鼠源噬菌体抗体展示库的构建及初步应用 被引量：4

1

作者 徐重新 张霄 +6 位作者 张存政 刘媛 仲建锋 董飒 胡晓丹 林曼曼 刘贤金 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第1期210-217,共8页

构建可用于特异性单链抗体(ScFv)筛选和应用的大容量鼠源噬菌体抗体展示库,获得拥有自主知识产权的抗体库材料。从小鼠脾脏细胞中提取总RNA,反转录成c DNA后,分别扩增抗体的重链基因、轻链基因,并设计2条互补的Linker基因。采用重叠延伸... 构建可用于特异性单链抗体(ScFv)筛选和应用的大容量鼠源噬菌体抗体展示库,获得拥有自主知识产权的抗体库材料。从小鼠脾脏细胞中提取总RNA,反转录成c DNA后,分别扩增抗体的重链基因、轻链基因,并设计2条互补的Linker基因。采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)法将重链-Linker和Linker-轻链拼接为完整的ScFv基因,酶切、酶连后,将ScFv基因克隆到pCANTAB-5E噬菌粒载体上,经电穿孔导入E.coli TG1感受态细胞中,过夜培养获得初级噬菌体展示库。以单克隆菌落数计算库容量大小,通过比对随机挑取的单克隆噬菌体ScFv可变区序列的差异,分析库的多样性。以Bt毒素(Cry1B、Cry1C、Cry1F)为包被抗原,从库中筛选具有结合活性的ScFv验证库的实用性。经检测,提取的总RNA条带清晰,浓度为2.76μg/μl,扩增的抗体重链基因、轻链基因条带清晰,且2条互补的Linker基因成功添加到重链基因和轻链基因上。经SOE-PCR法扩增,重链-Linker与Linker-轻链成功拼接为ScFv基因。电转化后,经PCR(Polymerase chain reaction)扩增和凝胶电泳检测,证实ScFv基因克隆成功,测得初级噬菌体抗体展示库的库容为3.67×10~8。随机挑取12个单克隆菌种进行测序和比对,证实ScFv基因为鼠源抗体基因,且12个单克隆菌种的ScFv基因可变区均有一定差异,说明ScFv基因具有多样性。以3种Bt毒素(Cry1B、Cry1C、Cry1F)为抗原,经4轮特异性富集筛选后均获得了具有抗原结合活性的噬菌体ScFv菌种,表明该库的实用性较强。 展开更多

关键词 噬菌体展示库 单链抗体 重叠延伸PCR 噬菌粒载体 BT毒素

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抗人VEGF受体Ⅱ基因Ⅲ区单链抗体基因的构建和表达 被引量：3

2

作者 李容 熊冬生 +4 位作者 邵晓枫 许元富 刘嘉 朱祯平 杨纯正 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期187-191,共5页

采用RT PCR技术从分泌抗人血管内皮生长因子受体Ⅱ (kinaseinsertdomain containingreceptor,KDR)基因Ⅲ区单克隆抗体Ycom1D3的杂交瘤细胞中克隆出VH 和VL 可变区基因 ,通过重叠延伸拼接 (splice overlapextension)PCR方法在VH 和VL 基... 采用RT PCR技术从分泌抗人血管内皮生长因子受体Ⅱ (kinaseinsertdomain containingreceptor,KDR)基因Ⅲ区单克隆抗体Ycom1D3的杂交瘤细胞中克隆出VH 和VL 可变区基因 ,通过重叠延伸拼接 (splice overlapextension)PCR方法在VH 和VL 基因之间引入柔性短肽 (Gly4Ser) 3 ,体外构建Ycom1D3单链抗体基因 (Ycom1D3 ScFv) ,将其克隆至pAYZ表达载体 ,在大肠杆菌中表达。SDS PAGE和Western blot分析结果表明 ,Ycom1D3 ScFv在E .coli 16C9中获得表达 ,重组蛋白的相对分子量为 3 0kD ,与预期结果一致。表达产物主要以不溶性包涵体形式存在 ,经过溶解包涵体 ,TALON金属亲合层析基质 (TALONmetalaffinityresin)纯化和体外复性过程 ,获得了高纯度的单链抗体片段。流式细胞分析结果证实该单链抗体可与人脐静脉内皮细胞结合 ,保留了鼠源单抗与KDR抗原的特异性结合活性。抗KDRⅢ单链抗体基因Ycom1D3 展开更多

