多胺氧化酶在多胺代谢中的作用 被引量：7

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作者 刘宝宝 张士璀 《鲁东大学学报（自然科学版）》 2014年第4期336-341,共6页

本文概括了精胺氧化酶和乙酰多胺氧化酶参与的主要的生化,细胞和生理过程,多胺氧化酶是黄素腺嘌呤二核苷酸包含酶,可以催化多胺和乙酰多胺的氧化,其底物的特异性和氧化产物的种类依赖于酶的来源.酵母菌的多胺氧化酶可以氧化精胺,N1-乙... 本文概括了精胺氧化酶和乙酰多胺氧化酶参与的主要的生化,细胞和生理过程,多胺氧化酶是黄素腺嘌呤二核苷酸包含酶,可以催化多胺和乙酰多胺的氧化,其底物的特异性和氧化产物的种类依赖于酶的来源.酵母菌的多胺氧化酶可以氧化精胺,N1-乙酰精胺,N1-乙酰亚精胺,然而在脊椎动物中,是由两个不同的多胺氧化酶亚家族分别承担了这些功能,即精胺氧化酶和乙酰多胺氧化酶,分别特异性地催化精胺和N1-乙酰精胺/N1-乙酰亚精胺的氧化.精胺氧化酶和乙酰多胺氧化酶高效参与多胺生物合成和降解的调节.因为多胺是细胞生长和分化的基础调节者,因此它们的体内平衡对细胞生命十分重要,而精胺氧化酶和乙酰多胺氧化酶则起到了调节体内多胺平衡的作用.精胺氧化酶和乙酰多胺氧化酶参与药物反应,细胞凋亡和应激反应,它们的异常可以改变多胺的体内平衡.多胺分解代谢的调节异常经常与包括癌症在内的几种病理状况有关. 展开更多

关键词 多胺氧化酶 多胺代谢 精胺氧化酶 乙酰多胺氧化酶

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精胺氧化酶抑制剂的筛选及抗肿瘤活性评价

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作者 杨建林 秦宇 +3 位作者 孙丽丹 吴红艳 吕亚丰 曹春雨 《华西药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期1-6,共6页

目的筛选多胺代谢关键酶精胺氧化酶小分子抑制剂,并评价其对人肺癌A549细胞的精胺氧化酶活性抑制效应、抗肿瘤作用及分子机制。方法以精胺和精胺氧化酶复合物结构为基础,用计算机辅助药物设计技术,在化学数据库中虚拟筛选获得候选的小... 目的筛选多胺代谢关键酶精胺氧化酶小分子抑制剂,并评价其对人肺癌A549细胞的精胺氧化酶活性抑制效应、抗肿瘤作用及分子机制。方法以精胺和精胺氧化酶复合物结构为基础,用计算机辅助药物设计技术,在化学数据库中虚拟筛选获得候选的小分子抑制剂。以A549细胞为肿瘤细胞模型,利用化学发光法、HPLC法分析小分子抑制剂对精胺氧化酶活性抑制及多胺含量的影响;采用MTT法、流式细胞术检测小分子抑制剂对细胞增值、细胞周期、诱导细胞凋亡的影响;在倒置荧光显微镜、透射电子显微镜下观察小分子抑制剂诱导细胞自噬小体的形成;Western blot法分析小分子抑制剂对细胞周期蛋白(Cyclin B1、p21、Cyclin D)、凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、细胞色素C)和自噬相关蛋白(LC3、P62)表达的影响。结果筛选出有效抑制精胺氧化酶活性的新型小分子抑制剂SI-1338,对精胺氧化酶的半数抑制浓度为880μmol·L^(-1)。SI-1338可有效抑制A549细胞中精胺氧化酶活性,干扰多胺代谢,减少总多胺的含量;抑制A549细胞的增殖,周期蛋白Cyclin B1、p21、Cyclin D表达增加,细胞被阻滞在G_(0)/G_(1)期;A549细胞中Bax的表达增加,Bcl-2的表达减少,细胞色素C的释放增多,凋亡细胞的数量增加;LC3-Ⅱ片段增多,P62蛋白的表达量明显减少,诱导A549细胞中自噬小体形成增加。结论筛选获得新的小分子抑制剂SI-1338。该抑制剂对A549细胞具有高效抗肿瘤效应,其分子机制可能与抑制精胺氧化酶活性、干扰多胺代谢、诱导凋亡和自噬发生相关,有望作为以多胺代谢为靶点的抗肿瘤药物先导化合物。 展开更多

