被发现对... 苏云金芽孢杆菌作为生物杀虫剂已有近百年历史,其杀虫谱包括从鳞翅目、鞘翅目、膜翅目、双翅目到线虫甚至是癌症细胞,对农林业生产以及医学领域研究具有非常重要的作用。全球每年死于蚊媒疾病的数目惊人。本综述首先介绍了首个被发现对双翅目幼虫具有杀蚊活性的苏云金芽孢杆菌以色列亚种,详细叙述了该菌株的杀虫功能、菌株特点以及含有的多种杀虫毒蛋白基因;随后概述了报道的其他杀蚊菌株和杀蚊毒蛋白;还揭示了苏云金芽孢杆菌杀蚊菌株Cry/Cyt杀蚊毒蛋白的作用模式,为有关苏云金芽孢杆菌杀蚊菌株的研究提供借鉴。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 杀蚊菌株 BTI 毒蛋白 杀蚊作用模式
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虫生真菌中对松墨天牛高毒性蛋白的筛选及性质测定 被引量：8
8
作者 李建庆 张永安 +2 位作者 张星耀 袁锋 王玉珠 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期1-6,共6页
从 6株虫生真菌中分离纯化了 4 8种蛋白。以松墨天牛Monochamusalternatus为试虫 ,通过生测筛选出 4种高毒性蛋白 ,并从 4种高毒性蛋白中筛选出毒力最强的蛋白Bb36W D。蛋白Bb36W D含 2个亚基 ,大亚基和小亚基的分子量分别约为 2 4kD和 ... 从 6株虫生真菌中分离纯化了 4 8种蛋白。以松墨天牛Monochamusalternatus为试虫 ,通过生测筛选出 4种高毒性蛋白 ,并从 4种高毒性蛋白中筛选出毒力最强的蛋白Bb36W D。蛋白Bb36W D含 2个亚基 ,大亚基和小亚基的分子量分别约为 2 4kD和 17kD ;等电点分别为 9 4 7和 9 32。该蛋白含 16种氨基酸 ,其中精氨酸、组氨酸及丙氨酸含量较高。 展开更多
关键词 虫生真菌 松墨天牛 毒蛋白 筛选 分子量 等电点
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炮制对天南星毒性成分草酸钙针晶及凝集素蛋白含量的影响 被引量：7
9
作者 王贺鹏 郁红礼 +7 位作者 吴皓 谢雨薇 陶兴宝 曾平 程砚秋 王彩霞 刘冰冰 张萍 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期375-381,共7页
目的探究天南星炮制前后内源性毒性成分的含量变化,建立天南星毒性控制指标检测方法。方法采用HPLC法对35批天南星炮制前后草酸钙含量进行测定,色谱柱为Megres C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.5%磷酸水溶液,流速0.8 mL·mi... 目的探究天南星炮制前后内源性毒性成分的含量变化,建立天南星毒性控制指标检测方法。方法采用HPLC法对35批天南星炮制前后草酸钙含量进行测定,色谱柱为Megres C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.5%磷酸水溶液,流速0.8 mL·min^(-1),检测波长220 nm,柱温25℃;采用Western blot法对32批天南星炮制前后凝集素蛋白进行检测。结果各批次生天南星草酸钙含量为0.78%~2.33%,平均含量为1.43%;各批次制天南星草酸钙含量为0.29%~0.98%,平均含量为0.60%;炮制后草酸钙含量的降幅为25.6%~78.3%。各批次天南星炮制后均未检测到凝集素蛋白条带。结论天南星经过复制法炮制,可显著降低所含内源性毒性物质草酸钙及凝集素蛋白的含量。建立的草酸钙及凝集素蛋白检测方法可用于天南星毒性成分检测,以凝集素蛋白限度作为天南星毒性控制指标更为稳定可靠,可为天南星毒性控制指标的建立提供参考。 展开更多
