大鼠小肠上皮细胞培养体系的建立及其影响因素的探讨 被引量：12

1

作者 冉新泽 粟永萍 +2 位作者 程天民 林远 刘晓宏 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 1997年第5期8-11,共4页

作者引进并建立了大鼠小肠上皮细胞（ＩＥＣ－６）的培养传代和活性检测的实验方法，且对几种影响因素进行了探讨，实验发现，ＩＥＣ－６在一定密度范围内与＾３Ｈ－ＴｄＲ参入量呈正相关变化；培养７２ｈ以内，参入量随时间延长而增加... 作者引进并建立了大鼠小肠上皮细胞（ＩＥＣ－６）的培养传代和活性检测的实验方法，且对几种影响因素进行了探讨，实验发现，ＩＥＣ－６在一定密度范围内与＾３Ｈ－ＴｄＲ参入量呈正相关变化；培养７２ｈ以内，参入量随时间延长而增加，＾３Ｈ－ＴｄＲ，５５．５Ｋｂｑ／孔内，计数值与剂量间呈线性关系，胎牛血清浓度以１０％为宜，但不加胰岛素组显著降低，ｐＨ值以７．２６最好，ＩＥＣ－６在４～２６Ｇｙ照射范围内。 展开更多

关键词 上皮细胞 培养方法 大鼠 小肠

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鸡胚小肠上皮细胞的分离及原代培养研究 被引量：12

2

作者 洪智敏 贾永杰 +2 位作者 瞿明仁 黎观红 刘思国 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1164-1170,共7页

取18日龄的SPF鸡胚,分别采用组织块培养法、胰蛋白酶、胶原酶I和嗜热菌蛋白酶消化法分离和体外培养小肠上皮细胞。结果表明:组织块培养法所获得的上皮细胞纯度较低;胰蛋白酶消化后多为单细胞,细胞贴壁和生长能力较弱;胶原酶Ⅰ单独消化50... 取18日龄的SPF鸡胚,分别采用组织块培养法、胰蛋白酶、胶原酶I和嗜热菌蛋白酶消化法分离和体外培养小肠上皮细胞。结果表明:组织块培养法所获得的上皮细胞纯度较低;胰蛋白酶消化后多为单细胞,细胞贴壁和生长能力较弱;胶原酶Ⅰ单独消化50 min或嗜热菌蛋白酶单独消化110 min以及胶原酶Ⅰ、嗜热菌蛋白酶联合消化后均可得到大量隐窝细胞团块,经低速离心去除单细胞、差速贴壁除去成纤维细胞,可获得较纯的上皮细胞。分离的细胞接种培养12～24 h贴壁,48～72 h细胞团中的细胞向四周蔓延,形成一群群的细胞集落,6～7 d细胞汇合成片,成"铺路石样",细胞多呈扁平多角状,椭圆状,单层生长,边界清晰,互不重叠。经形态学观察、扫描电镜鉴定、碱性磷酸酶染色和免疫组化鉴定为上皮细胞。 展开更多

关键词 鸡小肠上皮细胞 分离 原代培养 鸡胚

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抗氧化乳酸菌的筛选及其对小肠上皮细胞氧化损伤的保护作用 被引量：3

3

作者 王小鹏 崔文明 +7 位作者 王子卓越 杨文月 黄宇琪 李静蕊 陈水燕 郭培培 赵改名 闫爽 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2023年第4期387-394,共8页

从36株分离自长寿老人粪便的乳酸菌中筛选高抗氧化活性菌株,利用过氧化氢(H_(2)O_(2))建立大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)氧化损伤模型,探究所筛选菌株对IEC-6细胞氧化应激的影响。结果表明,菌株HN-04、HN-05、HN-15有较强的体外抗氧化能力,其... 从36株分离自长寿老人粪便的乳酸菌中筛选高抗氧化活性菌株,利用过氧化氢(H_(2)O_(2))建立大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)氧化损伤模型,探究所筛选菌株对IEC-6细胞氧化应激的影响。结果表明,菌株HN-04、HN-05、HN-15有较强的体外抗氧化能力,其DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基清除能力分别为52.18%~57.16%、47.44%~52.38%、37.11%~43.31%,菌株对IEC-6细胞的黏附率分别为6.77%、6.92%和5.82%。在3株乳酸菌的干预作用下,氧化损伤细胞的存活率提高了5.31%~11.19%,细胞中的谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和总抗氧化能力(T-AOC)分别提升12.03%~32.39%、21.20%~47.42%、36.10%~87.14%和23.55%~48.69%,丙二醛含量(MDA)降低20.98%~48.80%。所筛选的3株乳酸菌具有缓解细胞氧化应激损伤的作用,可作为天然抗氧化剂应用于功能性食品开发。 展开更多

关键词 乳酸菌 抗氧化活性 小肠上皮细胞 细胞黏附 细胞氧化损伤

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纳米氧化锌对奶牛小肠上皮细胞增殖及凋亡的影响 被引量：4

4

作者 徐文浩 张才 +5 位作者 邵琦 孟素丹 刘艳 孔涛 宋思梦 赵婉莉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期797-804,共8页

