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有机磷水解酶的大肠杆菌细胞表面展示 被引量：3
1
作者 黎小军 林陈水 胡军民 《江西师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2010年第1期93-97,共5页
PCR扩增来自黄杆菌ATCC27551的有机磷水解酶基因opd,直接与XcmⅠ酶切去除Ampr基因片段的pZXL-T连接,将opd克隆于锚定单元Lpp-OmpA编码序列下游,转化E.coliBL21(DE3).经抗性筛选、PCR鉴定和测序证实,成功构建了具有全细胞催化效应的大肠... PCR扩增来自黄杆菌ATCC27551的有机磷水解酶基因opd,直接与XcmⅠ酶切去除Ampr基因片段的pZXL-T连接,将opd克隆于锚定单元Lpp-OmpA编码序列下游,转化E.coliBL21(DE3).经抗性筛选、PCR鉴定和测序证实,成功构建了具有全细胞催化效应的大肠杆菌细胞表面展示工程菌.SDS-PAGE结果表明,工程菌能表达产生51 kD的融合蛋白.细胞表面展示的有机磷水解酶具有较高全细胞酶活性,用蛋白酶K消化处理重组菌表面蛋白可使其全细胞酶活降低90%. 展开更多
关键词 有机鳞水解酶 细胞表面展示 T载体 大肠杆菌
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枯草芽孢杆菌芽孢表面展示外源功能蛋白的应用 被引量：3
2
作者 冯杰 王振华 潘康成 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期3893-3898,共6页
枯草芽孢杆菌是一种好氧的可直接用于人和动物的益生菌菌种,在不利条件下可以被诱导产生芽孢。芽孢具有特殊的构造及独特的生理特征,研究者们发现枯草芽孢杆菌芽孢是酶和免疫原等外源性功能蛋白的理想的锚定载体,以枯草芽孢杆菌芽孢衣... 枯草芽孢杆菌是一种好氧的可直接用于人和动物的益生菌菌种,在不利条件下可以被诱导产生芽孢。芽孢具有特殊的构造及独特的生理特征,研究者们发现枯草芽孢杆菌芽孢是酶和免疫原等外源性功能蛋白的理想的锚定载体,以枯草芽孢杆菌芽孢衣壳蛋白作为分子载体,直接利用芽孢吸附作用和共价固定等方法使外源蛋白锚定在芽孢表面。目前已有多种酶蛋白、抗原蛋白和其他功能蛋白成功展示在枯草芽孢杆菌芽孢表面。本文主要对枯草芽孢杆菌芽孢结构及芽孢表面展示外源蛋白技术的策略和应用前景进行阐述。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 芽孢表面展示 共价固定 载体
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解脂耶罗维亚酵母(Yarrowia lipolytica)的代谢工程 被引量：3
3
作者 池振明 赵新灵 王凌飞 《中国海洋大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期60-67,共8页
本文论述最近几年在解脂耶罗维亚酵母(Yarrowia lipolytica)代谢工程研究方面的最新进展。解脂耶罗维亚酵母是最安全的微生物,广泛分布在包括海洋和极地等的各种环境中,已经具备很好的基因克隆表达系统;某些菌株在蛋白质、油脂、柠檬酸... 本文论述最近几年在解脂耶罗维亚酵母(Yarrowia lipolytica)代谢工程研究方面的最新进展。解脂耶罗维亚酵母是最安全的微生物,广泛分布在包括海洋和极地等的各种环境中,已经具备很好的基因克隆表达系统;某些菌株在蛋白质、油脂、柠檬酸、酸性蛋白酶和碱性蛋白酶生产上具有优良特性,并且许多菌株具有很强的降解石油烃的能力。本文介绍了几种对解脂耶罗维亚酵母进行的表达系统改造,改造后该酵母能分解廉价而广泛存在的菊粉,提高细胞中油脂含量和细胞分泌的柠檬酸含量,合成许多生物活性物质,在能源工业、食品工业、医药工业和养殖业具有广泛的应用前途。 展开更多
关键词 脂耶罗维亚酵母 代谢工程 表面展示质粒 生物油脂 柠檬酸
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枯草芽孢杆菌表达载体的构建及猪源表皮生长因子的表达 被引量：2
4
作者 董兵 肖童 +4 位作者 李志辉 李聪 季明月 陈海清 檀建新 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期71-76,共6页