关键词 天南星 炮制 毒性成分 草酸钙针晶 凝集素蛋白 含量测定
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镰刀菌属真菌毒素在植物和病原菌互作中的研究进展 被引量：2
10
作者 卓梦霞 刘思文 +1 位作者 李春雨 胡位荣 《广东农业科学》 CAS 2024年第3期56-69,共14页
镰刀菌是世界上最重要的植物病原菌之一,可影响植物的生长发育,严重威胁全球粮食安全和生物多样性。几乎所有的镰刀菌都会产生真菌毒素,其毒素种类多、毒性强,一方面可以作为致病因子之一参与镰刀菌的致病过程,另一方面可污染粮食和饲料... 镰刀菌是世界上最重要的植物病原菌之一,可影响植物的生长发育,严重威胁全球粮食安全和生物多样性。几乎所有的镰刀菌都会产生真菌毒素,其毒素种类多、毒性强,一方面可以作为致病因子之一参与镰刀菌的致病过程,另一方面可污染粮食和饲料,进而引起人类和动物的相关病症。已有研究表明,镰刀菌侵染植物后产生的不同种类真菌毒素不仅毒害植物细胞,引起植物组织的坏死,还会加速病原菌的侵染;同时,针对病原菌产生的毒素,植物会激活防御酶并启动防御相关基因的表达,或将致病毒素转化为无毒或低毒物质并转运到胞外,或通过分泌次生代谢物直接抑制病原菌毒素的生物合成。为全面解析镰刀菌毒素在病原菌侵染植物中的作用,提高植物对病原菌的抗性,该文综述了镰刀菌属真菌毒素的种类、毒性机理以及毒素在植物和病原菌互作中的作用,并讨论了植物对真菌毒素的防御反应策略,以期为镰刀菌毒素致病机制和病原菌防治策略研究提供参考。 展开更多
关键词 镰刀菌 真菌毒素 毒性机理 病原菌与植物互作 解毒酶 转运蛋白 次生代谢物
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转BtCry3A基因杨树6个株系体内毒蛋白表达及对桑天牛的抗性鉴定 被引量：7
11
作者 牛小云 黄大庄 +3 位作者 杨敏生 魏晓鹏 李晓芬 付新爽 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期593-599,共7页
为鉴定、筛选转BtCry3A基因抗虫杨树741杨对桑天牛有较强抗性的株系,选择741杨试验林中的6个转基因株系,检测外源基因整合的稳定性、可溶性蛋白和毒蛋白的表达量以及抗虫性等,并对6个转基因株系的抗虫性进行比较分析。结果表明:外源基因... 为鉴定、筛选转BtCry3A基因抗虫杨树741杨对桑天牛有较强抗性的株系,选择741杨试验林中的6个转基因株系,检测外源基因整合的稳定性、可溶性蛋白和毒蛋白的表达量以及抗虫性等,并对6个转基因株系的抗虫性进行比较分析。结果表明:外源基因在6个转基因株系基因组中整合稳定,各株系的木质部在整个生长季节均检测到毒蛋白表达,且呈现一定的时间序列规律,均在8-9月份达到高峰期,10月份开始急剧下降,但表达量有差异,其中CC84株系的表达量在7-9月份都明显高于其它株系;6个株系对桑天牛成虫产卵和幼虫的生长均有一定的抑制作用,表现出一定抗性,其中CC84株系对桑天牛幼虫的致死率达到50%,并表现出较稳定的抗虫性。根据检测鉴定结果初步认为,741杨转基因株系CC84具有推广应用潜力。 展开更多
关键词 转基因杨树 BtCry3A基因 毒蛋白 抗虫性 桑天牛
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SUMO在蛋白表达中的应用 被引量：6
12
作者 汪小杰 毛若雨 +3 位作者 张勇 滕达 王秀敏 王建华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期28-33,共6页
