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单环刺螠硫醌氧化还原酶相互作用蛋白质的筛选 被引量：5
1
作者 谭志 马玉彬 +1 位作者 邵明瑜 张志峰 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期60-64,共5页
硫化物是沿海水域中常见的有害物质,对于多数生物来讲,其在微摩尔级水平便可导致生物体中毒。硫醌氧化还原酶(SQR)是一种谷胱甘肽还原酶家族的膜结合黄素蛋白,为硫化物氧化解毒的一种关键酶。本研究以体外原核表达并复性的单环刺螠SQR... 硫化物是沿海水域中常见的有害物质,对于多数生物来讲,其在微摩尔级水平便可导致生物体中毒。硫醌氧化还原酶(SQR)是一种谷胱甘肽还原酶家族的膜结合黄素蛋白,为硫化物氧化解毒的一种关键酶。本研究以体外原核表达并复性的单环刺螠SQR为材料,采用His-pulldown技术和SDS-PAGE分析,从单环刺螠体壁细胞裂解液中筛选出两个可能与SQR结合的蛋白质,分子质量分别为40 ku和60 ku。通过毛细管液相色谱-离子肼质谱分析,初步判断其为细胞色素P450(cytochrome P450)和腺苷三磷酸结合盒转运蛋白(ATP-binding cassette transporter),并初步探讨了其可能的功能。 展开更多
关键词 单环刺螠 硫醌氧化还原酶 His-pulldown 质谱
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SQRDL在人类肿瘤中的综合泛癌分析
2
作者 李庭华 胡庆 +2 位作者 潘静 陈一彪 施民新 《南通大学学报（医学版）》 2023年第1期5-12,共8页
目的:探究硫化物-醌氧化还原酶(sulfide-quinone oxidoreductase,SQRDL)在不同肿瘤中的致癌作用。方法:(1)根据癌症基因组图谱和基因表达综合数据库等多个数据库从基因表达、生存预后、遗传变异、免疫浸润、SQRDL相关基因富集5个方面分... 目的:探究硫化物-醌氧化还原酶(sulfide-quinone oxidoreductase,SQRDL)在不同肿瘤中的致癌作用。方法:(1)根据癌症基因组图谱和基因表达综合数据库等多个数据库从基因表达、生存预后、遗传变异、免疫浸润、SQRDL相关基因富集5个方面分析SQRDL在33种肿瘤中的潜在致癌作用。(2)采用免疫组织化学法验证乳腺癌及癌旁组织中SQRDL的表达差异。结果:SQRDL在乳腺癌及子宫内膜癌等肿瘤中高表达。在以胰腺腺癌为代表的肿瘤中,SQRDL的表达与肿瘤病理分期间存在显著相关性。SQRDL的高表达显著缩短了脑低级别胶质瘤的总生存时间,而间皮瘤的总生存时间及直肠腺癌的无疾病生存时间却与SQRDL低表达相关。皮肤黑色素瘤中SQRDL突变率最高。结肠癌和子宫内膜癌SQRDL的S343位点磷酸化水平较高。SQRDL的表达与弥漫性大B细胞淋巴瘤、睾丸癌以及嗜铬细胞瘤和副神经节瘤癌症相关成纤维细胞的浸润水平相关。SQRDL主要参与细胞凋亡以及生物合成代谢过程。结论:SQRDL可能在这些肿瘤中充当肿瘤启动子,且可能是癌症预后的潜在标志物。 展开更多
关键词 硫化物-醌氧化还原酶 癌症 预后 免疫浸润 基因表达
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硫醌氧化还原酶研究进展
3
作者 马玉彬 史晓丽 +3 位作者 邵明瑜 董英萍 李金龙 张志峰 《生命科学》 CSCD 2012年第2期161-168,共8页
硫化物是一种广泛分布的有毒物质。硫醌氧化还原酶是生物体硫化物代谢的一种关键酶。对该酶的发现与分布、序列特征、催化机制、催化特性、三维结构和生理功能等几个方面进行概述,并对该酶未来研究方向进行展望。
