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离子交换色谱对抗VEGFR2单抗的电荷异质性分析
被引量：
9
1
作者
于传飞
王文波
+4 位作者
刘春雨
王兰
张峰
李萌
高凯
《微生物学免疫学进展》
2014年第5期17-21,共5页
目的采用离子交换高效液相色谱(CEX-HPLC)分析抗VEGFR2(抗血管内皮生长因子受体2)单抗制品的电荷异质性。方法应用CEX-HPLC技术,对VEGFR2单抗进行电荷异质性分析,并结合羧肽酶B(CpB)和N-糖酰胺酶F(EndoF2)酶切,初步研究其电荷异质性的...
目的采用离子交换高效液相色谱(CEX-HPLC)分析抗VEGFR2(抗血管内皮生长因子受体2)单抗制品的电荷异质性。方法应用CEX-HPLC技术,对VEGFR2单抗进行电荷异质性分析,并结合羧肽酶B(CpB)和N-糖酰胺酶F(EndoF2)酶切,初步研究其电荷异质性的成因。结果用CEX-HPLC分析CpB酶切前后单抗,证明其碱性变异体主要由C末端赖氨酸不均一性引起;分析EndoF2酶切前后处理的单抗,证明其酸性变异体部分由N-糖末端上的唾液酸修饰所引起。通过2种酶的顺序酶切可相对准确地分析含C-末端赖氨酸以及含唾液酸单抗的比例。结论采用CEX-HPLC可较好地分析单抗的电荷异质性;并结合合适的酶切处理,可判断单抗主要电荷异质性的来源,为保证单抗制品生产工艺的稳定性及质量控制提供了有效手段。
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关键词
血管内皮生长因子受体2单抗
电荷异质性
离子交换高效液相色谱
不均一性
唾液酸修饰
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职称材料
日本脑炎病毒NS1蛋白致脑血管内皮细胞损伤研究
被引量：
2
2
作者
潘俊慧
刘亚林
+3 位作者
梁真洁
杨兴淼
谢盛达
曹瑞兵
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第6期1107-1115,共9页
[目的]本试验旨在探究日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)非结构蛋白NS1的生物学功能。[方法]将JEV NS1基因克隆到pFastbac1载体并将其转化至感受态DH10Bac得到重组杆粒,将重组杆粒转染sf9细胞产生重组杆状病毒,通过病毒感...
[目的]本试验旨在探究日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)非结构蛋白NS1的生物学功能。[方法]将JEV NS1基因克隆到pFastbac1载体并将其转化至感受态DH10Bac得到重组杆粒,将重组杆粒转染sf9细胞产生重组杆状病毒,通过病毒感染High5细胞成功表达了JEV NS1。在人脑微血管内皮细胞(HBMEC)培养液添加外源NS1蛋白,通过光学显微镜观察细胞形态,利用共聚焦显微镜观察JEV NS1蛋白对HBMEC表面唾液酸修饰的影响,IFA检测细胞中组织蛋白酶L的表达;小鼠经尾静脉注射JEV NS1及其N207糖基化位点突变体蛋白NS1 N207Q,分别于24、48和72 h通过伊文思蓝(EB)染色检测2个蛋白对小鼠的血脑屏障(BBB)通透性的影响。[结果]JEV NS1蛋白通过下调人脑内皮细胞表面的唾液酸修饰和上调组织蛋白酶L表达损伤内皮糖萼;动物试验表明NS1蛋白能够破坏小鼠的血脑屏障;NS1 N207Q蛋白处理对细胞表面唾液酸修饰的影响不显著,体内处理对小鼠的血脑屏障无明显损伤。[结论]JEV NS1蛋白具有损伤人脑微血管内皮细胞的生物学功能,突变N207位点可导致其损伤功能减弱,可为JEV亚单位疫苗候选抗原的优化提供新思路。
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关键词
日本脑炎病毒
NS1蛋白
唾液酸修饰
组织蛋白酶L
脑血管内皮损伤
N207Q突变
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职称材料
成像毛细管等点聚焦电泳法对单克隆抗体制品的电荷异质性分析
被引量：
10
3
作者
于传飞
郭玮
+6 位作者
王兰
张峰
刘春雨
王文波
李萌
王军志
高凯
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第7期1212-1215,共4页
目的:采用成像毛细管等点聚焦电泳法分析单克隆抗体制品的电荷异质性。方法:应用优化的成像毛细管等点聚焦电泳技术,对2种单克隆抗体制品酶切处理前后进行电荷异质性分析。结果:羧肽酶B处理前后的抗体1成像毛细管等点聚焦电泳结果比较...
