核酸恒温扩增技术研究进展 被引量：18

1

作者 汪琳 罗英 +2 位作者 周琦 赖平安 柏亚铎 《生物技术通讯》 CAS 2011年第2期296-302,共7页

核酸恒温扩增技术在生命科学研究及相关诸多领域已经得到了广泛应用。我们对核酸恒温扩增技术的最新进展作一简要综述,包括环介导恒温扩增、链替代扩增、依赖核酸序列的扩增、滚环扩增、切口酶核酸恒温扩增、依赖解旋酶的恒温扩增、转... 核酸恒温扩增技术在生命科学研究及相关诸多领域已经得到了广泛应用。我们对核酸恒温扩增技术的最新进展作一简要综述,包括环介导恒温扩增、链替代扩增、依赖核酸序列的扩增、滚环扩增、切口酶核酸恒温扩增、依赖解旋酶的恒温扩增、转录依赖的扩增、杂交捕获法、转录介导的扩增等的原理、优缺点及应用。 展开更多

关键词 核酸恒温扩增 环介导恒温扩增 链替代扩增 依赖核酸序列的扩增 滚环扩增

下载PDF 职称材料

基于链置换反应的DNA等温扩增技术应用进展 被引量：5

2

作者 何艳 蒋涛 《医学综述》 2010年第1期24-27,共4页

DNA等温扩增是在恒定温度下用非热变性的方法解开DNA双链的一种扩增技术。链置换反应指某些具有链置换活性的DNA聚合酶在延伸新链的同时将下游旧链剥离,它已被用于多种体外等温扩增技术,包括链置换扩增、滚环扩增、多重置换扩增、环介... DNA等温扩增是在恒定温度下用非热变性的方法解开DNA双链的一种扩增技术。链置换反应指某些具有链置换活性的DNA聚合酶在延伸新链的同时将下游旧链剥离,它已被用于多种体外等温扩增技术,包括链置换扩增、滚环扩增、多重置换扩增、环介导的等温扩增等。其主要应用于DNA测序、全基因组扩增、基因芯片、微生物病原体检测等领域。 展开更多

关键词 等温扩增 链置换扩增 滚环扩增 多重置换扩增 环介导的等温扩增

下载PDF 职称材料

核酸等温扩增技术在电化学平台的应用

3

作者 刘翠颖 吴茳铃 +2 位作者 付正香 李胜强 黄昱 《分析试验室》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1029-1040,共12页

生物分子(包括核酸和蛋白等)的检测在临床诊断、疾病治疗、细菌和病毒的检测及环境监测等方面日益重要,因此,寻找简单、快速、灵敏度高、特异性佳的检测平台就显得极为重要。近年来,电化学检测平台因体积小、结构简单、灵敏度和特异性... 生物分子(包括核酸和蛋白等)的检测在临床诊断、疾病治疗、细菌和病毒的检测及环境监测等方面日益重要,因此,寻找简单、快速、灵敏度高、特异性佳的检测平台就显得极为重要。近年来,电化学检测平台因体积小、结构简单、灵敏度和特异性高等优点,在生物分子检测中得到了许多应用。为了更好的检测各种目标分析物,不同的核酸等温扩增技术被应用于电化学检测平台。本文从等温扩增技术的发展历程、扩增的基本原理及其在电化学平台的实际应用方面进行了综述,为后续应用中选择扩增技术提供一些借鉴思路。 展开更多

关键词 核酸等温扩增技术 电化学检测平台 生物分子检测 链置换扩增 滚环扩增

原文传递

链置换扩增(SDA)压电DNA传感器 被引量：5

4

作者 蒋天伦 府伟灵 +6 位作者 张波 陈鸣 刘明华 张雪 赵树铭 俞凡 陈小兵 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期26-28,共3页

