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生防放线菌ZZ-9耐药菌株的微波诱变选育 被引量:1
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作者 陈大为 薛应钰 +3 位作者 沈志彦 毛维兴 张树武 徐秉良 《干旱地区农业研究》 CSCD 北大核心 2019年第2期260-265,共6页
为了获得耐甲基硫菌灵的菌株,采用微波诱变法对放线菌ZZ-9菌株进行0~75 s的处理,筛选出在甲基硫菌灵致死浓度下仍能较好生长的突变菌株,并测定其对苹果树腐烂病菌拮抗性和传代稳定性的影响,选育出性能优良的耐药菌株,与甲基硫菌灵协同... 为了获得耐甲基硫菌灵的菌株,采用微波诱变法对放线菌ZZ-9菌株进行0~75 s的处理,筛选出在甲基硫菌灵致死浓度下仍能较好生长的突变菌株,并测定其对苹果树腐烂病菌拮抗性和传代稳定性的影响,选育出性能优良的耐药菌株,与甲基硫菌灵协同作用进行防治苹果树腐烂病试验。结果表明,在微波辐照15~60 s条件下,获得4株耐70μg·mL^(-1)甲基硫菌灵的突变菌株ZZ-9A、ZZ-9B、ZZ-9C和ZZ-9D。通过对4株突变菌株进行抑菌率和传代稳定性测定,筛选出一株抑菌率较好且传代稳定的突变菌株ZZ-9B。菌株ZZ-9B与70μg·mL^(-1)甲基硫菌灵协同作用测定表明,当菌株ZZ-9B与甲基硫菌灵配比为8∶2时,在离体枝条上对苹果树腐烂病的协同防效为89.42%,明显高于单独使用突变菌株和甲基硫菌灵的防效。因此,在使用菌株ZZ-9B来防治苹果树腐烂病时,添加少量的甲基硫菌灵,可显著提高防效。 展开更多
关键词 微波诱变选育 耐药菌株 放线菌ZZ-9 协同作用
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小白链霉菌中CRISPR-Cas9基因敲除系统的构建与优化
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作者 开朗 杨昊 +1 位作者 朱道君 陈旭升 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第14期10-17,共8页
小白链霉菌(Streptomyces albulus)是工业上生产ε-聚赖氨酸的主要菌株。为提高S.albulus的ε-聚赖氨酸合成能力,基于诱变和抗性筛选的传统育种方法被普遍应用。然而,由于传统育种存在“疲劳效应”,当前S.albulus的育种陷入了瓶颈。为... 小白链霉菌(Streptomyces albulus)是工业上生产ε-聚赖氨酸的主要菌株。为提高S.albulus的ε-聚赖氨酸合成能力,基于诱变和抗性筛选的传统育种方法被普遍应用。然而,由于传统育种存在“疲劳效应”,当前S.albulus的育种陷入了瓶颈。为利用代谢工程方法进一步提高S.albulus的ε-聚赖氨酸合成能力,亟需建立基于CRISPR-Cas9的基因编辑方法。为此,该文以S.albulus GS114为研究对象,以ε-聚赖氨酸合成酶基因pls为靶基因,构建了CRISPR-Cas9基因敲除系统,成功敲除了pls,编辑效率为100%。为进一步提高获得的敲除株数量,对S.albulus GS114结合转移条件进行了系统优化,获得的最优结合转移条件为:供受体比例1∶1,镁离子浓度30 mmol/L,55℃热激孢子10 min,培养20 h后覆盖抗生素。在最优转移条件下,结合转移效率达到2.5×10^(-8),较优化前提高了78%。该研究结果一方面为后续S.albulus的代谢工程改造提供了重要工具,另一方面为其他工业链霉菌构建CRISPR-Cas系统提供了重要参考。 展开更多
关键词 放线菌 小白链霉菌 CRISPR-Cas9系统 基因敲除
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链霉菌Streptomyces sp. S9木聚糖酶基因xynBS9的克隆表达及性质分析 被引量:1
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作者 姚国玉 李宁 +2 位作者 石鹏君 陈强 姚斌 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2009年第4期64-70,共7页
通过设计简并引物和构建基因组文库的方法从链霉菌Streptomycessp.S9中克隆得到-βl,4-木聚糖酶基因xynBS9。该基因全长1 023 bp,编码340个氨基酸。将不带原基因信号肽编码序列的xynBS9以正确阅读框架克隆到表达载体pET-22b(+)上,并在... 通过设计简并引物和构建基因组文库的方法从链霉菌Streptomycessp.S9中克隆得到-βl,4-木聚糖酶基因xynBS9。该基因全长1 023 bp,编码340个氨基酸。将不带原基因信号肽编码序列的xynBS9以正确阅读框架克隆到表达载体pET-22b(+)上,并在大肠杆菌BL2 l(DE3)中诱导表达。重组蛋白经硫酸铵分级沉淀和疏水柱纯化后达到电泳纯。酶学性质分析表明,重组木聚糖酶最适温度为60℃,最适pH为6.5,在碱性条件下具有良好的稳定性。 展开更多
关键词 链霉菌 木聚糖酶 xynBS9基因 原核表达
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微生物转化实现双氢青蒿素C-14位惰性甲基C-H键功能化 被引量:1
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作者 刘汉卿 马中宾 刘吉华 《药物生物技术》 CAS 2020年第5期397-401,共5页
惰性C-H键,尤其是青蒿素类化合物中C-14位孤立惰性甲基C-H键的选择性羟化在有机化学反应中极为困难。课题组前期研究发现微生物转化可选择性羟化双氢青蒿素C-2和C-9位C-H键。在此基础上,该研究对灰色链霉菌ATCC13273生物转化双氢青蒿素... 惰性C-H键,尤其是青蒿素类化合物中C-14位孤立惰性甲基C-H键的选择性羟化在有机化学反应中极为困难。课题组前期研究发现微生物转化可选择性羟化双氢青蒿素C-2和C-9位C-H键。在此基础上,该研究对灰色链霉菌ATCC13273生物转化双氢青蒿素的条件进行考察,结合色谱分离和结晶纯化,分离获得3个转化产物。经LC-MS和NMR鉴定,转化产物分别为2α-羟基双氢青蒿素(1)、9α-羟基双氢青蒿素(2)和14-羟基双氢青蒿素(3),其中化合物3为双氢青蒿素C-14位孤立惰性甲基C-H键羟基化的新化合物。微生物转化动态监测和转化p H条件优化结果显示,9α-羟基双氢青蒿素和14-羟基双氢青蒿素为双氢青蒿素生物转化的主要产物。在转化p H为5.5时,有利于转化产物14-羟基双氢青蒿素的积累,当底物浓度为1.2 g/L时,转化50 h后,14-OHDHA的产量可达267 mg/L。该研究首次通过微生物转化实现双氢青蒿素C-14位甲基C-H键的区域选择性羟化,为双氢青蒿素类化合物的结构修饰提供新的修饰位点,同时也为结构复杂化合物中孤立惰性C-H键的选择性羟化提供新思路。 展开更多
关键词 灰色链霉菌 双氢青蒿素 生物转化 2α-羟基双氢青蒿素 9α-羟基双氢青蒿素 14-羟基双氢青蒿素 惰性C-H键
