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条件性SV40 TAg转基因小鼠模型的建立 被引量:2
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作者 荆华 匡颖 +2 位作者 王龙 毛积芳 费俭 《同济大学学报(医学版)》 CAS 2009年第3期29-33,共5页
目的建立可调控的脑组织特异性表达SV40 TAg的转基因小鼠模型。方法构建由大鼠神经元特异性烯醇化酶基因(rat neuron-specific enolase,NSE)启动子驱动四环素基因表达调控系统的载体,从而控制SV40 TAg基因的表达;受精卵雄原核显微注射... 目的建立可调控的脑组织特异性表达SV40 TAg的转基因小鼠模型。方法构建由大鼠神经元特异性烯醇化酶基因(rat neuron-specific enolase,NSE)启动子驱动四环素基因表达调控系统的载体,从而控制SV40 TAg基因的表达;受精卵雄原核显微注射该线性化载体制备转基因小鼠;PCR方法鉴定首建鼠;RT-PCR方法检测小鼠组织中四环素反式激活子(rtTA)及SV40 TAg基因的表达情况。结果显微注射获得17个首建鼠,其中的6个首建鼠建系成功;1#、6#品系小鼠的脑组织中表达rtTA基因;强力霉素诱导后,可检测到6#品系小鼠脑组织中SV40TAg基因的特异性表达。结论可调控的脑组织表达SV40 TAg的转基因小鼠模型已经建立。 展开更多
关键词 四环素基因表达调控系统 猿猴病毒40大T抗原基因 转基因小鼠
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SV40LTag诱导鼠骨骺软骨细胞稳定分化的实验研究 被引量:1
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作者 李欣 黄仕龙 金润铭 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 2008年第1期51-54,共4页
目的建立稳定分化大鼠骨骺软骨细胞株,为细胞替代治疗和基因治疗小儿生长发育迟缓提供稳定的细胞来源。方法利用脂质体介导的基因转染技术将含有猿肾病毒40大T抗原(simian virus 40 large T antigen gene,SV40LTag)基因的质粒pEGFP-IRES... 目的建立稳定分化大鼠骨骺软骨细胞株,为细胞替代治疗和基因治疗小儿生长发育迟缓提供稳定的细胞来源。方法利用脂质体介导的基因转染技术将含有猿肾病毒40大T抗原(simian virus 40 large T antigen gene,SV40LTag)基因的质粒pEGFP-IRES2-SV40LTag转染原代培养的新生大鼠骨骺软骨细胞,G418筛选,抗性克隆扩大培养传代。应用II型胶原、X型胶原和SV40LTag抗体进行细胞鉴定,体外检测其分化能力,观察细胞的形态及其生长状况,绘制细胞生长曲线。用RT-PCR、Southern blot和免疫细胞化学法鉴定SV40LTag在转染细胞中的表达。结果转染后获得了阳性细胞克隆,免疫细胞化学证实为具有较强增殖能力和多分化潜能的骨骺软骨细胞。经Southern印迹杂交证实,SV40LTag已稳定转染入骨骺软骨细胞,表达mRNA及其蛋白。结论SV40LTag导入可诱导骨骺软骨细胞稳定分化,为细胞替代治疗和基因治疗小儿生长发育迟缓等疾病提供稳定的细胞来源。 展开更多
关键词 软骨细胞 永生化 猿肾病毒40
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SV40TAg转基因小鼠模型的建立及其表达 被引量:1
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作者 匡颖 梁斌 +4 位作者 麻孙恺 王珏 费俭 王铸钢 毛积芳 《细胞生物学杂志》 CSCD 2006年第6期873-878,共6页
为了建立中枢神经系统肿瘤小鼠模型,构建了大鼠神经元特异性烯醇化酶(ratneu-ron-specificenolase,NSE)基因启动子调控下的猿猴病毒40大T抗原基因(simianvirus40largeTantigengene,SV40TAg)转基因载体,通过受精卵雄原核显微注射的方法... 为了建立中枢神经系统肿瘤小鼠模型,构建了大鼠神经元特异性烯醇化酶(ratneu-ron-specificenolase,NSE)基因启动子调控下的猿猴病毒40大T抗原基因(simianvirus40largeTantigengene,SV40TAg)转基因载体,通过受精卵雄原核显微注射的方法制备转基因小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因型;RT-PCR和Northern印迹检测转基因阳性鼠中SV40TAgRNA水平的表达及其组织特异性;免疫组化检测其蛋白质水平的表达。经显微注射共获得9只首代转基因阳性鼠(首建者,Founder小鼠),其中2例出生时即发生神经干细胞来源的肿瘤,其他Founder小鼠经繁育后共建立了5个SV40TAg转基因小鼠系,其中有4个系检测到SV40TAgRNA水平的表达且特异性地表达于脑组织,但未检测到蛋白质水平的表达。研究表明NSE启动子活性具有较强的组织特异性,并起始于小鼠胚胎发育期;SV40TAg具有明显的致癌作用,且SV40TAg诱发的神经系统肿瘤易造成转基因小鼠早期死亡。 展开更多
关键词 猿猴病毒40大T抗原基因 大鼠神经元特异性烯醇化酶基因启动子 转基因小鼠 神经系统肿瘤
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