关键词 多胺代谢 精胺氧化酶 小分子抑制剂 抗肿瘤活性 A549细胞 细胞周期 凋亡 自噬

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精胺氧化酶靶向调控硫氧还蛋白还原酶1促进结肠癌恶性进展

3

作者 王慧 刘超 +7 位作者 章春雪 姚懿芹 陈龙 祁悦欣 费禹翔 赵树立 胡容 杜前明 《实用肿瘤杂志》 CAS 2024年第4期317-332,共16页

目的探讨精胺氧化酶(spermine oxidase,SMOX)靶向调控硫氧还蛋白还原酶1(thioredoxin reductase 1,TR1)对结肠癌恶性进展的影响。方法收集2018年9月至2019年6月就诊于南京市第一医院的30例结肠癌患者的结肠癌组织及其癌旁组织。采用免... 目的探讨精胺氧化酶(spermine oxidase,SMOX)靶向调控硫氧还蛋白还原酶1(thioredoxin reductase 1,TR1)对结肠癌恶性进展的影响。方法收集2018年9月至2019年6月就诊于南京市第一医院的30例结肠癌患者的结肠癌组织及其癌旁组织。采用免疫组织化学染色检测组织中的SMOX表达。采用Western blot实验检测结肠癌细胞株(HCT116、SW480、DLD-1、SW620、Caco-2、HCT-15、T84和LS123)和正常结肠细胞株NCM460的SMOX表达。利用基因表达谱互作分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)网站查询SMOX在结肠癌组织与癌旁组织中的表达情况和SMOX表达水平与患者总生存的关系。采用Western blot实验检测上述细胞和组织中代谢产物亚精胺合成酶的水平。利用2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)结合流式细胞术和组织免疫荧光实验分别检测结肠细胞和组织中代谢副产物活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。选取SMOX表达水平最高的结肠癌细胞株HCT116和SW480为实验对象,构建慢病毒载体,用PLKO.1-puro-shCtrl、PLKO.1-puro-shSMOX、PLKO.1-puro-shSMOX+pcDNA3.1和PLKO.1-puro-shSMOX+pcDNA3.1-TR1分别转染细胞,分别为shCtrl组、shSMOX组、shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组。Western blot实验检测HCT116和SW480细胞shCtrl组和shSMOX组SMOX与TR1的表达情况,以及HCT116细胞shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组的TR1表达水平。利用细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测细胞增殖活力。碘化丙啶(propidium iodide,PI)单染结合流式细胞术检测肿瘤细胞周期变化。PI/异硫氰酸荧光素-膜连蛋白(PI/fluorescein isothiocyanate-Annexin V,PI/FITC-Annexin V)双染结合流式细胞术检测细胞凋亡/坏死情况。Transwell体外侵袭实验分析细胞侵袭能力。shCtrl组、shSMOX组、shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组的HCT116细胞稀释至浓度为1×107个/mL的细胞悬液分别向裸鼠右侧腋窝皮下注射0.2 展开更多

关键词 结肠癌 精胺氧化酶 硫氧还蛋白还原酶1 恶性进展

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转录组学分析鹅等级前卵泡中多胺代谢关键酶的差异表达 被引量：4

4

作者 孙永峰 武惠岩 +3 位作者 刘璐璐 杨辉 柳俭强 隋玉健 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期352-357,共6页

为了解多胺代谢关键酶亚精胺合成酶(spermidine synthase,SRM)、精胺合成酶(spermine synthas,SMS)和精胺氧化酶(spermine oxidase,SMOX)在鹅等级前卵泡中的表达情况,本研究基于高通量测序技术对鹅等级前卵泡进行转录组测序分析,并通过... 为了解多胺代谢关键酶亚精胺合成酶(spermidine synthase,SRM)、精胺合成酶(spermine synthas,SMS)和精胺氧化酶(spermine oxidase,SMOX)在鹅等级前卵泡中的表达情况,本研究基于高通量测序技术对鹅等级前卵泡进行转录组测序分析,并通过荧光定量PCR对结果进行验证。通过FPKM值计算分析,这3个基因在鹅等级前卵泡中均有表达,且随着卵泡的发育,SRM和SMS的表达呈现先降低后增加再降低的趋势,在初级卵泡中的表达量达到最高值,在中白卵泡中的表达量最低;SMOX的表达则呈现先增加后降低的趋势,初级卵泡中的表达量最低,中白卵泡中的表达量最高。荧光定量PCR结果与转录组测序结果基本相同。结果证实SRM和SMS对卵泡的发育有促进作用,而SMOX可能参与卵泡闭锁过程。 展开更多