毒性蛋白表达具有很大的技术挑战性,其不仅对宿主菌有毒性,而且易于被宿主内源性蛋白酶降解。融合表达是实现毒性蛋白表达的有效策略。目前常用的融合标签有硫氧还蛋白、绿色荧光蛋白、麦芽糖结合蛋白、类固醇异构酶、N利用基质A及谷胱... 毒性蛋白表达具有很大的技术挑战性,其不仅对宿主菌有毒性,而且易于被宿主内源性蛋白酶降解。融合表达是实现毒性蛋白表达的有效策略。目前常用的融合标签有硫氧还蛋白、绿色荧光蛋白、麦芽糖结合蛋白、类固醇异构酶、N利用基质A及谷胱甘肽-S-转移酶等。而SUMO标签除具有传统融合标签的特性外,还具有分子小、促进折叠以及能被SUMO蛋白酶1专一性识别等优势,因此广受关注。综述SUMO标签、SUMO蛋白酶切割特性及其表达系统在异源蛋白融合表达中的应用。 展开更多
关键词 SUMO 融合表达 SUMO蛋白酶1 毒性蛋白
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椰心叶甲的危害及其生物防治研究 被引量：6
13
作者 钟锋 王辉 +2 位作者 邵志芳 黄其亮 黄碧波 《世界农药》 CAS 2014年第1期39-42,共4页
综述了椰心叶甲(Brontispa longissima)的危害状况及其生物防治研究进展,总结了天敌昆虫、昆虫病原微生物、生物源杀虫剂及转基因毒蛋白在防治椰心叶甲中的作用,探讨了目前椰心叶甲(B.longissima)生物防治中存在的问题及今后的生物防治... 综述了椰心叶甲(Brontispa longissima)的危害状况及其生物防治研究进展,总结了天敌昆虫、昆虫病原微生物、生物源杀虫剂及转基因毒蛋白在防治椰心叶甲中的作用,探讨了目前椰心叶甲(B.longissima)生物防治中存在的问题及今后的生物防治策略。 展开更多
关键词 椰心叶甲 生物防治 毒蛋白
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从白僵菌中筛选杀天牛蛋白的初步研究 被引量：3
14
作者 李建庆 张永安 +1 位作者 王玉珠 梅增霞 《中国森林病虫》 北大核心 2003年第2期8-10,共3页
通过硫铵沉淀浓缩和制备电泳洗脱的方法从白僵菌中提取纯化出了 12种蛋白 ,经初步筛选有 8种蛋白对松墨天牛表现出一定的毒性 ,其中蛋白Bb36W C和Bb36N E的毒性最高 ,Bb36N A和Bb36N F为中毒性 ,Bb36W D、Bb36W E、Bb36N B、Bb36N D为... 通过硫铵沉淀浓缩和制备电泳洗脱的方法从白僵菌中提取纯化出了 12种蛋白 ,经初步筛选有 8种蛋白对松墨天牛表现出一定的毒性 ,其中蛋白Bb36W C和Bb36N E的毒性最高 ,Bb36N A和Bb36N F为中毒性 ,Bb36W D、Bb36W E、Bb36N B、Bb36N D为弱毒性。 展开更多
关键词 毒蛋白 白僵菌 松墨天牛
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外泌体携带毒性蛋白在神经退行性疾病传播中的作用
15
作者 孟昱含 邹明新 《生理科学进展》 CAS 北大核心 2024年第2期149-154,共6页
外泌体(exosomes)是细胞外囊泡的一类亚型,由内体衍生并通过膜融合胞吐释放。外泌体介导细胞间信息通讯,在机体多种生理和病理过程中发挥重要作用。因其具有免疫原性低、可介导生物活性物质长距离运输等特点,外泌体被视为药物的理想生... 外泌体(exosomes)是细胞外囊泡的一类亚型,由内体衍生并通过膜融合胞吐释放。外泌体介导细胞间信息通讯,在机体多种生理和病理过程中发挥重要作用。因其具有免疫原性低、可介导生物活性物质长距离运输等特点,外泌体被视为药物的理想生物载体。工程化的外泌体可增强药物递送的靶向性,因此外泌体靶向药物递送的研究极具前景。但部分研究指出外泌体在患病机体中发挥促进病理进程的作用,例如肿瘤细胞分泌的外泌体可以"迷惑"免疫细胞或通过改善微环境促进肿瘤增殖和迁移。在神经退行性疾病中外泌体通过促进炎性反应和致病蛋白的扩散等方式加重病程。本文通过综述外泌体携带毒性致病蛋白介导神经退行性疾病的进展和病理传播,为神经退行性疾病的发生发展提供新的见解,为外泌体工程化改造和临床应用提出警示和建议。 展开更多