目的　构建链置换扩增 (SDA)压电DNA传感器 ,研究其响应特性。方法　①将SDA与压电DNA传感器结合 ,建立SDA压电DNA传感器结合技术 ;②以结核菌IS61 1 0片段为检测对象 ,研究SDA压电DNA传感器的响应特性。结果　①SDA压电DNA传感器的响... 目的　构建链置换扩增 (SDA)压电DNA传感器 ,研究其响应特性。方法　①将SDA与压电DNA传感器结合 ,建立SDA压电DNA传感器结合技术 ;②以结核菌IS61 1 0片段为检测对象 ,研究SDA压电DNA传感器的响应特性。结果　①SDA压电DNA传感器的响应信号达到 50 0Hz左右 ;②SDA压电DNA传感器出现频率下降的时间长度 (响应时间 )与加入的检测核酸的浓度相关 ;③不同浓度检测核酸 (靶核酸 )导致的频率下降绝对值差别不大。结论　SDA压电DNA传感器能直接检测基因组DNA ;其响应时间与检测物 (靶核酸 )的加入量相关 。 展开更多

关键词 DNA传感器 链置换扩增术 自组装生物膜 结核菌 SDA 压电石英晶体传感器

下载PDF 职称材料

基于缺口酶的链置换等温扩增技术 被引量：5

5

作者 邓世琼 董娟 +3 位作者 陈刚毅 杜凤 邹家尉 唐卓 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1080-1085,共6页

传统的链置换等温扩增技术中需要加入修饰的底物,为了解决这一技术难题,实现常规底物下的链置换等温扩增技术,采用缺口酶Nt.BstNBI代替传统链置换等温扩增技术中的限制性内切酶,通过优化两种酶的比例、反应温度、反应时间、两种原装buf... 传统的链置换等温扩增技术中需要加入修饰的底物,为了解决这一技术难题,实现常规底物下的链置换等温扩增技术,采用缺口酶Nt.BstNBI代替传统链置换等温扩增技术中的限制性内切酶,通过优化两种酶的比例、反应温度、反应时间、两种原装buffer的比例、buffer中的离子浓度等反应条件和引物浓度、引物序列以及引物前端保护序列的长度,最终建立了一种新型的链置换等温扩增技术.该方法可以检测到2 pmol/L的质粒DNA.扩增反应在15-30 min即可完成,并且产物可通过琼脂糖凝胶电泳进行直接检测.本研究建立的基于缺口酶的链置换等温扩增技术较之传统方法更加简便、快捷、环保且价格低廉,具有非常强的实际应用潜力,特别适用于现场检测. 展开更多

关键词 缺口酶 等温扩增 剪切 链置换扩增

原文传递

孔雀石绿和结晶紫在荧光检测中的比较 被引量：5

6

作者 赵永云 杜凤 +4 位作者 董娟 陈浩东 周丽 陈蓉 唐卓 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期365-369,共5页

为优选出三苯甲烷染料中的一种染料与G-四聚体结合开发为荧光定量报告体系,对孔雀石绿(Malachitegreen,MG)和结晶紫(Crystal violet,CV)与G-四聚体结合后的灵敏度和重现性进行了比较研究.首先,比较了4种不同DNA(hum21,short-hum21,doubl... 为优选出三苯甲烷染料中的一种染料与G-四聚体结合开发为荧光定量报告体系,对孔雀石绿(Malachitegreen,MG)和结晶紫(Crystal violet,CV)与G-四聚体结合后的灵敏度和重现性进行了比较研究.首先,比较了4种不同DNA(hum21,short-hum21,double-strands,single-strand)分别与孔雀石绿和结晶紫结合后的荧光光谱,结果显示,两种染料均可区分以上4种DNA,但孔雀石绿的灵敏度更高.然后,将孔雀石绿和结晶紫应用到实时荧光检测中,进一步比较验证两种染料灵敏度,并考察两种染料的重现性,结果显示,孔雀石绿的重现性和灵敏度均优于结晶紫.由此,建立了孔雀石绿与G-四聚体结合的荧光定量报告体系. 展开更多

关键词 孔雀石绿 结晶紫 G-四聚体 链置换等温扩增 实时荧光检测

原文传递

等温核酸放大技术在重金属检测方面的应用 被引量：3

7

作者 李婷婷 王嫦嫦 +5 位作者 白向茹 王利华 夏定 战艺芳 姚琪 郑思洁 《武汉工程大学学报》 CAS 2021年第1期38-44,共7页

等温核酸放大技术是一种可以实现重金属污染物痕量分析的高灵敏性检测方法,在分析检测中有着广泛且重要的作用。本文综述了几种不同的等温核酸放大技术及其在重金属检测方面的应用,阐述分析了各方法的检测原理,为之后建立更加灵敏、快... 等温核酸放大技术是一种可以实现重金属污染物痕量分析的高灵敏性检测方法,在分析检测中有着广泛且重要的作用。本文综述了几种不同的等温核酸放大技术及其在重金属检测方面的应用,阐述分析了各方法的检测原理,为之后建立更加灵敏、快速、准确的检测方法提供了参考。虽然等温核酸放大技术目前主要停留在实验室阶段,并且检测目标有限,但是由于该技术的高灵敏性、特异性以及与其他学科紧密的联系性,具有潜在的应用前景。 展开更多