关键词 鹅 转录组测序 等级前卵泡 多胺 亚精胺合成酶 精胺合成酶 精胺氧化酶

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人精胺氧化酶的原核表达及多克隆抗体制备 被引量：3

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作者 曹春雨 韩钰 +1 位作者 任玉珊 王艳林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期920-923,共4页

目的:克隆、原核表达有酶活性的重组人精胺氧化酶(SMO)蛋白,并制备兔抗人SMO多克隆抗体。方法:采用RT-PCR法从人非小细胞肺腺癌A549细胞株总RNA中克隆人精胺氧化酶cDNA,构建SMO原核表达质粒pET-15b/SMO。将SMO原核表达质粒转化E.coli的B... 目的:克隆、原核表达有酶活性的重组人精胺氧化酶(SMO)蛋白,并制备兔抗人SMO多克隆抗体。方法:采用RT-PCR法从人非小细胞肺腺癌A549细胞株总RNA中克隆人精胺氧化酶cDNA,构建SMO原核表达质粒pET-15b/SMO。将SMO原核表达质粒转化E.coli的BL21(DE3)菌并使用IPTG诱导重组SMO表达。表达的蛋白产物经Ni-NTA亲和层析纯化、透析复性后,化学荧光法测定其酶活性。使用制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、纯化重组人SMO蛋白,以此蛋白作为抗原皮内接种日本大耳白兔来制备抗人SMO多克隆抗体。分别以ELISA、Westernblot和免疫细胞化学法检测兔血清中抗体的滴度和抗原特异性。结果:纯化并透析复性后的重组人SMO蛋白具备快速氧化精胺的酶活性。用此重组蛋白制备的抗体具有较高抗体滴度和针对人SMO的特异性。结论:建立了人SMO原核表达、纯化系统,获得了有酶活性的高纯度人SMO蛋白并成功制备了兔抗人SMO的多克隆抗体,为以SMO为靶点的抗肿瘤基础和临床研究提供了有力的研究工具。 展开更多

关键词 精胺氧化酶 原核表达 抗体制备

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幽门螺杆菌相关胃癌与多胺代谢 被引量：3

6

作者 李论 陈鹏飞 +1 位作者 朱俊垚 王艳林 《生命的化学》 CAS CSCD 2018年第6期787-791,共5页

幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)选择性地在人的胃黏膜中定植,是引发胃癌的最强危险因素之一。多胺是一类广泛存在于真核细胞中带高密度正电荷的烷基类小分子化合物,参与细胞增殖、分化、凋亡等重要的生理过程,多种疾病... 幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)选择性地在人的胃黏膜中定植,是引发胃癌的最强危险因素之一。多胺是一类广泛存在于真核细胞中带高密度正电荷的烷基类小分子化合物,参与细胞增殖、分化、凋亡等重要的生理过程,多种疾病的发生发展与多胺代谢紊乱相关。近期研究发现,H.pylori感染能诱导宿主胃黏膜上皮细胞和巨噬细胞中多胺代谢异常。特别是该菌对多胺代谢途径中的关键酶ARG2(arginase 2,精氨酸酶2)、ODC(ornithine decarboxylase,鸟氨酸脱羧酶)和SMO(soermine oxidase,精胺氧化酶)的激活作用,与H. pylori免疫逃逸,慢性炎症维持、DNA损伤和胃癌的发生发展密切相关,提示多胺代谢途径可能成为H. pylori相关胃癌防治的新靶点。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 精氨酸酶 鸟氨酸脱羧酶 精胺氧化酶 胃癌

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精胺氧化酶与炎症相关肿瘤 被引量：2

7

作者 吕亚丰 王艳林 《生命的化学》 CAS CSCD 2015年第3期392-396,共5页

多胺是一类带正电荷的烷基类小分子化合物,广泛参与胚胎发育、细胞增殖和分化以及细胞凋亡等重要的生理过程。精胺氧化酶(spermine oxidase,SMO)是一种参与多胺降解代谢的多胺氧化酶,在维持细胞内多胺的稳态水平中发挥重要作用。新近研... 多胺是一类带正电荷的烷基类小分子化合物,广泛参与胚胎发育、细胞增殖和分化以及细胞凋亡等重要的生理过程。精胺氧化酶(spermine oxidase,SMO)是一种参与多胺降解代谢的多胺氧化酶,在维持细胞内多胺的稳态水平中发挥重要作用。新近研究发现,在多种慢性炎症环境中,精胺氧化酶表达持续上调,由此导致细胞内活性氧含量升高和DNA损伤,且这一过程与多种肿瘤的发生密切相关。本文简要综述精胺氧化酶的基因结构、生化特征及其与炎症相关肿瘤发生关系的研究进展。 展开更多