本文首先以枯草芽孢杆菌(B.subtilis)穿梭载体pDG150为基础,构建了含有5个克隆位点的表达载体pTD160,并在此基础上构建了带有淀粉酶信号肽的分泌表达载体pTD161和可用于外源蛋白与胞衣蛋白cotG融合表达的表面展示载体pTD162。将脂肪酶基... 本文首先以枯草芽孢杆菌(B.subtilis)穿梭载体pDG150为基础,构建了含有5个克隆位点的表达载体pTD160,并在此基础上构建了带有淀粉酶信号肽的分泌表达载体pTD161和可用于外源蛋白与胞衣蛋白cotG融合表达的表面展示载体pTD162。将脂肪酶基因lipa分别插入pTD161和pTD162,在B.subtilis 168中表达,其LipA酶活性分别为23.4U/mg和15.3U/mg,表明pTD载体具有良好的表达性能。通过无抗生素压力传代培养10代后,发现其稳定性仍为96.5%和95.0%,证明pTD载体具备较高的稳定性。将密码子优化后的猪源表皮生长因子基因pegf分别导入pTD161和pTD162,转化B.subtilis 168获得工程菌Bs168-pTD161-pegf和Bs168-pTD162-pegf,ELISA法证明pEGF在工程菌中表达量分别达到365ng/mL和285ng/mL,证明pEGF获得高效表达和展示。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 穿梭表达载体 表面展示载体 pEGF lipaseA
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细菌表面表达载体的构建与鉴定 被引量：1
5
作者 徐建生 成大荣 +1 位作者 孙怀昌 崔治中 《河南科技大学学报（农学版）》 2004年第4期14-19,共6页
用聚合酶链式反应(PCR)技术,从金黄色葡萄球菌中扩增出769bp的编码SPA细胞壁跨膜区的编码序列。将扩增的片断克隆进pEZZ 18载体BamHI和SalI位点之间。重组质粒转化大肠杆菌HB101后,根据酶切分析筛选到含有目的基因的重组质粒pZSPAX。序... 用聚合酶链式反应(PCR)技术,从金黄色葡萄球菌中扩增出769bp的编码SPA细胞壁跨膜区的编码序列。将扩增的片断克隆进pEZZ 18载体BamHI和SalI位点之间。重组质粒转化大肠杆菌HB101后,根据酶切分析筛选到含有目的基因的重组质粒pZSPAX。序列测定结果表明,该重组质粒中的插入序列与已发表的SPA X是一致的。通过水肿病毒素B亚单位(SLT IIeB)基因(slt IIeB)证实质粒pZSPAX能作为在细菌表面表达目的基因的载体。 展开更多
关键词 细菌 表面表达 表达载体 重组质粒 PCR SPA pEZZ-18 抗原
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用人源肠毒素性大肠杆菌CS3菌毛构建新型呈现载体(英文)
6
作者 高荣凯 张兆山 +1 位作者 李淑琴 黄翠芬 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第10期971-979,共9页
根据对人源大肠杆菌菌毛CS3亚单位亲水性、表位、二级结构和柔韧性计算机预测结果 ,以CS3亚单位第 72位氨基酸残基之后作为外源表位的插入位点 ,构建了一种新的表面呈现载体pCSX72。用该载体分别表达口蹄疫病毒 (FMDV)的VP1表位和C -my... 根据对人源大肠杆菌菌毛CS3亚单位亲水性、表位、二级结构和柔韧性计算机预测结果 ,以CS3亚单位第 72位氨基酸残基之后作为外源表位的插入位点 ,构建了一种新的表面呈现载体pCSX72。用该载体分别表达口蹄疫病毒 (FMDV)的VP1表位和C -myc的十肽表位 (4 1 0～ 4 1 9aa)。SDS -PAGE结果以及电镜和免疫电镜观察证明 ,插入的外源表位和CS3亚单位以杂合菌毛的形式呈现在菌体表面。ELISA检测结果表明 ,pCSX72表达的杂合蛋白的抗原性较之其他插入位点的载体要高得多。用重组细菌腹腔免疫小鼠 ,能够诱发机体对杂合蛋白的双重免疫应答。 展开更多
关键词 表面呈现 载体 CS3菌毛 人源肠毒素性大肠杆菌
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酵母细胞表面展示载体的构建及功能验证 被引量：1
7
作者 张秀艳 侯晓彦 +1 位作者 陈福生 王小红 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期1-4,共4页
目的:构建酵母细胞表面展示载体。方法:通过酶切连接方法在pADH1载体中插入信号肽、α-凝集素(含连接子)编码序列构建表面展示载体,并用EGFP来验证该载体的功能。结果:得到了267 bp的信号肽序列、1 623 bp的凝集素编码序列和717 bp的绿... 目的:构建酵母细胞表面展示载体。方法:通过酶切连接方法在pADH1载体中插入信号肽、α-凝集素(含连接子)编码序列构建表面展示载体,并用EGFP来验证该载体的功能。结果:得到了267 bp的信号肽序列、1 623 bp的凝集素编码序列和717 bp的绿色荧光蛋白编码序列,酵母细胞表面展示载体被成功构建,且绿色荧光蛋白被插入到pADH1-agg中后,阳性转化子能在荧光显微镜下呈现绿色荧光。结论:这说明酵母细胞表面展示载体已经构建成功,并能成功表达和展示蛋白在酵母细胞表面。该载体的构建成功将为利用酵母表面展示系统表达和展示相关蛋白提供了平台。 展开更多
关键词 酵母表面展示载体 绿色荧光蛋白 凝集素
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