目的:采用成像毛细管等点聚焦电泳法分析单克隆抗体制品的电荷异质性。方法:应用优化的成像毛细管等点聚焦电泳技术,对2种单克隆抗体制品酶切处理前后进行电荷异质性分析。结果:羧肽酶B处理前后的抗体1成像毛细管等点聚焦电泳结果比较证明其电荷异质性主要由C末端赖氨酸不均一性引起;羧肽酶B处理和/或N-糖苷酶处理前后的抗体2成像毛细管等点聚焦电泳结果比较证明其电荷异质性主要由C末端赖氨酸不均一性和N-糖的唾液酸修饰引起。结论:采用优化的成像毛细管等点聚焦电泳技术,可较好地分析单克隆抗体产品的电荷异质性;并且配合合适的酶切处理,可判断单克隆抗体产品主要电荷异质性的来源,为保证单克隆抗体产品技术药物生产工艺的稳定性及质量控制提供了有效手段。
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关键词
单克隆抗体
电荷异质性
成像毛细管等点聚焦电泳
C末端赖氨酸不均一性
N-糖末端唾液酸修饰
原文传递
题名
离子交换色谱对抗VEGFR2单抗的电荷异质性分析
被引量：
9
1
作者
于传飞
王文波
刘春雨
王兰
张峰
李萌
高凯
机构
中国食品药品检定研究院
出处
《微生物学免疫学进展》
2014年第5期17-21,共5页
基金
国家"重大新药创制"科技重大专项(2014ZX09304311-001)
文摘
目的采用离子交换高效液相色谱(CEX-HPLC)分析抗VEGFR2(抗血管内皮生长因子受体2)单抗制品的电荷异质性。方法应用CEX-HPLC技术,对VEGFR2单抗进行电荷异质性分析,并结合羧肽酶B(CpB)和N-糖酰胺酶F(EndoF2)酶切,初步研究其电荷异质性的成因。结果用CEX-HPLC分析CpB酶切前后单抗,证明其碱性变异体主要由C末端赖氨酸不均一性引起;分析EndoF2酶切前后处理的单抗,证明其酸性变异体部分由N-糖末端上的唾液酸修饰所引起。通过2种酶的顺序酶切可相对准确地分析含C-末端赖氨酸以及含唾液酸单抗的比例。结论采用CEX-HPLC可较好地分析单抗的电荷异质性;并结合合适的酶切处理,可判断单抗主要电荷异质性的来源,为保证单抗制品生产工艺的稳定性及质量控制提供了有效手段。
关键词
血管内皮生长因子受体2单抗
电荷异质性
离子交换高效液相色谱
不均一性
唾液酸修饰
Keywords
Anti-VEGFR2
monoclonal
antibody
Charge
heterogeneity
CEX-HPLC
（Cation
exchange-high
performance
liquid
chromatography
）
Non-homogeneity
sialic acid
modification
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
日本脑炎病毒NS1蛋白致脑血管内皮细胞损伤研究
被引量：
2
2
作者
潘俊慧
刘亚林
梁真洁
杨兴淼
谢盛达
曹瑞兵
机构
南京农业大学动物医学院
出处
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第6期1107-1115,共9页
基金
国家重点研发计划项目(2016YFD0500402)
国家自然科学基金项目(31772756)。
文摘
[目的]本试验旨在探究日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)非结构蛋白NS1的生物学功能。[方法]将JEV NS1基因克隆到pFastbac1载体并将其转化至感受态DH10Bac得到重组杆粒,将重组杆粒转染sf9细胞产生重组杆状病毒,通过病毒感染High5细胞成功表达了JEV NS1。在人脑微血管内皮细胞(HBMEC)培养液添加外源NS1蛋白,通过光学显微镜观察细胞形态,利用共聚焦显微镜观察JEV NS1蛋白对HBMEC表面唾液酸修饰的影响,IFA检测细胞中组织蛋白酶L的表达;小鼠经尾静脉注射JEV NS1及其N207糖基化位点突变体蛋白NS1 N207Q,分别于24、48和72 h通过伊文思蓝(EB)染色检测2个蛋白对小鼠的血脑屏障(BBB)通透性的影响。