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可构建不同三维微环境的细胞培养芯片设计与制作 被引量:3
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作者 陈淑豪 刘冲 +2 位作者 丁来钱 何玫娟 李经民 《机电工程技术》 2020年第10期167-170,共4页
为模拟在体微环境,设计并制作了一种可建立不同小分子浓度梯度三维微环境的细胞培养微流控芯片。通过建模与仿真优化设计了芯片封装三维生物水凝胶的微结构,确定了效果最佳的圆形微柱。利用微加工技术制作芯片,设计实验验证了芯片上不... 为模拟在体微环境,设计并制作了一种可建立不同小分子浓度梯度三维微环境的细胞培养微流控芯片。通过建模与仿真优化设计了芯片封装三维生物水凝胶的微结构,确定了效果最佳的圆形微柱。利用微加工技术制作芯片,设计实验验证了芯片上不同微环境的构建。在对称的芯片两侧,可调控外侧旁通道培养液成分形成多种不同小分子浓度分布的三维微环境。该芯片可用于样本的重复对比实验,为细胞与微环境相互作用机制的研究提供一个新的技术平台。 展开更多
关键词 微流控芯片 三维微环境 细胞培养 微柱
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生物制造领域的机遇与挑战:发展类器官构建及培养的新技术 被引量:2
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作者 王思涵 裴雪涛 李艳华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期312-319,共8页
类器官构建及培养技术是近年来新兴的前沿性科学技术,该技术已经被广泛用到组织器官发育、疾病发病机制、药物开发和再生医学等领域的研究之中。干细胞及组织器官发育分化调控的研究成果为类器官构建及培养技术的建立提供了重要的信息... 类器官构建及培养技术是近年来新兴的前沿性科学技术,该技术已经被广泛用到组织器官发育、疾病发病机制、药物开发和再生医学等领域的研究之中。干细胞及组织器官发育分化调控的研究成果为类器官构建及培养技术的建立提供了重要的信息。体外借助细胞外基质成分及细胞因子等构建出适宜于干细胞增殖、分化的三维微环境是类器官构建及培养技术的核心。在适宜的微环境中,干细胞及其分化的多种类型细胞可通过自组织形成与体内相应组织结构和功能相似的类器官。当前,多种类型的类器官构建及培养技术虽然得到广泛应用,但其技术体系仍具有操作的复杂性、产量的不确定性及获得的类器官结构和功能与体内组织存在较大差异性等难题。生物制造领域先进技术的引入推动了类器官技术的发展。本文将综述基质成分与细胞因子构建的三维微环境的研究进展,并讨论生物制造领域的先进技术在类器官构建与培养技术中的应用,例如微孔限定的培养技术可以控制类器官的生长发育,能用于制备大小均一及生物学特性相似的类器官;图案化技术使细胞按图案特征响应性地增殖与分化,可以精准控制类器官的生成;三维生物打印技术可以精确组装各类细胞,有助于构建具有复杂结构和区域特异性的类器官。类器官构建及培养技术是一个新兴的多学科交叉的创新技术,但是还应该看到其技术体系仍有待进一步改进及提升,以获得可准确展现体内相应组织器官结构和功能的类器官。 展开更多
关键词 类器官 三维微环境 干细胞 生物制造
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3D打印Ti6Al4V-4Cu合金通过骨免疫调节促进成骨基因的表达 被引量:3
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作者 张臣科 卢衍锦 +5 位作者 郭宇鹏 陈万 唐红 李怀胜 唐康来 何清义 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1170-1176,共7页
目的探究3D打印Ti6Al4V-4Cu合金对小鼠BMSCs及小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7炎症及成骨基因表达的影响。方法通过选择性激光熔融技术制备Ti6Al4V与Ti6Al4V-4Cu合金,依据医疗器械生物学评价标准制备两种材料浸提液。通过细胞计数试剂盒8法... 目的探究3D打印Ti6Al4V-4Cu合金对小鼠BMSCs及小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7炎症及成骨基因表达的影响。方法通过选择性激光熔融技术制备Ti6Al4V与Ti6Al4V-4Cu合金,依据医疗器械生物学评价标准制备两种材料浸提液。通过细胞计数试剂盒8法检测两种浸提液对小鼠BMSCs、小鼠RAW264.7细胞增殖的影响。两种浸提液与小鼠BMSCs共培养3 d后,通过实时荧光定量PCR法检测成骨相关基因Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,Col-Ⅰ)、ALP、Runx家族转录因子2(Runx family transcription factor 2,Runx-2)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)mRNA的表达;与小鼠RAW264.7共培养1 d后,通过实时荧光定量PCR法检测炎症相关基因IL-4、一氧化氮合成酶2(nitric oxide synthase 2,iNOS)mRNA的表达,并收集两组上清液通过ELISA法检测其中VEGF-a、BMP-2的分泌量。将两组上清液制备成成骨条件培养基,与BMSCs共培养3 d,实时荧光定量PCR法检测成骨相关基因Col-Ⅰ、ALP、Runx-2、OPG、OPN mRNA的表达。结果与Ti6Al4V合金浸提液比较,Ti6Al4V-4Cu合金浸提液对BMSCs及小鼠RAW264.7细胞的增殖影响不明显;但是可促进BMSCs OPG mRNA的表达,减少小鼠RAW264.7细胞炎症相关基因iNOS mRNA的表达、促进抑炎因子IL-4 mRNA的表达,还可促进小鼠RAW264.7细胞分泌VEGF-a及BMP-2,而Ti6Al4V-4Cu成骨条件培养基又可促进BMSCs成骨相关基因Col-Ⅰ、ALP、Runx-2、OPG、OPN mRNA的表达,上述指标差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 3D打印Ti6Al4V-4Cu合金通过释放铜离子,促进RAW264.7细胞分泌VEGF-a及BMP-2,从而通过骨免疫调节促进成骨发生,为金属假体的应用奠定了理论基础。 展开更多
