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抗丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3单链抗体的制备及免疫组织化学研究 被引量：27
1
作者 钟彦伟 王松山 +3 位作者 赵景民 成军 张玲霞 李莉 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期186-188,共3页
目的　研制抗丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS3的人源噬菌体单链抗体 ,并探讨其在临床诊断中的应用价值。方法　以重组的丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3为固相抗原 ,利用亲和筛选的原理 ,从噬菌体抗体库中经过 5轮“吸附 洗脱 扩增”的筛... 目的　研制抗丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS3的人源噬菌体单链抗体 ,并探讨其在临床诊断中的应用价值。方法　以重组的丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3为固相抗原 ,利用亲和筛选的原理 ,从噬菌体抗体库中经过 5轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试验 (ELISA)、斑点免疫杂交试验和DNA序列分析 ,获得HCVNS3的人源单链抗体 ;用该抗体与不同来源的HCVNS3抗原进行反应 ;对 10例石蜡包埋的丙型肝炎患者肝组织进行免疫组化鉴定。结果　ELISA结果表明 ,所制备的HCVNS3人源单链抗体能与不同来源的HCVNS3抗原特异性结合 (吸光度A值为1 38) ;免疫组化结果表明 ,该抗体能够特异性识别丙型肝炎患者肝组织HCVNS3抗原 ,与正常肝组织及乙型肝炎病毒 (HBV)的表面抗原均无交叉反应。结论　此法制备的单链抗体亲和性好 ,特异性强 ,且制备方法简便 ,周期短 。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 非结构蛋白NS3 单链抗体 免疫组织化学
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丙型肝炎病毒包膜蛋白E2可溶性单链可变区抗体在大肠杆菌中的表达 被引量：19
2
作者 成军 施双双 +5 位作者 钟彦伟 夏小兵 王刚 王琳 刘妍 陈菊梅 《中国病毒学》 CSCD 2001年第3期220-223,共4页
利用分子生物学技术 ,构建表达丙型肝炎病毒 (HCV)包膜蛋白E2的人源单链可变区抗体 (ScFv)的原核表达载体 ,并在大肠杆菌JM10 9中表达可溶性的HCV E2 ScFv。以重组的HCVE2蛋白为包被抗原 ,利用噬菌体抗体库的表面展示技术 ,筛选到含有H... 利用分子生物学技术 ,构建表达丙型肝炎病毒 (HCV)包膜蛋白E2的人源单链可变区抗体 (ScFv)的原核表达载体 ,并在大肠杆菌JM10 9中表达可溶性的HCV E2 ScFv。以重组的HCVE2蛋白为包被抗原 ,利用噬菌体抗体库的表面展示技术 ,筛选到含有HCV E2 ScFv基因的噬菌体克隆 ,从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒 ,经Ncol/NotI酶切鉴定后 ,该ScFv基因由 75 0bp组成 ,将其亚克隆到pCANTAB5E载体中 ,转化大肠杆菌JM10 9,提取质粒进行DNA序列测定 ,符合ScFv的基因结构特点。IPTG诱导转化的大肠杆菌JM10 9,在其培养上清中获得了可溶性HCVE2单链可变区抗体的表达。酶联免疫吸附法 (ELISA)证实表达的HCV E2 ScFv具有与重组HCVE2蛋白的反应活性和特异性 ,对转化的JM10 9大肠杆菌上清中表述的HCV E2 ScFv进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) ,证实表达的HCV E2 ScFv的分子量为 2 8kD。为应用HCV E2 ScFv进行肝组织免疫组织化学和细胞内免疫基因治疗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 包膜蛋白 单链可变区抗体 表达 大肠杆菌