为研究纳米氧化锌(nano-ZnO)对奶牛小肠上皮细胞(BIECs)增殖及凋亡的影响,本实验选取初生犊牛P3代十二指肠上皮细胞为试验对象,向培养基中添加0(对照)、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8μg/mL不同浓度的nano-ZnO培养12 h后,通过倒... 为研究纳米氧化锌(nano-ZnO)对奶牛小肠上皮细胞(BIECs)增殖及凋亡的影响,本实验选取初生犊牛P3代十二指肠上皮细胞为试验对象,向培养基中添加0(对照)、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8μg/mL不同浓度的nano-ZnO培养12 h后,通过倒置显微镜、CCK-8法检测细胞的生长状态和增殖活性;微量法检测LDH漏出量;DAPI荧光染色结合Image J图像测定分析nano-ZnO对BIECs凋亡的影响;实时荧光定量PCR对细胞凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax、Bcl-2 mRNA的表达进行测定。结果显示,与对照组相比,nano-ZnO低剂量各组(0.2、0.4、0.8μg/m L)细胞生长状态良好,核型正常,增殖活性增加,凋亡率无明显差异(P>0.05),LDH漏出量无差异(P>0.05);高剂量各组(1.6、3.2、6.4、12.8μg/m L)细胞皱缩变圆,密度减小,细胞核致密浓染、裂解,细胞增殖活性降低(P<0.05),凋亡率明显升高(P<0.05),LDH漏出量明显增加(P<0.05);实验组基因Caspase-3、Caspase-8、Bcl-2的相对表达量与对照组相比随着nano-ZnO浓度的增加呈现先增加后下降的趋势,Caspase-9的表达量随着nano-ZnO浓度的增加先下降后升高再下降,Bax随着Nano-ZnO浓度的增加而下降(P<0.05或P<0.01)。结论:nano-ZnO低剂量组对BIECs的增殖有促进作用;高剂量组能够抑制BIECs增殖,促进细胞凋亡。 展开更多

关键词 纳米氧化锌 奶牛 小肠上皮细胞 凋亡

原文传递

L.casei EPS体外促进Balb/c小鼠小肠上皮细胞增殖及其分泌IL-8、IL-10和TGF-β 被引量：3

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作者 霍思序 唐彦君 刘宁 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期835-839,共5页

目的以干酪乳杆菌（Lactobacillus casei,L.casei）胞外多糖（exopolysaccharides,EPS）为研究对象,研究其在体外对Balb/c小鼠小肠上皮细胞（small intestinal epithelial cell,IECs）增殖及其分泌IL-8、IL-10和TGF-β的影响。方法利用... 目的以干酪乳杆菌（Lactobacillus casei,L.casei）胞外多糖（exopolysaccharides,EPS）为研究对象,研究其在体外对Balb/c小鼠小肠上皮细胞（small intestinal epithelial cell,IECs）增殖及其分泌IL-8、IL-10和TGF-β的影响。方法利用嗜热菌蛋白酶消化联合差速贴壁以及免疫细胞化学鉴定的方法对Balb/c小鼠IECs进行分离和鉴定,获得实验用的IECs。用不同质量浓度的L.casei EPS与IECs共培养,分别观察0.5、1、2 h和4 h后IECs的增殖情况。当用不同质量浓度的L.casei EPS处理IECs 2 h后,采用双抗体夹心ELISA法检测细胞培养上清液中细胞因子IL-8、IL-10和TGF-β的质量浓度。结果嗜热菌蛋白酶消化联合差速贴壁的方法能够获得纯度高与活性好的IECs;L.casei EPS能够促进IECs的增殖,显著上调上清液中IL-8、IL-10和TGF-β的分泌水平（P〈0.05）,EPS质量浓度在0-150μg/ml范围内呈剂量依赖关系,并且在150μg/ml的质量浓度时达到最大值。结论 L.casei EPS能够促进IECs的增殖及IL-8、IL-10和TGF-β的分泌水平。 展开更多

关键词 干酪乳杆菌胞外多糖 小肠上皮细胞 增殖 细胞因子

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MANF对内质网应激诱导小肠上皮细胞损伤的保护作用 被引量：1

6

作者 陈滢 周南 +2 位作者 王杰 倪倩倩 赵倩 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期1066-1071,共6页

目的在正常人小肠上皮细胞系FHs 74 Int中观察中脑星形胶质细胞源性神经营养因子(mesencephalic astrocyte-derived neurotrophic factor,MANF)对内质网(endoplasmic reticulum,ER)应激诱导的肠道上皮细胞损伤的保护作用。方法分别用ER... 目的在正常人小肠上皮细胞系FHs 74 Int中观察中脑星形胶质细胞源性神经营养因子(mesencephalic astrocyte-derived neurotrophic factor,MANF)对内质网(endoplasmic reticulum,ER)应激诱导的肠道上皮细胞损伤的保护作用。方法分别用ER应激诱导剂tunicmycin(TM)或TNF-α刺激FHs 74 Int细胞,观察内源性MANF的表达;将MANF-GFP质粒转染FHs 74 Int细胞,用免疫印迹法(Western blot)观察MANF对ER应激指标的影响;CCK8细胞增殖实验检测MANF对肠上皮细胞发生ER应激后增殖能力的影响;Western blot和流式细胞术(Flow cytometry)检测MANF对ER应激后细胞凋亡的影响。结果ER应激可以诱导小肠上皮细结论MANF通过抑制小肠上皮细胞内的ER应激,促进细胞增殖,减少细胞凋亡,从而发挥肠黏膜屏障保护作用。 展开更多

