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猪戊型肝炎病毒结构蛋白片段的表达及其在ELISA中的初步应用 被引量:8
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作者 赵宇军 许冬梅 +2 位作者 朱远茂 薛飞 相文华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1198-1201,共4页
为建立一种快速的猪戊型肝炎病毒抗体检测方法,根据已克隆的戊型肝炎病毒株DQ1结构蛋白基因(ORF2)的抗原性及水溶性分析,在其序列上设计一对引物,上游引物和下游引物分别带有BamHⅠ、HindⅢ酶切位点,用PCR方法扩增,获得369 bp大小的相... 为建立一种快速的猪戊型肝炎病毒抗体检测方法,根据已克隆的戊型肝炎病毒株DQ1结构蛋白基因(ORF2)的抗原性及水溶性分析,在其序列上设计一对引物,上游引物和下游引物分别带有BamHⅠ、HindⅢ酶切位点,用PCR方法扩增,获得369 bp大小的相应片段,位于ORF2 128-497 bp处。将扩增片段克隆到pET-32a构建了原核表达载体pET32a-DQ01,经测序证明该片段正确插入。将pET32a-DQ01转化BL21并诱导表达,SDS-PAGE结果显示表达蛋白大小为33 ku,Western-blot结果表明表达的蛋白质具有生物活性,将表达蛋白作为诊断抗原,对反应条件进行优化,初步建立了ELISA诊断方法。 展开更多
关键词 猪戊型肝炎 结构蛋白基因 原核表达 ELISA
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猪戊型肝炎ELISA诊断试剂盒的研制及应用 被引量:5
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作者 刘启文 李震 +8 位作者 赵凯 于瑞嵩 唐雪明 朱宏 吴潇 谭芙蓉 王金斌 陶世如 蒋玲曦 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1435-1441,共7页
本试验旨在建立有效的针对猪戊型肝炎病毒(HEV)的诊断技术及试剂盒。作者建立了应用猪HEVORF3筛选出来的一段序列合成肽swHEV11检测HEV血清抗体的间接ELISA诊断方法,确定的抗原最适包被浓度为3μg·mL-1;血清最适稀释度为1∶10,作... 本试验旨在建立有效的针对猪戊型肝炎病毒(HEV)的诊断技术及试剂盒。作者建立了应用猪HEVORF3筛选出来的一段序列合成肽swHEV11检测HEV血清抗体的间接ELISA诊断方法,确定的抗原最适包被浓度为3μg·mL-1;血清最适稀释度为1∶10,作用时间为30min;酶标抗体最适稀释度为1∶12000,作用时间为60min。用HEV ORF3合成肽swHEV11研制的猪HEV ELISA诊断试剂盒,与北京万泰试剂盒检测比较,符合率为73.4%(205/279),灵敏度和特异性分别为73.3%(200/273)和83.3%(5/6)。该试剂盒批内重复的变异系数<10%,批间变异系数<20%。结果表明,该方法的建立和所研制的猪戊型肝炎诊断试剂盒灵敏度高,特异性强,稳定性合格,为猪戊型肝炎病毒抗体的检测和流行病学的调查提供了一种简便快速的血清学诊断方法。 展开更多
关键词 猪戊型肝炎病毒 合成肽 间接ELISA 检测 诊断试剂盒
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应用巢式PCR检测猪戊型肝炎病毒核酸及其序列分析 被引量:2
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作者 邱蜜蜜 丛彦龙 +8 位作者 丁壮 孟轲音 李志杰 尹仁福 李少丽 王昌庆 刘美 吴昊 母连志 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期296-298,307,共4页
根据GenBank注册的AJ272108等序列,利用Oligo6应用软件设计内外2对引物,采用RT-PCR技术对本实验室分离的猪戊型肝炎病毒进行探索性扩增,并对测定的序列进行分析,结果用套式引物扩增出了目的条带,序列分析表明该序列属于基因Ⅳ型,并与其... 根据GenBank注册的AJ272108等序列,利用Oligo6应用软件设计内外2对引物,采用RT-PCR技术对本实验室分离的猪戊型肝炎病毒进行探索性扩增,并对测定的序列进行分析,结果用套式引物扩增出了目的条带,序列分析表明该序列属于基因Ⅳ型,并与其核苷酸同源性在85.6%~94.8%之间,氨基酸同源性在99.1%~100%之间。而与基因Ⅲ型核苷酸同源性最低,与基因Ⅱ型氨基酸同源性最低。 展开更多