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HBsAg人源噬菌体单链抗体的筛选及其在临床诊断中的应用 被引量：13
3
作者 钟彦伟 成军 +6 位作者 施双双 赵景民 王刚 夏小兵 田小军 李莉 张玲霞 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期223-225,共3页
目的　筛选乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原 (HBsAg)的人源噬菌体单链抗体 ,并探讨其在临床治疗和诊断中的应用价值。方法　以HBsAg阳性血清超速离心纯化的HBsAg为固相抗原 ,从噬菌体单链可变区半合成抗体库中经过 5轮“吸附 洗脱 扩增”... 目的　筛选乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原 (HBsAg)的人源噬菌体单链抗体 ,并探讨其在临床治疗和诊断中的应用价值。方法　以HBsAg阳性血清超速离心纯化的HBsAg为固相抗原 ,从噬菌体单链可变区半合成抗体库中经过 5轮“吸附 洗脱 扩增”筛选过程 ,获得特异性较强的HBsAg人源单链可变区抗体 (ScFv) ;用该抗体对 10例石蜡包埋的乙型肝炎患者肝组织进行免疫组化鉴定。结果　酶联免疫吸附法 (ELISA)结果表明 ,制备的HBV人源单链抗体能与HBsAg抗原特异性结合 ;免疫组化结果表明 ,该抗体能够特异性识别乙型肝炎患者肝组织中的HBsAg抗原 ,与正常肝组织及丙型肝炎病毒 (HCV)的抗原均无交叉反应。结论　此法制备的单链抗体亲和性好 ,特异性强 ,且制备方法简便 ,周期短 ,为HBV病原的检测提供了新的有效试剂 ,为今后HBsAg人源抗体的研究和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 HBSAG 人源噬菌体单链抗体 筛选 临床 诊断 治疗 免疫组织化学 乙型肝炎病毒 表面抗原
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人源抗丙型肝炎病毒包膜蛋白E2单链抗体的研究 被引量：16
4
作者 钟彦伟 成军 +6 位作者 施双双 王刚 夏小兵 田小军 李莉 张玲霞 陈菊梅 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 2002年第2期109-112,共4页
目的 研制抗丙型肝炎病毒包膜蛋白Ｅ２（ＨＣＶ Ｅ２）的人源噬菌体单链抗体，并探讨其临床价值。方法 以重组的ＨＣＶ Ｅ２为固相抗原，利用亲和筛选的原理，从噬菌体抗体库中经过５轮“吸附－洗脱－扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试... 目的 研制抗丙型肝炎病毒包膜蛋白Ｅ２（ＨＣＶ Ｅ２）的人源噬菌体单链抗体，并探讨其临床价值。方法 以重组的ＨＣＶ Ｅ２为固相抗原，利用亲和筛选的原理，从噬菌体抗体库中经过５轮“吸附－洗脱－扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和ＤＮＡ序列分析，获得ＨＣＶ　Ｅ２的人源单链抗体；用该抗体对１０例石蜡包埋的丙型肝炎患者肝组织进行免疫组织化学鉴定。结果 ＥＬＩＳＡ结果表明，制备的ＨＣＶ Ｅ２人源单链抗体（吸光度值Ａ４５０为 １．８８）能与ＨＣＶ Ｅ２抗原特异性结台；免疫组织化学结果表明，该抗体能够特异性识别丙型肝炎患者肝组织ＨＣＶ Ｅ２抗原，与正常肝组织及乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）抗原均无交叉反应。结论 此法制备的单链抗体亲和性好，特异性强，且制备方法简便，周期短，为ＨＣＶ Ｅ２病原的检测提供了新的有效的试剂。 展开更多
关键词 人源抗丙型肝炎病毒 包膜蛋白E2 单链抗体 研究 免疫组织化学
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丙型肝炎病毒核心蛋白可溶性单链可变区抗体在大肠杆菌中的表达 被引量：12
5
作者 成军 施双双 +5 位作者 钟彦伟 夏小兵 王刚 王琳 刘妍 陈菊梅 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期394-397,共4页
