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大豆分离蛋白水解多肽聚集物的组成及相互作用 被引量:15
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作者 于泓鹏 唐传核 +1 位作者 曾庆孝 杨晓泉 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第8期105-109,共5页
研究了大豆分离蛋白(SPI)的枯草杆菌蛋白酶水解产物的聚集作用,以及参与聚集组分的氨基酸组成及其相互作用.十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和SE-HPLC分析显示,SPI的枯草杆菌蛋白酶降解产物大部分为分子质量小于6.5 ku的... 研究了大豆分离蛋白(SPI)的枯草杆菌蛋白酶水解产物的聚集作用,以及参与聚集组分的氨基酸组成及其相互作用.十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和SE-HPLC分析显示,SPI的枯草杆菌蛋白酶降解产物大部分为分子质量小于6.5 ku的小分子组分,聚集物主要由这些小分子组分组成.聚集物可溶于脲素、盐酸胍或SDS,而难溶于β-巯基乙醇.氨基酸分析显示聚集物中的疏水性氨基酸含量高于SPI.说明疏水相互作用是聚集物形成的主要推动力,氢键、静电引力参与稳定聚集物的结构,而二硫键很少参与聚集物的形成.文中还从蛋白质分子结构的角度,探讨了SPI的枯草杆菌蛋白酶水解多肽的聚集机理. 展开更多
关键词 大豆分离蛋白 枯草杆菌蛋白酶 聚集 相互作用 机理
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枯草杆菌蛋白酶水解对大豆蛋白肽谱变化规律的影响
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作者 焦艳玲 陶晓露 +3 位作者 许伟洲 于文娟 路福平 王洪彬 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2023年第19期49-53,117,共6页
该研究针对芽孢菌来源的枯草杆菌蛋白酶对大豆蛋白的水解过程,探究过程中形成肽谱的变化规律。使用高效液相色谱-电喷雾四极杆飞行时间串联质谱检测不同时间点的水解多肽,基于非特异性酶切肽谱鉴定方法,解析多肽序列和组成,展示肽谱的... 该研究针对芽孢菌来源的枯草杆菌蛋白酶对大豆蛋白的水解过程,探究过程中形成肽谱的变化规律。使用高效液相色谱-电喷雾四极杆飞行时间串联质谱检测不同时间点的水解多肽,基于非特异性酶切肽谱鉴定方法,解析多肽序列和组成,展示肽谱的动态变化特征和氨基酸位点种类选择的倾向性。结果发现,枯草杆菌蛋白酶更倾向于酶切大豆蛋白中组氨酸C端、天冬酰胺C端、丙氨酸N端和苏氨酸N端的肽键。 展开更多
关键词 枯草杆菌蛋白酶 大豆蛋白 水解 肽谱 位点倾向性
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枯草杆菌蛋白酶促大豆分离蛋白聚集:蛋白质和酶浓度以及热处理的影响(英文) 被引量:1
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作者 于泓鹏 唐传核 +1 位作者 曾庆孝 杨晓泉 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2006年第2期142-149,共8页
研究了大豆分离蛋白的枯草杆菌蛋白酶水解产物的聚集行为。加入枯草杆菌蛋白酶后,大豆蛋白分离物被迅速降解为分子量小于6.5 kDa小分子组分,这些组分相互作用形成大的聚集物。水解液的浊度变化趋势呈S型,底物浓度大于3.2%(酶浓度为750 U... 研究了大豆分离蛋白的枯草杆菌蛋白酶水解产物的聚集行为。加入枯草杆菌蛋白酶后,大豆蛋白分离物被迅速降解为分子量小于6.5 kDa小分子组分,这些组分相互作用形成大的聚集物。水解液的浊度变化趋势呈S型,底物浓度大于3.2%(酶浓度为750 U/mL)时蛋白质的浓度对聚集过程的影响更明显,此临界浓度主要取决于酶浓度。适当的预热处理有利于酶促聚集。由于聚集物能溶于SDS和尿素,说明非共价键(主要是疏水相互作用、氢键和离子键)对聚集物的形成有特别重要的作用。最后并提出了酶促聚集的机理。 展开更多
关键词 大豆分离蛋白 枯草杆菌蛋白酶 聚集 相互作用力
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Panhandle PCR strategy to amplify the upstream unknown sequence of the Pr1 gene of pythium guiyangense
4
作者 DUAN Siliang SU Xiaoqing YU Sheng 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 2013年第5期268-272,共5页