关键词 3D打印技术 Ti6Al4V-4Cu合金 成骨微环境 骨免疫调节
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Quantitative heterogeneity and subgroup classification based on motility of breast cancer cells
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作者 Ling Xiong Yanping Liu +9 位作者 Ruchuan Liu Wei Yuan Gao Wang Yi He Jianwei Shuai Yang Jiao Xixiang Zhang Weijing Han Junle Qu Liyu Liu 《Chinese Physics B》 SCIE EI CAS CSCD 2019年第10期590-596,共7页
Cancer cell motility and its heterogeneity play an important role in metastasis, which is responsible for death of 90% of cancer patients. Here, in combination with a microfluidic technique, single-cell tracking, and ... Cancer cell motility and its heterogeneity play an important role in metastasis, which is responsible for death of 90% of cancer patients. Here, in combination with a microfluidic technique, single-cell tracking, and systematic motility analysis,we present a rapid and quantitative approach to judge the motility heterogeneity of breast cancer cells MDA-MB-231 and MCF-7 in a well-defined three-dimensional(3D) microenvironment with controllable conditions. Following this approach,identification of highly mobile active cells in a medium with epithelial growth factor will provide a practical tool for cell invasion and metastasis investigation of multiple cancer cell types, including primary cells. Further, this approach could potentially become a speedy(~ hours) and efficient tool for basic and clinical diagnosis. 展开更多
关键词 cancer METASTASIS MOTILITY HETEROGENEITY three-dimensional microenvironment INVASION potential
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三维细胞培养技术在肿瘤研究领域的应用 被引量:5
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作者 王颖钰 陆茵 +3 位作者 张伟伟 孙志广 郑仕中 陈磊 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1545-1548,共4页
传统二维细胞培养具有易操作、费用低、可大量应用的优点,在细胞培养领域广泛使用。但是由于细胞呈平面生长,无法构建出一个立体的微环境,且缺乏各种细胞因子的作用,因而与体内细胞状态存在差距;而三维细胞培养可以在细胞基因表达、基... 传统二维细胞培养具有易操作、费用低、可大量应用的优点,在细胞培养领域广泛使用。但是由于细胞呈平面生长,无法构建出一个立体的微环境,且缺乏各种细胞因子的作用,因而与体内细胞状态存在差距;而三维细胞培养可以在细胞基因表达、基质分泌及细胞功能活动等方面更好地模拟体内细胞状态。该文着重论述三维细胞培养技术在肿瘤研究中的应用,包括构建肿瘤微环境、观察肿瘤生物学行为、肿瘤血管生成、研究肿瘤耐药性等,为肿瘤研究工作者提供参考。 展开更多
关键词 三维细胞培养技术 肿瘤模型 细胞外基质 微环境 生物学行为 耐药性 血管生成 血管拟态
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三维细胞培养中支架的研究现状 被引量:5