关键词 硫醌氧化还原酶 硫化物 序列特征 催化机制 三维结构
原文传递
脱氮硫杆菌ATCC25259 SQR蛋白及突变体的结构分析与活性研究
4
作者 陈新 孟志忠 +2 位作者 罗义 荣向 李杉 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2017年第9期46-55,共10页
本文研究了通过Discovery Studio 3.5利用同源建模法构建了脱氮硫杆菌ATCC25259的硫化物:醌氧化还原酶(Sulfide:quinone oxidoreductase,SQR)野生型蛋白及突变体蛋白模型,通过GROMACS 5.1.2对所有模型进行分子力学及分子动力学的优化,... 本文研究了通过Discovery Studio 3.5利用同源建模法构建了脱氮硫杆菌ATCC25259的硫化物:醌氧化还原酶(Sulfide:quinone oxidoreductase,SQR)野生型蛋白及突变体蛋白模型,通过GROMACS 5.1.2对所有模型进行分子力学及分子动力学的优化,使蛋白模型处于能量较低且结构稳定的状态。使用PROCHECK,Verify 3D和Pro SA三种模型评价方法对模型进行评价,表明蛋白模型具有较高的合理性。使用该蛋白模型计算蛋白相互作用、SAS及能量值。将构建好的SQR及突变体的表达载体转入大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达分子量约65 ku的蛋白。使用镍柱亲和层析纯化经大量表达含有6×His标签的野生型与突变体蛋白,采用已经建立的SQR活性测定方法,进行酶活性测定实验,结果表明突变体酶活性较低。从模拟计算与实验验证两方面说明SQR C端α螺旋结构对蛋白的结构稳定性具有重要影响,蛋白结构稳定性降低,从而酶活性降低。 展开更多
关键词 分子动力学 脱氮硫杆菌 硫化物:醌氧化还原酶 诱导表达
原文传递
嗜酸硫杆菌属硫氧化系统研究进展 被引量：12
5
作者 张成桂 夏金兰 +1 位作者 王晶 邱冠周 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第1期59-65,共7页
硫化矿的酸溶解和化学氧化过程中(H+和Fe3+作用下,金属硫化矿中分解),伴随着硫元素转变成多聚硫S8或硫代硫酸盐的过程。对嗜酸硫杆菌属硫氧化过程的研究表明,胞外环状多聚硫S8可能通过细胞外膜蛋白巯基活化成线状-SnH后,被转运到细胞周... 硫化矿的酸溶解和化学氧化过程中(H+和Fe3+作用下,金属硫化矿中分解),伴随着硫元素转变成多聚硫S8或硫代硫酸盐的过程。对嗜酸硫杆菌属硫氧化过程的研究表明,胞外环状多聚硫S8可能通过细胞外膜蛋白巯基活化成线状-SnH后,被转运到细胞周质区域,进而被硫加双氧酶氧化成SO32-,活化过程中同时生成少量H2S;这些酶促反应不需要辅助因子参与,不释放电子。胞外硫代硫酸盐通过未知途径进入细胞周质。细胞周质中的SO32-主要经由亚硫酸-受体氧化还原酶氧化成SO42-,S2O32-可能经由硫代硫酸盐-辅酶Q氧化还原酶、硫代硫酸盐脱氢酶、连四硫酸盐水解酶等氧化为硫酸,少量H2S则经由硫化物-辅酶Q氧化还原酶氧化为多聚硫,后者再经由SO32-和S2O32-氧化生成最后产物SO42-。这些生物氧化过程释放的电子进入呼吸链参与产生细菌生长代谢所需的能量。然而,关于A.ferrooxidans硫氧化系统中各种硫化合物的酶催化氧化机制的研究仍很缺乏,胞内外硫化合物的转运机制、是否存在胞外酶催化氧化等仍然有待解决。另外,硫的型态和价态、酶催化反应的细胞微区域以及硫氧化系统中一些关键酶的分离及其表达基因的鉴定等问题都还有待进一步研究。基于对这些事实的分析,提出了一个嗜酸硫杆菌属硫氧化系统的模型。 展开更多
