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用原核增强子提高hTERT启动子介导的基因表达 被引量：6
1
作者 王丽娜 李卓 +8 位作者 薛志刚 薛金锋 胡友金 周银 李剑 潘乾 夏昆 梁德生 夏家辉 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2006年第15期1125-1130,共6页
目的：探讨原核增强子能否提高hTERT启动子的转录活性及对其肿瘤特异性的影响。方法：将增强子SV40、CMV分别或组合构建一系列GFP和荧光素酶报告基因载体，转染人肝癌、鼻咽癌、宫颈癌、结直肠癌细胞、成纤维肉瘤和正常成纤维细胞，流... 目的：探讨原核增强子能否提高hTERT启动子的转录活性及对其肿瘤特异性的影响。方法：将增强子SV40、CMV分别或组合构建一系列GFP和荧光素酶报告基因载体，转染人肝癌、鼻咽癌、宫颈癌、结直肠癌细胞、成纤维肉瘤和正常成纤维细胞，流式细胞仪计数和双荧光酶分析系统检测基因的表达效率。结果：在正常成纤维细胞中这些载体均不能有效表达；而在肿瘤细胞中hTERT启动子能介导基因表达但效率不高，增强子能使基因表达增强3～26倍，特别是单独CMV增强子和SV40-CMV双增强子使荧光素酶表达提高20-26倍，是常用的CMV增强子／启动子的2～7倍；完整CMV增强子／启动子对hTERT启动子的活性影响因不同细胞而异。结论：增强子能显著增强hTERT启动子的转录活性并对其肿瘤特异性没有影响，CMV增强子或SV40-CMV双增强子／hTERT启动子是高效特异的通用调控元件，用于靶向性肿瘤基因治疗具有巨大潜力。 展开更多
关键词 端粒 末端转移酶/遗传学 启动区(遗传学) 增强子元件(遗传学) 基因表达 转染
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联合测定hTERT和Ki-67的表达对胶质瘤分级的评价 被引量：5
2
作者 马越 于士柱 杨树源 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2007年第14期1081-1084,共4页
目的:探讨人脑胶质瘤恶性程度评定的客观标准。方法:采用组织微阵列技术,通过免疫组化的方法对60例不同级别人脑胶质瘤组织的hTERT和Ki-67表达水平进行测定,并与10例正常组织比较。结果:Ⅰ～Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级胶质瘤与对照组Ki-67表达阳... 目的:探讨人脑胶质瘤恶性程度评定的客观标准。方法:采用组织微阵列技术,通过免疫组化的方法对60例不同级别人脑胶质瘤组织的hTERT和Ki-67表达水平进行测定,并与10例正常组织比较。结果:Ⅰ～Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级胶质瘤与对照组Ki-67表达阳性细胞标记指数分别为1.90±0.29、8.39±1.26、21.19±3.06与0.35±0.13,各组间差异有统计学意义,P<0.001;hTERT表达阳性细胞标记指数分别为5.30±0.65、28.63±3.59、53.62±4.68与0,各组间差异有统计学,P<0.01。hTERT与Ki-67表达阳性指数显著正相关,r=0.94,P<0.01,hTERT表达水平越高,Ki-67的表达也越高。结论:联合测定Ki-67和hTERT表达水平可以作为评价胶质瘤生物学行为、判断临床预后的重要参考指标。 展开更多
关键词 端粒 末端转移酶/遗传学 Ki-67抗原/代谢 脑肿瘤/病理学 神经胶质瘤/分类
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外周血hTERT mRNA表达与进展期结直肠癌术后复发及预后的关系 被引量：4
3
作者 刘少平 方春华 +2 位作者 胡亚华 张险峰 罗钢 《中国医师杂志》 CAS 2014年第5期597-600,604,共5页
目的 探讨进展期结直肠癌（CRC）患者外周血人端粒酶逆转录酶（hTERT） mRNA表达量与术后复发及预后的关系.方法 以实时荧光定量RT-PCR定量检测85例进展期CRC患者根治术前、术后1个月及30例健康对照者外周血hTERT mRNA表达量;术后随访3... 目的 探讨进展期结直肠癌（CRC）患者外周血人端粒酶逆转录酶（hTERT） mRNA表达量与术后复发及预后的关系.方法 以实时荧光定量RT-PCR定量检测85例进展期CRC患者根治术前、术后1个月及30例健康对照者外周血hTERT mRNA表达量;术后随访3年,CRC复发患者及未复发患者复查外周血hTERT mRNA表达量.结果进展期CRC组术前外周血hTERT mRNA表达量显著高于正常对照组[（6.22 ±5.85）2-△△Ct vs （0.45 ±0.27）2-△△Ct,P ＜0.01],术后1个月外周血hTERT mRNA表达量显著降低（P＜0.01）.术后复发组外周血hTERT mRNA表达量显著高于术后1个月组和未复发组[（5.07 ±2.87）2-△△Ctvs（1.83±1.08）2-△△Ct,（2.15 ±1.49）2-△△Ct,（P＜0.01）].单因素分析显示肿瘤分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移率及有无肝转移是影响进展期CRC患者术前外周血hTERT mRNA表达水平升高的因素（P＜0.05或P＜ 0.01）.Logistic多因素回归分析显示肿瘤分化程度、淋巴结转移及肝转移为影响进展期CRC术前外周血hTERT mRNA表达升高的独立危险因素;随着术前外周血hTERT mRNA表达量的升高,CRC患者术后3年复发率逐步升高,术后生存率逐步降低.结论术前外周血hTERTmRNA表达量与进展期CRC重要病理特征相关,是影响预后的重要因素,可作为预后评价指标;术后外周血hTERT mRNA表达量升高与术后复发相关. 展开更多