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作者 李彤 张晓晓 +2 位作者 李婧 王俊妹 吴哲 《北京生物医学工程》 2017年第4期433-437,共5页
细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术,目前常用的二维细胞培养方法,例如,多孔板、烧瓶和培养皿等存在诸多不足和限制,三维细胞培养能够改善细胞局部微环境、促进细胞与细胞、细胞与基质之间的交流,模拟体内生理环境,从而增强... 细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术,目前常用的二维细胞培养方法,例如,多孔板、烧瓶和培养皿等存在诸多不足和限制,三维细胞培养能够改善细胞局部微环境、促进细胞与细胞、细胞与基质之间的交流,模拟体内生理环境,从而增强细胞功能,在新药研发、肿瘤研究等领域具有广泛应用前景。支架是实现三维细胞培养最常用的手段之一,相当于人工细胞外基质,能够模拟体内组织复杂的三维结构及其主要特征。本文从基于支架的培养体系和无支架的培养体系两方面讨论了三维细胞培养方法,尤其详细介绍了各种支架。 展开更多
关键词 3D细胞培养 生理微环境 支架 细胞外基质
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构建高通量三维细胞共培养芯片模拟肿瘤微环境
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作者 王云超 刘青 +5 位作者 牛海涛 门同义 张晓明 杨吉伟 沈彬 王建宁 《泌尿外科杂志(电子版)》 2020年第1期17-23,共7页
目的构建高通量三维细胞共培养芯片,模拟体内微环境,实现多种细胞共培养.方法借助微流控技术构建高通量三维细胞共培养芯片.通过设计芯片、制作光刻阳膜、制作基片、修剪、打孔、清洗处理,封接制成芯片.将基质胶及稀释后的基质胶分别灌... 目的构建高通量三维细胞共培养芯片,模拟体内微环境,实现多种细胞共培养.方法借助微流控技术构建高通量三维细胞共培养芯片.通过设计芯片、制作光刻阳膜、制作基片、修剪、打孔、清洗处理,封接制成芯片.将基质胶及稀释后的基质胶分别灌入到基质胶灌注单元、细胞培养室内,37℃凝固,利用荧光标记葡聚糖FITC-Dextran灌注到营养液灌注单元,分别于灌注后15 min、180 min测试芯片弥散情况.将膀胱癌T24细胞、纤维细胞、内皮细胞接种到芯片中,培养24h,观察细胞生长情况.结果制作成的高通量三维细胞共培养芯片,大小为5 cm×5 cm×1 cm.芯片包括营养液灌注单元、生物胶灌注单元和细胞培养单元以及微桥连接结构.显微镜下观察FITC-Dextran弥散至整个芯片,3种细胞在该平台生长状态良好.结论本研究实现了4组3种细胞在微小尺度下三维共培养,为进一步研究体内微环境以及以后的药物筛选提供了良好生物平台,将会成为一种新的细胞培养方式. 展开更多
关键词 高通量 微流控芯片技术 三维细胞共培养 肿瘤微环境
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刚度可调丝素蛋白-胶原复合水凝胶影响人乳腺上皮细胞生长与表型
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作者 张一宁 焦慧 +5 位作者 郭丽娜 马馨雨 盖高成 张津滔 阳文青 王秀丽 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期381-391,共11页
细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的刚度特性与乳腺组织的生理及病理状态密切相关。本研究旨在探讨刚度可调的丝素蛋白-胶原复合水凝胶培养基质对正常乳腺上皮细胞生长与表型的影响及其作用机制。利用辣根过氧化物酶(horseradish p... 细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的刚度特性与乳腺组织的生理及病理状态密切相关。本研究旨在探讨刚度可调的丝素蛋白-胶原复合水凝胶培养基质对正常乳腺上皮细胞生长与表型的影响及其作用机制。利用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)-H2O2酶促交联反应制备刚度可调的丝素蛋白-胶原复合水凝胶,用旋转流变仪检测其弹性模量。接种人乳腺上皮细胞(MCF-10A细胞)至不同刚度(19.10~4932.36 Pa)复合水凝胶并维持三维(three dimensional,3D)培养,用CCK-8试剂盒检测MCF-10A细胞增殖能力,并利用whole-mount洋红染色和苏木素-伊红(HE)染色评价细胞的形态与分布。结果显示,随着基质刚度增加,MAC-10A细胞增殖能力减弱,并且其形成的腺泡样上皮结构逐渐减少、分支样结构增多。同时,基质刚度的增加显著阻遏MCF-10A细胞生理极性的建立。实时定量PCR结果显示,伴随培养基质刚度的增加,ECM重塑相关基因mmp-2、mmp-3、mmp-9表达水平显著上调,而上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关基因E-cadherin表达水平显著下调,Vimentin基因和Wnt通路中Snail、Wnt5b、Integrinβ1基因表达水平均显著上调。上述结果提示,刚度可调的丝素蛋白-胶原复合水凝胶可调控MCF-10A细胞的增殖、表型和功能基因的表达,该调控作用可能与乳腺上皮细胞极性的改变、ECM重塑以及EMT的发生密切相关。 展开更多
关键词 基质刚度 三维培养 微环境 上皮-间质转化
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