Objective: Based on a partialsubtilisin-like protease, Prl genomic sequence ofPythium guiyangense which has been cloned before, Panhandle PCR strategy was used to amplify the upstream flanking sequence adjacent to th... Objective: Based on a partialsubtilisin-like protease, Prl genomic sequence ofPythium guiyangense which has been cloned before, Panhandle PCR strategy was used to amplify the upstream flanking sequence adjacent to the known sequence of the Prl gene. Methods: The genomic DNA was firstly digested with BamH I and then treated with calf intestinal alkaline phosphatase(CIAP). Next, a 5' phosphorylated oligonucleotide was ligated to the 5' ends of BamH I -digested DNA. After denaturation, intmstrand annealing and polymemse extension, a pan with a handle was formed,and lastly the nested PCR was performed. Results: A 864 bp product was amplified,which was adjacent to the known sequence of Prl gene.The gene has been accessed by GenBank (Accession:JQ975036). Conclusion: Panhandle PCR is a quick and convenient approach for amplifying and identifying unknown partner genes,which facilitates cloning full-length Prl gene 展开更多
关键词 Panhandle PCR Upstream regulation sequence subtilisin-like protease Prl Chromosome walking
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预热处理对SPI水解过程多肽稳定性的影响
5
作者 于泓鹏 吴克刚 柴向华 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期32-34,共3页
研究了预热处理对大豆分离蛋白(SPI)水解多肽溶液稳定性的影响。采用浊度法监测聚集过程,结果表明预热处理后的SPI蛋白在水解过程的聚集速率明显升高,但过度的热处理不利于酶促聚集速率进一步提高。采用差示扫描量热法分析其热力学性质... 研究了预热处理对大豆分离蛋白(SPI)水解多肽溶液稳定性的影响。采用浊度法监测聚集过程,结果表明预热处理后的SPI蛋白在水解过程的聚集速率明显升高,但过度的热处理不利于酶促聚集速率进一步提高。采用差示扫描量热法分析其热力学性质,结果显示11S经90℃热处理解聚并和解聚的7S通过疏水相互作用形成聚集物,聚集物的形成一方面导致水解液浊度的增大,另一方面减少了酶反应位点,不利于酶的作用。 展开更多
关键词 大豆分离蛋白 枯草杆菌蛋白酶 聚集 稳定性
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球孢白僵菌不同世代菌株胞外蛋白酶与毒力的关系 被引量:25
6
作者 彭国雄 张永军 +2 位作者 杨星勇 王中康 裴炎 《中国生物防治》 CSCD 2000年第2期61-64,共4页
以蝉蜕、蝇蛆壳两种培养基培养球孢白僵菌不同世代菌株 ,分析其类枯草杆菌蛋白酶(Pr1)和总胞外蛋白酶的产生水平及其与菌株毒力的相关性。结果表明 ,菌株的 Pr1产生水平达到最高的时间较总胞外蛋白酶早 1~ 2天。在蝉蜕培养基中 ,菌株 ... 以蝉蜕、蝇蛆壳两种培养基培养球孢白僵菌不同世代菌株 ,分析其类枯草杆菌蛋白酶(Pr1)和总胞外蛋白酶的产生水平及其与菌株毒力的相关性。结果表明 ,菌株的 Pr1产生水平达到最高的时间较总胞外蛋白酶早 1~ 2天。在蝉蜕培养基中 ,菌株 Pr1产生水平较高 ,而总胞外蛋白酶产生水平大大低于蝇蛆壳培养基中的产生水平。随着世代数的增加 ,Pr1和总胞外蛋白酶产生水平及对家蚕的毒力都明显下降。不同世代菌株在蝉蜕和蝇蛆壳培养基上的 Pr1产生水平与其毒力的相关系数分别为 0 .92和 0 .89,高于总胞外蛋白酶与其毒力的相关系数(0 .84和 0 .6 7)。因此认为在总胞外蛋白酶中 ,Pr1是影响菌株主要毒力因子之一 。 展开更多
关键词 球孢白僵菌 类枯草杆菌蛋白酶 胞外蛋白酶 毒力
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球孢白僵菌胞外蛋白酶及类枯草杆菌蛋白酶的诱导 被引量:16
7
作者 张永军 彭国雄 +3 位作者 方卫国 杨星勇 裴炎 王中康 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 2000年第2期182-186,共5页
研究了接种物和诱导物对球孢白僵菌总胞外蛋白酶及类枯草杆菌蛋白酶 (Pr1)产生的影响 .结果表明 ,球孢白僵菌不同接种物产生的总胞外蛋白酶及Pr1活性有明显差异 ;不同诱导物对产酶水平也有较大影响 .其中芽管状物在蝉蜕诱导液中的总胞... 研究了接种物和诱导物对球孢白僵菌总胞外蛋白酶及类枯草杆菌蛋白酶 (Pr1)产生的影响 .结果表明 ,球孢白僵菌不同接种物产生的总胞外蛋白酶及Pr1活性有明显差异 ;不同诱导物对产酶水平也有较大影响 .其中芽管状物在蝉蜕诱导液中的总胞外蛋白酶和Pr1活性均最高 ,诱导 12h酶活性达高峰 .不同来源的菌丝产酶水平有差异 .在诱导液中 ,接种物总胞外蛋白酶和Pr1的变化趋势一致 ,但总胞外蛋白酶活性和Pr1活力间没有直接的相关性 .图 2表 2参 展开更多