关键词 血管内皮生长因子 人 KDR 原核表达 单链抗体 受体 肿瘤 治疗 基因

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肺腺癌靶向性超氧化物歧化酶的构建及功能分析 被引量：1

3

作者 卢敏 龚兴国 +3 位作者 汪辰卉 郑乐 郭建军 章申峰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第1期51-58,共8页

临床上,超氧化物歧化酶(SOD)的低肿瘤细胞定位能力限制了其在抗肿瘤领域的广泛应用,这一直是国内外学者们试图解决的难点.研究中,以基因工程方法连接念珠藻Fe-SOD(iron-superoxidedismutase)基因和抗SPC-A-1肺腺癌LC-1ScFv(singlechain... 临床上,超氧化物歧化酶(SOD)的低肿瘤细胞定位能力限制了其在抗肿瘤领域的广泛应用,这一直是国内外学者们试图解决的难点.研究中,以基因工程方法连接念珠藻Fe-SOD(iron-superoxidedismutase)基因和抗SPC-A-1肺腺癌LC-1ScFv(singlechainFv)基因,并融合表达获得了SOD-ScFv融合蛋白.纯化后SOD-ScFv表现出SOD和ScFv的双重活性.SPC-A-1肺腺癌细胞中,融合蛋白的异硫氰酸荧光素(FITC)染色追踪和自由基含量分析表明,SOD-ScFv具备识别SPC-A-1肺腺癌细胞、透膜并清除胞内自由基的功能,最终达到抑制肿瘤细胞生长的目的.研究提出的靶向抗肿瘤机制将克服临床上SOD无目标趋向性和难于进入实体瘤的两大应用局限性,并提供了一种利用LC-1ScFv来靶向投递抗肿瘤药物的思路. 展开更多

关键词 FE-SOD 单链抗体(scfv) 融合表达 靶向治疗

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抗黄曲霉毒素B1单链抗体基因克隆及其结构分析

4

作者 马兰 刘爱平 +1 位作者 王佳 王小红 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期2064-2070,共7页

【目的】克隆构建黄曲霉毒素B1(AFB1)单链抗体(scFv)基因,并对其编码蛋白序列和结构进行分析预测,为scFv分子修饰改造及在免疫学检测中的应用提供参考依据。【方法】以抗AFB1单克隆抗体杂交瘤细胞株为原料,通过PCR扩增重链可变区(VH)和... 【目的】克隆构建黄曲霉毒素B1(AFB1)单链抗体(scFv)基因,并对其编码蛋白序列和结构进行分析预测,为scFv分子修饰改造及在免疫学检测中的应用提供参考依据。【方法】以抗AFB1单克隆抗体杂交瘤细胞株为原料,通过PCR扩增重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),以(Gly4Ser)3为柔性接头(Linker)拼接构建抗AFB1 scFv基因,并采用在线生物信息学分析软件对其氨基酸序列、理化性质及蛋白结构进行分析预测。【结果】抗AFB1 scFv基因全长744 bp,编码248个氨基酸,分子量为26312.05 Da,理论等电点(pI)5.70,其二级结构中含有35个α-螺旋(占14.11%)、28个β-折叠(占11.29%)、85个延伸链(占34.28%)和100个随机卷曲(占40.32%),在三级结构中连接肽卷曲将VH和VL区域牵拉而相互靠近,形成典型的抗体结构——沟槽结构,是scFv的抗原结合区域。【结论】构建的抗AFB1 scFv其VH含有117个氨基酸、VL含有116个氨基酸,具备典型抗体结构——沟槽结构,能与抗原特异性结合。 展开更多

关键词 黄曲霉毒素B1(AFB1) 单链抗体(scfv) 重链可变区(VH) 轻链可变区(VL) 沟槽结构

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牛源抗金黄色葡萄球菌α溶血素单链抗体研制 被引量：1

5

作者 张波 王曼 +3 位作者 王凤青 张蕾 管玉 朱建国 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2019年第2期59-63,共5页