关键词 精胺氧化酶 炎症 肿瘤

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siRNA抑制精胺氧化酶的表达可降低人A549肺癌细胞对多胺类似物CPENSpm的敏感性 被引量：2

8

作者 韩钰 任玉珊 +1 位作者 任东明 王艳林 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期466-470,共5页

目的研究精胺氧化酶(spermine oxidase,SMO)基因表达抑制对多胺类似物CPENSpm抗瘤活性的影响。方法用siRNA技术获得SMO基因表达抑制的人A549肺癌细胞株,QT-RT-PCR法和酶活性分析法用于鉴定SMO基因的表达水平,MTT法检测细胞的存活率,DNA... 目的研究精胺氧化酶(spermine oxidase,SMO)基因表达抑制对多胺类似物CPENSpm抗瘤活性的影响。方法用siRNA技术获得SMO基因表达抑制的人A549肺癌细胞株,QT-RT-PCR法和酶活性分析法用于鉴定SMO基因的表达水平,MTT法检测细胞的存活率,DNA降解分析和流式细胞/亚凋亡峰分析检测细胞凋亡状况。结果成功获得SMO基因表达抑制的人A549肺癌细胞株。用SMO-siRNA质粒转染的细胞中,SMO mRNA和酶活性的基础水平分别降低53%和14%。用10μmol·L-1 CPENSpm处理对照细胞24h可使SMO mRNA和酶活性分别升高10倍和20倍,但在SMO-siRNA质粒转染的细胞中,这种药物对SMO的表达诱导被抑制。细胞增殖实验发现,SMO表达抑制的细胞对CPENSpm(0～20μmol·L-1)的药物敏感性低于对照细胞。细胞凋亡分析发现,与对照细胞相比,CPENSpm诱导SMO表达,抑制细胞发生细胞凋亡的能力明显减弱。结论CPENSpm诱导肿瘤细胞内SMO高表达可能是其抗癌药理活性的分子基础之一。 展开更多

关键词 精胺氧化酶 siRNA 多胺 多胺类似物 肺癌细胞 药物敏感性

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SMS、SRM和SMOX基因mRNA在鹅等级前卵泡中的表达

9

作者 孙永峰 武惠岩 +3 位作者 王子遒 路洪涛 李书哲 隋玉健 《畜牧与兽医》 北大核心 2017年第11期5-9,共5页

为研究精胺、亚精胺和腐胺对鹅等级前卵泡发育的作用,通过荧光定量PCR对其合成代谢关键酶亚精胺合成酶(spermidine synthase,SRM),精胺合成酶(spermine synthas,SMS)和精胺氧化酶(spermine oxidase,SMOX)基因mRNA在鹅等级前卵泡中的表... 为研究精胺、亚精胺和腐胺对鹅等级前卵泡发育的作用,通过荧光定量PCR对其合成代谢关键酶亚精胺合成酶(spermidine synthase,SRM),精胺合成酶(spermine synthas,SMS)和精胺氧化酶(spermine oxidase,SMOX)基因mRNA在鹅等级前卵泡中的表达情况进行检测分析。结果发现:SMS,SRM和SMOX基因mRNA在鹅等级前卵泡中均有表达,通过差异分析发现SMS基因mRNA在PE等级卵泡中的表达量最高,且表达量显著高于其他4个等级卵泡(P<0.05);而在SY,L,M和S这4个等级卵泡中表达量差异不显著(P>0.05)。SRM基因mRNA在PE和L等级卵泡中的表达量较高,差异不显著(P>0.05),但显著高于其他3个等级卵泡(P<0.05);而在SY,M和S等级卵泡中SRM基因mRNA的表达量差异不显著(P>0.05)。SMOX基因mRNA在5个等级卵泡中表达差异显著(P<0.05)。 展开更多

关键词 精胺合成酶 亚精胺合成酶 精胺氧化酶 等级前卵泡 荧光定量PCR

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精胺氧化酶高表达对人宫颈癌Hela细胞生长和药物敏感性的影响 被引量：1

10

作者 韩钰 杨建林 +2 位作者 张军 夏燕 王艳林 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期34-38,共5页

