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Photobacterium sp.QH氨肽酶的基因克隆及其序列、酶学性质分析
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作者 武翠玲 万兵 +3 位作者 李钰娜 钟妞妞 周静 裴晋红 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第10期1017-1021,1027,共6页
目的克隆盐湖菌株Photobacterium sp.QH(Ps sp.QH)氨肽酶的基因,并对其进行序列及酶学性质分析。方法从青海盐湖采集水样,筛选Ps sp.QH菌株,进行16S rRNA分子生物学测定。通过硫酸铵沉淀、阴离子交换层析、凝胶过滤层析法从筛选菌株的... 目的克隆盐湖菌株Photobacterium sp.QH(Ps sp.QH)氨肽酶的基因,并对其进行序列及酶学性质分析。方法从青海盐湖采集水样,筛选Ps sp.QH菌株,进行16S rRNA分子生物学测定。通过硫酸铵沉淀、阴离子交换层析、凝胶过滤层析法从筛选菌株的发酵液中纯化氨肽酶,同时对其进行质谱分析,基因克隆及酶学性质分析。结果获得的菌株Ps sp.QH与Photobacterium halotolerans为同一属。该菌株分泌的氨肽酶属于金属螯合氨肽酶M28家族,全基因序列长1 527 bp,共编码508个氨基酸,预测其全酶分子相对分子质量为55 900,氨基酸序列与Photobacterium halotolerans氨肽酶(KKC99795.1)同源性达98%。该氨肽酶在50℃时酶活最高,40~50℃及pH 8.5时稳定性较好;Co^(2+)对其有激活作用,Mg^(2+)、Mn^(2+)、Zn^(2+)、Ca^(2+)、Fe^(2+)及Cu^(2+)对其有不同程度的抑制作用;该酶在1~3 mol/L的Na Cl溶液中仍保持较高活性。结论 Ps sp.QH分泌的氨肽酶对高盐有一定的耐受性,具有潜在的工业应用价值。 展开更多
关键词 Photobacterium sp.qh 氨肽酶 基因克隆 酶学性质 质谱分析
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