由金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳腺炎给养殖业造成了严重损失,抗生素是治疗奶牛乳腺炎的首选方法,但易出现耐药菌株。而目前针对金黄色葡萄球菌的疫苗也不能对奶牛乳腺炎提供足够的保护,疫苗的主要作用机理是激发机体产生抗体,故被动免疫... 由金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳腺炎给养殖业造成了严重损失,抗生素是治疗奶牛乳腺炎的首选方法,但易出现耐药菌株。而目前针对金黄色葡萄球菌的疫苗也不能对奶牛乳腺炎提供足够的保护,疫苗的主要作用机理是激发机体产生抗体,故被动免疫针对金黄色葡萄球菌毒力因子的抗体也许能对感染起到一定的治疗作用。本研究首先扩增得到影响其致病性的重要毒力因子-α溶血素(Hla)的编码基因,然后将其转化到E.coli中进行表达并纯化,再以此纯化产物为抗原,从牛源噬菌体单链抗体表达文库中筛选到了一株针对α溶血素(Hla)高亲和力的scFv,最终将该scFv进行纯化。本研究一方面为治疗金黄色葡萄球菌所致奶牛乳腺炎提供一种新思路,另一方面也为分子水平上研究α溶血素的致病机制提供了有效的阻断分子。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 α溶血素 单链抗体 原核表达

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链间二硫键增强抗前胃泌素释放肽单链抗体稳定性

6

作者 郭玉凤 刘佳玉 +5 位作者 许静 张婷 张超 孔晓娜 周小林 王伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1418-1425,共8页

前胃泌素释放肽(pro-gastrin-releasing peptide,ProGRP)是小细胞肺癌的特异性标志物,^(131)I标记的抗ProGRP单克隆抗体对小细胞肺癌具有明显的抑制作用。抗ProGRP单链抗体的制备具有重要的应用前景。本研究以抗ProGRP单克隆细胞株E-B_(... 前胃泌素释放肽(pro-gastrin-releasing peptide,ProGRP)是小细胞肺癌的特异性标志物,^(131)I标记的抗ProGRP单克隆抗体对小细胞肺癌具有明显的抑制作用。抗ProGRP单链抗体的制备具有重要的应用前景。本研究以抗ProGRP单克隆细胞株E-B_(5) cDNA为模板,扩增获得VH和VL序列,并对其进行序列比对和同源建模,分析引入链间二硫键的突变位点。通过基因合成获得单链抗体Scfv_(ProGRP)和单链二硫键稳定抗体Sdsfv_(ProGRP)基因,并将其分别构建在质粒pET-28a,获得重组表达质粒pET28a-His-Scfv_(ProGRP)和pET28a-His-Sdsfv_(ProGRP)。重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达出的ScFv_(ProGRP)和SdsFv_(ProGRP)以包涵体的形式存在。包涵体经变复性后进行纯化,获得ScFv_(ProGRP)和SdsFv_(ProGRP)的纯度分别为87.38%和95.73%。酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测显示,0.021 mg/mL ScFv_(ProGRP)和0.026 mg/mL SdsFv_(ProGRP)可以与抗原ProGRP特异性结合。SdsFv_(ProGRP)稳定性高于ScFv_(ProGRP)。结果表明,重组表达的抗ProGRP单链抗体识别ProGRP,具有免疫学活性,链间二硫键增强了抗前胃泌素释放肽单链抗体稳定性,研究为ProGRP人源化单链抗体的制备提供了新的数据。 展开更多

关键词 前胃泌素释放肽 二硫键 单链抗体 原核表达 稳定性

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抗人血管内皮生长因子单链抗体基因的构建、表达及活性鉴定 被引量：1