关键词 等温核酸放大技术 重金属检测 杂交链式反应 链置换扩增技术 滚环扩增技术 催化发夹组装技术

下载PDF 职称材料

一种基于目标介导核酸链置换扩增反应的电化学传感器用于赭曲霉毒素A的检测研究

8

作者 杨彩萍 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期188-194,共7页

本文利用聚多巴胺纳米微球(Polydopamine Nanospheres,PDANS)作为富集功能核酸的载体材料,并结合链置换扩增(Strand Displacement Amplification,SDA)技术,构建了一种可用于超灵敏检测赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)的电化学传感方法。... 本文利用聚多巴胺纳米微球(Polydopamine Nanospheres,PDANS)作为富集功能核酸的载体材料,并结合链置换扩增(Strand Displacement Amplification,SDA)技术,构建了一种可用于超灵敏检测赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)的电化学传感方法。实验精细设计了一段整合了OTA适配体、扩增所需的引物和模板三种功能的发夹型DNA序列,并通过π-π作用吸附在PDANS表面。在PDANS的保护下,溶液中的核酸酶无法顺利消解吸附发夹型DNA,从而阻碍SDA的进行。在此条件下,带正电荷的电活性物质亚甲基蓝(MB)可以自由迁移到ITO电极表面,产生强电流信号。当OTA存在时,OTA与发卡DNA中的适配体相结合,引起发夹DNA构型变化而脱离PDANS表面。随后,在核酸内切酶和聚合酶的帮助下启动SDA反应,产生大量带负电荷的双链DNA(dsDNA)。此时,溶液中的MB分子通过静电相互作用而嵌入dsDNA沟槽中,从而使得ITO表面的电活性探针MB的数量减少,导致电流下降。该方法对OTA的检出限可以达到21 pmol/L,且无需标记和探针固定,可用于饮料中OTA的测定。 展开更多

关键词 聚多巴胺纳米微球 链置换扩增反应 赭曲霉毒素A 电化学传感

下载PDF 职称材料

石英谐振传感器液相稳定平台构建及检测HCMV的实验研究 被引量：2

9

作者 陈庆海 府伟灵 +5 位作者 边志衡 陈鸣 张波 蒋天伦 汤万里 蔡国儒 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第21期1954-1957,共4页

目的 建立石英谐振压电基因传感器检测系统液相稳定平台并应用该检测系统实时检测链置换扩增(Stranddisplacement amplification,SDA)反应。方法①观察以金属夹具式和粘胶式两种检测池连接方式构成的传感器在液相中的频率稳定性;②以巨... 目的 建立石英谐振压电基因传感器检测系统液相稳定平台并应用该检测系统实时检测链置换扩增(Stranddisplacement amplification,SDA)反应。方法①观察以金属夹具式和粘胶式两种检测池连接方式构成的传感器在液相中的频率稳定性;②以巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)为检测对象,建立SDA反应系统;③传感器检测系统对HCMVSDA反应进行实时检测。结果①新型金属夹具式可调节及可换式传感器检测池可实现传感器在液相中的频率稳定性;②SDA反应可引起压电基因传感器的频率持续下降;③在一定范围内核酸杂交所引起的频率下降幅度随加入的靶序列浓度提高而增大。结论 成功构建压电基因传感器液相检测稳定平台并实现对SDA反应的实时检测;该系统可直接检测基因组DNA并可广泛应用于病原微生物的临床检测。 展开更多

关键词 压电基因传感器 稳定性 链置换扩增(SDA) 巨细胞病毒

下载PDF 职称材料

链置换扩增技术的影响因素研究 被引量：3

10

作者 蒋天伦 府伟灵 +3 位作者 张波 陈鸣 张雪 赵树铭 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期39-42,共4页

