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中性粒细胞胞外诱捕网通过上调DU145人前列腺癌细胞IL-8表达促进前列腺癌细胞增殖、 侵袭及迁移
被引量：
3
1
作者
罗后宙
陈国强
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第3期261-267,共7页
目的研究中性粒细胞胞外诱捕网(NET)对人前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其相关机制。方法收集28例前列腺癌患者肿瘤组织,免疫组织化学染色法检测肿瘤及癌旁组织中白细胞介素8(IL-8)、淋巴细胞抗原6G(LY6G)、瓜氨酸化组蛋白H3...
目的研究中性粒细胞胞外诱捕网(NET)对人前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其相关机制。方法收集28例前列腺癌患者肿瘤组织,免疫组织化学染色法检测肿瘤及癌旁组织中白细胞介素8(IL-8)、淋巴细胞抗原6G(LY6G)、瓜氨酸化组蛋白H3(H3CIT)的表达情况。提取患者外周血中性粒细胞,体外用佛波酯(PMA)刺激形成NET。将纯化后的NET与DU145人前列腺癌细胞共孵育,通过核糖核酸测序(RNA-seq)检测NET刺激后DU145细胞上调的基因,并采用实时定量PCR和Western blot法进行验证。使用注释、可视化和整合发掘数据库(DAVID)对上调基因进行基因与基因组百科全书(KEGG)和基因本体(GO)分析。采用CCK-8法检测DU145细胞增殖能力,Transwell^(TM)实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力。敲低DU145细胞IL-8表达后,再次检测DU145细胞增殖、侵袭和迁移能力的改变情况。结果肿瘤组织IL-8、LY6G、H3CIT表达水平明显高于癌旁组织。NET刺激后,DU145细胞IL-8等638个基因表达上调,这些基因与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路以及细胞增殖、侵袭功能相关。NET能促进DU145细胞的增殖、侵袭和迁移。沉默IL-8后,NET对DU145细胞的促增殖、侵袭和迁移能力下降。结论NET通过上调DU145细胞IL-8的表达,促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移。
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关键词
中性粒细胞胞外诱捕网(NET)
前列腺癌
DU145细胞
小干扰
rna
下载PDF
职称材料
重组伪狂犬病病毒介导的siRNA对高致病性PRRSVN蛋白基因表达的抑制作用
被引量：
2
2
作者
曹素芳
王岩
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第8期1142-1149,1153,共9页
构建表达HP-PRRSV河南分离株HN1N蛋白基因的siRNA重组伪狂犬病病毒3株,将其感染PK-15细胞,在细胞水平上评价重组伪狂犬病病毒介导的siRNA对N蛋白表达的抑制效果。PCR扩增带CMV-siRNA-poly(A)片段和新霉素基因,通过酶切将CMV-siRNA-poly...
构建表达HP-PRRSV河南分离株HN1N蛋白基因的siRNA重组伪狂犬病病毒3株,将其感染PK-15细胞,在细胞水平上评价重组伪狂犬病病毒介导的siRNA对N蛋白表达的抑制效果。PCR扩增带CMV-siRNA-poly(A)片段和新霉素基因,通过酶切将CMV-siRNA-poly(A)片段和新霉素基因分别插入伪狂犬病病毒转移载体pUSKBH中,构建重组伪狂犬病病毒通用转移载体pUsiRNA。分别用BamHⅠ和HindⅢ酶切pUsiRNA,回收后与HPPRRSV河南分离株HN1N蛋白基因的3个siRNA分子连接,构建表达N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒表达载体。将鉴定正确的重组伪狂犬病病毒表达载体与伪狂犬病病毒DNA共转染PK-15细胞,经同源重组及噬斑纯化获得表达N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒株,应用PCR及Southern blot鉴定重组病毒。将HN1株N蛋白基因的真核表达质粒pAcGFP1-N转染PK-15,经筛选获得稳定表达N蛋白基因的细胞。将鉴定正确的表达N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒接种于稳定表达N蛋白基因的细胞,利用绿色荧光蛋白基因及半定量RT-PCR检测重组伪狂犬病病毒介导的N蛋白基因siRNA对N蛋白表达的抑制效果。结果显示,PCR扩增到的CMV-siRNA-poly(A)片段约为0.7kb,新霉素基因约1.5kb。经酶切、PCR及测序鉴定,构建了表达siRNA的通用伪狂犬病病毒转移载体pUsiRNA。经PCR及Southern blot检测,获得了3株表达HP-PRRSV河南分离株HN1N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒gG-/siRNAN1、gG-/siRNAN2和gG-/siRNAN3;经荧光显微镜观察和半定量RT-PCR检测表明,重组伪狂犬病病毒介导的N蛋白基因siRNA能够显著抑制N蛋白在PK-15细胞中表达,其中gG-/siRNAN2抑制效果最好。这为深入研究N蛋白基因siRNA抑制HP-PRRSV复制奠定基础,并为HP-PRRSV的防制提供新的思路。
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关键词
高致病性
PRRS
N蛋白基因
sirna
重组伪狂犬病病毒
原文传递
题名
中性粒细胞胞外诱捕网通过上调DU145人前列腺癌细胞IL-8表达促进前列腺癌细胞增殖、 侵袭及迁移
被引量：
3
1
作者
罗后宙
陈国强
机构
三亚中心医院泌尿外科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第3期261-267,共7页
基金
国家自然科学基金(81660253)
海南省卫生计生行业科研项目(19A300105)。