7

作者 杨西川 王大章 +2 位作者 郑光勇 袁清安 俞炜源 《生物技术通讯》 CAS 1998年第4期259-263,281,共6页

鼠单克隆抗体E11能与人血管内皮生长因子(VEGF)特异结合,已用于临床检测恶性肿瘤细胞VEGF的表达,并初步证明其体内抑瘤活性。为便于大规模生产,特进行基因工程改造,构建小分子的单链抗体(scFv)。首先通过逆转录及多聚酶链式反应(PCR),... 鼠单克隆抗体E11能与人血管内皮生长因子(VEGF)特异结合,已用于临床检测恶性肿瘤细胞VEGF的表达,并初步证明其体内抑瘤活性。为便于大规模生产,特进行基因工程改造,构建小分子的单链抗体(scFv)。首先通过逆转录及多聚酶链式反应(PCR),分离并克隆E11的可变区基因。经测序表明,E11轻链可变区(VL)基因全长333bp,编码111个氨基酸,归属小鼠轻链可变区基因第Ⅲ亚组。重链可变区VH基因全长369bp,编码123个氨基酸,归属小鼠重链可变区基因Ⅱ(A)亚组。然后用一编码亲水性多肽接头的DNA片断将E11单抗轻、重链可变区基因连接,构建表达质粒pET-15YV,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。表达产物(包含体)经变性及复性后,用免疫组化法检测该单链抗体结合抗原(颊癌)能力。对颊癌组织检测的结果表明,基因工程抗体scFv与亲代抗体一样,具有较高的组织特异性。本研究获得的抗人VEGF单链抗体具有潜在的临床价值,为肿瘤放射免疫显像及以血管为靶标的抗血管生成治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 VEGF 单链抗体 基因表达

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体外展示技术及其在抗体工程中的应用

8

作者 杨磊 张春明 王德芝 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第13期2590-2593,共4页

体外展示技术包括核糖体展示技术、mRNA展示技术、DNA展示技术,是在无细胞蛋白质表达体系内将基因型和表型通过一定的方法连接在一起,体外高通量的筛选多肽和蛋白质的技术。抗体的产生是一个不断选择的过程,利用体外展示技术在体外选择... 体外展示技术包括核糖体展示技术、mRNA展示技术、DNA展示技术,是在无细胞蛋白质表达体系内将基因型和表型通过一定的方法连接在一起,体外高通量的筛选多肽和蛋白质的技术。抗体的产生是一个不断选择的过程,利用体外展示技术在体外选择针对某一抗原的抗体分子,并结合基因工程技术对抗体进行改造,以产生高亲和力、高特异性的抗体。体外展示技术的研究和应用已越来越广泛,有望成为下一代的抗体制备技术。 展开更多

关键词 体外展示 抗体工程 单链抗体

原文传递

抗人CD14新克隆ZCH-7-2F9单链抗体的真核表达和初步鉴定

9

作者 宁铂涛 汤永民 +2 位作者 曹江 沈红强 钱柏芹 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期605-609,共5页

目的在真核细胞中表达Zhejiang Children’s Hospital（ZCH）-7-2F9（简称2F9）单链抗体（scFv2F9）以获得高活性的目的蛋白，为2F9其他类型的基因工程抗体及其免疫毒素的研究奠定基础。方法根据pSectag2A多克隆位点、（G4S）3及scFv2F... 目的在真核细胞中表达Zhejiang Children’s Hospital（ZCH）-7-2F9（简称2F9）单链抗体（scFv2F9）以获得高活性的目的蛋白，为2F9其他类型的基因工程抗体及其免疫毒素的研究奠定基础。方法根据pSectag2A多克隆位点、（G4S）3及scFv2F9基因序列，设计含有SfiI、EcoRI酶切位点、6×His以及终止密码TGA的引物，采用高保真的Taq酶，通过重叠延伸拼接法（splicing by overlap extension，SOE）扩增克隆到scFv2F9基因，将扩增到的目的基因片段克隆到pGEM T—easy载体，测序核实后再克隆到pSectag2A真核分泌型表达载体中。阳性重组质粒pSectag2A／scFv2F9转染中华仓鼠卵巢（CHO）细胞进行目的蛋白的瞬时表达，将培养上清浓缩后，流式细胞术观察其对亲本单抗的阻滞效果。结果真核分泌型表达载体pSectag2A／scFv2F9在CHO细胞中获得成功表达，其相对分子质量为31000。亲本直标单抗2F9-FITC被真核细胞表达的scFv2F9阻滞后其阳性细胞百分数、平均荧光强度和最高峰值分别下降了90．02％、63．30％和63．38％。结论克隆到的2F9V。和2F9VL基因及构建的真核分泌型表达载体pSectag2A／scFv2F9是正确的，scFv2F9在CHO细胞中获得成功的表达，且有较高的识别和结合人CD14抗原的功能。 展开更多