目的　探索限制酶、聚合酶、缓冲体系和DTT等对链置换扩增 (SDA)实验的影响 ,以期在商品化试剂条件下组建SDA系统。方法　以结核菌IS61 1 0序列为扩增对象设计SDA引物 ,利用商品化的BsoBI和exo Bst为实验用酶建立SDA实验系统。对比在不... 目的　探索限制酶、聚合酶、缓冲体系和DTT等对链置换扩增 (SDA)实验的影响 ,以期在商品化试剂条件下组建SDA系统。方法　以结核菌IS61 1 0序列为扩增对象设计SDA引物 ,利用商品化的BsoBI和exo Bst为实验用酶建立SDA实验系统。对比在不同BsoBI、exo Bst浓度条件下SDA产物的电泳条带亮度来观察限制酶、聚合酶对SDA效率的影响 ;对比SDA在pH 7.6的磷酸盐缓冲液和以Tris HCl为缓冲体系的NEBuffer2、ThermoPolBuffer和EcoPolBuffer中的产物电泳条带的方法来观察不同缓冲体系对SDA效率的影响 ;对比加入DTT和不加DTT时SDA产物的电泳条带亮度来观察DTT对SDA效率的影响。结果　①在 0 .1～ 0 .4U μl浓度范围内 ,SDA的扩增率与BsoBI含量正相关 ,而 0 .8U μlBsoBI反而使SDA受到抑制。②在 0 .0 8～ 0 .3 2U μl浓度范围内exo Bst用量对SDA的扩增能力没有显著影响 ;③SDA可以在pH 7.6的磷酸盐缓冲液和ThermoPolBuffer中进行 ,而不能在NEBuffer2和EcoPolBuffer中进行 ;④DTT对SDA的扩增率和特异性都没有显著影响。结论　以上实验结果表明在商品化试剂条件下可以构建SDA系统 。 展开更多

关键词 链置换扩增 等温扩增 核酸 结核菌 压电石英晶体传感器 DNA传感器 基因诊断

下载PDF 职称材料

霍乱弧菌SDA-琼脂糖凝胶电泳检测技术研究 被引量：3

11

作者 梁炜 尼秀媚 +5 位作者 雷质文 魏晓棠 张京宣 姜英辉 吴兴海 宋涛 《食品安全质量检测学报》 CAS 2011年第3期165-169,共5页

选取霍乱弧菌ompW基因片段,设计链置换扩增(strand displacement amplification)特异性引物,建立霍乱弧菌SDA快速检测方法,同时对设计的引物的灵敏度、特异性进行研究,结果发现所建立的SDA检测技术对霍乱弧菌的检测灵敏度达到7.0×1... 选取霍乱弧菌ompW基因片段,设计链置换扩增(strand displacement amplification)特异性引物,建立霍乱弧菌SDA快速检测方法,同时对设计的引物的灵敏度、特异性进行研究,结果发现所建立的SDA检测技术对霍乱弧菌的检测灵敏度达到7.0×102cfu/mL,特异性检测发现,SDA技术可以特意性地扩增霍乱弧菌。 展开更多

关键词 霍乱弧菌 链置换扩增 SDA

下载PDF 职称材料

分子生物学技术在临床常见病原微生物快速检测中应用研究进展 被引量：2

12

作者 吉永 胡大春 《医学综述》 2009年第11期1608-1612,共5页

近年来,随着现代生物技术的快速发展,建立在分子生物学基础上的快速检测病原微生物技术得到了迅速的发展。基于核酸杂交的方法、聚合酶链反应（PCR）、生物传感技术这三大类快速检测病原微生物的新技术被广泛应用于微生物检测,使得疾病... 近年来,随着现代生物技术的快速发展,建立在分子生物学基础上的快速检测病原微生物技术得到了迅速的发展。基于核酸杂交的方法、聚合酶链反应（PCR）、生物传感技术这三大类快速检测病原微生物的新技术被广泛应用于微生物检测,使得疾病诊断的水平有了很大的提高。本文根据目前国内外研究的动向,对这三类检测技术的原理、特点及应用进行综述。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 微阵列 荧光标记原位杂交 链置换扩增技术 16SRRNA基因