关键词 硫氧化系统 嗜酸硫杆菌属 硫加双氧酶 硫化物-辅酶Q氧化还原酶 硫代硫酸盐-辅酶Q氧化还原酶 硫代硫酸盐硫转移酶 亚硫酸-受体氧化还原酶 连四硫酸盐水解酶
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单环刺螠硫醌氧化还原酶的表达、纯化和复性 被引量：6
6
作者 马玉彬 谭志 张志峰 《中国海洋大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期81-86,共6页
硫化物是1种广泛分布的有毒物质。硫醌氧化还原酶(SQR)是硫化物代谢的关键酶。单环刺螠是1种生活在潮间带下区及潮下带中的底栖生物。本研究为了获得具有活性的单环刺螠SQR,将其基因的开放阅读框cDNA克隆到原核表达载体pET28a中,转化大... 硫化物是1种广泛分布的有毒物质。硫醌氧化还原酶(SQR)是硫化物代谢的关键酶。单环刺螠是1种生活在潮间带下区及潮下带中的底栖生物。本研究为了获得具有活性的单环刺螠SQR,将其基因的开放阅读框cDNA克隆到原核表达载体pET28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行重组蛋白的表达,后采用稀释复性的方法对重组蛋白进行复性。经IPTG诱导后该重组蛋白主要以包涵体形式存在。用8 mol/L的尿素溶解包涵体后,通过镍离子金属螯合柱纯化获得重组蛋白。首次通过蛋白复性的方法获得具有活性的单环刺螠SQR,确定最佳稀释复性条件为pH=8.0,蛋白浓度20μg/mL,L-精氨酸浓度0.2 mol/L,还原型谷胱甘肽∶氧化型谷胱甘肽=10∶1,复性时间为96 h。 展开更多
关键词 单环刺螠 硫醌氧化还原酶 蛋白表达与纯化 稀释复性
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单环刺螠硫醌氧化还原酶间接竞争ELISA检测方法的建立
7
作者 马玉彬 史晓丽 +3 位作者 李阳 董英萍 张立涛 张志峰 《中国海洋大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期64-69,共6页
硫醌氧化还原酶(Sulfide:quinone oxidoreductase,SQR),是线粒体硫化物代谢的关键酶。本研究以生活在潮间带下区及潮下带中的底栖生物—单环刺螠SQR重组蛋白为材料,建立了单环刺螠SQR间接竞争ELISA检测方法,为定量分析SQR蛋白水平表达... 硫醌氧化还原酶(Sulfide:quinone oxidoreductase,SQR),是线粒体硫化物代谢的关键酶。本研究以生活在潮间带下区及潮下带中的底栖生物—单环刺螠SQR重组蛋白为材料,建立了单环刺螠SQR间接竞争ELISA检测方法,为定量分析SQR蛋白水平表达奠定了基础。将SQR重组蛋白免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,检测效价高达1:64 000。采用免疫印迹实验,将该抗体与重组蛋白和体壁总蛋白杂交,均得到了单一的条带,表明该抗体特异性好。优化SQR间接竞争ELISA检测条件,得出最佳的抗原包被浓度为250ng/mL,一抗浓度为1∶20 000,二抗浓度为1∶12 000,此条件下建立的标准曲线检测范围为2.5～1 000ng/mL。精确度检测结果显示,批内差异在0.42%～7.27%、批间差异在2.58%～7.78%范围内,表明该条件下精确度具有良好的准确性和重复性。以上结果表明,已成功建立单环刺螠SQR间接竞争ELISA检测方法。 展开更多
关键词 单环刺螠 硫醌氧化还原酶 间接竞争ELISA 多克隆抗体
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