关键词 球孢白僵菌 胞外蛋白酶 类枯草杆菌 昆虫病原菌
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贵阳腐霉类枯草杆菌蛋白酶(Pr1)的纯化与部分特性研究(英文) 被引量:6
8
作者 于声 段斯亮 苏晓庆 《贵阳医学院学报》 CAS 2007年第2期126-130,共5页
目的:纯化灭蚊真菌贵阳腐霉胞外蛋白酶类枯草杆菌蛋白酶,并测定其分子量。方法:培养贵阳腐霉菌丝体,用几丁质诱导,使其产生大量胞外酶,对其产酶条件进行了部分优化。将粗酶液经过脱盐,浓缩进一步纯化,再过Sephadex G-100柱子层析并进行S... 目的:纯化灭蚊真菌贵阳腐霉胞外蛋白酶类枯草杆菌蛋白酶,并测定其分子量。方法:培养贵阳腐霉菌丝体,用几丁质诱导,使其产生大量胞外酶,对其产酶条件进行了部分优化。将粗酶液经过脱盐,浓缩进一步纯化,再过Sephadex G-100柱子层析并进行SDS-PAGE,分离类枯草杆菌蛋白酶。结果:(1)以几丁质为唯一碳氮源,在26℃,初始pH值6.0,1%的菌丝接种量为最佳诱导条件;(2)分离得到的类枯草杆菌蛋白酶,并测定其分子量约为33kDa。结论:类枯草杆菌蛋白酶纯化成功,结果较理想,为进一步研究提供依据。 展开更多
关键词 贵阳腐霉 类枯草杆菌蛋白酶 纯化 分子量 蚊虫生物防治
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转基因球孢白僵菌发酵产物对野生菌株的增效作用 被引量:6
9
作者 张永军 金凯 +2 位作者 罗志兵 蒋小东 裴炎 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期246-250,共5页
研究发现,超量表达类枯草杆菌蛋白酶基因CDEP-1的球孢白僵菌菌株Bb0062-15-4-CDEP-1的发酵产物对野生菌株具有明显的杀桃蚜增效作用。进一步分析增效作用与目的基因表达产物关系的结果显示,加入CDEP-1酶活为44.3±0.6U/μL的发酵产... 研究发现,超量表达类枯草杆菌蛋白酶基因CDEP-1的球孢白僵菌菌株Bb0062-15-4-CDEP-1的发酵产物对野生菌株具有明显的杀桃蚜增效作用。进一步分析增效作用与目的基因表达产物关系的结果显示,加入CDEP-1酶活为44.3±0.6U/μL的发酵产物,可使野生菌株对桃蚜的致死中浓度降低4倍以上,共毒系数(CTC)达404.6。但发酵产物经121℃处理20min,增效作用完全丧失。用饱和硫酸铵沉淀蛋白质分别将透析后的重溶蛋白质和上清液用于增效作用测定,结果证明增效成分主要是蛋白类物质。将梯度稀释的发酵产物与浓度为1×107孢子/mL的野生菌株孢子悬浮液混合进行生物测定,发现各处理的致死中时与CDEP-1的活性呈负相关,相关系数为-0.8946。由此推断,发酵产物中的增效物质主要是目的基因表达产物CDEP-1。 展开更多
关键词 类枯草杆菌蛋白酶 球孢白僵菌 发酵产物
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用锅柄聚合酶链反应法克隆卡地腐霉Pr1基因的未知片段(英文) 被引量:3
10
作者 杨平 夏玉先 苏晓庆 《贵阳医学院学报》 CAS 2005年第1期4-9,共6页
目的:分离和克隆灭蚊真菌卡地腐霉类枯草杆菌蛋白酶基因已知片段的3′端未知序列。方法:采用 PANHANDLEPCR,以基因组DNA为模板,通过链内退火及延伸形成一个类似锅柄形状的结构,经嵌套式PCR 扩增得到未知目的片段。通过已知cDNA片段... 目的:分离和克隆灭蚊真菌卡地腐霉类枯草杆菌蛋白酶基因已知片段的3′端未知序列。方法:采用 PANHANDLEPCR,以基因组DNA为模板,通过链内退火及延伸形成一个类似锅柄形状的结构,经嵌套式PCR 扩增得到未知目的片段。通过已知cDNA片段设计引物,PCR扩增得到该蛋白酶部分基因组序列,采用限制性 内切酶BamHⅠ消化卡地腐霉基因组DNA,经去磷酸化处理后,在消化片段3′端连接一段与卡地腐霉类枯草杆 菌蛋白酶基因5′端已知序列互补的5′端磷酸化寡核苷酸链NA,经链内退火及聚合酶延伸形成一锅柄状结构。 结果:获得一大小为876bp的PCR产物,经序列分析验证,该panhandlePCR产物包含了已知卡地腐霉类枯草杆 菌蛋白酶基因3′端未知的853bp核苷酸序列。结论:这种特殊的PCR方法可以高度有效地克隆和鉴定已知片 段两侧的未知基因片段。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 克隆 分子 灭蚊 害虫防治 生物学 枯草杆菌蛋白酶 碱基序列 枯草菌素类蛋 白酶卡地腐霉
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Pythium sp.GY1938菌株类枯草菌素蛋白酶Pr1基因的克隆与序列分析 被引量:4
11
作者 杨平 李敏惠 苏晓庆 《成都医学院学报》 CAS 2006年第1期5-8,共4页