利用分子生物学技术 ,构建表达丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白的人源单链可变区抗体 (ScFv)的原核表达载体 ,并在大肠杆菌JM 10 9中表达可溶性的HCV core ScFv。以重组的HCV核心蛋白为包被抗原 ,利用噬菌体抗体库的表面展示技术 ,筛选到含... 利用分子生物学技术 ,构建表达丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白的人源单链可变区抗体 (ScFv)的原核表达载体 ,并在大肠杆菌JM 10 9中表达可溶性的HCV core ScFv。以重组的HCV核心蛋白为包被抗原 ,利用噬菌体抗体库的表面展示技术 ,筛选到含有HCV core ScFv基因的噬菌体克隆。从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒 ,经NcoI/NotI酶切鉴定 ,该ScFv基因由 75 0bp组成。将其亚克隆到 pCANTAB5E表达载体中 ,转化大肠杆菌JM10 9,提取质粒进行DNA序列测定 ,符合ScFv的重链可变区和轻链可变区基因结构特点。IPTG诱导转化的大肠杆菌JM10 9,在其培养上清中获得了可溶性HCV core ScFv的表达。酶联免疫吸附法 (ELISA)证实表达的HCV core ScFv具有重组HCV核心蛋白的反应活性和特异性。对转化的JM10 9大肠杆菌上清中表达的HCV core ScFv进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) ,证实表达的HCV core ScFv的分子量为 2 8kDa。为应用HCV core ScFv进行肝组织免疫组织化学和细胞内免疫基因治疗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 核心蛋白 单链可变区抗体 表达
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抗HBsAg人源单链可变区抗体的筛选与可溶性抗体的表达 被引量：12
6
作者 钟彦伟 成军 +5 位作者 施双双 夏小兵 李克 董菁 刘妍 杨继珍 《中国病毒学》 CSCD 2001年第2期105-108,共4页
采用噬菌体表面展示技术 ,以从乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原 (HBsAg)阳性血清超速离心纯化的HBsAg为固相抗原 ,从噬菌体单链可变区半合成抗体库中经过 5轮“吸附 洗脱 扩增”筛选过程 ,获得特异性较强的HBsAg人源单链可变区抗体 (ScFv... 采用噬菌体表面展示技术 ,以从乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原 (HBsAg)阳性血清超速离心纯化的HBsAg为固相抗原 ,从噬菌体单链可变区半合成抗体库中经过 5轮“吸附 洗脱 扩增”筛选过程 ,获得特异性较强的HBsAg人源单链可变区抗体 (ScFv)克隆并提取质粒 ,经SfiⅠ /NotⅠ酶切鉴定后 ,亚克隆到 pCANTAB5E表达载体中 ,转化大肠杆菌XL1 Blue。经IPTG诱导后 ,表达的可溶性HBsAg特异性ScFv以 5 0 %硫酸胺沉淀 ,经SDS PAGE电泳表明 ,XL1 Blue中表达的HBsAg可溶性ScFv的分子量约 2 8kD。免疫活性检测结果表明 ,该单链抗体具有较强的抗原结合活性和特异性。HBsAg人源单链抗体的筛选和表达成功 ,为今后HBsAg人源抗体的研究和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 HBSAG 噬菌体 单链抗体 筛选 表达 HBV
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单链抗体的研究进展 被引量：5
7
作者 谭文庆 《国外医学（放射医学核医学分册）》 2001年第2期55-59,共5页
抗体技术由细胞工程抗体 (杂交瘤 -单克隆抗体 )发展到基因工程抗体 ,尤其是抗体库技术的出现 ,将抗体工程发展到了一个新阶段。本文从抗体库技术等方面介绍单链抗体 (single- chain Fv antibody,sc Fv)的进展情况。
关键词 单链抗体 抗体库 人源抗体 SCfv
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抗大肠癌噬菌体单链抗体的筛选及初步鉴定 被引量：6
8
作者 朱建高 胡锦跃 +4 位作者 李官成 李跃辉 周国华 李小玲 孙去病 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期18-22,共5页
