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随机ssDNA文库不对称PCR扩增条件的优化及回收效率比较 被引量：2
1
作者 周晏丞 曹立亭 +1 位作者 陈露 马跃 《四川畜牧兽医》 2015年第11期33-35,37,共4页
本研究开展了SELEX技术中ssDNA文库不对称PCR扩增及回收条件的优化试验,结果得出:20μL不对称PCR反应体系中上下游引物的最佳比例为60∶1,最优循环数为30个循环,回收效率最高的方法为乙醇沉淀法。此条件下,随机ssDNA文库不对称PCR扩增... 本研究开展了SELEX技术中ssDNA文库不对称PCR扩增及回收条件的优化试验,结果得出:20μL不对称PCR反应体系中上下游引物的最佳比例为60∶1,最优循环数为30个循环,回收效率最高的方法为乙醇沉淀法。此条件下,随机ssDNA文库不对称PCR扩增出来的条带清晰、稳定、特异性高,并具有较好的纯化效率。 展开更多
关键词 配基系统进化技术 ssdna文库 不对称PCR DNA纯化
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2种不同方法制备玉米赤霉烯酮单克隆抗体适配子的ssDNA文库的比较 被引量：2
2
作者 邹绮 王元凯 +4 位作者 毛紫微 杜斌 王恒安 孙建和 严亚贤 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2013年第5期54-60,共7页
体外合成全长为71个碱基的随机ssDNA文库,采用SELEX技术,以玉米赤霉烯酮单克隆抗体为靶蛋白,微孔板为筛选介质进行筛选。通过对比不对称PCR法和生物素-链霉亲和素磁珠2种分离方法制备ssDNA文库的效果,确定了以生物素-链霉亲和素磁珠分... 体外合成全长为71个碱基的随机ssDNA文库,采用SELEX技术,以玉米赤霉烯酮单克隆抗体为靶蛋白,微孔板为筛选介质进行筛选。通过对比不对称PCR法和生物素-链霉亲和素磁珠2种分离方法制备ssDNA文库的效果,确定了以生物素-链霉亲和素磁珠分离方法制备ssDNA为优选方法。ssDNA文库扩增为双链DNA(dsDNA)文库的PCR反应条件为:退火温度50℃,循环数20次。不对称PCR退火温度为50℃,最佳循环数为30次,引物Ⅰ与引物Ⅱ的比例为80∶1。此反应条件下,ssDNA文库PCR扩增的条带清晰、稳定、特异性高。生物素-链霉亲和素磁珠法为有效筛选特异性强的玉米赤霉烯酮单克隆抗体适配子的优选技术方案,为适配子SELEX筛选奠定基础。 展开更多
关键词 玉米赤霉烯酮单克隆抗体 适配子 SELEX ssdna文库
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SELEX法体外筛选胃癌细胞适配子方法的建立 被引量：10
3
作者 李真真 韩跃武 +3 位作者 刘玲玲 韩亚萍 路艳 王春霞 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期42-46,共5页
目的:建立SELEX技术筛选胃癌细胞SGC-7901适配子的方法,并初步鉴定获得的SGC-7901细胞适配子。方法:体外合成全长88bp中间含52bp随机序列的ssDNA文库,通过优化PCR扩增条件,利用地高辛-抗地高辛抗体-碱性磷酸酶系统测定亲和力,经SELEX反... 目的:建立SELEX技术筛选胃癌细胞SGC-7901适配子的方法,并初步鉴定获得的SGC-7901细胞适配子。方法:体外合成全长88bp中间含52bp随机序列的ssDNA文库,通过优化PCR扩增条件,利用地高辛-抗地高辛抗体-碱性磷酸酶系统测定亲和力,经SELEX反复筛选获得胃癌SGC-7901细胞的特异性适配子。将最后一轮筛选产物克隆、测序并用相关软件分析适配子序列的一级结构和二级结构。结果:经12轮SELEX筛选,ssDNA文库与SGC-7901细胞的亲和力由0.16上升至1.14,表明特异性适配子得到逐步富集。22个克隆子测序,有4个序列完全一致,二级结构预测茎环可能是适配子与胃癌细胞作用的结构基础。结论:成功建立了SELEX技术体外筛选胃癌细胞SGC-7901高亲和性适配子的方法。 展开更多
关键词 胃癌细胞 SELEX 适配子 随机ssdna文库
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筛选环孢霉素A适体的SELEX技术的建立(英文) 被引量：10
4
作者 李卫滨 兰小鹏 +1 位作者 杨湘越 周长邵 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期829-834,共6页