关键词 MANF TM 内质网应激 小肠上皮细胞 增殖 凋亡

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晚期氧化蛋白产物在小肠上皮细胞的上皮间质转化中的作用

7

作者 郑羽 聂宗强 +4 位作者 陈鸿源 王襄瑜 黄海啸 黄良祥 曾长青 《中华炎性肠病杂志（中英文）》 2020年第2期124-130,共7页

目的探讨晚期氧化蛋白产物(AOPPs)在小肠上皮细胞的上皮间质转化(EMT)中的作用,为研究炎症性肠病(IBD)患者小肠纤维化的发病机制提供依据。方法体外培养小鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6,采用次氯酸氧化修饰大鼠血清白蛋白(RSA)的方法体外制备... 目的探讨晚期氧化蛋白产物(AOPPs)在小肠上皮细胞的上皮间质转化(EMT)中的作用,为研究炎症性肠病(IBD)患者小肠纤维化的发病机制提供依据。方法体外培养小鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6,采用次氯酸氧化修饰大鼠血清白蛋白(RSA)的方法体外制备AOPPs。将IEC-6细胞分为AOPPs组、RSA组和空白对照组。采用50、100、200、400μg/ml的AOPPs干预IEC-6细胞作为AOPPs组,50、100、200、400μg/ml的RSA干预IEC-6细胞作为RSA组,空白对照组不做任何干预。干预24 h后观察细胞形态并采用流式细胞术检测细胞凋亡,统计分析凋亡率最高时AOPPs的浓度。采用该浓度的AOPPs干预IEC-6细胞,流式细胞术检测48、72 h的细胞凋亡并统计分析不同时间点凋亡率的差异。荧光定量PCR检测AOPPs组、RSA组和空白对照组E-cadherin、纤维连接蛋白(Fibronectin)及参与调节细胞EMT过程的转录因子Snail、Slug的mRNA表达以及细胞外基质胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)的mRNA表达。结果AOPPs可以诱导IEC-6细胞的凋亡,并具有时间及浓度依赖效应(P<0.05);400μg/ml的AOPPs干预72 h细胞的凋亡率最高,达到(17.30±1.03)%。AOPPs明显下调IEC-6细胞E-cadherin的mRNA表达,而明显上调Fibronectin及CollagenⅠ的mRNA表达,同时转录因子Snail和Slug mRNA表达也明显增加(均P<0.05)。结论AOPPs通过诱导小肠上皮细胞凋亡,上调细胞的转录因子Snail和Slug的基因表达,抑制E-cadherin的转录,同时上调Fibronectin和CollagenⅠ基因表达,促进肠上皮细胞EMT,在IBD小肠纤维化中发挥一定作用。 展开更多

关键词 晚期氧化蛋白产物 上皮间质转化 小肠上皮细胞 小肠纤维化 炎症性肠病

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TNF-α刺激的IEC-6细胞源性外泌体miRNAs表达谱差异

8

作者 肖婷婷 罗敏 +2 位作者 王银晓 曾星 张娴 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1216-1223,共8页

目的:分析肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激的IEC-6小肠上皮细胞源性外泌体miRNAs的表达差异。方法:以TNF-α(终浓度50 ng/mL)刺激IEC-6细胞4 h(TNF-α-exosome组)后收集上清液,外泌体提取试剂盒结合超速离心法分... 目的:分析肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激的IEC-6小肠上皮细胞源性外泌体miRNAs的表达差异。方法:以TNF-α(终浓度50 ng/mL)刺激IEC-6细胞4 h(TNF-α-exosome组)后收集上清液,外泌体提取试剂盒结合超速离心法分离提取上清液中的外泌体;使用透射电镜、纳米微粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)技术和Western blot鉴定外泌体;提取外泌体miRNAs进行高通量测序,比较control-exosome组(IEC-6细胞以不含TNF-α的无外泌体血清培养基正常孵育)和TNF-α-exosome组外泌体miRNAs表达谱差异;采用TargetScan、miRDB和miRWalk 3个软件对有显著差异表达的mi RNAs进行潜在靶基因预测;Cytoscape软件绘制显著差异表达miRNAs靶基因调控网络图;DAVID网站注释工具对潜在靶基因进行功能注释,以此进一步分析潜在靶基因的生物学功能。结果:在透射电镜下可以观察到大量外泌体结构,其分布不均匀,直径50~200 nm,呈圆形或椭圆形的脂质双层杯状囊泡;NTA检测显示其粒径主峰为141.9 nm,浓度为3.41×10;particle/mL;Western blot结果显示外泌体表面标志蛋白CD63表达阳性;高通量测序筛选出6个显著差异表达(差异倍数>2,P<0.05)的外泌体miRNAs。与control-exosome组比较,TNF-α-exosome组rno-miR-125a-5p(差异倍数=3.689 0)、rno-miR-351-5p(差异倍数=3.803 1)、rno-miR-125b-5p(差异倍数=2.933 0)、rno-miR-542-3p(差异倍数=2.995 6)、rno-miR-30c-5p(差异倍数=3.065 0)和miR-20a-5p(差异倍数=2.890 8)均明显下调(P=0.001,P=0.002,P=0.025,P=0.019,P=0.022,P=0.032);运用靶基因预测网站对6个差异表达miRNAs靶基因预测,共得到潜在靶基因158个,并绘制miRNAs靶基因网络调控图;DAVID功能注释结果显示这些下调miRNAs主要参与了1个京都基因和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路和12个基因本体论(gene ontology,GO);物学过程(biological process,BP)、15个GO;胞组分(cell component,CC)、3个GO;� 展开更多

关键词 外泌体 外泌体miRNA 小肠上皮细胞 高通量测序

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鼠李糖乳酸杆菌LG_A对鸡小肠上皮细胞β-防御素-9基因表达的影响 被引量：14

9

作者 黎观红 洪智敏 +3 位作者 贾永杰 易中华 瞿明仁 刘思国 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期634-641,共8页