目的克隆Pythium sp.CY1938菌株类枯草菌素蛋白酶Pr1基因。方法在已经克隆得到的Pythi- um sp.GY1938菌株类枯草菌素蛋白酶cDNA片段的基础上,首先通过PCR扩增得到与其相对应的基因组DNA片段,然后分别通过Mini基因组DNA文库法和Panhandle... 目的克隆Pythium sp.CY1938菌株类枯草菌素蛋白酶Pr1基因。方法在已经克隆得到的Pythi- um sp.GY1938菌株类枯草菌素蛋白酶cDNA片段的基础上,首先通过PCR扩增得到与其相对应的基因组DNA片段,然后分别通过Mini基因组DNA文库法和Panhandle PCR法扩增其上游和下游未知片段,最后通过PCR法扩增得到类枯草菌素蛋白酶基因片段。结果克隆得到1 519bp Pr1蛋白酶基因序列YP1977.DNAassist软件分析其中含有一个969bp的完整的开放阅读框,编码323个氨基酸,NCBI BlastX比对结果显示,该阅读框可能编码的氨基酸序列与多个物种的Pr1蛋白酶都具有较高的同源性。结论YP1977很可能是Pythium sp.CY1938菌株类枯草菌素蛋白酶Pr1基因的部分片段,但仍需要进一步通过构建表达系统加以验证。 展开更多
关键词 类枯草菌素蛋白酶 克隆 基因组文库 锅柄聚合酶链式反应
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猪链球菌2型枯草杆菌素样蛋白酶的截短表达及其免疫保护作用研究 被引量:4
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作者 吴立志 沈志强 +5 位作者 张松林 肖跃强 夏小静 扈俊波 李振伟 伍晓雄 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期507-509,共3页
为研究猪链球菌2型(SS2)截短表达枯草杆菌素样蛋白酶(C5a-1)的免疫保护特性,本研究选择其B细胞线性表位优势区(aa 91~aa 323)进行PCR扩增,克隆至pET32a载体中进行原核表达,并接种小鼠鉴定其免疫保护性。W estern blot鉴定结果显示,截... 为研究猪链球菌2型(SS2)截短表达枯草杆菌素样蛋白酶(C5a-1)的免疫保护特性,本研究选择其B细胞线性表位优势区(aa 91~aa 323)进行PCR扩增,克隆至pET32a载体中进行原核表达,并接种小鼠鉴定其免疫保护性。W estern blot鉴定结果显示,截短表达的sspA重组蛋白分子量约45.6 ku,能够与SS2阳性血清反应,具有良好的反应原性。将纯化的重组蛋白经3次免疫CD-1小鼠,攻毒试验结果表明重组蛋白对小鼠的免疫保护率仅为菌体免疫所提供保护率的15%。本研究为利用该蛋白作为动物免疫制剂提供了实验数据。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 枯草杆菌素样蛋白酶 原核表达 免疫保护
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Cold-adaptive alkaline protease from the psychrophilic Planomicrobium sp.547: enzyme characterization and gene cloning 被引量:1
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作者 YANG XiangSheng CHEN XingLin +1 位作者 XU XianZhong ZENG RunYing 《Chinese Journal of Polar Science》 2011年第1期49-54,共6页
A psychrophilic bacterium strain 547 producing cold-adaptive alkaline protease was isolated from the deep sea sediment of Prydz Bay, Antarctica. The organism was identified as a Planomicrobium species by 16S rRNA anal... A psychrophilic bacterium strain 547 producing cold-adaptive alkaline protease was isolated from the deep sea sediment of Prydz Bay, Antarctica. The organism was identified as a Planomicrobium species by 16S rRNA analysis. The optimal and highest growth temperatures for strain 547 were 15~C and 30~C, respectively. The extracellular protease was purified by ammonium sulfate precipitation and DEAE cellulose-52 chromatography. The optimal temperature and pH for the activity of the purified enzyme were 35~C and pH 9.0, respectively. The enzyme retained approximately 40% of its activity after 2 h of incubation at 50℃. The enzymatic activity was inhibited by 1 mmol/L phenylmethyl sulfonylfluoride (PMSF) and hydrochloride 4-(2-aminoethyl)-benzenesulfonyl