下载PDF 职称材料

基于链置换循环无标记检测端粒酶RNA的荧光法 被引量：3

13

作者 张霞菲 成锐 +1 位作者 时志路 金燕 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2016年第1期12-18,共7页

以氧化石墨烯（GO）作为DNA载体和荧光猝灭剂,SYBR GreenⅠ（SGⅠ）为荧光信号探针,发夹核酸探针为分子识别探针,基于目标物启动的发夹核酸探针链置换循环反应,建立了一种利用荧光共振能量转移和链置换循环放大技术检测端粒酶RNA（h TR... 以氧化石墨烯（GO）作为DNA载体和荧光猝灭剂,SYBR GreenⅠ（SGⅠ）为荧光信号探针,发夹核酸探针为分子识别探针,基于目标物启动的发夹核酸探针链置换循环反应,建立了一种利用荧光共振能量转移和链置换循环放大技术检测端粒酶RNA（h TR）的荧光新方法.发夹核酸探针hp DNA1和hp DNA2吸附在GO表面,嵌插在发夹DNA探针茎部的SGⅠ的荧光信号被GO猝灭.当人工合成的目标物（T1）存在时,T1与hp DNA1杂交打开hp DNA1的茎-环结构而引发hp DNA2与T1之间的链置换循环反应,由此累积产生大量的hp DNA1/hp DNA2杂交双链.刚性的双链DNA脱离GO表面,导致所嵌插的SGⅠ产生较强的荧光信号.基于荧光信号的变化,可定量检测0.2~50 nmol/L的T1,检出限为90 pmol/L.该方法为端粒酶RNA检测提供了一种高灵敏、高特异性且无需标记的荧光新途径. 展开更多

关键词 端粒酶RNA 链置换循环 荧光共振能量转移 无标记

下载PDF 职称材料

链替代扩增反应研究进展 被引量：1

14

作者 韩延平 杨瑞馥 《生物技术通讯》 CAS 2002年第3期205-208,共4页

链替代扩增反应作为一种体外恒温酶控扩增体系,主要基于限制酶打开缺口和无外切酶活性的DNA聚合酶的聚合替代的原理。随着该反应体系各环节的不断改进,目前该方法已应用于细菌尤其是分枝杆菌DNA的检测、体外进化模型的建立、核酸定量及... 链替代扩增反应作为一种体外恒温酶控扩增体系,主要基于限制酶打开缺口和无外切酶活性的DNA聚合酶的聚合替代的原理。随着该反应体系各环节的不断改进,目前该方法已应用于细菌尤其是分枝杆菌DNA的检测、体外进化模型的建立、核酸定量及芯片杂交等多个方面。 展开更多

关键词 链替代扩增反应 研究进展 限制酶/DNA聚合酶体系 等温DNA扩增

下载PDF 职称材料

基于链置换和催化发夹组装策略用于miRNA高灵敏生物传感检测 被引量：2

15

作者 文博 赵敏 +3 位作者 周晓燕 程伟 丁小娟 丁世家 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1168-1173,共6页

目的:基于链置换扩增(strand displacement amplification,SDA)和催化发夹组装(catalytic hairpin assembly,CHA)级联放大策略构建电化学生物传感器用于micro RNA(miRNA)高灵敏检测。方法:靶标miR-21引发SDA获得大量与靶标miR-21相关的... 目的:基于链置换扩增(strand displacement amplification,SDA)和催化发夹组装(catalytic hairpin assembly,CHA)级联放大策略构建电化学生物传感器用于micro RNA(miRNA)高灵敏检测。方法:靶标miR-21引发SDA获得大量与靶标miR-21相关的触发DNA,继而引发CHA,得到大量生物素标记的双链DNA。然后,所获得的双链DNA与修饰在电极表面的辅助探针杂交,再利用生物素与链霉亲和素的特异性识别作用,将含链霉亲和素的碱性磷酸酶(streptavidin-alkaline phosphatase,STAP)修饰在电极表面上,在底物α-萘酚磷酸酯(α-naphthyl phosphate,α-NPP)存在下,ST-AP催化α-NPP水解,在电极表面原位产生具有电化学活性的α-萘酚(α-naphthol,α-NP),获得电化学信号,从而实现对靶标miR-21的高灵敏检测。结果:在最优实验条件下,所制备的miR-21生物传感器的线性范围为0.1 pmol/L至10 nmol/L,最低检测限为60 fmol/L。结论:所设计的miR-21生物传感器展现出高的灵敏度和强的特异性,将为临床上miR-21的检测提供新思路和新平台。 展开更多