本研究旨在研究益生性鼠李糖乳酸杆菌LGA对体外培养的鸡小肠上皮细胞β-防御素-9(AvBD9)表达的调节作用。选用鼠李糖乳酸杆菌LGA对体外培养的鸡小肠上皮细胞进行剂量依赖性及时间依赖性刺激实验,利用实时荧光定量PCR(fluorescence quant... 本研究旨在研究益生性鼠李糖乳酸杆菌LGA对体外培养的鸡小肠上皮细胞β-防御素-9(AvBD9)表达的调节作用。选用鼠李糖乳酸杆菌LGA对体外培养的鸡小肠上皮细胞进行剂量依赖性及时间依赖性刺激实验,利用实时荧光定量PCR(fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)从mRNA水平研究刺激后上皮细胞AvBD9基因表达水平的差异。结果表明,不同浓度(2×105、2×106、2×107 cfu.mL-1)鼠李糖乳酸杆菌LGA均能上调AvBD9mRNA的表达,且在不同细菌浓度之间AvBD9mRNA的表达存在差异。热灭活鼠李糖乳杆菌LGA亦能上调AvBD9基因表达,且上调值显著高于活菌(P<0.05)。鼠李糖乳杆菌LGA刺激上皮细胞后AvBD9表达存在时间依赖关系,12h时AvBD9的表达达到峰值。Western blot检测结果显示,鼠李糖乳杆菌LGA刺激后的上皮细胞培养上清中存在AvBD9蛋白表达,表明AvBD9蛋白可以分泌到细胞外而发挥其生物学功能。益生性鼠李糖乳酸杆菌LGA与鸡肠道上皮细胞的相互作用过程中,鼠李糖乳酸杆菌LGA能够促进上皮细胞抗菌肽β-防御素-9的表达。本研究结果提示益生性乳杆菌可能通过促进肠道上皮抗菌肽的表达而发挥其益生作用。 展开更多

关键词 β-防御素-9 鸡小肠上皮细胞 鼠李糖乳酸杆菌LGA 荧光定量PCR

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白藜芦醇对热应激诱导的山羊小肠上皮细胞炎性反应调节作用的研究 被引量：10

10

作者 张宇 徐子洁 +4 位作者 黄晓瑜 邢晓南 张小强 赵雷云 张恩平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1886-1894,共9页

本试验旨在探究白藜芦醇对热应激(HS)诱导的山羊小肠上皮细胞炎性因子转录的影响。采用生长良好的第4代山羊小肠上皮细胞(GIE细胞),分为空白对照组(37℃)、热应激组(42℃)、42℃热应激加白藜芦醇组(5、15、30μmol·L-1);加药预处理... 本试验旨在探究白藜芦醇对热应激(HS)诱导的山羊小肠上皮细胞炎性因子转录的影响。采用生长良好的第4代山羊小肠上皮细胞(GIE细胞),分为空白对照组(37℃)、热应激组(42℃)、42℃热应激加白藜芦醇组(5、15、30μmol·L-1);加药预处理6 h后进行热应激处理6 h。通过CCK-8法检测白藜芦醇细胞毒性;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白藜芦醇对热应激诱导的细胞因子分泌的影响;采用生化法检测白藜芦醇对热应激诱导的GIE细胞抗氧化性能的影响;利用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测白藜芦醇对热应激诱导的GIE细胞HSP70、IL-1β、TNF-α、IL-8和NF-κB基因转录的影响。结果显示:不同浓度(5、15、30μmol·L-1)的白藜芦醇可不同程度地提高热应激诱导的GIE细胞GSH-Px、SOD及T-AOC活性,极显著降低脂质过氧化物MDA含量(P<0.01);不同浓度(5、15、30μmol·L-1)的白藜芦醇能不同程度地抑制热应激诱导的GIE细胞IL-1β、IL-2、IFN-γ和TNF-α的分泌,并极显著降低炎性模型细胞IL-1β、TNF-α、IL-8、HSP 70和NF-κB的基因转录水平(P<0.01)。结果提示,白藜芦醇可调节热应激诱导GIE细胞炎性模型中HSP70基因表达和炎症因子的产生及表达,促进抗氧化酶活力,具有显著的抗炎活性,其抑炎作用可能与抑制NF-κB信号通路相关。 展开更多

关键词 白藜芦醇 山羊小肠上皮细胞 热应激 HSP70 抗炎 NF-ΚB

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谷氨酰胺二肽对奶牛小肠上皮细胞增殖与凋亡的影响

11

作者 贺光祖 叶惠慧 +5 位作者 李逢振 邹振兴 钟金凤 黄通灵 蒋真良 马勇 《湖南生态科学学报》 CAS 2024年第3期103-110,共8页

【目的】旨在研究2种谷氨酰胺二肽对奶牛小肠上皮细胞增殖及凋亡的影响。【方法】对体外培养的奶牛小肠上皮细胞进行谷氨酰胺(Glutamine,Gln)饥饿处理后,分别添加Gln、丙氨酰谷氨酰胺(Alanyl-glutamine,Ala-Gln)和甘氨酰谷氨酰胺(Glycyl... 【目的】旨在研究2种谷氨酰胺二肽对奶牛小肠上皮细胞增殖及凋亡的影响。【方法】对体外培养的奶牛小肠上皮细胞进行谷氨酰胺(Glutamine,Gln)饥饿处理后,分别添加Gln、丙氨酰谷氨酰胺(Alanyl-glutamine,Ala-Gln)和甘氨酰谷氨酰胺(Glycyl-glutamine,Gly-Gln)进行处理,检测各处理组细胞的细胞活力、细胞凋亡率及周期、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)漏出量及凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2和Caspase-3)的表达量。【结果】与CK(Gln饥饿处理组)相比,添加Ala-Gln或Gly-Gln的奶牛小肠上皮细胞的细胞活力显著提高(P<0.05),LDH漏出量显著降低(P<0.05)。此外,与CK相比,添加Gln、Ala-Gln及Gly-Gln均能显著降低G0/G1和G2/M期阻滞细胞比率,提高S期细胞比率(P<0.05),也能显著提高抗凋亡因子Bcl-2蛋白表达,而显著降低促凋亡因子Bax和Caspase-3蛋白表达(P<0.05),从而显著降低细胞凋亡率(P<0.05)。【结论】谷氨酰胺二肽(Ala-Gln及Gly-Gln)能够促进奶牛小肠上皮细胞增殖并减缓其凋亡,从而保护肠道黏膜结构的完整性。该研究结果可为谷氨酰胺二肽在奶牛肠道营养中的应用提供理论依据。 展开更多