fluoride (AEBSF), indicating that it was a serine protease. The presence of Cae+ and Mnz+ increased the activity of the enzyme. The protease gene with a size of 1 269 bp was cloned from Planomicrobium sp. 547 using primers designed based on the conserved sequences of proteases in GenBank. The Planomicrobium sp. 547 protease contained a domain belonging to the peptidase S8 family, which has a length of 309 amino acid (AA) residues. The alignment and phylogenetic analysis of the AA sequence indicated that the protease belonged to the subtilisin family. 展开更多
关键词 cold-adaptive protease Planomicrobium Antarctic subtilisin
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贵阳腐霉类枯草菌素蛋白酶基因的原核表达 被引量:3
14
作者 段斯亮 于声 苏晓庆 《贵阳医学院学报》 CAS 2008年第3期233-236,239,共5页
目的:实现贵阳腐霉(Pythium guiyangense Su)类枯草菌素蛋白酶(subtilisin-like protease,Pr1)基因在大肠杆菌中的活性表达,验证已获得的基因序列(YP1977)是否属于subtilisin-like protease基因家族成员。方法:(1)提取贵阳腐霉总RNA,以... 目的:实现贵阳腐霉(Pythium guiyangense Su)类枯草菌素蛋白酶(subtilisin-like protease,Pr1)基因在大肠杆菌中的活性表达,验证已获得的基因序列(YP1977)是否属于subtilisin-like protease基因家族成员。方法:(1)提取贵阳腐霉总RNA,以已获得的序列(YP1977)为模版设计引物,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增Pr1基因ORF片段;(2)构建含有Pr1基因ORF序列、绿色荧光蛋白基因ORF序列的重组质粒pTWIN1-Pr1-EGFP,转化表达菌株E.coliER2566,IPTG诱导菌株表达Pr1蛋白酶。结果:成功构建含有Pr1基因ORF序列、绿色荧光蛋白ORF序列的重组质粒pTWIN1-Pr1-EGFP,实现了Pr1基因在大肠杆菌中的活性表达。结论:证明已获得的DNA序列是贵阳腐霉的一个Pr1基因的编码区。 展开更多
关键词 灭蚊 枯草杆菌蛋白酶类 逆转录聚合酶链反应 基因 真菌 贵阳腐霉 类枯草菌素蛋白酶 原核表达
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卡地腐霉Pr1蛋白酶cDNA片段的分离和克隆 被引量:3
15
作者 施晓鋆 苏晓庆 《贵阳医学院学报》 CAS 2003年第1期1-4,共4页
目的 :分离和克隆灭蚊真菌卡地腐霉 (Pythiumcarolinianum)Pr1蛋白酶 (subtilisin likeprotease)的cDNA片段。方法 :用 1%的几丁质悬液诱导培养卡地腐霉菌丝 30h ,然后按下述流程操作 :抽提菌丝的总RNA ;逆转录合成cDNA第一链 ;根据Pr1... 目的 :分离和克隆灭蚊真菌卡地腐霉 (Pythiumcarolinianum)Pr1蛋白酶 (subtilisin likeprotease)的cDNA片段。方法 :用 1%的几丁质悬液诱导培养卡地腐霉菌丝 30h ,然后按下述流程操作 :抽提菌丝的总RNA ;逆转录合成cDNA第一链 ;根据Pr1的保守氨基酸序列设计合成一对简并引物 ,以cDNA第一链为模板 ,用MOPAC方法 (MixedoligonucleotidesprimedamplificationofcDNA)扩增cDNA ;将扩增产物纯化、连入pGEM T载体 ,转化大肠杆菌DH5α用于测序。结果 :所获片段中 ,1个 5 30bp的cDNA片段与枯草杆菌类蛋白酶基因有较高的相似性 ,尤其与真菌Aphanomycesastaci (卵菌纲、水霉目 )的Pr1在核苷酸序列及翻译得到的氨基酸序列水平有较高的相似性 ,分别为 5 9%和 4 9%。此序列已登录Genbank数据库 ,检索号 :AF4 990 0 6。P .car olinianum与A .astaciPr1部分cDNA序列的比对亦登录Genbank数据库 ,检索号 :AY0 94 976 ,AY0 94 977。结论 :这一DNA片段可能是卡地腐霉Pr1蛋白酶的一条cDNA片段。更进一步的工作是设法获得全长cDNA片段 ,并加以证实。 展开更多
关键词 灭蚊 真菌 害虫防治 生物学 CDNA 卡地腐霉 枯草杆菌蛋白酶类蛋白酶 简并引物
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杀虫球孢白僵菌菌株筛选及类枯草杆菌蛋白酶基因的克隆 被引量:2
16