应用 3种方法 (肿瘤细胞膜表面和胞内、裸鼠体内和组织切片 ) ,从全人源化的抗大肠癌噬菌体初级抗体库中筛选肿瘤特异性的噬菌体单链抗体 (Sc Fv) .在肿瘤细胞经过 3轮亲和选择 ,回收结合胞膜和内化进入胞内的噬菌体 ,得到抗肿瘤噬菌体... 应用 3种方法 (肿瘤细胞膜表面和胞内、裸鼠体内和组织切片 ) ,从全人源化的抗大肠癌噬菌体初级抗体库中筛选肿瘤特异性的噬菌体单链抗体 (Sc Fv) .在肿瘤细胞经过 3轮亲和选择 ,回收结合胞膜和内化进入胞内的噬菌体 ,得到抗肿瘤噬菌体单链抗体的富集倍数为 430倍 ;荷瘤裸鼠体内注入初级抗体库后 ,在不同时刻点处死裸鼠 ,回收肿瘤组织内的噬菌体 ,其回收率在 2 4 h时最高 ;初级抗体库与大肠癌组织切片亲和选择后 ,从冰冻组织切片上比从石蜡组织切片上回收得到的噬菌体高出约 1 .6倍 .从上述方法挑选单克隆 ,经 ELISA筛选抗大肠癌阳性噬菌体克隆株 ,分离得到 5个对大肠癌细胞反应较好的单克隆噬菌体单链抗体 .进一步用细胞 ELISA检测对各种肿瘤细胞的特异性反应 ,其中 4个对大肠癌细胞有很好的特异性 ,1个克隆对所有肿瘤细胞均有反应 .因此 ,3种方法用于筛选抗大肠癌噬菌体初级抗体库是有效的 ,具有推广和应用价值 . 展开更多
关键词 噬菌体呈现技术 大肠癌 单链抗体 筛选 噬菌体抗体
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抗人RBC A抗原50A株单抗可变区基因克隆及单链抗体基因构建 被引量：4
9
作者 王长军 唐家琪 +1 位作者 潘秀珍 李先富 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期69-72,共4页
目的：从分子水平分析抗人红细胞血型Ａ抗原单克隆抗体５０Ａ株，进而为制备新一代基因工程抗体的血型检定试剂奠定基础。方法：从杂交瘤细胞提取总ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增、克隆抗体的轻、重链可变区基因，用ＰＣＲ及双脱氧核苷酸... 目的：从分子水平分析抗人红细胞血型Ａ抗原单克隆抗体５０Ａ株，进而为制备新一代基因工程抗体的血型检定试剂奠定基础。方法：从杂交瘤细胞提取总ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增、克隆抗体的轻、重链可变区基因，用ＰＣＲ及双脱氧核苷酸链终止法分析其核苷酸序列，采用ＰＣＲ技术重叠延伸拼接法构建５０Ａ单抗单链抗体基因。结果：序列分析表明所克隆基因为抗体轻、重链可变区基因，５０ＡＶＨ隶属于小鼠Ｉｇ重链ⅡＢ亚组，是由ＶＨ－Ｄ－ＪＨ３基因重排产生；５０ＡＶＬ隶属于小鼠ＩｇＫａｐｐａ链Ⅱ亚组，Ｊｋ１基因重排。重叠延伸拼接法构建单链抗体基因简易可行。结论：所克隆基因含有正确的抗体框架结构，可作为研究基因工程血型检定抗体的目标基因。 展开更多
关键词 抗人RBCA抗原 VH/VL克隆 序列分析 单链抗体基因
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戊型肝炎患者肝组织中HEV抗原的检测研究 被引量：2
10
作者 倪勤 翟琦 +4 位作者 王莉 王松山 张耀新 卢晓梅 张巍 《新疆医科大学学报》 CAS 2000年第4期327-329,共3页
目的 :用抗 - HEV ORF2单克隆抗体和抗 - HEV ORF2单链可变区抗体研究急性戊型肝炎的免疫病理学 ,探讨二者在临床病理诊断中的应用价值。 方法 :(1)以杂交瘤技术制备的抗 - HEV单克隆抗体 (Mc Ab,m ono-clonal antibody)作为第一抗体 ,... 目的 :用抗 - HEV ORF2单克隆抗体和抗 - HEV ORF2单链可变区抗体研究急性戊型肝炎的免疫病理学 ,探讨二者在临床病理诊断中的应用价值。 方法 :(1)以杂交瘤技术制备的抗 - HEV单克隆抗体 (Mc Ab,m ono-clonal antibody)作为第一抗体 ,用免疫组化 L SAB法检测急性戊型肝炎患者肝组织中的 HEV抗原。 (2 )用抗 - HEVORF2单链可变区抗体以间接酶标法检测肝组织内的 HEV抗原。 结果 :用抗 - HEV单克隆抗体从 14例急性戊型肝炎肝标本中检出 9例 HEV抗原阳性者 (6 4.2 8% ) ,其中 8例阳性标本用抗 - HEV ORF2单链可变区抗体检测HEVAg均为阳性。HEV抗原在肝细胞浆表达以胞浆弥漫型为主 ,尚可见膜型表达。HEV抗原阳性细胞集中分布在病变明显区 ,伴淋巴细胞浸润 ,病变较轻区也可见随机散在分布 ,部分阳性肝细胞无变性。胆管上皮细胞中见有HEV抗原阳性颗粒。 结论 :本研究结果支持急性戊型肝炎的免疫致病机理。 HEV抗原在胆管上皮细胞的检出可能为 HEV从胆管上皮细胞向胆小管排泌提供了一个直观的证据。同时表明两种抗体可作为一种特异而有效的HEV抗原检测试剂。 展开更多