关键词 猪戊型肝炎病毒 巢式PCR 序列分析
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猪戊型肝炎结构基因ORF2的克隆及其植物表达载体的构建 被引量:1
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作者 杨薇 曲娟娟 +5 位作者 于婧 李杰 刘琦 夏善勇 相文华 李柱刚 《黑龙江农业科学》 2009年第4期90-94,共5页
通过RT-PCR技术从一份猪粪中扩增并克隆了戊型肝炎病毒主要结构基因ORF2部分片段,大小为681 bp,将其克隆于pMD18-T载体。序列分析表明,与GenBank公布的序列一致。然后,将该基因亚克隆到植物表达载体p35S-2300-two-T-DNA-4×Ta1上,... 通过RT-PCR技术从一份猪粪中扩增并克隆了戊型肝炎病毒主要结构基因ORF2部分片段,大小为681 bp,将其克隆于pMD18-T载体。序列分析表明,与GenBank公布的序列一致。然后,将该基因亚克隆到植物表达载体p35S-2300-two-T-DNA-4×Ta1上,并将载体p2300上的CaMV35S启动子替换为E12启动子,构建成植物表达载体p2300-ORF2-E12。通过冻融法将重组质粒导入根癌农杆菌LBA4404中,获得了携带ORF2基因的根癌农杆菌菌株,为转基因植物工作奠定了基础。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 ORF2 克隆 植物表达载体
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两种免疫酶试剂盒检测猪抗E型肝炎病毒IgG的比较 被引量:1
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作者 张焕容 杨发龙 《中国动物检疫》 CAS 2010年第8期30-33,共4页
目的比较两种免疫酶试剂盒recomWell HEV IgG(swine)ELISA(recom Well )和recomLine HEV IgG(swine)(recom Line )检测猪抗E型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)IgG的准确性。方法分别采用基因3型和基因4型人HEV(human HEV,hHEV)人... 目的比较两种免疫酶试剂盒recomWell HEV IgG(swine)ELISA(recom Well )和recomLine HEV IgG(swine)(recom Line )检测猪抗E型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)IgG的准确性。方法分别采用基因3型和基因4型人HEV(human HEV,hHEV)人工感染无菌猪各2头,采用上述试剂盒检测猪感染后不同天数的血清样品中抗HEV IgG,同时对两头接种PBS液的无菌猪血清样品18份和4头未感染猪的18份血清进行了检测。结果 2头猪人工感染基因3型hHEV后,recomWell检测均于感染后21d出现阳性,并持续56d;recomLine检测,其中1头猪于感染后14d呈阳性,而另1头于感染后21d呈阳性,且均持续56d。2头猪人工感染基因4型hHEV后,两种试剂盒检测,其中1头猪于感染后21d呈阳性,另1头35d呈阳性,并均持续56d仍为阳性。18份对照血清两种试剂盒检测均为阴性。18份未人工感染猪血清中,只有1份两种试剂盒检测均为阳性。两种试剂盒同时检测的共72份样品中,recomWell检出阳性样品23份,阳性率约为32.0%(23/72),recomLine检出阳性样品24份,阳性率约为33.30%(24/72),检出阳性率两者差异不显著(P>0.05);在recomWell检出的23份阳性样品中,recomLine检测均为阳性,两者阳性检出符合率为100%(23/23);recomWell的漏检率约为4.1%(1/24)。结论 recomWellR和recomLine均可用于猪抗HEVIgG的检测,recomLine检测灵敏度略高于recomWell,且操作更简便,不需要特殊昂贵的检测设备,特别适合用于基层检测猪抗HEV IgG。 展开更多
关键词 免疫酶试剂盒 猪抗E型肝炎病毒IgG 检测 比较
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