关键词 单链抗体 中华仓鼠卵巢(CHO)细胞 CD14 真核 表达

原文传递

口蹄疫病毒单链抗体基因的构建及其推导蛋白三维结构的分子模拟

10

作者 刘涛 周广青 +4 位作者 马军武 林密 祁淑芸 冯霞 马明仁 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1035-1040,共6页

用口蹄疫病毒(FMDV)Asia1/JS/China/2005株灭活抗原免疫家兔,从兔脾细胞中提取RNA作为模板,通过PCR及重叠PCR方法构建出FMDV的单链抗体基因。测序结果显示,序列中有重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)基因,经Blast比较,发现VH、VL的相似性... 用口蹄疫病毒(FMDV)Asia1/JS/China/2005株灭活抗原免疫家兔,从兔脾细胞中提取RNA作为模板,通过PCR及重叠PCR方法构建出FMDV的单链抗体基因。测序结果显示,序列中有重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)基因,经Blast比较,发现VH、VL的相似性最高分别可达81.0%和93.0%,且在序列中有连接VH及VL的柔性接头(Gly4Ser)3。用EXPASY软件包预测了推导蛋白的特性。运用Swiss-pdb viewer软件的SWISS-Model处理器对构建的单链抗体基因推导的蛋白序列进行了三维结构的分子模拟。拉马钱德兰图证明,所模拟的单链抗体的三维结构较为合理。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 单链抗体 重叠聚合酶链反应 序列分析 三维结构 分子模拟

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鼠源抗HFRSV衣壳蛋白McAb F3株单链抗体基因克隆构建及表达

11

作者 李光富 唐家琪 +2 位作者 操敏 李先富 潘秀珍 《微生物学免疫学进展》 2000年第2期38-41,共4页

为了获得鼠源抗HFRSV衣壳蛋白McAbF3 株轻链和重链可变区基因 ,由连接肽体外连接获得单链抗体基因 ,在大肠杆菌中表达。从鼠源抗HFRSV衣壳蛋白McAbF3株细胞中分离总RNA ,以oligo(dT) 18为引物逆转录成cDNA ,通过PCR扩增出抗体的轻链 (VL... 为了获得鼠源抗HFRSV衣壳蛋白McAbF3 株轻链和重链可变区基因 ,由连接肽体外连接获得单链抗体基因 ,在大肠杆菌中表达。从鼠源抗HFRSV衣壳蛋白McAbF3株细胞中分离总RNA ,以oligo(dT) 18为引物逆转录成cDNA ,通过PCR扩增出抗体的轻链 (VL)和重链可变区 (VH)基因 ,由连接肽体外连接获得单链抗体 (ScFv)基因。将此单链抗体 (ScFv)基因插入原核表达载体PET2 8a ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导后表达。结果构建的鼠源抗HFRSV衣壳蛋白McAbF3株单链抗体 (ScFv)基因 ,全长 741bp ,在大肠杆菌中获得了表达。结论为表达产物经SDS—PAGE及Western印迹分析 ,此单链抗体分子相对分子量为 2 9,0 0 0 ,与兔抗 鼠IgG产生特异反应。 展开更多

关键词 肾综合征出血热 单克隆抗体 单链抗体 基因表达

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牛源金黄色葡萄球菌α溶血素单链抗体对小鼠乳腺的保护作用

12

作者 张波 王曼 +3 位作者 王凤青 张蕾 管玉 朱建国 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2019年第6期235-240,共6页