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螺旋链霉菌遗传操作系统-接合转移体系的建立 被引量:1
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作者 王优蓓 郭思妤 +2 位作者 常碧博 叶蕊芳 花强 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期45-52,共8页
背景:螺旋链霉菌(Streptomyces spiramyceticus)为国内螺旋霉素(spiramycin,SPM)的生产菌,但目前工业生产中螺旋链霉菌利用遗传操作进行基因改造还没有成功报道。目的:建立螺旋链霉菌遗传操作系统,利用遗传改造的方法改变SPM的组分比例... 背景:螺旋链霉菌(Streptomyces spiramyceticus)为国内螺旋霉素(spiramycin,SPM)的生产菌,但目前工业生产中螺旋链霉菌利用遗传操作进行基因改造还没有成功报道。目的:建立螺旋链霉菌遗传操作系统,利用遗传改造的方法改变SPM的组分比例,降低SPM的分离成本。方法:以大肠杆菌(Escherichia coli ET12567/pUZ8002)为供体,螺旋链霉菌为受体进行接合转移实验,建立螺旋链霉菌接合转移的遗传操作系统,并对影响接合转移效率的培养基种类、抗生素覆盖时间、供受体比例等条件进行优化。结果:螺旋链霉菌不适合利用孢子进行接合转移,利用菌体进行接合转移时ISP4培养基为接合转移的最适培养基,供受体比例为103∶1得到的接合子数量最多,接合转移效率为1.93×10-4,SPM中三种组分百分含量变化显著。结论:实验首次建立了螺旋链霉菌接合转移的方法,利用菌体进行接合转移操作,简化了实验操作过程,并且利用CRISRP/Cas9基因编辑系统成功阻断3-O-酰基转移酶基因,并在该位置导入φC31整合位点att B,为后续螺旋链霉菌的基因改造奠定了基础。 展开更多
关键词 螺旋链霉菌 菌体接合转移 螺旋霉素 CRISRP/Cas9
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Biosorption of mercury and lead by aqueous Streptomyces VITSVK9 sp. isolated from marine sediments from the bay of Bengal, India
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作者 Pratibha SANJENBAM Kumar SAURAV Krishnan KANNABIRAN 《Frontiers of Chemical Science and Engineering》 SCIE EI CAS CSCD 2012年第2期198-202,共5页
Toxic heavy metals are increasingly accumu- lating in the environment worldwide and are considered to be life threatening contaminants. The biosorption of mercury and lead by marine actinomycetes isolated from marine ... Toxic heavy metals are increasingly accumu- lating in the environment worldwide and are considered to be life threatening contaminants. The biosorption of mercury and lead by marine actinomycetes isolated from marine sediment collected from the Bay of Bengal coast of Puducherry, India, was evaluated. The maximum tolerance concentration (MTC) of Streptomyces sp. was determined by a well diffusion method and a broth dilution method. The effects of the initial metal ion concentration, the pH and the biomass dosage on the biosorption of mercury and lead ions were investigated. The MTC of the isolate to metals was 200 mg. L 1 for mercury and 1800 mg. L-1 for lead. At neutral pH, the isolate had a maximum biosorption of metal ions of 200 mg.L 1 and 150 mg.L~ for mercury and lead respectively. Fourier transform infrared (FTIR) absorption spectra showed the chemical interactions between the functional groups in the biomass such as hydroxyl (- OH), amine (-NH2), earboxyl (- COOH) and the metal ions. The isolate was further characterized by molecular taxonomy and identified as a member of the genus Streptomyces. Based on the phenotypic and phylogenetic analysis, the strain was classified as a new species of the genus Streptomyces and designated as Streptomyces VITSVK9 sp. (HM137310). A blast search of the 16S rDNA sequence of the strain showed the most similarity (95%) with Streptomyces sp. A515 Ydz-FQ (EU384279). Based on the results, it can be concluded that this marine Streptomyces could be used as a biosorbent for the removal of heavy metal ions from aqueous environments. 展开更多
关键词 MERCURY LEAD BIOSORPTION maximum toler- ance concentration streptomyces VITSVK9 sp.
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