[结果]JEV NS1蛋白通过下调人脑内皮细胞表面的唾液酸修饰和上调组织蛋白酶L表达损伤内皮糖萼;动物试验表明NS1蛋白能够破坏小鼠的血脑屏障;NS1 N207Q蛋白处理对细胞表面唾液酸修饰的影响不显著,体内处理对小鼠的血脑屏障无明显损伤。[结论]JEV NS1蛋白具有损伤人脑微血管内皮细胞的生物学功能,突变N207位点可导致其损伤功能减弱,可为JEV亚单位疫苗候选抗原的优化提供新思路。
关键词
日本脑炎病毒
NS1蛋白
唾液酸修饰
组织蛋白酶L
脑血管内皮损伤
N207Q突变
Keywords
Japanese
encephalitis
virus
NS1
protein
sialic acid
modification
cathepsin
L
endothelial
injury
N207Q
mutation
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
成像毛细管等点聚焦电泳法对单克隆抗体制品的电荷异质性分析
被引量：
10
3
作者
于传飞
郭玮
王兰
张峰
刘春雨
王文波
李萌
王军志
高凯
机构
中国食品药品检定研究院
出处
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第7期1212-1215,共4页
基金
国家"重点新药创制"科技重大专项(编号:2014ZX09304311-001)
文摘
目的:采用成像毛细管等点聚焦电泳法分析单克隆抗体制品的电荷异质性。方法:应用优化的成像毛细管等点聚焦电泳技术,对2种单克隆抗体制品酶切处理前后进行电荷异质性分析。结果:羧肽酶B处理前后的抗体1成像毛细管等点聚焦电泳结果比较证明其电荷异质性主要由C末端赖氨酸不均一性引起;羧肽酶B处理和/或N-糖苷酶处理前后的抗体2成像毛细管等点聚焦电泳结果比较证明其电荷异质性主要由C末端赖氨酸不均一性和N-糖的唾液酸修饰引起。结论:采用优化的成像毛细管等点聚焦电泳技术,可较好地分析单克隆抗体产品的电荷异质性;并且配合合适的酶切处理,可判断单克隆抗体产品主要电荷异质性的来源,为保证单克隆抗体产品技术药物生产工艺的稳定性及质量控制提供了有效手段。
关键词
单克隆抗体
电荷异质性
成像毛细管等点聚焦电泳
C末端赖氨酸不均一性
N-糖末端唾液酸修饰
Keywords
monoclonal
antibody
charge
heterogeneity
imaging
capillary
isoelectric
focusing
electrophoresis
C
ter-minal
lysine
heterogeneity
sialic acid
modification
at
N-glycan
terminus
分类号
R927 [医药卫生—药学]
O657.8 [理学—分析化学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
离子交换色谱对抗VEGFR2单抗的电荷异质性分析
于传飞
王文波
刘春雨
王兰
张峰
李萌
高凯
《微生物学免疫学进展》
2014
9
下载PDF
职称材料
2
日本脑炎病毒NS1蛋白致脑血管内皮细胞损伤研究
潘俊慧
刘亚林
梁真洁
杨兴淼
谢盛达
曹瑞兵
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
2
下载PDF
职称材料
3
成像毛细管等点聚焦电泳法对单克隆抗体制品的电荷异质性分析
于传飞
郭玮
王兰
张峰
刘春雨
王文波
李萌
王军志
高凯
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
10
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