关键词 谷氨酰胺二肽 奶牛小肠上皮细胞 细胞增殖 细胞凋亡

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几种功能性物质抑制产肠毒性大肠杆菌的效果及作用机制研究

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作者 黄一智 宋转 +5 位作者 童庆芳 张艺 王露 李中华 吴涛 侯永清 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期696-701,共6页

不同浓度葛根素(PR)、丙酮酸乙酯(EP)、酪醇(TS)、氧化锌(ZnO)处理IPEC-1细胞,CCK-8法检测细胞活力;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogena,sLeDH)试剂盒检测几种功能性物质对ETEC K88感染IPEC-1细胞损伤程度的影响;实时荧光定量PCR法检测不... 不同浓度葛根素(PR)、丙酮酸乙酯(EP)、酪醇(TS)、氧化锌(ZnO)处理IPEC-1细胞,CCK-8法检测细胞活力;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogena,sLeDH)试剂盒检测几种功能性物质对ETEC K88感染IPEC-1细胞损伤程度的影响;实时荧光定量PCR法检测不同功能性物质对ETEC K88感染IPEC-1细胞相关基因相对表达水平的影响。结果:PR、EP和ZnO均可促进IPEC-1细胞增殖,其最适添加浓度分别为5μmol/L、1 mmol/L和1μmol/L;TS无促进IPEC-1细胞增殖作用。ETEC K88感染IPEC-1细胞后导致LDH活性显著升高(P<0.05);与K88组相比,添加5μmol/L PR、1 mmol/L EP和1μmol/L ZnO均能显著降低LDH活性(P<0.05)。ETEC K88感染后引起白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、趋化因子配体2(CXCL2)、热休克蛋白70(HSP70)和核因子E2相关因子(Nrf2)的相对表达量显著升高(P<0.05),细胞周期蛋白D(cyclin D)和绒毛蛋白(Villi)n基因的相对表达量显著降低(P<0.05)。PR显著提高了细胞IL-8和Villin基因的相对表达量(P<0.05);EP显著降低了(P<0.05)细胞TNF-α和CXCL2基因的相对表达量;ZnO显著提高了Villin和Cyclin D基因的相对表达量(P<0.05)。此外,PR、EP和ZnO均能降低大肠杆菌16S rRNA基因的相对表达量(P<0.05)。综上所述,PR、EP和ZnO均能抑制ETEC K88的增殖,具有抑菌效果,EP可以降低K88造成的炎性基因的表达,PR可以增加肠绒毛基因表达,ZnO可以增加细胞周期基因的表达。 展开更多

关键词 功能性物质 猪小肠上皮细胞 产肠毒性大肠杆菌

原文传递

富马酸与肉桂醛联用调节产肠毒素型大肠杆菌诱导猪肠上皮细胞氧化应激的分子机制

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作者 刘禹彤 杨冠华 +3 位作者 张菊 李玉鹏 乔家运 李海花 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1904-1915,共12页

本试验旨在研究富马酸(FA)与肉桂醛(CA)联用调节产肠毒素型大肠杆菌(ETEC)K88诱导猪肠上皮细胞IPEC⁃J2氧化应激的分子机制。试验选用IPEC⁃J2细胞建立氧化损伤模型,用不同浓度FA和CA处理IPEC⁃J2细胞12和24 h,并用CCK⁃8法检测细胞活力,确... 本试验旨在研究富马酸(FA)与肉桂醛(CA)联用调节产肠毒素型大肠杆菌(ETEC)K88诱导猪肠上皮细胞IPEC⁃J2氧化应激的分子机制。试验选用IPEC⁃J2细胞建立氧化损伤模型,用不同浓度FA和CA处理IPEC⁃J2细胞12和24 h,并用CCK⁃8法检测细胞活力,确定最佳处理浓度和时间;以最佳处理浓度的FA和CA预处理细胞,ETEC K88感染细胞3、6、12和24 h,检测其活菌黏附率,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞因子含量和抗氧化指标,并用实时荧光定量PCR(RT⁃qPCR)测定热休克蛋白70(Hsp70)和核因子-κB(NF⁃κB)信号通路相关基因mRNA相对表达量。结果表明:1)FA和CA的最佳处理浓度分别为1.00 mg/mL和1.00μL/mL,最适培养时间为12 h。2)添加FA和CA可有效抑制ETEC K88黏附IPEC⁃J2细胞,当ETEC K88感染细胞3 h时其黏附率显著下降(P<0.05),6、12和24 h时极显著下降(P<0.01)。3)添加FA和CA可极显著降低ETEC K88感染细胞中促炎性细胞因子白细胞介素-8(IL⁃8)和肿瘤坏死因子-α(TNF⁃α)含量(P<0.01),极显著提高抗炎性细胞因子白细胞介素-10(IL⁃10)和转化生长因子-β(TGF⁃β)含量(P<0.01)。4)ETEC K88通过激活NF⁃κB信号通路诱导IPEC⁃J2细胞氧化损伤,添加FA和CA可上调Hsp70 mRNA相对表达量并抑制NF⁃κB信号通路缓解IPEC⁃J2细胞氧化应激。5)添加FA和CA可显著提高ETEC K88感染细胞中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH⁃Px)活性(P<0.05),极显著降低丙二醛(MDA)含量(P<0.01)。综上所述,FA与CA联用可调节炎性细胞因子和氧化应激蛋白平衡并抑制ETEC K88黏附IPEC⁃J2细胞,其可能是通过上调Hsp70抑制NF⁃κB信号通路,增强IPEC⁃J2细胞的抗氧化和抗炎能力,从而缓解ETEC K88诱导的IPEC⁃J2细胞氧化应激。 展开更多