为探究治疗奶牛乳腺炎的抗生素替代性生物制剂,研究将前期获得的特异性针对金黄色葡萄球菌毒力因子α溶血素的单链抗体scFvZZ107,在小鼠感染金黄色葡萄球菌乳腺炎模型中验证其保护作用。结果显示,3种不同剂量(5、10、15μg)单链抗体处... 为探究治疗奶牛乳腺炎的抗生素替代性生物制剂,研究将前期获得的特异性针对金黄色葡萄球菌毒力因子α溶血素的单链抗体scFvZZ107,在小鼠感染金黄色葡萄球菌乳腺炎模型中验证其保护作用。结果显示,3种不同剂量(5、10、15μg)单链抗体处理组乳腺组织内细菌数量分别为25.42±1.3、3.33±0.53和4.8±0.78 lgcfu/mg,IL-1α的含量分别为49±7.91、31.37±2.26和57.34±4.48 pg/mL,IL-1β含量分别为40.91±7.39、47.81±4.78和39.2±2.28 pg/mL,IL-8的含量分别为48.64±1.86、41.65±3.07和45.74±1.56 pg/mL,与生理盐水处理组相比,单链抗体中、高剂量处理组乳腺内金黄色葡萄球菌检出量显著减少(P<0.05),且IL-1α、IL-1β与IL-8的含量均显著降低(P<0.05)。通过观察小鼠乳腺组织HE和TUNEL染色情况,与生理盐水处理组相比,scFv中、高剂量处理组乳腺组织更加完整,凋亡细胞的数量也更少,表明scFvZZ107对小鼠乳腺具有良好的保护作用。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 α溶血素 单链抗体 小鼠乳腺炎

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抗GD2单链抗体-IL-2融合蛋白基因的构建及表达 被引量：2

13

作者 倪剑锋 纪剑飞 +3 位作者 吕安国 黄日波 韦宇拓 吴文芳 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第1期170-175,共6页

将已经突变了稀有密码子的人IL-2(Ala125)基因,与GD2单链抗体基因通过over-lap-PCR法,构建成ScFv-IL-2融合基因,并在基因的C端引入his tag序列。ScFv-IL-2基因经测序正确后连接到表达载体pSE380上,然后导入大肠杆菌BL21中表达。表达蛋... 将已经突变了稀有密码子的人IL-2(Ala125)基因,与GD2单链抗体基因通过over-lap-PCR法,构建成ScFv-IL-2融合基因,并在基因的C端引入his tag序列。ScFv-IL-2基因经测序正确后连接到表达载体pSE380上,然后导入大肠杆菌BL21中表达。表达蛋白为包涵体,表达量占总蛋白的30%以上,经SDS-PAGE及Western blot鉴定表达蛋白的分子量为43 kD,与预期的相符。包涵体粗提后,经Ni2+亲和层析柱及Sephacryl S-200HR柱分离复性,纯度可达90%以上,ELISA试验结果证明该融合蛋白保存了与相应抗原的结合活性和IL-2的生物活性。 展开更多

关键词 神经节苷脂GD2 单链抗体 白细胞介素2 融合蛋白

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噬菌体展示抗体微型文库的构建 被引量：1

14

作者 黄跃龙 李侠 +3 位作者 许静 刘俊霞 宋增璇 卢光琇 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第6期1320-1324,共5页

用噬菌体展示技术构建抗神经钙粘连素(N-cadherin,N-cad)分子胞外结构域、CD34分子胞外结构域及AC133分子的噬菌体展示单链抗体库。将3种分子分别表达于噬菌体表面,再以此噬菌体免疫BALB/c小鼠,提取脾总RNA,RT-PCR扩增抗体重、轻链基因c... 用噬菌体展示技术构建抗神经钙粘连素(N-cadherin,N-cad)分子胞外结构域、CD34分子胞外结构域及AC133分子的噬菌体展示单链抗体库。将3种分子分别表达于噬菌体表面,再以此噬菌体免疫BALB/c小鼠,提取脾总RNA,RT-PCR扩增抗体重、轻链基因cDNA并插入噬菌体表达载体,构建分别抗N-cad分子胞外结构域、CD34分子胞外结构域及AC133分子的噬菌体表达文库。然后对文库的库容量、多样性、滴度及表达能力进行鉴定。结果显示,用噬菌体展示的3种分子免疫小鼠获得成功,所构建抗体文库的库容量、多样性、滴度及表达能力均能满足进一步筛选目的抗体基因的需要,为制备相应的特异性抗体奠定了基础。 展开更多