关键词 戊型肝炎 抗原 单克隆抗体 单链可变区抗体
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抗丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A单链抗体的制备及免疫组织化学研究 被引量：2
11
作者 钟彦伟 成军 +4 位作者 焦成松 张忠东 李强 李莉 陈菊梅 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2003年第2期89-91,共3页
目的:研制抗丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS5A的人源噬菌体单链可变区抗体,并探讨其在临床病理学诊断中的应用价值。方法:以大肠杆菌表达的重组HCV非结构蛋白NS5A为固相抗原,利用抗原-抗体亲和性结合的原理,从半合成的人源可变区噬菌体... 目的:研制抗丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS5A的人源噬菌体单链可变区抗体,并探讨其在临床病理学诊断中的应用价值。方法:以大肠杆菌表达的重组HCV非结构蛋白NS5A为固相抗原,利用抗原-抗体亲和性结合的原理,从半合成的人源可变区噬菌体抗体库中经过5轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试验(ELISA)和DNA序列分析,获得HCV NS5A的人源单链抗体;用该抗体对7721转染全长HCV cDNA后筛选的阳性克隆细胞中的HCV NS5A抗原进行免疫组化鉴定。结果:ELISA结果表明,制备的HCV NS5A人源单链抗体能与HCV NS5A抗原特异性结合;免疫组化结果表明,该抗体能够特异性识别HCV NS5A抗原,与正常肝细胞无交叉反应。结论:此法制备的单链抗体亲和性好,特异性强,且制备方法简便,周期短,为HCV NS5A病原的检测提供了新的有效的检测手段。 展开更多
关键词 抗丙型肝炎病毒 非结构蛋白 NS5A 单链抗体 制备 免疫组织化学 医学细胞生物学 人体免疫学
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人源性天然抗体库的构建及淀粉样蛋白Aβ_(1-42)寡聚体单链抗体的筛选和鉴定 被引量：2
12
作者 包福祥 何金生 +5 位作者 曹贵方 尹凡 王鑫 庞思媛 张莹 洪涛 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1195-1203,共9页
本研究旨在利用噬菌体展示技术构建人源性天然抗体库,以可溶性Aβ1-42寡聚体对抗体库进行筛选获得针对低分子量Aβ1-42寡聚体的特异性单链抗体。利用RT-PCR法从10个健康人外周血淋巴细胞中得到全套人抗体VH和VL基因,经过重叠延伸PCR将VH... 本研究旨在利用噬菌体展示技术构建人源性天然抗体库,以可溶性Aβ1-42寡聚体对抗体库进行筛选获得针对低分子量Aβ1-42寡聚体的特异性单链抗体。利用RT-PCR法从10个健康人外周血淋巴细胞中得到全套人抗体VH和VL基因,经过重叠延伸PCR将VH和VL连接得到scFv片段,将scFv片段酶切后克隆至pCANTAB5E噬菌体载体,电转化TG1感受态菌,获得库容为2.5×109单链抗体库。经辅助噬菌体M13K07拯救,以可溶性Aβ1-42寡聚体为抗原,对抗体库进行4轮筛选,ELISA法筛选特异性识别Aβ1-42寡聚体的阳性克隆,将筛选到的阳性克隆B19转化至E.coli HB2151菌,诱导表达可溶性scFv抗体。SDS-PAGE及Western blotting分析结果显示可溶性scFv抗体获得了正确表达,且能够与Aβ1-42三聚体及纤维特异性结合,亲和力(Kd)为9×10-6 mol/L。Aβ1-42寡聚体特异性单链抗体的获得为老年性痴呆(AD)的治疗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人源性天然抗体库 Aβ1-42寡聚体 单链抗体 老年性痴呆
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小鼠抗人T淋巴细胞表面抗原噬菌体抗体库的构建及筛选 被引量：1