关键词 电化学生物传感器 MIRNA 链置换扩增 催化发夹组装

下载PDF 职称材料

肠炎沙门氏菌SDA-琼脂糖凝胶电泳检测技术研究 被引量：2

16

作者 尼秀媚 魏晓棠 《安徽农业科学》 CAS 2014年第22期7443-7444,7466,共3页

[目的]建立肠炎沙门氏菌的SDA快速检测方法。[方法]根据肠炎沙门氏菌invA基因片段设计链置换扩增(SDA)引物,建立肠炎沙门氏菌的SDA快速检测方法,并对设计的引物的灵敏度和特异性进行研究。[结果]成功建立了肠炎沙门氏菌的SDA快速检测方... [目的]建立肠炎沙门氏菌的SDA快速检测方法。[方法]根据肠炎沙门氏菌invA基因片段设计链置换扩增(SDA)引物,建立肠炎沙门氏菌的SDA快速检测方法,并对设计的引物的灵敏度和特异性进行研究。[结果]成功建立了肠炎沙门氏菌的SDA快速检测方法,SDA反应成功扩增了目标序列。建立的SDA检测技术对肠炎沙门氏菌的检测灵敏度达到7.0×103cfu/ml,且特异性良好。[结论]试验选取的序列和引物具有较高的特异性,可用于肠炎沙门氏菌的特异性检测。 展开更多

关键词 肠炎沙门氏菌 链置换扩增 琼脂糖凝胶电泳

下载PDF 职称材料

链置换扩增(SDA)压电DNA传感器阵列 被引量：1

17

作者 蒋天伦 府伟灵 +6 位作者 张波 刘明华 陈鸣 张雪 赵树铭 俞凡 陈小兵 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期29-31,共3页

目的　构建SDA压电DNA传感器阵列 ,解决SDA压电DNA传感器的检测通量不足问题。方法　①采用传感器集成技术将 1 0个SDA压电DNA传感器制成 2× 5的传感器阵列芯片 ;②以结核菌IS61 1 0片段为检测对象 ,研究SDA压电DNA传感器阵列的特... 目的　构建SDA压电DNA传感器阵列 ,解决SDA压电DNA传感器的检测通量不足问题。方法　①采用传感器集成技术将 1 0个SDA压电DNA传感器制成 2× 5的传感器阵列芯片 ;②以结核菌IS61 1 0片段为检测对象 ,研究SDA压电DNA传感器阵列的特性。结果　传感器阵列芯片的各传感器微单元能够相互独立工作 ,互不干扰。结论　SDA压电DNA传感器的阵列化不影响传感器性能 ,同时在一定程度上提高了SDA压电DNA传感器的检测通量 。 展开更多

关键词 链置换扩增 阵列 压电石英晶体传感器 DNA传感器 SDA

下载PDF 职称材料

链置换恒温扩增快速检测单核细胞增生李斯特氏菌

18

作者 胡东青 魏晓棠 +1 位作者 林超 尼秀媚 《食品安全质量检测学报》 CAS 2017年第11期4139-4142,共4页

目的开发单核细胞增生李斯特氏菌快速、简便、准确的链置换恒温扩增(strand displacement amplification,SDA)检测方法。方法根据单核增生李斯特菌特异性基因prfA基因片段,设计链置换扩增特异性引物,建立单核细胞增生李斯特菌SDA快速检... 目的开发单核细胞增生李斯特氏菌快速、简便、准确的链置换恒温扩增(strand displacement amplification,SDA)检测方法。方法根据单核增生李斯特菌特异性基因prfA基因片段,设计链置换扩增特异性引物,建立单核细胞增生李斯特菌SDA快速检测方法,同时对设计的引物的特异性和灵敏度进行研究。结果所建立的单核细胞增生李斯特菌SDA扩增方法灵敏度达到了7.0×10~2 CFU/mL,检验技术可以特异性地扩增单核增生李斯特菌。结论本试验所建立的单核细胞增生李斯特菌SDA检验技术具有快速、简便、特异性强的特点,具有在进出口实验室推广应用前景。 展开更多