关键词 外泌体 神经退行性疾病 毒蛋白 星形胶质细胞 神经元
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转双Bt基因巨霸杨外源基因表达及抗虫性检测 被引量：5
16
作者 赵洁 杜沙沙 +2 位作者 邱彤 杨敏生 王进茂 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期47-51,共5页
为提高转基因杨树中Bt基因的表达效率并扩大抗虫谱,以同时转入Cry1Ac和Cry3A基因的转双Bt基因巨霸杨(Populus deltocdes‘55/56’×P.deltocdes‘2KEN8’)株系1年生苗为材料,对外源基因的表达和抗虫性进行检测。经PCR检测,证明目的... 为提高转基因杨树中Bt基因的表达效率并扩大抗虫谱,以同时转入Cry1Ac和Cry3A基因的转双Bt基因巨霸杨(Populus deltocdes‘55/56’×P.deltocdes‘2KEN8’)株系1年生苗为材料,对外源基因的表达和抗虫性进行检测。经PCR检测,证明目的基因已被整合到巨霸杨基因组中。利用荧光定量PCR和ELISA技术检测了4个转基因株系叶片中Bt基因的转录丰度和毒蛋白表达量。结果表明:不同株系间Bt基因的转录丰度存在显著差异,Cry3A基因的转录丰度显著高于Cry1Ac基因的转录丰度;2种Bt毒蛋白表达量在各株系间存在显著差异,Cry3A毒蛋白质量分数均显著高于Cry1Ac毒蛋白质量分数。各株系对鳞翅目害虫美国白蛾(Hyphantria cunea)幼虫抗虫效果不明显,且无显著差异;对鞘翅目害虫柳蓝叶甲(Plagiodera versicolora)表现出极高抗虫效果,且均显著高于转单基因Cry3A 741杨高抗株系CC84,不同株系间存在显著差异。 展开更多
关键词 巨霸杨 双Bt基因 转录丰度 毒蛋白 抗虫性
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转基因水稻恢复系及其F_1代Bt蛋白的时空表达分析 被引量：4
17
作者 汪秀峰 叶芬 +6 位作者 李莉 陆徐忠 倪大虎 王德正 麦霄黎 王淑云 杨剑波 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1077-1081,共5页
本研究以抗虫水稻恢复系9311(Bt)及其杂交种F1(Bt)为研究材料,以非转基因的9311为阴性对照,利用ELISA方法研究9311(Bt)及F1(Bt)各生育时期可溶性总蛋白和Bt蛋白的时空变化规律,为转Bt基因抗虫水稻的安全监管提供科学依据。结果表明:外... 本研究以抗虫水稻恢复系9311(Bt)及其杂交种F1(Bt)为研究材料,以非转基因的9311为阴性对照,利用ELISA方法研究9311(Bt)及F1(Bt)各生育时期可溶性总蛋白和Bt蛋白的时空变化规律,为转Bt基因抗虫水稻的安全监管提供科学依据。结果表明:外源基因的导入没有引起水稻组织中可溶性总蛋白含量的明显变化;9311(Bt)的Bt蛋白表达量在整个生长周期的各个部位均高于相应的F1(Bt)植株;同一植株不同组织器官中Bt蛋白表达量为:叶片>胚乳>颖壳及茎秆>根;同一植株不同发育期叶片Bt蛋白的测定结果整体表现为:营养生长阶段>生殖生长阶段>成熟衰老阶段。研究结果为转Bt基因抗虫水稻适宜检测时期的选择提供了一定的参考。 展开更多
关键词 转基因水稻 BT抗虫基因 毒蛋白 时空表达
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建立以α-突触核蛋白损伤为靶点的细胞筛选模型 被引量：4
18
作者 闫文芬 衡洋 +2 位作者 邵千航 陈乃宏 苑玉和 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期586-590,共5页