13
作者 王剑利 王一理 司履生 《西安医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期239-241,282,共4页
目的　构建并筛选小鼠抗人静息 /活化T淋巴细胞表面抗原的噬菌体展示抗体库。方法　以人静息 /活化T淋巴细胞免疫Balb/c小鼠 ,取脾细胞 ,RT -PCR扩增VH 和VK 基因 ,拼接为ScFv ,插入噬菌粒载体转化大肠杆菌 ,构建了噬菌体展示抗体库 ,以... 目的　构建并筛选小鼠抗人静息 /活化T淋巴细胞表面抗原的噬菌体展示抗体库。方法　以人静息 /活化T淋巴细胞免疫Balb/c小鼠 ,取脾细胞 ,RT -PCR扩增VH 和VK 基因 ,拼接为ScFv ,插入噬菌粒载体转化大肠杆菌 ,构建了噬菌体展示抗体库 ,以人T淋巴细胞为靶抗原 ,对该库进行了 3轮淘洗 ,ELISA方法鉴定噬菌体抗体。结果　成功构建了最大实际库容量为 1 .75× 1 0 6的小鼠抗人静息T淋巴细胞表面抗原的噬菌体展示ScFv抗体库和小鼠抗人活化T淋巴细胞表面抗原的噬菌体展示ScFv抗体库。结论　所构建的抗体库可进一步用于对T淋巴细胞表面蛋白抗原的差异显示分析及构建基因工程抗体。 展开更多
关键词 T淋巴细胞表面抗原 抗体库 噬菌体展示 单链fv抗体 T淋巴细胞 噬菌体抗体库技术
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抗卵巢癌单链免疫毒素183B_2ScFvPE38融合蛋白的高效表达及活性测定 被引量：1
14
作者 尤芳蕾 冯捷 +2 位作者 成夜霞 付天云 姚煜 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期84-87,共4页
目的　制备抗人卵巢癌单链免疫毒素融合蛋白 183B2 ScFvPE38,并对其活性进行测定 ,为卵巢癌导向治疗打下基础。　方法　在异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)的诱导下 ,高效表达免疫毒素 183B2 ScFvPE38,并采用直接ELISA及细胞毒性实验... 目的　制备抗人卵巢癌单链免疫毒素融合蛋白 183B2 ScFvPE38,并对其活性进行测定 ,为卵巢癌导向治疗打下基础。　方法　在异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)的诱导下 ,高效表达免疫毒素 183B2 ScFvPE38,并采用直接ELISA及细胞毒性实验对抗体及毒素部分的活性进行检查。　结果　表达蛋白 183B2 ScFvPE38以包涵体形式为主高效表达 ,并有少量可溶性表达。该蛋白具有较好的抗体活性及毒素活性。　结论　抗卵巢癌单链免疫毒素183B2 ScFvPE38具有良好的免疫学活性及生物学活性 。 展开更多
关键词 单链抗体 免疫毒素 卵巢癌 假单胞外毒素 高效表达
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抗克伦特罗单链抗体在毕赤酵母GS115中的表达 被引量：1
15
作者 陈舒迟 何永盛 +2 位作者 徐小艳 陆田珍 王弘 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期217-219,236,共4页
构建表达抗克伦特罗单链抗体(CBL scFv)的毕赤酵母菌株,筛选高拷贝转化子并诱导CBL scFv在毕赤酵母中的分泌表达。将构建的含有CBL scFv基因的重组真核表达载体pPICZαA-CBL经BstX I酶切线性化后,利用电转化方法转化毕赤酵母菌GS115感... 构建表达抗克伦特罗单链抗体(CBL scFv)的毕赤酵母菌株,筛选高拷贝转化子并诱导CBL scFv在毕赤酵母中的分泌表达。将构建的含有CBL scFv基因的重组真核表达载体pPICZαA-CBL经BstX I酶切线性化后,利用电转化方法转化毕赤酵母菌GS115感受态细胞,通过Zeocin抗性平板筛选高拷贝转化子,以甲醇诱导蛋白表达,对表达产物进行SDS-PAGE、Western blotting鉴定及ELISA活性分析。结果显示,通过筛选出的重组毕赤酵母菌株分泌表达了1个分子量约为41kDa的蛋白,该蛋白可与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性结合,且可被游离的CBL竞争性抑制,IC50值为5.1ng/mL。经检测,重组抗体表达量为0.095g/L。这说明分泌表达CBL scFv的毕赤酵母菌株构建成功,为后期CBL scFv发酵与制备奠定了基础。 展开更多