关键词 神经钙粘连素 CD34 AC133噬菌体展示 单链抗体

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单链抗体的研究进展 被引量：18

15

作者 秦海艳 毛晓燕 +2 位作者 乔玉玲 李晓进 赵红 《现代生物医学进展》 CAS 2011年第4期795-797,771,共4页

单链抗体即单链抗体可变区片段(single-chain antibody variable fragment,or ScFv)是由抗体重链可变区和轻链可变区通过一段10-25个氨基酸的连接肽连接而成,其分子质量小,穿透力强,特异性好,免疫原性低,在免疫学和医学方面得到了广泛... 单链抗体即单链抗体可变区片段(single-chain antibody variable fragment,or ScFv)是由抗体重链可变区和轻链可变区通过一段10-25个氨基酸的连接肽连接而成,其分子质量小,穿透力强,特异性好,免疫原性低,在免疫学和医学方面得到了广泛应用。本文就单链抗体的结构设计、展示系统、表达和应用方面做一综述。 展开更多

关键词 单链抗体 展示系统

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日本血吸虫未成熟卵单链抗体库的构建、筛选及初步应用 被引量：13

16

作者 何卓 汪世平 +4 位作者 肖小芹 曾少华 刘明社 李林 周帅锋 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第8期921-928,共8页

运用噬菌体展示技术构建日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)单链抗体(scFv)表达文库,以天然分子候选疫苗SIEA26～28ku为靶抗原筛选SIEA单链抗体库,获得特异性单链抗体.并将该scFv基因亚克隆至原核高效表达载体PET32a,诱导SIEA26～28k... 运用噬菌体展示技术构建日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)单链抗体(scFv)表达文库,以天然分子候选疫苗SIEA26～28ku为靶抗原筛选SIEA单链抗体库,获得特异性单链抗体.并将该scFv基因亚克隆至原核高效表达载体PET32a,诱导SIEA26～28ku特异性scFv大量表达.随后以此为探针筛选日本血吸虫尾蚴cDNA文库,以期获得SIEA26～28ku天然分子候选疫苗相关的编码基因.结果显示,所获得的SIEA26～28ku特异性scFv,表达量高,采用该探针初步筛选出相关基因核糖体蛋白S4.SIEA26～28ku特异性scFv的获得,为进一步筛选、分析鉴定抗日本血吸虫病天然分子候选疫苗SIEA26～28ku的编码基因奠定了基础. 展开更多

关键词 日本血吸虫 未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA) 单链抗体(scfv) 噬菌体展示抗体库 CDNA文库

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单链抗体的构建及其在医学上的应用 被引量：8

17

作者 汪希雅 余平 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2009年第10期790-792,共3页

基因工程抗体在疾病诊断、治疗及医学研究等方面都有着广泛的应用。近几年来,国内外学者对抗体的研究已迈入基因工程抗体阶段,其中单链抗体(single chain Fv,scFv)因其具有分子质量小、穿透力强、体内循环半衰期短及排除了Fc段所致的免... 基因工程抗体在疾病诊断、治疗及医学研究等方面都有着广泛的应用。近几年来,国内外学者对抗体的研究已迈入基因工程抗体阶段,其中单链抗体(single chain Fv,scFv)因其具有分子质量小、穿透力强、体内循环半衰期短及排除了Fc段所致的免疫复合物反应等优点,成为基因工程抗体探索领域中的研究热点。尤其是将scFv应用于医学的研究已取得突破性进展,现就scFv的构建及其在医学上的应用综述如下。 展开更多

关键词 单链抗体 构建 应用 综述

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全人源抗狂犬病病毒G蛋白单链抗体制备及中和活性鉴定 被引量：5

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作者 张倩倩 赵茜 +7 位作者 张晓 丁贵鹏 金秋 高畅 熊四平 陈玉平 朱进 冯振卿 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期927-931,共5页

