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北京长白杂交猪IgGH链基因CH2-CH3的克隆、序列分析及表达质粒构建 被引量:3
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作者 李新生 高凤山 +4 位作者 李云岗 崔保安 陈红英 崔沛 夏春 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期1-6,共6页
根据GenBank中注册的猪IgG H链基因cDNA CH2 CH3序列(SSU03780),设计了含KpnⅠ和HindⅢ酶切位点的一对引物,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法从北京长白杂交猪肠系膜淋巴结细胞扩增猪IgG H链基因CH2 CH3序列.将PCR产物纯化回收后,... 根据GenBank中注册的猪IgG H链基因cDNA CH2 CH3序列(SSU03780),设计了含KpnⅠ和HindⅢ酶切位点的一对引物,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法从北京长白杂交猪肠系膜淋巴结细胞扩增猪IgG H链基因CH2 CH3序列.将PCR产物纯化回收后,插入到含LacZ基因的克隆载体pGEM-T Easy中,转化大肠杆菌JM 109感受态细胞,经KpnⅠ和HindⅢ双酶切及PCR鉴定,筛选出阳性克隆.将所克隆的目的片断亚克隆到原核表达载体pQE 30,构建重组质粒pQE 30/PIgG CH2 CH3.将重组表达质粒转化大肠杆菌JM 109感受态细胞,筛选阳性克隆,经IPTG诱导表达后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析.结果表明,本研究克隆了猪IgG H链基因CH2 CH3序列,全长663 bp,编码221个氨基酸,利用Gentyx version 6.0软件将CH2 CH3基因的核苷酸序列与GenBank中的参考序列比较,其核苷酸序列同源率为99.551%,推导的氨基酸序列同源率为100%.将pQE 30/PIgG CH2 CH3转化JM 109感受态细胞,表达的融合蛋白相对分子质量约为26.95 ku,经IPTG诱导2 h,表达量约占菌体总蛋白41.5%. 展开更多
关键词 igg H链基因 CH2和CH3 基因克隆 DNA序列分析 原核表达
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以免疫球蛋白为载体的抗O型口蹄疫病毒基因工程疫苗的构建 被引量:13
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作者 赵凯 陈光辉 +10 位作者 张震宇 严维耀 郑兆鑫 孙理云 盛祖恬 尤永进 徐泉兴 朱彩珠 冯霞 张强 卢永干 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期679-683,共5页
以自体免疫球蛋白作为外源抗原的载体来研制疫苗是一条研制安全、高效疫苗的新途径。将猪IgGH链基因中的CDR3区缺失 ,剩余的两个片段分别连接到pBluescriptⅡSK(+)和 pBluescriptⅡKS(+)上 ,其中一片段再与编码FMDVVP1两个拷贝的 141~ ... 以自体免疫球蛋白作为外源抗原的载体来研制疫苗是一条研制安全、高效疫苗的新途径。将猪IgGH链基因中的CDR3区缺失 ,剩余的两个片段分别连接到pBluescriptⅡSK(+)和 pBluescriptⅡKS(+)上 ,其中一片段再与编码FMDVVP1两个拷贝的 141~ 16 0位氨基酸残基和一个拷贝的 2 0 0~ 2 13位氨基酸残基构成的串联片段2 0AA~ 14AA~ 2 0AA的核苷酸片段相连。然后将它们切下与质粒表达载体 pET2 8b相连 ,构建出融合表达质粒pET2 8b FH ,经限制酶酶解及DNA序列分析证明该融合基因各连接点及读框正确。转入大肠杆菌BL2 1(DE3) plysS表达出一分子量为 6 4kD的蛋白质。经ELISA检验证明 ,大肠杆菌细胞中表达的融合蛋白有O型FMDV抗原活性。将该融合蛋白肌肉注射免疫豚鼠和猪 ,攻毒实验表明 ,疫苗pET2 8b FH对豚鼠产生了保护作用 ,保护率为 6 6 % ,对猪也有保护作用。 展开更多
关键词 基因工程疫苗 O型口蹄疫病毒 构建
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酸奶双菌发酵过程对不同来源IgG的影响 被引量:5
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作者 曹劲松 罗明姬 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2004年第2期6-9,共4页