目的研究精胺氧化酶(SMO)稳定性高表达对人宫颈癌Hela细胞生长和药物敏感性的影响。方法含SMO全长编码序列的真核表达质粒用脂质体法稳定转染人宫颈癌Hela细胞后,QT-RT-PCR和酶活性分析法筛选SMO高表达的细胞株。MTS法检测细胞的增殖和... 目的研究精胺氧化酶(SMO)稳定性高表达对人宫颈癌Hela细胞生长和药物敏感性的影响。方法含SMO全长编码序列的真核表达质粒用脂质体法稳定转染人宫颈癌Hela细胞后,QT-RT-PCR和酶活性分析法筛选SMO高表达的细胞株。MTS法检测细胞的增殖和对抗癌药物的敏感性。流式细胞分析法检测细胞周期和细胞凋亡。结果成功获得SMO稳定高表达的人Hela宫颈癌细胞株。MTS分析发现,SMO高表达细胞的生长速度显著性高于对照细胞,且对多胺类似物抗癌药物CPENSpm的敏感性明显下降。与对照细胞相比,CPENSpm诱导SMO高表达细胞发生细胞凋亡的能力明显减弱。结论 SMO稳定性高表达可降低宫颈癌细胞对抗癌药物CPENSpm的敏感性。 展开更多

关键词 精胺氧化酶 宫颈癌 多胺类似物 药物敏感性

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小鼠精胺氧化酶基因启动子结构和功能研究 被引量：1

11

作者 汤桂成 韩钰 王艳林 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期14-17,共4页

目的:克隆和鉴定小鼠精胺氧化酶(mSMO)启动子DNA序列。方法:用Trizol试剂法从小鼠成纤维细胞中提取总RNA,应用5’-RACE法获得mSMO的转录起始位点;巢式PCR方法克隆含有mSMO启动子的DNA序列,并由此构建5’端系列截短的mSMO启动子荧光素酶... 目的:克隆和鉴定小鼠精胺氧化酶(mSMO)启动子DNA序列。方法:用Trizol试剂法从小鼠成纤维细胞中提取总RNA,应用5’-RACE法获得mSMO的转录起始位点;巢式PCR方法克隆含有mSMO启动子的DNA序列,并由此构建5’端系列截短的mSMO启动子荧光素酶报告质粒;将报告质粒瞬时转染Cos7细胞后,用荧光素酶分析法测定启动子活性。结果:确定mSMO基因至少有6个转录起始位点(+1,+4,+27,+31,+51,和+63),且均定位于外显子1中。克隆获得mSMO基因转录起始位点上游大约2.1kb的DNA片断,以此片段为基础构建了11个5’端系列截短的启动子报告质粒。报告基因分析证实,该上游DNA片段具有启动子活性,截短至-615和-176bp时,获得2个启动子活性峰值,截短至-373bp时启动子活性最低。结论:mSMO基因含有多个转录起始位点,其上游-176～+124bp为mSMO核心启动子区,-615～-176bp区为重要的转录调控区。 展开更多

关键词 多胺 精胺氧化酶 启动子 转录调控

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小鼠精胺氧化酶的原核表达与鉴定

12

作者 韩钰 王艳林 《生物技术通讯》 CAS 2007年第1期44-46,共3页

目的:原核表达和分离纯化小鼠精胺氧化酶(SMO)。方法:采用RT-PCR法从小鼠胚胎干细胞(ES细胞)RNA中克隆小鼠SMOcDNA,构建SMO原核表达质粒并转染大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导,将表达的小鼠SMO重组蛋白在变性条件下经Ni-NTA树脂亲和... 目的:原核表达和分离纯化小鼠精胺氧化酶(SMO)。方法:采用RT-PCR法从小鼠胚胎干细胞(ES细胞)RNA中克隆小鼠SMOcDNA,构建SMO原核表达质粒并转染大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导,将表达的小鼠SMO重组蛋白在变性条件下经Ni-NTA树脂亲和层析纯化和透析复性。结果:在大肠杆菌中高表达出小鼠SMO重组蛋白;纯化并透析复性后的重组SMO具备快速氧化特异性底物精胺的酶活性。结论:建立了原核表达和纯化有活性小鼠SMO的实验方法。 展开更多

关键词 精胺氧化酶 多胺氧化酶 原核表达 蛋白纯化

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抗人精胺氧化酶单克隆抗体的制备与鉴定

13

作者 李春红 杨建林 +2 位作者 韩钰 蔡富强 王艳林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1286-1290,共5页