关键词 肉桂醛 富马酸 猪肠上皮细胞 产肠毒素型大肠杆菌 氧化应激

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发酵乳酸杆菌F6对鸡小肠上皮细胞β-防御素-9基因表达的影响 被引量：6

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作者 洪智敏 张和平 +2 位作者 贾永杰 刘思国 黎观红 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1142-1147,共6页

采用实时荧光定量PCR(fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)检测益生性发酵乳酸杆菌F6刺激鸡小肠上皮细胞后抗菌肽β-防御素-9(AvBD9)基因表达变化,为从益生菌与上皮细胞抗菌肽表达关系的新角度解析益生菌发挥益生作用的新途径和机制... 采用实时荧光定量PCR(fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)检测益生性发酵乳酸杆菌F6刺激鸡小肠上皮细胞后抗菌肽β-防御素-9(AvBD9)基因表达变化,为从益生菌与上皮细胞抗菌肽表达关系的新角度解析益生菌发挥益生作用的新途径和机制提供一定的基础及依据。利用不同剂量(2×105,2×106,2×107 CFU)的发酵乳酸杆菌F6分别刺激原代培养的鸡小肠上皮细胞4h,提取刺激后的细胞总RNA,反转录为cDNA,FQ-PCR检测抗菌肽AvBD9基因表达变化。结果表明,未受刺激的正常对照组也检测到AvBD9mRNA的表达,发酵乳酸杆菌F6能上调AvBD9基因表达。刺激组中AvBD9mRNA的表达在不同剂量组之间存在差异。2×105 CFU/mL组AvBD9mRNA的表达量极显著高于未受细菌刺激的对照组和2×106 CFU/mL组(P<0.01),显著高于2×107 CFU/mL组(P<0.05)。2×106 CFU/mL组和2×107 CFU/mL组AvBD9mRNA的表达量显著高于未受细菌刺激的对照组(P<0.05),但2×106 CFU/mL组和2×107 CFU/mL组之间无显著差异(P>0.05)。发酵乳杆菌F6与鸡小肠上皮细胞相互作用过程中可提高抗菌肽AvBD9mRNA的表达,且存在剂量依赖性。 展开更多

关键词 β-防御素-9 鸡小肠上皮细胞 发酵乳酸杆菌F6 荧光定量PCR

原文传递

ETEC感染猪小肠上皮细胞初期差异表达cricRNA的筛选

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作者 朱凯晴 朱悦 +3 位作者 刘迎迎 崔亚男 蒋秉妤 李妍 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期3490-3498,共9页

【目的】分析产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)感染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)初期宿主细胞内环状RNA(circularRNA,circRNA)的表达谱变化,并探究其调控机制。【方法】采用Illumina PE150测序平台对ETEC感染IPEC-J... 【目的】分析产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)感染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)初期宿主细胞内环状RNA(circularRNA,circRNA)的表达谱变化,并探究其调控机制。【方法】采用Illumina PE150测序平台对ETEC感染IPEC-J2细胞进行转录组测序,利用生物信息学在线软件筛选出差异表达circRNAs,经过GO功能和KEGG通路富集分析筛选出ETEC感染相关circRNAs,用IRESfinder和PFAM 33.1软件进行circRNAs编码潜能预测;随机挑选5个差异表达circRNAs,用实时荧光定量PCR验证circRNAs表达情况及核糖核酸酶R(RNase R)消化结果。【结果】转录组测序结果显示,共获得201个差异表达circRNAs,其中95个表达上调和106个表达下调。GO功能富集分析表明,ETEC感染初期circRNAs来源基因主要影响细胞形态、细胞代谢和泛素蛋白连接酶活性等功能。KEGG通路富集分析显示,circRNAs可能参与氨基酸代谢途径、泛素介导的蛋白质水解通路、黏合连接和肌动蛋白细胞骨架调节等信号通路。circRNAs编码潜能预测发现4个具有编码潜能的circRNAs,其中novel_circ_0009996和来源基因TNFAIP3共同富集在NF-κB和TNF信号通路。实时荧光定量PCR结果显示,5个circRNAs的表达水平与测序结果一致,差异表达circRNAs均为环状RNA分子,测序结果准确可靠。【结论】ETEC感染IPEC-J2细胞初期差异表达circRNAs和其来源基因主要参与炎症反应、基因表达的转录后调控、细胞免疫过程、细胞骨架、细胞增殖和凋亡等相关生物过程,其中novel_circ_0009996具有编码潜能,主要富集在NF-κB和TNF信号通路。研究结果为深入探究circRNA在ETEC感染初期的调控机制提供理论基础。 展开更多

关键词 产肠毒素大肠杆菌(ETEC) 猪小肠上皮细胞 circRNA 感染

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富硒乳酸菌对AFB;导致的CSIEC氧化损伤的影响 被引量：2