作者 贺小红 曾智 +4 位作者 付祖姣 丁学知 胡胜标 孙运军 夏立秋 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2008年第1期100-103,共4页
在水稻叶蝉僵虫中分离出一株球孢白僵菌(Beauveria bassiana),根据GenBank上球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶基因序列同源性设计引物,采用RT-PCR法得到一个球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶CDEP2基因的cD-NA片段.利用表达载体pET28 a(+),在大肠... 在水稻叶蝉僵虫中分离出一株球孢白僵菌(Beauveria bassiana),根据GenBank上球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶基因序列同源性设计引物,采用RT-PCR法得到一个球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶CDEP2基因的cD-NA片段.利用表达载体pET28 a(+),在大肠杆菌中表达了CDEP2蛋白. 展开更多
关键词 RT-PCR 球孢白僵菌 类枯草杆菌蛋白酶
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Characterizing proteases in an Antarctic Janthinobacterium sp. isolate: Evidence of a protease horizontal gene transfer event
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作者 Cecilia Martinez-Rosales Juan José Marizcurrena +3 位作者 Andrés Iriarte Natalia Fullana Héctor Musto Susana Castro-Sowinski 《Advances in Polar Science》 2015年第1期88-95,共8页
We report the isolation of a cold-adapted bacterium belonging to the genus Janthinobacterium (named AU 11), from a water sample collected in Lake Uruguay (King George Island, South Shetlands). AUI 1 (growth betwe... We report the isolation of a cold-adapted bacterium belonging to the genus Janthinobacterium (named AU 11), from a water sample collected in Lake Uruguay (King George Island, South Shetlands). AUI 1 (growth between 4℃ and 30℃) produces a single cold-active extracellular protease (ExPAU11), differentially expressed at low temperature. ExPAU11 was identified by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-ToF MS) as an alkaline metallo-protease (70% coverage with an extracellular protease of Janthinobacterium sp. PI12), and by protease-inhibitor screening identified as a serine-protease. To the best of our knowledge this is the first experimental evidence of a cold-active extracellular protease produced by Janthinobacterium. Furthermore, we identified a serine-protease gene (named JSP8A) showing 60% identity (98% query coverage) to subtilisin peptidases belonging to the $8 family (S8A subfamily) of many cyanobacteria. A phylogenetic analysis of the JSP8A protease, along with related bacterial protein sequences, confirms that JSP8A clusters with S8A subtilisin sequences from different cyanobacteria, and is clearly separated from SSA bacterial sequences of other phyla (including its own). An analysis of the genomic organization around JSP8A suggests that this protease gene was acquired in an event that duplicated a racemase gene involved in transforming L- to D-amino acids. Our results suggest that AU11 probably acquired this subtilisin-like protease gene by horizontal gene transfer (HGT) from a cyanobacterittrn. We discuss the relevance of a bacterial protease-HGT in the Antarctic environment in light of this hypothesis. 展开更多