目的:制备小鼠抗人精胺氧化酶(SMO)单克隆抗体(mAb),并验证其在Western blot,免疫组织化学等方法中的应用价值。方法:用pET-15b/SMO质粒转化BL2(DE3)后,IPTG诱导表达带6×His标签的SMO重组蛋白并用Ni-NTA树脂亲和层析纯化。用SMO重... 目的:制备小鼠抗人精胺氧化酶(SMO)单克隆抗体(mAb),并验证其在Western blot,免疫组织化学等方法中的应用价值。方法:用pET-15b/SMO质粒转化BL2(DE3)后,IPTG诱导表达带6×His标签的SMO重组蛋白并用Ni-NTA树脂亲和层析纯化。用SMO重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞杂交融合,获得能高效合成和分泌抗SMO mAb的杂交瘤细胞株。所得抗体的特异性和效价用ELISA和Western blot法以及免疫组织化学技术检测。结果:成功建立了稳定分泌鼠抗人SMO的mAb杂交瘤细胞株,获得的mAb效价高、特异性强,可用于ELISA,Western blot,免疫组织化学等分析技术。结论:成功制备出高特异性并能用于多种生物分析技术的SMO mAb。 展开更多

关键词 精胺氧化酶 重组蛋白 单克隆抗体

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新型精胺氧化酶抑制剂SI-4650对人卵巢癌SKVO-3细胞增殖和上皮细胞间质化的影响 被引量：3

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作者 杨建林 田家俊 +3 位作者 张浩 陈倩影 吕亚丰 曹春雨 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期175-180,192,共7页

目的:研究新型精胺氧化酶(SMO)小分子抑制剂SI-4650对人卵巢癌SKVO-3细胞增殖和上皮细胞间质化影响及其分子机制。方法:体外培养SKVO-3细胞,以未加药作为对照组,30、60μmol/L SI-4650处理48 h细胞为实验组,每组设3个复孔,检测SI-4650对... 目的:研究新型精胺氧化酶(SMO)小分子抑制剂SI-4650对人卵巢癌SKVO-3细胞增殖和上皮细胞间质化影响及其分子机制。方法:体外培养SKVO-3细胞,以未加药作为对照组,30、60μmol/L SI-4650处理48 h细胞为实验组,每组设3个复孔,检测SI-4650对SKVO-3细胞内SMO的酶活性及多胺含量、酶促反应产物活性氧水平的影响,对细胞增殖、周期、线粒体膜电位的作用,以及对细胞凋亡、侵袭和迁移能力的影响,同时检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase3以及上皮细胞间质化(EMT)相关蛋白E-Cad、N-Cad、Vimentin、MMP-2、MMP-9表达。结果:与对照组相比,实验组SKVO-3细胞中SI-4650浓度增加,明显抑制SKVO-3细胞内SMO酶活性(P<0.01)、减少SMO酶促反应产物活性氧水平(P<0.01)、降低细胞内总多胺含量(P<0.01)。SI-4650高效抑制SKVO-3细胞生长(P<0.01),实验组细胞生长抑制率分别为32.27%、47.31%;将SKVO-3细胞阻滞在S期(P<0.01),实验组细胞Bax表达和Caspase3活化剪切增加,Bcl-2表达减少,线粒体膜电位下降,凋亡细胞比率增加至31.41%、43.51%;同时,实验组E-cad表达显著增加,N-cad、Vimentin表达均明显减少,合成分泌MMP-2、MMP-9减少,干扰了SKVO3细胞EMT进程,降低肿瘤细胞侵袭、迁移能力(P<0.01)。结论:SI-4650对人卵巢癌SKVO-3细胞具有杀伤和抑制肿瘤细胞侵袭、迁移的抗肿瘤活性,其机制可能与干扰多胺代谢、诱导细胞S周期阻滞和线粒体途径细胞凋亡以及干扰细胞EMT进程相关。 展开更多

关键词 精胺氧化酶抑制剂 人卵巢癌细胞 细胞培养 细胞增殖 凋亡 侵袭迁移

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新型精胺氧化酶抑制药对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡和自噬的影响

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作者 李玉玲 杨建林 +4 位作者 崔芝 王静 吴红艳 吕亚丰 曹春雨 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第16期2343-2347,共5页