目的:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,筛选针对狂犬病病毒G蛋白不同表位的单链抗体(scFv)并鉴定其中和活性。方法:分离130例经狂犬病疫苗免疫接种志愿者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,逆转录制备cDNA,构建全人源抗狂犬病病毒scF... 目的:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,筛选针对狂犬病病毒G蛋白不同表位的单链抗体(scFv)并鉴定其中和活性。方法:分离130例经狂犬病疫苗免疫接种志愿者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,逆转录制备cDNA,构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库。以纯化的狂犬病病毒G蛋白包板筛选,对阳性克隆进行可溶性表达,并鉴定中和活性。结果:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,库容为5.0×107,经核酸序列分析,证实插入片段为scFv。经过5轮筛选,从富集的次级抗体库中随机挑出140个克隆,通过phage-ELISA鉴定得到4株核酸序列不同的scFv抗体。经His-Trap纯化后进行中和活性鉴定,获得1株有中和活性的scFv,其中和效价为0.13 IU/mg。结论:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,获得1株具有中和活性的抗狂犬病病毒G蛋白scFv抗体,为进一步研发狂犬病治疗性抗体药物奠定了基础。 展开更多

关键词 狂犬病病毒G蛋白 噬菌体抗体库 单链抗体(scfv) 中和活性

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抗恶性疟原虫富含组氨酸蛋白Ⅱ单链抗体库的构建及筛选 被引量：5

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作者 侯云霞 董文其 +3 位作者 徐伟文 王萍 陈白虹 李明 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第4期241-244,共4页

目的构建抗恶性疟原虫富含组氨酸蛋白Ⅱ(Histidine-rich protein Ⅱ,HRP-Ⅱ）单链抗体库，并筛选出阳性克隆。方 法用噬菌体抗体库技术构建抗恶性疟原虫ＨＲＰ－Ⅱ单链抗体库，并以ＨＲＰ－Ⅱ为靶抗原对该库进行了三轮“亲和吸附 一援... 目的构建抗恶性疟原虫富含组氨酸蛋白Ⅱ(Histidine-rich protein Ⅱ,HRP-Ⅱ）单链抗体库，并筛选出阳性克隆。方 法用噬菌体抗体库技术构建抗恶性疟原虫ＨＲＰ－Ⅱ单链抗体库，并以ＨＲＰ－Ⅱ为靶抗原对该库进行了三轮“亲和吸附 一援救一感染扩增”的富集，挑取单菌落筛选并鉴定阳性克隆。结果获得目的基因并成功构建抗恶性疟原虫 ＨＲＰ－Ⅱ的 单链抗体库，库容为 １０６，并从中筛选出８株阳性克隆。结论 噬菌体抗体库技术具有高效的筛选性能，抗 ＨＲＰ－Ⅱ单链 抗体的制备为其在恶性疟的免疫快速诊断方法中的应用奠定了基础。 展开更多

关键词 噬菌体抗体库 单链抗体 恶性疟原虫 富含组氨酸蛋白Ⅱ

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抗人肺腺癌单链抗体的构建及在大肠杆菌中的表达 被引量：1

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作者 吴朝伟 张屹 +7 位作者 张明生 黄浩旻 林晴 俞小淙 陈艾 黄华梁 李新元 王登顺 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1999年第2期125-130,共6页

目的:构建抗肺腺癌的单链抗体(scFv),研究其表达条件,为将这一小分子抗体应用于临床奠定基础.方法:将抗人肺腺癌单克隆抗体的重链及轻链可变区基因插入表达载体pFUW80、pTH、pTF,分别在大肠杆菌XL1-Blue、Top10、GI698/GI724中诱导表达... 目的:构建抗肺腺癌的单链抗体(scFv),研究其表达条件,为将这一小分子抗体应用于临床奠定基础.方法:将抗人肺腺癌单克隆抗体的重链及轻链可变区基因插入表达载体pFUW80、pTH、pTF,分别在大肠杆菌XL1-Blue、Top10、GI698/GI724中诱导表达,得到噬菌体抗体或包涵体.用SDS-PAGE和ELISA鉴定检测活性.结果:SDS-PAGE的结果表明,在pTH和pTF的表达产物中,有一条43kD的特异条带,其分子量与预期相符,单链抗体以包涵体形式出现,其表达量达细菌总蛋白的18.6%.ELISA的结果表明,噬菌体抗体和经复性处理的包涵体具有与亲本单抗相同的特异性.结论:成功地构建和在大肠杆菌中表达了抗肺腺癌单链抗体. 展开更多

关键词 肺腺癌 单链抗体 噬菌体 抗体 ELISA

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