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耐热α-淀粉酶的筛选、基因克隆和酶学性质分析 被引量：2
1
作者 廖思明 孙靓 +6 位作者 王青艳 申乃坤 朱婧 黄桂媛 黄纪民 陈东 黄日波 《广西科学》 CAS 2017年第1期92-99,共8页
【目的】筛选耐热α-淀粉酶并实现异源表达,同时分析其酶学性质特征。【方法】以M9培养基加上可溶性淀粉作为选择性分离培养基,从腾冲火山温泉土壤中筛选到产淀粉酶的菌株Anoxybacillus sp.GXS-3。根据淀粉酶氨基酸保守序列,设计引物进... 【目的】筛选耐热α-淀粉酶并实现异源表达,同时分析其酶学性质特征。【方法】以M9培养基加上可溶性淀粉作为选择性分离培养基,从腾冲火山温泉土壤中筛选到产淀粉酶的菌株Anoxybacillus sp.GXS-3。根据淀粉酶氨基酸保守序列,设计引物进行PCR扩增,然后对目标序列进行步移扩增,获得淀粉酶基因AmyGX。将AmyGX与表达载体pQE30连接,导入大肠杆菌M15中表达,对重组酶进行分离纯化和酶学性质分析。【结果】AmyGX基因长1 515 bp,编码505个氨基酸残基,前23个氨基酸残基为信号肽序列;重组质粒pQE30-AmyGX编码的蛋白分子量为58.04kDa,对可溶性淀粉催化水解反应的最适温度为60℃,最适pH值为8.0,V_(max)、K_m值分别为0.19U/mg、3.14mg/mL,热半失活温度T_(50)^(30)值为65.2℃;Zn^(2+)、Cu^(2+)、Co^(2+)、Fe^(3+)、Ba^(2+)对该酶具有明显的抑制作用,Na^+、K^+对该酶有激活作用,Mg^(2+)、Ca^(2+)的影响则不明显。【结论】AmyGX是一种中等耐温碱性酶,在造纸、洗涤剂生产和有毒废弃物去除等方面具有潜在的应用前景。 展开更多
关键词 ANOXYBACILLUS sp.gxs-3菌株 重组淀粉酶 AmyGX 克隆与表达 酶学性质
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