目的研究新型精胺氧化酶抑制药SI-4650对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡和自噬的影响。方法将SGC-7901细胞分为空白组(正常培养)、低、高剂量实验组(40、80μmol·L^(-1)SI-4650)、自噬抑制药3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(2.5 mmol·L^(... 目的研究新型精胺氧化酶抑制药SI-4650对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡和自噬的影响。方法将SGC-7901细胞分为空白组(正常培养)、低、高剂量实验组(40、80μmol·L^(-1)SI-4650)、自噬抑制药3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(2.5 mmol·L^(-1)3-MA)、3-MA+低、高剂量实验组(2.5 mmol·L^(-1)3-MA+40、80μmol·L^(-1)SI-4650),均处理48 h。用化学发光法检测细胞中精胺氧化酶(SMO)活性,用细胞计数8(CCK8)法和流式细胞术检测细胞增殖和周期,用碘化丙啶(PI)/异硫氰酸荧光素(FITC)-Annexin V双染法检测凋亡细胞情况,用蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白微管结合蛋白轻链-3Ⅰ/Ⅱ(LC3-Ⅰ/Ⅱ)表达水平。结果空白组与低、高剂量实验组中人胃癌SGC-7901细胞中相对SMO酶活性分别为(7293±195)、(4506±195)、(989±115)RLU·(mg·s)^(-1),S期细胞比例分别为(28.83±1.17)%、(32.23±1.21)%、(36.50±0.73)%,低、高剂量实验组与空白组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。空白组与低、高剂量实验组以及3-MA组与3-MA+低剂量实验组、3-MA+高剂量实验组中可见,细胞生长抑制率分别为(0.00±2.09)%、(43.61±2.29)%、(52.16±2.49)%、(1.81±4.43)%、(27.50±1.88)%、(34.22±1.07)%,细胞凋亡率分别为(7.01±2.09)%、(13.16±1.59)%、(25.35±2.32)%、(7.13±2.09)%、(8.61±1.59)%、(11.35±2.32)%,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值分别为0.01±0.03、0.58±0.04、2.73±0.03、0.03±0.01、0.06±0.02、0.23±0.03。低、高剂量实验组与空白组相比,低、高剂量实验组与对应浓度3-MA+低、高剂量实验组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论SI-4650能高效抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,机制可能与干扰多胺代谢、阻滞细胞周期S期和诱导细胞自噬、凋亡相关。 展开更多

关键词 精胺氧化酶抑制药 人胃癌SGC-7901细胞 增殖 凋亡 自噬

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精胺氧化酶抑制剂SI-4650抑制人恶性黑素瘤A375细胞增殖的分子机制研究 被引量：2

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作者 周游 王艳林 +2 位作者 曹春雨 孙丽丹 杨建林 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期722-728,共7页

目的探讨精胺氧化酶抑制剂SI-4650对人恶性黑素瘤A375细胞增殖的影响及其机制。方法取0、10、20、40、80、160μmol/LSI-4650作用A375细胞24、48、72h,MTT法分析SI-4650对细胞增殖抑制率的影响。根据增殖活性,筛选出浓度分别为0(对照组)... 目的探讨精胺氧化酶抑制剂SI-4650对人恶性黑素瘤A375细胞增殖的影响及其机制。方法取0、10、20、40、80、160μmol/LSI-4650作用A375细胞24、48、72h,MTT法分析SI-4650对细胞增殖抑制率的影响。根据增殖活性,筛选出浓度分别为0(对照组)、40、80μmol/L的SI-4650处理A375细胞48h,化学发光法检测细胞内精胺氧化酶活性;高效液相色谱法(HPLC)检测细胞内多胺含量;流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡;Western印迹分析凋亡标志蛋白Bax、c-PARP,凋亡抑制蛋白Bcl-2和自噬标志蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达。多组均数比较采用单因素方差分析,组间比较采用SNK-q检验。结果不同浓度、不同处理时间的SI-4650对A375细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(F=977.23、5.16,均P<0.001)。对照组、40μmol/L组、80μmol/L组A375细胞精胺氧化酶活性(F=242.58,P<0.001)、精脒和总多胺含量(F=338.02、2931.07,P<0.001)、S期细胞比例(F=31.66,P<0.001)、凋亡细胞比例(F=100.68,P<0.001)、凋亡相关蛋白Bax、c-PARP、Bcl-2水平(F=35.51、730.11、27.54,P<0.001)、自噬标志蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ水平(F=35.87、425.04,P<0.001)差异均有统计学意义;40μmol/L组、80μmol/L组精胺氧化酶活性(发光强度61432.85±2620.92、43337.35±1221.25)低于对照组,精脒(1.97±0.007、1.88±0.006)和总多胺(3.18±0.03、2.81±0.01)含量低于对照组,S期细胞比例(27.61%±2.05%、31.58%±1.45%)高于对照组,凋亡细胞比例(7.59%±0.63%、20.14%±2.27%)高于对照组,凋亡标志蛋白Bax(0.83±0.12、1.18±0.16)、c-PARP(0.32±0.002、0.79±0.035)和自噬标志蛋白Beclin-1(1.00±0.007、1.14±0.003)、LC3-Ⅱ(0.31±0.001、0.98±0.003)水平高于对照组,凋亡抑制蛋白Bcl-2水平(0.65±0.09、0.12±0.002)低于对照组(均P<0.05)。结论SI-4650能抑制A375细胞增殖,其机制可能与干扰多胺代谢和诱导细胞周期阻滞、细胞凋亡和自噬相关。 展开更多