关键词 克伦特罗 单链抗体 毕赤酵母 蛋白表达
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抗丙型肝炎病毒核心蛋白单链抗体的制备及免疫组织化学研究 被引量：1
16
作者 钟彦伟 成军 +4 位作者 焦成松 张忠东 李强 李莉 陈菊梅 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期8-9,12,共3页
目的　制备丙型肝炎病毒核心蛋白单链抗体并进行免疫组织化学研究。方法　以大肠杆菌表达的重组丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白为固相抗原 ,利用抗原 抗体亲和性结合的原理 ,从半合成的人源可变区噬菌体抗体库中经过 3轮“吸附 洗脱 扩增”... 目的　制备丙型肝炎病毒核心蛋白单链抗体并进行免疫组织化学研究。方法　以大肠杆菌表达的重组丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白为固相抗原 ,利用抗原 抗体亲和性结合的原理 ,从半合成的人源可变区噬菌体抗体库中经过 3轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试验 (ELISA)和DNA序列分析 ,获得HCV核心蛋白的人源单链抗体 ;用该抗体对 772 1转染全长HCVcDNA后筛选的阳性克隆细胞中的HCV核心蛋白抗原进行免疫组化鉴定。结果　ELISA结果表明 ,制备的HCV核心蛋白人源单链抗体能与HCV核心蛋白抗原特异性结合 ;免疫组化结果表明 ,该抗体能够特异性识别HCV核心蛋白抗原 ,与正常肝细胞无交叉反应。结论　此法制备单链抗体方法简便 ,周期短 ,可为HCV核心蛋白病原的检测提供新的检测手段。 展开更多
关键词 C型肝炎样病毒属 病毒核心蛋白质类 单链抗体 免疫组织化学
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抗乳铁蛋白单链抗体制备及鉴定
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作者 虞东芳 刘祖国 +2 位作者 李民友 顾熊飞 胡皎月 《医学研究杂志》 2006年第8期36-38,共3页
目的制备特异性的可溶性抗乳铁蛋白单链抗体。方法用固相化的乳铁蛋白从天然噬菌体抗体库筛选出抗乳铁蛋白的单链抗体克隆,转化至大肠杆菌HB2151中进行可溶性表达。表达产物以镍离子亲和层析法纯化,并进一步鉴定其纯度、活性等。结果成... 目的制备特异性的可溶性抗乳铁蛋白单链抗体。方法用固相化的乳铁蛋白从天然噬菌体抗体库筛选出抗乳铁蛋白的单链抗体克隆,转化至大肠杆菌HB2151中进行可溶性表达。表达产物以镍离子亲和层析法纯化,并进一步鉴定其纯度、活性等。结果成功筛选并表达了抗乳铁蛋白的单链抗体,该抗体能与乳铁蛋白特异性结合,而与转铁蛋白、溶菌酶、小牛血清白蛋白无交叉反应。结论建立了一种抗乳铁蛋白单链抗体的有效制备途径,为其进一步临床应用的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 乳铁蛋白 噬菌体抗体库 单链抗体 筛选
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抗人VEGF单链抗体基因的克隆及突变校正
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作者 廖楚航 王大章 +2 位作者 杨西川 李扬 房思炼 《实用医院临床杂志》 2004年第1期26-29,共4页
目的:回复基因克隆过程中的异常点突变,重新表达抗人血管内皮生长因子(VEGF)单链抗体基因(V11),恢复其抗原结合能力。方法:通过逆转录及多聚酶链式反应(RT-PCR),扩增抗人VEGF单克隆抗体(E11)的可变区基因片段,构建表达载体pET-15b(含E-t... 目的:回复基因克隆过程中的异常点突变,重新表达抗人血管内皮生长因子(VEGF)单链抗体基因(V11),恢复其抗原结合能力。方法:通过逆转录及多聚酶链式反应(RT-PCR),扩增抗人VEGF单克隆抗体(E11)的可变区基因片段,构建表达载体pET-15b(含E-tag)。将V11轻、重链可变区基因序列(V11L、V11H)与其所属亚组共同序列和一致序列进行联配比较,发现异常氨基酸并分析其性质,确定异常突变点。PCR定点回复突变,重新表达单链抗体基因(V11m),ELISA检测表达产物与VEGF165的结合。结果:V11存在四个异常突变点:V11L第7、23、36位,V11H第113位。回复突变后的表达产物与VEGF165的结合能力显著提高。结论:利用抗体残基位置序列保守性及氨基酸侧链性质分析,可以推定并有助于回复异常点突变,该方法简便易行。获得的抗人VEGF单链抗体对恶性肿瘤的诊治具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 恶性肿瘤 单链抗体基因 基因克隆 突变校正