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作者 李元辉 傅春妮 +4 位作者 李鹏程 彭玉凯 李留安 张建斌 秦顺义 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第22期117-122,共6页

为了探究黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))诱导鸡小肠上皮细胞(chicken small intestinal epithelial cells,CSIEC)氧化损伤的作用机制以及富硒乳酸菌对该过程的缓解作用,试验将体外培养的CSIEC分为5组,即C组(空白细胞组)、AFB... 为了探究黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))诱导鸡小肠上皮细胞(chicken small intestinal epithelial cells,CSIEC)氧化损伤的作用机制以及富硒乳酸菌对该过程的缓解作用,试验将体外培养的CSIEC分为5组,即C组(空白细胞组)、AFB_(1)组(AFB_(1)300μmol/L)、AFB_(1)+0.01Se组(AFB_(1)300μmol/L+0.01μmol/L富硒乳酸菌,以Se计)、AFB_(1)+0.05Se组(AFB_(1)300μmol/L+0.05μmol/L富硒乳酸菌,以Se计)、AFB_(1)+0.1Se组(AFB_(1)300μmol/L+0.1μmol/L富硒乳酸菌,以Se计),待细胞贴壁面积达到60%~70%后,AFB_(1)+0.01Se组、AFB_(1)+0.05Se组和AFB_(1)+0.1Se组更换为含富硒乳酸菌(经高压灭菌处理)的完全培养基,浓度分别为0.01,0.05,0.1μmol/L(以Se计)。8 h后向除C组外的各组添加AFB_(1)溶液,使其终浓度为300μmol/L,继续培养24 h后终止培养。采用ELISA法分别测定各组CSIEC的抗氧化酶总抗氧化能力(T-AOC)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)浓度,以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-10水平;通过Western-blot检测磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和核因子(NF)-κB p65的蛋白表达量。结果表明:AFB_(1)能诱导CSIEC T-AOC和GSH-Px、CAT活性及IL-10水平的降低,MDA水平的升高,而富硒乳酸菌能够颉颃这种作用,提高TNF-α和SOD的分泌水平,通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路和NF-κB p65蛋白表达水平来发挥其抑制AFB_(1)诱导的细胞氧化损伤的作用。说明富硒乳酸菌能够缓解AFB_(1)诱导的CSIEC的氧化损伤。 展开更多

关键词 细胞氧化损伤 富硒乳酸菌 黄曲霉毒素 鸡小肠上皮细胞 PI3K/Akt/mTOR信号通路

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富硒乳酸菌对黄曲霉毒素B_(1)诱导鸡小肠上皮细胞凋亡的影响 被引量：1

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作者 李元辉 傅春妮 +4 位作者 李鹏程 彭玉凯 李留安 张建斌 秦顺义 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第12期4702-4709,共8页

试验旨在探究富硒乳酸菌对黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))对鸡小肠上皮细胞(CSIEC)凋亡的影响。将体外培养的CSIEC细胞分为对照组(C)、AFB_(1)(300μmol/L AFB_(1))、AFB_(1)+0.01 Se(300μmol/L AFB_(1)+0.01μmol/L富硒乳酸菌,以Se计)、AFB... 试验旨在探究富硒乳酸菌对黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))对鸡小肠上皮细胞(CSIEC)凋亡的影响。将体外培养的CSIEC细胞分为对照组(C)、AFB_(1)(300μmol/L AFB_(1))、AFB_(1)+0.01 Se(300μmol/L AFB_(1)+0.01μmol/L富硒乳酸菌,以Se计)、AFB_(1)+0.05 Se和AFB_(1)+0.1 Se组,待细胞长至60%~70%汇合时,AFB_(1)+0.01 Se、AFB_(1)+0.05 Se和AFB_(1)+0.1 Se组培养液更换为含对应Se浓度的培养液,对照组和AFB_(1)组更换为正常培养液,8 h后向含AFB_(1)组加入300μmol/L AFB_(1),继续培养24 h。用CCK-8法检测细胞存活率,ELISA法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性,TUNEL法检测细胞凋亡率,Western blotting检测线粒体通路和内质网通路相关蛋白Bcl-2、Bax、PERK、ATF4、CHOP、GRP78、p53和p21的表达。细胞存活率检测结果表明,与对照组相比,其余各组CSIEC存活率均极显著降低(P<0.01);与AFB_(1)组相比,加硒各组存活率均极显著升高(P<0.01)。LDH活性检测结果表明,与对照组相比,其余各组LDH活性均极显著升高(P<0.01);与AFB_(1)组相比,加硒各组LDH活性均极显著降低(P<0.01)。细胞凋亡率检测结果表明,与对照组相比,AFB_(1)组TUNEL阳性细胞数极显著升高(P<0.01),且与加硒各组差异均不显著(P>0.05)。Bcl-2/Bax表达量检测结果表明,与对照组相比,AFB_(1)组Bcl-2/Bax极显著降低(P<0.01),AFB_(1)+0.05 Se组显著升高(P<0.05)。内质网应激通路相关蛋白表达量检测结果表明,与对照组相比,AFB_(1)组PERK、CHOP、GRP78和p53的表达量均极显著升高(P<0.01);与AFB_(1)组相比,加硒各组PERK、GRP78表达量均极显著降低(P<0.01),AFB_(1)+0.05 Se和AFB_(1)+0.1 Se组CHOP和p53的表达量均极显著或显著降低(P<0.01;P<0.05)。因此,富硒乳酸菌能够缓解AFB_(1)诱导的CSIEC凋亡。 展开更多

关键词 富硒乳酸菌 黄曲霉毒素 鸡小肠上皮细胞 细胞凋亡

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基于猪小肠上皮细胞炎症模型分析产肠毒素大肠杆菌诱导的转录组表达变化