关键词 单核细胞增生李斯特氏菌 链置换恒温扩增

下载PDF 职称材料

基于链替代扩增-纳米金比色直观检测单链核酸方法的研究

19

作者 朱乾琨 汤丹 +2 位作者 孙浩然 焦虎平 张玉静 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第2期681-683,727,共4页

[目的]将链替代扩增技术与核酸修饰纳米金积聚变色的光学特性相结合,设计了一种新型的直观检测3′端暴露单链核酸的方法,实现对单链核酸的高灵敏度检测。[方法]设计一条含有硫代修饰酶切位点的单链核酸（ZDNA）,其酶切位点5′端是能将... [目的]将链替代扩增技术与核酸修饰纳米金积聚变色的光学特性相结合,设计了一种新型的直观检测3′端暴露单链核酸的方法,实现对单链核酸的高灵敏度检测。[方法]设计一条含有硫代修饰酶切位点的单链核酸（ZDNA）,其酶切位点5′端是能将核酸修饰纳米金变色的Linker序列,3′端是能与Target单链核酸3′端完全互补的H序列。当无Target存在时,Linker会充分暴露,能使核酸修饰纳米金积聚呈现紫色;但是当Target存在时,会与H序列完全互补,作为ZDNA的引物进入链替代扩增循环,形成的新链不断与Linker序列互补,不能使核酸修饰纳米金积聚呈现红色,从而间接检测了Target单链核酸。[结果]通过一系列试验确定检测体系,具体为：40μl修饰纳米金溶液（0.52 nmol/L）加入10μl酶循环体系（ZDNA20 nmol/L,33 mmol/L Tris-HCl（pH值7.9）;10 mmol/L MgCl2;66 mmol/LNaCl;0.5 mmol/LdNTP;0.1 mg/ml BSA;0.05 U/μl klenow;1 U/μl Hinc II）,直观或紫外检测并绘制Target浓度与纳米金积聚程度的标准曲线,表明Target浓度在1~200 pmol/L的范围内呈现良好的线性关系,R2=0.946,最低检测限是1 pmol/L。[结论]链替代扩增-纳米金比色检测单链核酸方法简便、直观、成本低,与传统修饰纳米金比色检测DNA方法相比,灵敏度提高了104倍。 展开更多

关键词 修饰纳米金 链替代扩增 核酸检测 比色方法

下载PDF 职称材料

基于链置换扩增的电化学适配体生物传感器检测食品中的赭曲霉毒素A

20

作者 刘伟 张蕴哲 +3 位作者 杨倩 范少华 田益玲 张伟 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第1期232-241,共10页

为构建一种基于链置换扩增技术(SDA)和电化学适配体传感器技术检测食品中赭曲霉毒素A(OTA)的方法,根据OTA特异性适配体设计发卡结构,并在发卡结构的茎部设置SDA反应识别位点,进行SDA扩增。将扩增产物与修饰二茂铁(Fc)的电化学探针进行杂... 为构建一种基于链置换扩增技术(SDA)和电化学适配体传感器技术检测食品中赭曲霉毒素A(OTA)的方法,根据OTA特异性适配体设计发卡结构,并在发卡结构的茎部设置SDA反应识别位点,进行SDA扩增。将扩增产物与修饰二茂铁(Fc)的电化学探针进行杂交,使电信号发生变化,从而建立电化学适配体传感器检测OTA的方法。通过对7组不同毒素的测定评价该方法的特异性,测定其灵敏度和检出限,并与赭曲霉毒素A酶联免疫分析方法(ELISA)国家标准(GB 5009.96-2016)进行对比试验。结果表明:最优条件下,电化学适配体传感器灵敏度线性范围为0.1 pg/mL~10 ng/mL,检出限(LOD)为0.05 pg/mL。当OTA存在时,检测结果为阳性,当OTA不存在时,检测为阴性,说明该方法特异性良好。在人工加标试验中,该电化学适配体传感器的加标回收率为96.60%~99.04%,ELISA(国家标准)的加标回收率为94.00%~98.50%,该方法的加标回收率优于国家标准。结论:该方法能够快速检测食品中的OTA,具有实用应用价值。 展开更多

关键词 赭曲霉毒素A 核酸适配体 链置换扩增 电化学生物传感器

下载PDF 职称材料