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抗HEVORF2单链可变区抗体的筛选和鉴定
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作者 倪勤 成军 +6 位作者 钟彦伟 王松山 施双双 董菁 夏小兵 张耀新 翟琦 《新疆医科大学学报》 CAS 2000年第4期323-326,共4页
目的 :筛选和鉴定抗戊型肝炎病毒 (HEV)开放读码框架 2 (ORF2 )的人源化噬菌体单链可变区抗体。方法 :以大肠杆菌表达的重组 HEV ORF2多肽做为固相包被抗原 ,从半合成的人源化噬菌体抗体库中经过 4轮“吸附 -洗脱 -扩增”的筛选过程及... 目的 :筛选和鉴定抗戊型肝炎病毒 (HEV)开放读码框架 2 (ORF2 )的人源化噬菌体单链可变区抗体。方法 :以大肠杆菌表达的重组 HEV ORF2多肽做为固相包被抗原 ,从半合成的人源化噬菌体抗体库中经过 4轮“吸附 -洗脱 -扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试验 (EL ISA )、DNA序列分析鉴定 ,获得抗原结合活性较强的抗 -HEV ORF2单链可变区抗体 ,并以间接酶标法用该抗体对戊型肝炎患者石蜡包埋肝组织中的 HEV ORF2抗原进行免疫组织化学鉴定。结果 :筛选到的抗 - HEV ORF2的单链可变区抗体基因。酶切和序列分析表明 ,该抗体基因由 795 bp组成 :EL ISA和免疫组织化学结果显示 ,抗 - HEV ORF2人源化噬菌体单链可变区抗体能与重组 HEVORF2抗原特异性结合 ,并能够特异性识别戊型肝炎患者肝组织中的 HEV抗原。结论 :此法筛选的噬菌体单链可变区抗体亲和性较好 ,特异性强 ,较单克隆抗体制备方法简便 ,周期短 ,为进一步研究应用奠定了基础。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 单链可变区抗体 噬菌体
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抗人Lipocalin型前列腺素D合酶单链抗体基因的构建与表达
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作者 朱国华 陈德宇 +2 位作者 黄宇烽 宛传丹 许晓风 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期182-186,共5页
利用RT-PCR技术,从稳定分泌抗人Lipocalin型前列腺素D合酶(Lipocalin-typeprostaglandinDsynthase,L-PGDS)单克隆抗体的鼠杂交瘤细胞中获得抗体可变区基因;通过一柔性连接短肽[(Gly)4Ser]3,SOEPCR法将此重、轻链可变区拼接成完整的抗人L... 利用RT-PCR技术,从稳定分泌抗人Lipocalin型前列腺素D合酶(Lipocalin-typeprostaglandinDsynthase,L-PGDS)单克隆抗体的鼠杂交瘤细胞中获得抗体可变区基因;通过一柔性连接短肽[(Gly)4Ser]3,SOEPCR法将此重、轻链可变区拼接成完整的抗人L-PGDS单链抗体基因,并装入表达载体pET-28a(+),在BL21宿主菌中进行表达。经SDS-PAGE检测显示,在低剂量0.02mmol/LIPTG诱导和较低温度25℃或28℃条件下培养,重组菌表达了一定量的可溶性单链抗体。后经Ni-NTA亲和层析柱纯化,得率为2mg/100ml,纯度达92%;双夹心ELISA和免疫荧光竞争抑制实验证实,纯化后的单链抗体具有较好的亲和力和特异性。 展开更多
关键词 Lipocalin型前列腺素D合酶 单链抗体 构建 表达
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