关键词 黑色素瘤 精胺 精脒 细胞增殖 细胞凋亡 自噬 细胞系 肿瘤 精胺氧化酶抑制剂

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新型精胺氧化酶抑制剂SI-4650对人恶性黑素瘤A375细胞侵袭和迁移的抑制作用研究 被引量：3

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作者 黄娇娇 周游 +5 位作者 王艳林 曹春雨 孙丽丹 刘钰妮 王世恩 杨建林 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期800-802,837,共4页

目的研究新型精胺氧化酶抑制剂-SI-4650对人恶性黑素瘤A375细胞侵袭迁移的影响及其作用机制。方法体外培养A375细胞,将A375细胞分为3组:空白对照组(正常培养)和低、高2个浓度实验组(SI-4650:40,80μmol·L-1),均培养48 h。Transwel... 目的研究新型精胺氧化酶抑制剂-SI-4650对人恶性黑素瘤A375细胞侵袭迁移的影响及其作用机制。方法体外培养A375细胞,将A375细胞分为3组:空白对照组(正常培养)和低、高2个浓度实验组(SI-4650:40,80μmol·L-1),均培养48 h。Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白质印迹法检测上皮-钙黏素(E-cadherin)、神经-钙黏素(N-cadherin)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达水平。结果空白对照组与低、高2个浓度实验组的迁移数分别为268±35,86±26和32±19;这3组的侵袭穿膜细胞数分别为234±28,32±15和9±5;这3组的E-cadherin蛋白相对表达量分别为1.00±0.06,1.55±0.33和3.34±0.50;这3组的N-cadherin蛋白相对表达量分别为1.00±0.04,0.42±0.06和0.15±0.03;这3组的MMP2蛋白相对表达量分别为0.74±0.03,0.63±0.04和0.34±0.01。上述指标:低、高2个浓度实验组与空白对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.001)。结论 SI-4650可高效抑制人恶性黑素瘤A375细胞迁移和侵袭,其机制可能与影响A375细胞上皮-间质转化进程相关。 展开更多

关键词 精胺氧化酶抑制剂 A375细胞 上皮-间质转化 侵袭 迁移

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新型精胺氧化酶小分子抑制剂SI-4650抗人骨肉瘤活性及分子机制研究 被引量：3

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作者 周游 王艳林 +2 位作者 孙丽丹 曹春雨 杨建林 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期454-462,共9页

SI-4650是本实验室新近发现的一种新型精胺氧化酶(spermine oxidase, SMO)小分子抑制剂,本研究的目的是进一步探究SI-4650对人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移能力的影响及其分子机制。研究利用化学发光法和高效液相色谱法分析SI-4650对143B... SI-4650是本实验室新近发现的一种新型精胺氧化酶(spermine oxidase, SMO)小分子抑制剂,本研究的目的是进一步探究SI-4650对人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移能力的影响及其分子机制。研究利用化学发光法和高效液相色谱法分析SI-4650对143B细胞中SMO活性的影响; DIOC6(3)探针染色/流式细胞术分析细胞中活性氧的堆积水平; MTT法和流式细胞术检测SI-4650对细胞增殖和周期的影响; Transwell法和Western blot分析细胞迁移相关蛋白的表达; PI/FITC-Annexin V双染、倒置荧光显微镜观察和Western blot法分析细胞凋亡和自噬。结果显示,SI-4650可显著性抑制人骨肉瘤143B细胞内SMO酶活性,高效抑制143B细胞的增殖和迁移能力,并引起S期周期阻滞,其机制可能与干扰多胺代谢、活化线粒体介导的细胞凋亡途径和引起自噬性死亡相关。上述研究结果提示,SI-4650具有用于人骨肉瘤临床治疗的潜在价值。 展开更多

关键词 多胺代谢 精胺氧化酶抑制剂 人骨肉瘤细胞 细胞增殖 迁移 凋亡 自噬

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