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非洲猪瘟病毒CD2v蛋白单链抗体的制备及鉴定
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作者 杜晨暄 邹亚文 +8 位作者 张颜 王智勇 李丹彤 喻蓓蕾 蒋一凡 王瑀琦 何庆 杨毅 王乃东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期1465-1472,共8页
为了获得特异性针对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)CD2v蛋白单链抗体(scFv),本研究以CD2v阳性单克隆抗体杂交瘤细胞为模板,通过PCR扩增得到抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,利用Overlap-PCR在VH和VL基因间引入短... 为了获得特异性针对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)CD2v蛋白单链抗体(scFv),本研究以CD2v阳性单克隆抗体杂交瘤细胞为模板,通过PCR扩增得到抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,利用Overlap-PCR在VH和VL基因间引入短肽(Gly4Ser)2连接形成scFv。将其插入原核表达载体p ET28a(+)中,并转化至大肠杆菌BL21(DE3),经1 mmol/L IPTG于25℃条件下诱导表达,通过ELISA对复性scFv蛋白进行反应活性评价。结果显示,通过CD2v蛋白的阻断ELISA筛选出分泌阻断效果良好的单抗杂交瘤细胞株4B8,并成功扩增获得单克隆抗体4B8的重链可变区(VH,399 bp)、轻链可变区(VL,369 bp)及由GS Linker连接而成的4B8-scFv基因(744 bp);SDS-PAGE结果显示,4B8-scFv在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达,通过尿素变性及透析复性,得到纯度较高的4B8-scFv(相对分子质量约为34 ku);间接ELISA结果表明,4B8-scFv与CD2v蛋白具有良好的反应活性。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 单克隆抗体 单链抗体 CD2v蛋白
原文传递
包含体中单链抗体3H11的复性条件对抗体活性的影响 被引量：8
2
作者 陈东海 韩梅 寿成超 《北京医科大学学报》 CSCD 1997年第6期497-499,503,共4页
研究包含体中单链抗体的最佳复性条件，并探讨复性后单链抗体的保存条件。方法：将含抗胃癌单链抗体3H11（ScFv3H11）的包含体纯化后在不同温度、分批加入、不同的变性液和复性液体积比的条件下进行复性，用ELISA法检测活性。结果：在1... 研究包含体中单链抗体的最佳复性条件，并探讨复性后单链抗体的保存条件。方法：将含抗胃癌单链抗体3H11（ScFv3H11）的包含体纯化后在不同温度、分批加入、不同的变性液和复性液体积比的条件下进行复性，用ELISA法检测活性。结果：在10℃复性的抗体活性是4℃条件下的3倍；变性蛋白的分批加入及变性液和复性液的体积比为1：50时，均可分别获得相对最佳活性；复性液是复性抗体的理想保存条件。结论：此复性条件可以应用于其他原核表达的重组蛋白的复性。 展开更多
关键词 包涵体 代谢 单链抗体 抗体 肿瘤 胃肿瘤
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