目的建立以α-突触核蛋白损伤为靶点筛选抗帕金森病创新药物的细胞模型。方法通过PCR方法扩增目的基因,分子克隆技术构建原核表达载体。融合载体转化至大肠杆菌诱导后表达重组α-突触核蛋白,亲和层析法纯化目的蛋白并通过蛋白免疫印迹... 目的建立以α-突触核蛋白损伤为靶点筛选抗帕金森病创新药物的细胞模型。方法通过PCR方法扩增目的基因,分子克隆技术构建原核表达载体。融合载体转化至大肠杆菌诱导后表达重组α-突触核蛋白,亲和层析法纯化目的蛋白并通过蛋白免疫印迹和质谱技术进行鉴定,MTT法检测细胞存活率。结果α-突触核蛋白基因的c DNA片段与理论分子量大小一致,并成功克隆至载体p ET30a;测序正确的融合载体转化至大肠杆菌E.Coli.BL21(DE3)。转化子经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达α-突触核蛋白,通过改变温度、IPTG浓度及宿主菌的增殖状态等条件,获得高表达菌株;宿主菌的裂解液通过亲和层析方法获得纯化的α-突触核蛋白,纯化蛋白通过与不同抗体免疫印迹结果证明为α-突触核蛋白,质谱结果显示其分子质量为15.3ku,与理论分子质量15.5 ku基本一致。纯化的α-突触核蛋白刺激PC12细胞及原代神经元细胞后,细胞存活率明显下降,存活率的降低程度与α-突触核蛋白刺激浓度呈正相关性。结论成功建立了以α-突触核蛋白损伤为靶点的细胞筛选模型,可用于筛选具有抗帕金森病功能的创新化合物。 展开更多
关键词 Α-突触核蛋白 毒性作用 帕金森病 筛选模型 蛋白表达 药物靶点
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凤凰木种子毒蛋白的高效凝胶过滤色谱分析 被引量：1
19
作者 吴红京 王文忠 唐根源 《分析测试学报》 CAS CSCD 1999年第2期29-31,共3页
介绍用ＨＰＧＦＣ（高效凝胶过滤色谱）对凤凰木种子中提取的３种毒蛋白分别进行色谱分析。并对分离的蛋白峰进行紫外光谱扫描来确认蛋白的纯度。根椐标准相对分子质量曲线，分别得到它们的相对分子质量并与ＳＤＳ－ＰＡＧＦ（十二烷基... 介绍用ＨＰＧＦＣ（高效凝胶过滤色谱）对凤凰木种子中提取的３种毒蛋白分别进行色谱分析。并对分离的蛋白峰进行紫外光谱扫描来确认蛋白的纯度。根椐标准相对分子质量曲线，分别得到它们的相对分子质量并与ＳＤＳ－ＰＡＧＦ（十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳）所得结果进行比较，用柱后衍生法测定了３个蛋白各自的氨基酸组成。 展开更多
关键词 毒蛋白 凤凰木 种子 HPGFC 测定
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杀虫微生物——无色杆菌的研究新进展 被引量：3
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作者 邓海滨 朱西儒 田世尧 《广州大学学报（自然科学版）》 CAS 2003年第2期117-121,共5页
无色杆菌是一种昆虫病原线虫的共生细菌 ,已证实对多种害虫具毒杀活力 ,且其主要作用成分为该细菌分泌的“外毒素” .文章综述了无色杆菌的致病机理 ,及其杀虫毒素蛋白的研究新进展 ,并讨论了基因工程技术在无色杆菌中的应用潜力和发展... 无色杆菌是一种昆虫病原线虫的共生细菌 ,已证实对多种害虫具毒杀活力 ,且其主要作用成分为该细菌分泌的“外毒素” .文章综述了无色杆菌的致病机理 ,及其杀虫毒素蛋白的研究新进展 ,并讨论了基因工程技术在无色杆菌中的应用潜力和发展前景 . 展开更多
关键词 杀虫微生物 无色杆菌 研究进展 致病机理 杀虫毒素蛋白 基因工程 基因克隆
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