18

作者 朱悦 刘迎迎 +4 位作者 李莹慧 李培 朱凯晴 贾垌 李妍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第12期1445-1453,共9页

【目的】分析产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)炎症反应的主要宿主调控基因及相关分子通路,为进一步揭示ETEC感染引发炎症反应的作用机制提供理论依据。【方法】用感染复数(multipl... 【目的】分析产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)炎症反应的主要宿主调控基因及相关分子通路,为进一步揭示ETEC感染引发炎症反应的作用机制提供理论依据。【方法】用感染复数(multiplicity of infection, MOI)为100的ETEC菌液感染IPEC-J2细胞,18 h后收集细胞上清,通过ELISA方法检测炎性因子白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)的分泌水平。由Illumina PE150测序平台进行高通量转录组测序,通过edgeR v 3.12.1软件对测序结果进行差异表达分析,利用GOseq和KOBAS 2.0软件对得到的差异表达mRNA进行GO功能和KEGG通路富集分析,随机挑选5条差异表达mRNA,利用实时荧光定量PCR对其验证。【结果】试验成功建立了ETEC感染诱导的IPEC-J2细胞炎症模型。与对照组相比,炎症模型组共发现529条差异表达mRNA,其中236条表达上调,293条表达下调,包括HSP90AA1、CGNL1、CADPS2、EHBP1等免疫相关基因。GO功能分析表明,ETEC感染后差异表达mRNA显著富集于细胞组分和生物过程,包括细胞内成分(intracellular part)、细胞质(cytoplasm)、核成分(nuclear part)、胞内膜结合细胞器(intracellular membrance-bounded organelle)、膜结合细胞器(membrance-bounded orgabelle)及细胞进程(cellular process)等。KEGG通路分析表明,炎症模型中差异表达基因大多数被注释到疾病相关通路及Toll样受体信号通路、mTOR信号通路、细胞周期、黏附连接等免疫相关信号通路。利用实时荧光定量PCR验证随机挑选的5条差异表达mRNA,结果与测序报告中差异表达mRNA变化趋势一致,证明测序结果可信。【结论】HSP90AA1、CGNL1、CADPS2和EHBP1等基因可能在ETEC黏附IPEC-J2细胞并诱导炎症反应中发挥关键作用,并通过Toll样受体、mTOR等信号通路进行免疫调控。研究结果为进一步揭示ETEC感染诱导炎症反应的分子机制及相关调控网络提供参考依据。 展开更多

关键词 产肠毒素大肠杆菌(ETEC) 猪小肠上皮细胞(IPEC-J2) 炎症模型 转录组

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Ghrelin对猪小肠上皮细胞增殖的影响

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作者 孔志伟 姜明鑫 +2 位作者 郭楠 杨文艳 杨连玉 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第3期31-33,共3页

以体外分离培养的猪小肠上皮细胞为试验材料,通过分别添加1×10-5、1×10-6、1×10-7、1×10-8、1×10-9和1×10-10mol/L的Ghrelin液,来测定Ghrelin对猪小肠上皮细胞增殖的影响。试验结果表明,Ghrelin的浓度在1... 以体外分离培养的猪小肠上皮细胞为试验材料,通过分别添加1×10-5、1×10-6、1×10-7、1×10-8、1×10-9和1×10-10mol/L的Ghrelin液,来测定Ghrelin对猪小肠上皮细胞增殖的影响。试验结果表明,Ghrelin的浓度在1×10-7-1×10-6mol/L时能够显著促进体外培养的猪小肠上皮细胞的增殖(P<0.05),且在刺激后第5天达到增殖高峰。 展开更多

关键词 GHRELIN 猪小肠上皮细胞 细胞增殖

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不同浓度α-卡茄碱对仔猪小肠黏膜上皮细胞增殖率的影响

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作者 何玉华 贾晓满 +1 位作者 徐雪雪 温娅 《畜牧与饲料科学》 2019年第4期15-17,共3页

[目的]研究α-卡茄碱对仔猪小肠黏膜上皮细胞增殖率的影响。[方法]以体外培养的仔猪小肠黏膜上皮细胞系IPEC-J2为试验材料,向其中添加不同浓度的α-卡茄碱,分别于培养的24、48、72 h采集细胞样品,采用MTT法测定细胞的增殖率。[结果]浓度... [目的]研究α-卡茄碱对仔猪小肠黏膜上皮细胞增殖率的影响。[方法]以体外培养的仔猪小肠黏膜上皮细胞系IPEC-J2为试验材料,向其中添加不同浓度的α-卡茄碱,分别于培养的24、48、72 h采集细胞样品,采用MTT法测定细胞的增殖率。[结果]浓度为0.1、0.2μg/mL的α-卡茄碱处理24 h后,其细胞增殖率较对照组相比差异不显著(P>0.05);而0.4、0.8、1.6μg/mL组的增殖率与对照组相比,极显著(P<0.01)降低。处理48 h后,0.1μg/mL组增殖率与对照组相比差异不显著(P>0.05);而0.2、0.4、0.8、1.6μg/mL组与对照组相比,极显著(P<0.01)降低。处理72 h后,各处理组增殖率与对照组相比,极显著(P<0.01)降低。[结论]α-卡茄碱可以降低仔猪小肠黏膜上皮细胞增殖率,其浓度越高对小肠黏膜上皮细胞增殖率的影响越明显(P<0.01),作用时间越长细胞增殖率降低越明显(P<0.01)。 展开更多

关键词 α-卡茄碱 仔猪小肠黏膜上皮细胞 增殖率

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