文摘
目的研究中性粒细胞胞外诱捕网(NET)对人前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其相关机制。方法收集28例前列腺癌患者肿瘤组织,免疫组织化学染色法检测肿瘤及癌旁组织中白细胞介素8(IL-8)、淋巴细胞抗原6G(LY6G)、瓜氨酸化组蛋白H3(H3CIT)的表达情况。提取患者外周血中性粒细胞,体外用佛波酯(PMA)刺激形成NET。将纯化后的NET与DU145人前列腺癌细胞共孵育,通过核糖核酸测序(RNA-seq)检测NET刺激后DU145细胞上调的基因,并采用实时定量PCR和Western blot法进行验证。使用注释、可视化和整合发掘数据库(DAVID)对上调基因进行基因与基因组百科全书(KEGG)和基因本体(GO)分析。采用CCK-8法检测DU145细胞增殖能力,Transwell^(TM)实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力。敲低DU145细胞IL-8表达后,再次检测DU145细胞增殖、侵袭和迁移能力的改变情况。结果肿瘤组织IL-8、LY6G、H3CIT表达水平明显高于癌旁组织。NET刺激后,DU145细胞IL-8等638个基因表达上调,这些基因与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路以及细胞增殖、侵袭功能相关。NET能促进DU145细胞的增殖、侵袭和迁移。沉默IL-8后,NET对DU145细胞的促增殖、侵袭和迁移能力下降。结论NET通过上调DU145细胞IL-8的表达,促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移。
关键词
中性粒细胞胞外诱捕网(NET)
前列腺癌
DU145细胞
小干扰
rna
Keywords
neutrophils
extracellular
traps(NETs)
prostate
cancer
DU145
cells
smallinterfering
rna
(
sirna
)
分类号
Q279 [生物学—细胞生物学]
R737.25 [医药卫生—肿瘤]
R392-33 [医药卫生—临床医学]
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职称材料
题名
重组伪狂犬病病毒介导的siRNA对高致病性PRRSVN蛋白基因表达的抑制作用
被引量：
2
2
作者
曹素芳
王岩
机构
郑州牧业工程高等专科学校动物医学系
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第8期1142-1149,1153,共9页
基金
河南省高校科技创新人才支持计划资助项目(2008HASTIT01)
河南省教育厅自然科学研究计划资助项目(2011A230012)
文摘
构建表达HP-PRRSV河南分离株HN1N蛋白基因的siRNA重组伪狂犬病病毒3株,将其感染PK-15细胞,在细胞水平上评价重组伪狂犬病病毒介导的siRNA对N蛋白表达的抑制效果。PCR扩增带CMV-siRNA-poly(A)片段和新霉素基因,通过酶切将CMV-siRNA-poly(A)片段和新霉素基因分别插入伪狂犬病病毒转移载体pUSKBH中,构建重组伪狂犬病病毒通用转移载体pUsiRNA。分别用BamHⅠ和HindⅢ酶切pUsiRNA,回收后与HPPRRSV河南分离株HN1N蛋白基因的3个siRNA分子连接,构建表达N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒表达载体。将鉴定正确的重组伪狂犬病病毒表达载体与伪狂犬病病毒DNA共转染PK-15细胞,经同源重组及噬斑纯化获得表达N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒株,应用PCR及Southern blot鉴定重组病毒。将HN1株N蛋白基因的真核表达质粒pAcGFP1-N转染PK-15,经筛选获得稳定表达N蛋白基因的细胞。将鉴定正确的表达N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒接种于稳定表达N蛋白基因的细胞,利用绿色荧光蛋白基因及半定量RT-PCR检测重组伪狂犬病病毒介导的N蛋白基因siRNA对N蛋白表达的抑制效果。结果显示,PCR扩增到的CMV-siRNA-poly(A)片段约为0.7kb,新霉素基因约1.5kb。经酶切、PCR及测序鉴定,构建了表达siRNA的通用伪狂犬病病毒转移载体pUsiRNA。经PCR及Southern blot检测,获得了3株表达HP-PRRSV河南分离株HN1N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒gG-/siRNAN1、gG-/siRNAN2和gG-/siRNAN3;经荧光显微镜观察和半定量RT-PCR检测表明,重组伪狂犬病病毒介导的N蛋白基因siRNA能够显著抑制N蛋白在PK-15细胞中表达,其中gG-/siRNAN2抑制效果最好。这为深入研究N蛋白基因siRNA抑制HP-PRRSV复制奠定基础,并为HP-PRRSV的防制提供新的思路。
关键词
高致病性
PRRS
N蛋白基因
sirna
重组伪狂犬病病毒
Keywords
highly
pathogenic
porcine
reproductive
and
respiratory
syndrome
N
protein
gene
smallinterfering
rna
（
sirna
）
recombination
pseudorabies
virus
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
中性粒细胞胞外诱捕网通过上调DU145人前列腺癌细胞IL-8表达促进前列腺癌细胞增殖、 侵袭及迁移
罗后宙
陈国强
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023
3
下载PDF
职称材料
2
重组伪狂犬病病毒介导的siRNA对高致病性PRRSVN蛋白基因表达的抑制作用
曹素芳
王岩
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
2
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