关键词 ANTARCTIC cold-active protease horizontal gene transfer Janthinobacterium subtilisin
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类枯草杆菌蛋白酶的生物学功能及其在农牧业疾病控制中的应用 被引量:2
18
作者 廖素环 张民秀 +2 位作者 施李鸣 黄伟坚 韦英益 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第23期13897-13899,共3页
综述国内外研究类枯草杆菌蛋白酶基因在生物生长过程中参与表型的稳定性、致病性和自噬等重要生理功能及其在农牧业疾病控制中的应用前景。
关键词 类枯草杆菌蛋白酶 表型的稳定性 毒力因子 自噬 疾病控制
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蛹虫草CmKexin基因克隆和菌丝体中表达检测 被引量:1
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作者 毛玉梅 李琴 +3 位作者 付鸣佳 金华燕 沈俊良 钟雪晴 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第4期112-118,共7页
为了探讨蛹虫草类枯草杆菌蛋白酶(Subtilisin-like protease)的表达特性,以真菌蛹虫草菌丝体为研究对象,通过RT-PCR获得蛹虫草CmKexin基因的ORF序列,并进行序列分析。应用Northern杂交和Real-time PCR方法,检测蓝光照射后蛹虫草菌丝体... 为了探讨蛹虫草类枯草杆菌蛋白酶(Subtilisin-like protease)的表达特性,以真菌蛹虫草菌丝体为研究对象,通过RT-PCR获得蛹虫草CmKexin基因的ORF序列,并进行序列分析。应用Northern杂交和Real-time PCR方法,检测蓝光照射后蛹虫草菌丝体中CmKexin基因的转录情况。结果获得蛹虫草CmKexin基因的ORF序列。对翻译蛋白质产物CmKexin进行生物信息学分析,表明该蛋白质含1个属蛋白转化酶的肽酶S8家族功能域(143~429)和1个前体蛋白转化酶P功能域(514~600),符合真菌类枯草杆菌蛋白酶的特征。蛹虫草菌丝体在黑暗预培养4 d后再蓝光照射,Northern Blotting和Real-time PCR检测均可得到相同的结果,即在持续的蓝光照射48~50 h时,出现CmKexin基因的瞬时大量转录。而其他时间内均未检测到该基因的大量转录。试验结果将为蛹虫草类枯草杆菌蛋白酶的利用提供理论依据。 展开更多
关键词 蛹虫草 CmKexin基因 类枯草杆菌蛋白酶 NORTHERN杂交 实时荧光定量PCR
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球孢白僵菌CDEP2基因原核表达、蛋白纯化及多克隆抗血清制备 被引量:1
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作者 曾智 王梅 +1 位作者 肖虎松 钟日超 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第16期131-133,137,共4页
类枯草杆菌蛋白酶是昆虫致病真菌重要的毒力因子,利用合成的特异性引物通过RT-PCR扩增了球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶CDEP2基因。将其与质粒pET28a连接,构建重组原核表达载体pET28-CDEP2,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG进行诱导表达。SD... 类枯草杆菌蛋白酶是昆虫致病真菌重要的毒力因子,利用合成的特异性引物通过RT-PCR扩增了球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶CDEP2基因。将其与质粒pET28a连接,构建重组原核表达载体pET28-CDEP2,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE检测His-CDEP2融合蛋白以包涵体方式大量表达并对其进行纯化。用SDS-PAGE分离纯化的CDEP2蛋白免疫家兔,制备了多克隆抗血清。Western blotting免疫印迹检测分析表明,该抗血清对CDEP2蛋白有特异性识别能力,可用于对CDEP2蛋白功能的进一步研究。 展开更多
关键词 类枯草杆菌蛋白酶 原核表达 融合蛋白 多克隆抗血清
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