研究了酸奶嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌双菌混合发酵过程对牛初乳IgG,牛血IgG,猪血IgG和鸡蛋黄IgY的影响。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证实,常规的双菌发酵不会致使上述4种IgG分子降解,分别采用琼脂单向免疫扩散法(RID)和酶联免疫吸附... 研究了酸奶嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌双菌混合发酵过程对牛初乳IgG,牛血IgG,猪血IgG和鸡蛋黄IgY的影响。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证实,常规的双菌发酵不会致使上述4种IgG分子降解,分别采用琼脂单向免疫扩散法(RID)和酶联免疫吸附法(ELISA)对牛初乳、牛血IgG及蛋黄IgY组分作定量分析,发现这些成分保持了原有免疫反应活性。虽然添加不同IgG基料后均可制备含有活性IgG的凝固型酸奶,但显著改变双菌发酵过程中乳源蛋白质的降解模式,添加牛血IgG,猪血IgG或者鸡蛋类IgY基料后,αs-酪蛋白和β-酪蛋白相应为发生降解的主要乳源蛋白。 展开更多
关键词 酸奶 嗜热链球菌 保加利亚乳杆菌 混合发酵 牛初乳igg 牛血igg 猪血igg 鸡蛋黄IgY
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两种免疫酶试剂盒检测猪抗E型肝炎病毒IgG的比较 被引量:1
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作者 张焕容 杨发龙 《中国动物检疫》 CAS 2010年第8期30-33,共4页
目的比较两种免疫酶试剂盒recomWell HEV IgG(swine)ELISA(recom Well )和recomLine HEV IgG(swine)(recom Line )检测猪抗E型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)IgG的准确性。方法分别采用基因3型和基因4型人HEV(human HEV,hHEV)人... 目的比较两种免疫酶试剂盒recomWell HEV IgG(swine)ELISA(recom Well )和recomLine HEV IgG(swine)(recom Line )检测猪抗E型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)IgG的准确性。方法分别采用基因3型和基因4型人HEV(human HEV,hHEV)人工感染无菌猪各2头,采用上述试剂盒检测猪感染后不同天数的血清样品中抗HEV IgG,同时对两头接种PBS液的无菌猪血清样品18份和4头未感染猪的18份血清进行了检测。结果 2头猪人工感染基因3型hHEV后,recomWell检测均于感染后21d出现阳性,并持续56d;recomLine检测,其中1头猪于感染后14d呈阳性,而另1头于感染后21d呈阳性,且均持续56d。2头猪人工感染基因4型hHEV后,两种试剂盒检测,其中1头猪于感染后21d呈阳性,另1头35d呈阳性,并均持续56d仍为阳性。18份对照血清两种试剂盒检测均为阴性。18份未人工感染猪血清中,只有1份两种试剂盒检测均为阳性。两种试剂盒同时检测的共72份样品中,recomWell检出阳性样品23份,阳性率约为32.0%(23/72),recomLine检出阳性样品24份,阳性率约为33.30%(24/72),检出阳性率两者差异不显著(P>0.05);在recomWell检出的23份阳性样品中,recomLine检测均为阳性,两者阳性检出符合率为100%(23/23);recomWell的漏检率约为4.1%(1/24)。结论 recomWellR和recomLine均可用于猪抗HEVIgG的检测,recomLine检测灵敏度略高于recomWell,且操作更简便,不需要特殊昂贵的检测设备,特别适合用于基层检测猪抗HEV IgG。 展开更多
关键词 免疫酶试剂盒 猪抗E型肝炎病毒igg 检测 比较
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关中驴抗猪瘟病毒IgG制备工艺及质量监控研究
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作者 李六金 朱德生 +4 位作者 贾满民 陈慧茹 押宗保 吴耀南 赵永康 《动物医学进展》 CSCD 2003年第2期100-102,114,共4页
本实验用配有佐剂的猪瘟病毒抗原,按特定基础免疫与强化免疫程序接种关中毛驴,用两次盐析法沉淀提取抗猪瘟病毒IgG,其中对提纯制备工艺所涉及的pH值、温度、硫酸铵浓度等工艺进行探索比较,继之对单位体积内的蛋白浓度、酶标抗体效价和... 本实验用配有佐剂的猪瘟病毒抗原,按特定基础免疫与强化免疫程序接种关中毛驴,用两次盐析法沉淀提取抗猪瘟病毒IgG,其中对提纯制备工艺所涉及的pH值、温度、硫酸铵浓度等工艺进行探索比较,继之对单位体积内的蛋白浓度、酶标抗体效价和稀释度进行了标化,同时对质量监控进行了平行性分析。本实验以陕西关中毛驴作为免疫反应供浆动物;研制用于预防和治疗猪瘟的抗病毒免疫球蛋白(IgG)生物制剂获得理想结果。经6省、市、区试用后,深受用户和兽医防疫部门的一致好评和欢迎。 展开更多
关键词 制备工艺 猪瘟 抗猪瘟病毒免疫球蛋白 关中驴 质量监控
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