体外合成一个全长78个核苷酸,中间含35个随机序列的随机单链寡核苷酸序列(ssDNA)文库,运用指数富集的配体系统进化(SELEX)技术,以环孢霉素A(CsA)为靶目标,以磁珠作为筛选介质,利用生物素-链酶抗生物素-辣根过氧化物酶系统,检测每轮ssDN... 体外合成一个全长78个核苷酸,中间含35个随机序列的随机单链寡核苷酸序列(ssDNA)文库,运用指数富集的配体系统进化(SELEX)技术,以环孢霉素A(CsA)为靶目标,以磁珠作为筛选介质,利用生物素-链酶抗生物素-辣根过氧化物酶系统,检测每轮ssDNA文库与CsA的亲和力,筛选并鉴定CsA特异性的适体.经过11轮的筛选,ssDNA文库与CsA的亲和力呈上升趋势.将第10轮筛选产物克隆测序并运用相关软件进行一级结构和二级结构分析.随机挑选的19个克隆适体,根据一级结构的同源性可分为5个家族,二级结构预测以茎环(发夹)为主,这可能是适体与CsA作用的部位.CsA特异性的适体将用于酶联法、免疫荧光法等对CsA进行检测. 展开更多
关键词 环孢霉素A 适体 随机ssdna文库
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两种富集方法相结合对蓖麻毒素进行SELEX筛选研究 被引量：6
5
作者 唐吉军 谢剑炜 +1 位作者 邵宁生 沈晓书 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第1期35-37,共3页
为了获得能特异识别具有细胞毒性的蓖麻毒素蛋白寡核苷酸适配子 ,体外构建了含 4 0个随机序列全长 87nt的随机ssDNA文库 ,采用指数富集配基的系统进化 (SELEX)技术方法 ,结合微孔板和亲和树脂两种分离、富集方法 ,经过数轮筛选 ,文库与... 为了获得能特异识别具有细胞毒性的蓖麻毒素蛋白寡核苷酸适配子 ,体外构建了含 4 0个随机序列全长 87nt的随机ssDNA文库 ,采用指数富集配基的系统进化 (SELEX)技术方法 ,结合微孔板和亲和树脂两种分离、富集方法 ,经过数轮筛选 ,文库与蓖麻毒素的结合率达到了 38.5 %。结果表明 ,以亲和树脂为分离介质进行筛选 。 展开更多
关键词 指数富集配基的系统进化 蓖麻毒素 随机ssdna文库 适配子
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Cell SELEX技术筛选巨噬细胞源性泡沫细胞适配子的初步研究 被引量：4
6
作者 汪江波 李艳红 严鹏科 《中国医药科学》 2012年第24期25-28,共4页
目的利用Cell SELEX技术筛选巨噬细胞源性泡沫细胞适配子。方法通过80mg/L氧化性低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞为泡沫细胞;聚合酶链反应扩增文库;生物素-链霉亲和素磁珠分离法构建单链DNA文库;以巨噬细胞源性泡沫细胞为靶细胞,巨噬细... 目的利用Cell SELEX技术筛选巨噬细胞源性泡沫细胞适配子。方法通过80mg/L氧化性低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞为泡沫细胞;聚合酶链反应扩增文库;生物素-链霉亲和素磁珠分离法构建单链DNA文库;以巨噬细胞源性泡沫细胞为靶细胞,巨噬细胞和血管平滑肌细胞为反筛细胞,利用Cell SELEX技术筛选与巨噬细胞源性泡沫细胞结合的寡核苷酸序列,并对最后一轮筛选结果进行克隆测序。结果 PCR的退火温度对PCR产物的量有显著的影响,退火温度由65℃提高为72℃时的产物量明显增加。利用生物素-链霉亲和素磁珠分离法获得了纯度高、产量大的ssDNA文库;经过18轮筛选后,成功获得了28个与预期大小相同的ssDNA序列。结论利用Cell SELEX技术筛选出了巨噬细胞源性泡沫细胞的适配子,为研发用于动脉粥样硬化的早期无创诊断试剂和靶向治疗药物奠定了基础。 展开更多
关键词 CELL SELEX技术 巨噬细胞源性泡沫细胞 适配子 随机ssdna文库
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SELEX筛选LPS寡核苷酸适配子方法的建立 被引量：3
7
作者 杨清武 文爱清 +1 位作者 吕凤林 陈彩宇 《重庆医学》 CAS CSCD 2008年第16期1773-1775,共3页
目的建立SELEX筛选LPS的适配子方法,为后续大规模筛选奠定基础。方法在成功构建含40个随机序列的单链DNA(ssDNA)文库的基础上,优化了扩增为双链DNA(dsDNA)文库的PCR反应条件;同时对液相筛选与固液相筛选两种方法进行比较,确定最优的筛... 目的建立SELEX筛选LPS的适配子方法,为后续大规模筛选奠定基础。方法在成功构建含40个随机序列的单链DNA(ssDNA)文库的基础上,优化了扩增为双链DNA(dsDNA)文库的PCR反应条件;同时对液相筛选与固液相筛选两种方法进行比较,确定最优的筛选方法并进行4轮筛选。结果确定了扩增为双链DNA(dsDNA)文库的PCR反应的最佳条件,采用液相筛选方法经过4轮筛选,随机单链DNA(ssDNA)文库与内毒素(LPS)的结合率明显上升,CPM值与初始库相比差异有统计学意义。结论建立了SELEX筛选LPS寡核苷酸适配子的筛选方法。 展开更多
关键词 随机ssdna文库 指数富集配基的系统进化(SELEX) 寡核苷酸适配子 LPS
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