关键词 端粒 末端转移酶 遗传学 RNA 信使 遗传学 端粒 末端转移酶 血液 结直肠肿瘤 外科学 结直肠肿瘤 血液 逆转录聚合酶链反应 复发 预后
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hTERT及Ki-67的表达与中晚期宫颈癌放射敏感性的关系 被引量：2
4
作者 迟峰 郑伟 吴荣 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2006年第15期1171-1173,共3页
目的：探讨人端粒酶逆转录酶（human telomerase reverse transcriptase，hTERT）和Ki一67的表达与中晚期宫颈癌放射敏感性的关系。方法：应用免疫组化方法检测72例中晚期宫颈癌组织hTERT和Ki-67的表达情况。全部患者均采用单纯放射治... 目的：探讨人端粒酶逆转录酶（human telomerase reverse transcriptase，hTERT）和Ki一67的表达与中晚期宫颈癌放射敏感性的关系。方法：应用免疫组化方法检测72例中晚期宫颈癌组织hTERT和Ki-67的表达情况。全部患者均采用单纯放射治疗，外照射用直线加速器6MVX线等中心盆腔野常规放疗DT-40～44Gy，腔内后装治疗（192Ir）每周1次6Gy，A点参考剂量42Gy。结果：hTERT和Ki-67的表达指数分别分布为56．4％～95．2％和4．8％～52．4％，平均值分别为75．8％和26．6%。hTERT和Ki-67的表达强度与放射敏感性相关，随着hTERT和Ki-67表达的增高，其放射敏感性有增高趋势。Logistic多因素回归分析，筛选出时放射敏感性有影响的因素依次为：hTERT、肿瘤的分化程度和肿瘤的体积。结论：hTERT和Ki-67表达与中晚期宫颈癌的放射敏感性呈正相关。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤/病理学 粒端 末端转移酶/遗传学 KI-67抗原 辐射耐受性
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端粒酶蛋白催化亚单位基因及其蛋白在胃癌中的表达 被引量：2
5
作者 邵晋晨 吴继锋 《安徽医科大学学报》 CAS 2002年第1期29-31,共3页
目的　探讨端粒酶蛋白催化亚单位 (hTERT)基因mRNA及其蛋白在胃癌发生、发展中的重要作用以及在胃癌诊断中的意义。方法　应用原位杂交方法检测 5 3例胃癌标本中hTERTmRNA的表达 ,应用免疫组化S P法检测相同标本中hTERT蛋白的表达。结果... 目的　探讨端粒酶蛋白催化亚单位 (hTERT)基因mRNA及其蛋白在胃癌发生、发展中的重要作用以及在胃癌诊断中的意义。方法　应用原位杂交方法检测 5 3例胃癌标本中hTERTmRNA的表达 ,应用免疫组化S P法检测相同标本中hTERT蛋白的表达。结果　 5 3例胃癌标本中 ,hTERTmRNA阳性 41例 (77% ) ,其中低分化腺癌阳性 18例 (82 % ) ,高分化腺癌阳性 2 1例 (81% ) ,黏液腺癌及黏液细胞癌阳性 2例 (2 / 5 ) ;hTERT蛋白阳性共 46例 (87% ) ,其中低分化腺癌阳性 2 0例 (91% ) ,高分化腺癌阳性 2 5例(96 % ) ,黏液腺癌及黏液细胞癌阳性 1例 (1/ 5 ) ;hTERTmR NA及hTERT蛋白的表达在低分化腺癌组与高分化腺癌组之间差异未见显著性 (P >0 0 5 ) ,但hTERTmRNA与hTERT蛋白之间呈正相关 (rS=0 6 2 3,P <0 0 1)。 展开更多
关键词 端粒 末端转移酶 胃肿瘤 免疫组化 原位杂交
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hTERT核心启动子驱动的条件复制型腺病毒载体的构建及鉴定 被引量：1
6
作者 倪芳 鲁茁壮 +3 位作者 瞿成奎 胡泽斌 王立生 汪思应 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2006年第1期19-22,共4页
目的构建并鉴定一种新型人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子驱动的条件复制型腺病毒载体。方法采用PCR的方法克隆腺病毒E1区基因(E1A,E1B55K)、E1B的启动子(E1Bp)以及人端粒酶逆转录酶亚基启动子(hTERTp),以及2个目的基因:人GM-CSF和GFP(Gre... 目的构建并鉴定一种新型人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子驱动的条件复制型腺病毒载体。方法采用PCR的方法克隆腺病毒E1区基因(E1A,E1B55K)、E1B的启动子(E1Bp)以及人端粒酶逆转录酶亚基启动子(hTERTp),以及2个目的基因:人GM-CSF和GFP(GreenFluorescenceProtein,GFP)。采用一系列分子生物学方法构建pShuttle-GFPSV55K穿梭质粒,应用此穿梭质粒与AdEasy-1腺病毒DNA在BJ5183细菌内重组得到重组腺病毒质粒,将其转染293细胞获得Ad-GFPSV55K重组腺病毒。PCR法鉴定重组腺病毒,噬斑形成实验测病毒滴度。结果经过酶切鉴定成功地构建了分别携带GM-CSF基因和GFP报告基因的腺病毒载体,病毒滴度为7×1010pfu/ml。结论成功获得由hTERT启动子驱动的条件复制型腺病毒载体,为肿瘤的基因治疗打下良好的基础。 展开更多
关键词 末端转移酶/遗传学 腺病毒科 发光蛋白质类/遗传学
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